Estandarización de un método inmunoenzimático de tipo ELISA para medir la concentración de 17 ß-estradiol en saliva / A solid-phase enzyme immunoassay to measure 17 ß-oestradiol in saliva

Las hormonas esteroides pueden difundir fácilmente a la saliva, donde su concentración es un reflujo de los valores en sangre. El objeto de este trabajo fue estandarizar un método inmunoenzimático competitivo de fase sólida (ELISA) para determinar 17 ß-estradiol (E2) en saliva. El método requiere E2 como antígeno unido a la fase sólida y para la curva de calibración; un suero de oveja anti-17 ß-estradiol (1er. Ab) y un suero de conejo anti-Y-globulina de oveja (2-Ab). Este último fue conjugado a la fosfatasa alcalina y utilizado para valorar la concentración de la hormona mediante la actividad enzimática de la placa. Los resultados muestran una sensibilidad de 2.5 pg, respecto a especificidad, el anticuerpo presenta mínima reacción cruzada con estrona (1.32%) y estriol (2.46%) y la recuperación es de 90 a 95%. La precisión valorada mediante los coeficientes de variación (CV) intra e interensayo es de 4.2-9%y de 4.8-12.1%respectivamente. Con este método los valores de E2 en saliva en mujeres normales oscilaron de 400 a 970 pg/ml en el día del pico preovulatorio y de 50-450pg durante la fase lútea. El método podría ser utilizado para evaluar la función ovárica, con ventajas sobre el radioinmunoanálisis por su precisión, rapidez y bajo costo

Determinación de la concentración de 17B estradiol en la saliva de mujeres fértiles durante el ciclo menstrual, por un método inmunoenzimático, competitivo de tipo ELISA / 17B estradiol concentration determination in saliva of fertile women during menstrual cycle by an immunoenzymatic method, competitive of ELISA type

Se ha demostrado que las hormonas esteroides no conjugadas pueden difundir fácilmentee a la saliva, en donde su concentración es un fiel reflejo de los valroes que se encuentran en la sangre. El presente trabajo aprovecha esta característica para determinar la concentración de 17B B2, en mujeres durante el ciclo menstrual, usando saliva como líquido biológico de fácil obtención y procesamiento y un método inmunoenzimático de fase sólida de tipo competitivo (ELISA) en vez del tradicional radioinmunoanálisis (RIA). El método requiere: 17B estradiol como antígeno unido a placas de ELISA y también para curva de calibración; un suero de oveja anti 17B E2 (1er. Ab) y un suero de conejo antiglobulina de oveca (2o. Ab). Este último conjugado a la fosfatasa alcalina, permitió detectar y valorar de una manera indirecta la concentración de la hormona en el estandar o en el problema mediante la actividad enzimática presente en la placa la cual es inversamente proporcional a la concentración de 17B E2 en la muestra. La técnica de ELISA mostró excelentes resultados en sensibilidad un límite de detección de 2.5 pg y linearidad de la curva de calibración de 2.5 a 125 pg. La especificidad depende del anticuerpo utilizado (Calbochem) indica reacción cruzada con esteroides estructuralmente relacionados, como estrona (1.32 por ciento) y estriol (2.46 por ciento) pero no con otro tipo de esteroides. La recuperación evaluada por adición de 50 y 100 pg de 17B E2 a diferentes muestras de saliva fue adecuada (90-95 por ciento). La precisión valorada mediante el coeficiente de variación (CV) osciló en la curva de calibración de 3.4-4.8 (interensayo); en las muestras de saliva fue ligeramente mayor de 4.2-9 por ciento y 4.8-12.1 por ciento para la variación intra e interensayo respectivamente. El método estandarizado aplicado a la medición de 17B E2 en muestras de saliva de mujeres normales eumenorréicas a lo largo del ciclo menstrual, mostró valores de 400-970 pg/ml en el día del pico preovulatorio con una M + DE de 672 + - 290 pg/ml; durante la fase lútea la concentración fue menor (50-450 pg/ml). En cuanto a líquido biológico podemos señalar que la saliva es uno de los fluídos más accesibles del cuerpo humano, fácil de procesar, y una excelente alternativa para las muestras de sangre, con algunas ventajas respecto a su valor diagnóstico, ya que se pueden tomar muestras diarias. El método inmunoenzimático no requiere de radioisótopos y por sus características similars al radioinmu

Papel de la hiperpolarización y despolarización en la membrana del espermatozoide humano / The role of hyperpolarization and despolarization on human spermatozoon membarane

El potencial eléctrico a través de la membrana (gama) se cuantificó mediante la acumulación del catión radiactivo trifenilmetilfosfonio (TPMP+) en la membrana espermática. Los espermatozoides previamente lavados se incubaron en presencia de TPMP+ en un medio denominado K+ - baja o K+ - elevada hasta que se logra el estado de equilibrio (20 min a 37 grados centigrados)., El valor obtenido por diferencia se inserta en la ecuación de Nernst y se obtiene el valor de -69 + - 2 mV. La presencia de cationes como el Zn ++ y Mg++ en el medio de incubación inducen una hiperpolarización de un 10 y 8.6% respectivamente. La adición de reactivos específicos como el p-cloromercuribenzoato-ácido sulofónico y etilendiaminotetra-acetato sódico, disminuye el gama en un 35 y 58% respectivamente. Los agentes que actúan sobre los componentes de la superficie de espermatozoide como el ditiotreitol y progesterona inducen una hiperpolarización y despolarización de la membrana en un 16 y 40%, respectivamente. La presencia de propanolol y L-alfa-lisofosfatidilcolina, los cuales afectan los gradientes iónicos presentes a través de la membrana inducen una despolarización en un 43 y 92%, respectivamente. Finalmente, la adición de tetraffenilboron (TPB -) en el medio de incubación aumentó el valor del gama 75%. La importancia de estos estudios es que mediante la utilización de agentes hiperpolarizantes y despolarizantes se obtienen cambios en el gama desde -80 + - 2.5 mV hasta -6 + - 0.6 mV es decir, cambios hasta de 74 +- 1.5 mV a través de la membrana espermática.(au)