Potent inhibition of Western Equine Encephalitis virus by a fraction rich in flavonoids and phenolic acids obtained from Achyrocline satureioides

ABSTRACT Achyrocline satureioides (Lam.) DC. Asteraceae, ‘marcela del campo', possess several pharmacological properties. Previously we reported antiviral activity of an aqueous extract of A. satureioides against an alphavirus, Western Equine Encephalitis virus. Alphaviruses are highly virulent pathogens which cause encephalitis in humans and equines. There are no effective antiviral to treat its infections. The aim of this study was to evaluate in vitro cytotoxic and antiviral activities against Western Equine Encephalitis virus of five water extract chromatographic fractions from A. satureioides and identify the main compounds of the bioactive fraction. Also, it was to assess in vivo cytogenotoxic ability of the active fraction. Cytotoxicity studies revealed low toxicity of the most of fractions in Vero and in equine peripheral blood mononuclear cells. Antiviral studies showed that the water crude extract – Sephadex LH 20 – fraction 3 MeOH–H2O (Fraction 3) was active against Western Equine Encephalitis virus with Effective Concentration 50% = 5 µg/ml. Selectivity Indices were 126.0 on Vero and 133.6 on peripheral blood mononuclear cells, four times higher than aqueous extract selectivity index. Regarding the mechanism of action we demonstrated that F3 exerted its action in intracellular replication stages. Further, fraction 3 showed important virucidal action. Fraction 3 contains, in order of highest to lowest: chlorogenic acid, luteolin, 5,7,8-trimethoxyflavone, 3-O-methylquercetin and caffeic acid. Fraction 3 did not induce in vivo toxic nor mutagenic effect. Therefore, it is safe its application as antiviral potential. Further studies of antiviral activity in vivo will be developed using a murine model.

Inhibición in vitro de la desgranulación de basófilos por drogas utilizadas habitualmente en el tratamiento del asma: comparación con productos vegetales inmunomoduladores / In vitro basophils degranulation inhibition by drugs habitually used in the asthma treatment: comparison with inmunomodulator vegetal products

Antecedentes. Los derivados de Achyrocline satureioides (A.s.) y Minthostachys verticillata (M.v.) han sido utilizados tradicionalmente por sus propiedades antiinflamatorias y broncodilatadoras en el asma. Objetivos. Comparar la inhibición de basófilos in vitro por dexametasona, teofilina, cromoglicato disódico, bromuro de ipratropio + salbutamol con la de decocciones de hojas/flores de A.s. y decocción/aceite esencial de M.v., mediante el dosaje de B-hexosaminidasa, un marcador de la reacción alérgica inmediata. Evaluar los efectos inmunomoduladores de la decocción/aceite esencial de M.v. sobre la producción de IFN-y. Metodologia. Se estudiaron 38 pacientes alérgicos a hongos anemófilos. Se realizó prick y dosaje de IgE total por EIA. La liberación de B-hexosaminidasa se evaluó con el alergeno solo y el alergeno adicionado de las drogas comerciales o cada derivado vegetal, por EIA. Los niveles de IFN-y fueron cuarificados por EIA en los sobrenadantes de cultivos de linfocitos estimulados con decocción o aceite esencial de M.v. Resultados. Todos los pacientes mostraron reactividad cutánea. Los basófilos desafiados in vitro por el alergeno, liberanon B-hexosaminidasa. La liberación de la enzima fue disminuida por cada droga o derivado vegetal (p<0,05). La producción de IFN-y fue significativamente menor en los alérgicos que en los controles (p<0,02). La decocción o el aceite esencial de M.v. estimularon la síntesis de IFN-y en las muestras de pacientes alérgicos (p<0,02). Conclusiones. La prueba de liberación de B-hexosaminidasa demostró ser una técnica accesible y de fácil realización que podría reemplazar o complementar las prácticas diagnósticas habituales. Bromuro de ipratropio + salbutamol resultó la droga más eficaz in vitro. Las decocciones de flores de A.s. y de hojas de M.v. mostraron potencia reguladora sobre la desgranulación in vitro. Cecocción de hojas y aceite esencial de M.v., fueron inmunomoduladores para la procucción de IFN-y.

Effects of alpha-difluoromethylornithine on the cyclin A expression in Hep-2 cells

DFMO is an irreversible inhibitor of ornithine decarboxilase (ODC), the key enzyme in mammalian polyamine biosynthesis. The goal of this study was to determine the effects of DFMO on the expression of cyclin A at different stages of the cell cycle of Hep-2 cells. The cell cycle analysis, done by measuring the incorporation of thymidine in the cell DNA, revealed that DFMO produced a lower and constant level of that incorporation; this effect is probably due to the incapacity of the cells to culminate the phase S of the cell cycle. The expression of cyclin A increased in the phases S and G2 in control cells, almost disappearing in phase M. However, in DFMO treated cultures, the expression of cyclin A was increased in M and this effect remained still after 48 h treatment. We conclude that polyamines could exert an effect on the cyclin destruction mechanism, and the depletion caused by DFMO would alter this mechanism.