Quantification of canine cytokines using real time reverse transcriptase polymerase chain reaction / Cuantificación de citocinas caninas mediante reacción en cadena de la polimerasa de transcriptasa reversa en tiempo real

Introducción. Los caninos son el principal reservorio domestico de la leishmaniasis visceral en el Nuevo y Viejo mundo. La reacción en cadena de la polimerasa de transcriptasa reversa en tiempo real para la medición de citocinas caninas no ha sido implementada para el estudio de la leishmaniasis visceral. Objetivo. Estandarizar la cuantificación relativa de IFN-g, IL-4, IL-10, IL-12p40 y IL-12p35 caninas utilizando reacción en cadena de la polimerasa de transcriptasa reversa en tiempo real. Materiales y métodos. Células mononucleares de sangre periférica de perros Fox-Hound fueron estimuladas con ConA, LPS y extracto de Staphylococcus aureus. El ARN fue utilizado en la reacción en cadena de la polimerasa de transcriptasa reversa en tiempo real de un solo paso para optimizar las concentraciones de iniciadores y sondas especificas de cada citocina, generar curvas estándar, confirmar la eficiencia de amplificación de las citocinas y del normalizador (18S ARNr) y cuantificar la expresión de ARN. El método comparativo Ct fue utilizado para determinar los niveles relativos de expresión de ARN en las muestras, expresado como el incremento en el número de veces comparado con los controles. Resultados. El coeficiente de regresión para las curvas estándar y las eficiencias de amplificación de las citocinas y el normalizador, indicaron que la cuantificación fue confiable en un amplio rango de concentraciones de ARN. La activación de células mononucleares de sangre periférica resultó en un incremento en la expresión de IFN-g (132), IL-4 (8.8), IL-10 (7,2), y IL-12p40 (275), relativo a células control. La expresión basal de IL-12p35 fue también detectada. Conclusión. Esta metodología, comparada con los métodos convencionales disponibles para la medición de citocinas, ofrece varias ventajas y podría ser utilizada en estudios sobre inmunopatogenia e inmunidad en leishmaniasis visceral canina.

Introduction. Canines are the principal domestic reservoirs of visceral leishmaniasis in both the Old and New World. The development of highly sensitive and quantitative methods, such as real time reverse transcriptase polymerase chain reaction for measurement of canine cytokines has not been exploited in studies of visceral leishmaniasis. Objective. To standardize the relative quantification of canine IFN-g, IL-4, IL-10, IL-12p40 and IL-12p35 using real time reverse transcriptase polymerase chain reaction. Materials and methods. RNA was isolated from PBMCs from 1 year–old foxhounds and cultured with or without Con A, LPS or Staphylococcus aureus extract. This RNA was used in one-step real time reverse transcriptase polymerase chain reaction to optimize the concentrations of the cytokine primers and probes, generate standard curves for each cytokine, confirm equivalent amplification efficiency of cytokine and normalizer (18S rRNA) RNA, and to quantify the expression of the cytokine RNA. The comparative Ct method was used to determine the relative levels of gene expression in the samples, expressed as the fold-increase relative to the control samples. Results. The regression coefficient for the standard curves and the amplification efficiencies of the cytokine and normalizer RNA indicated that the quantification was reliable over a broad concentration range of input RNA. Relative to control cells, activation of PBMCs led to increased expression of IFN-g (132-fold), IL-4 (8.8-fold), IL-10 (7.2-fold), and IL-12p40 (275-fold). Basal expression of IL-12p35 was also detected. Conclusion. This approach provides several advantages over conventional assays for cytokine measurement and can be exploited in the study of the immunopathogenesis and immunity in canine leishmaniasis.

Polymorphism in 1908STR1934 locus of the 3. UTR of the Nramp1 bovine gene in eight cattle breeds

The Nramp1 gene has been associated with natural resistance to intracellular microorganisms in several species including bovine. Recent evidence suggests an association between polymorphism in the 3. untranslated region (3. UTR) of this gene with resistance/susceptibility (R/S) to Brucella abortus as determined in vivo and in vitro. In this study we tested for the variability of the short tandem repeat (STR) within the 3. UTR of Nramp1 in six breeds of Colombian creole cattle (CCC) and compared the genotypes with those of Holstein and Brahman, which were recently introduced into this country. In CCC as well as in Holstein we found the allele 175 fixed in all populations. In Brahman, 175 allele was also present with a frequency of 0.467 but additionally, in this breed there appeared five other alleles and among them two previously unreported: 183 y 185; also was found the allele 189 in the Colombian creole Harton del Valle cattle, which is not previously reported. Together these results suggest that the 175 allele in the 3. UTR Nramp1 may be an ancestral allele in cattle and if this is true the association previously reported with the R/S trait requires further evaluation.

Standardization of bovine macrophage monolayers and isolation and culture of trypanosomes

We describe a method for culturing over 90 percent pure bovine macrophages from peripheral blood mononuclear cells separated with Nycoprep. The cells were cultured for 12 days and then stained with esterase and with anti CD14 to test for purity. The method is reproducible and ensures an adequate number of cells for immunological research. Additionally, we report the unexpected finding of Trypanosoma trypomastigotes in our macrophage cultures from bovines belonging to a geographic area from which no bovine trypanosomes had been reported before

Respuesta inmune y estrategias de evasión durante la infección con Brucella spp / Inmune Response and Strategics of xxx in the infection by Brucella spp

La Brucella es una bacteria Gram-negativa, intracelular facultativa que infecta en forma persistente a humanos y animales domésticos y salvajes. Este género de bacterias se replica en los fagocitos mononucleares del hospedero, evadiendo los mecanismos solubles extracelulares de la respuesta inmune. La patogénesis de la infección por Brucella es bastante compleja, depende del patógeno y de los mecanismos de defensa que se activan, donde la inmunidad celular, macrófagos, citoquinas tipo Th1 y células citotóxicas participan activamente en la resolución de la infección. Aunque esta bacteriano evade los mecanismos de fagocitosis, si ha desarrollado mecanismos para la sobrevivencia intracelular. El entendimiento de la interrelación de la respuesta inmune con estos patógenos microbianos, permitirá el desarrollo de medidas para la prevención y el control. Esta revisión describe algunos de los mecanismos inmunológicos innatos y específicos involucrados en la eliminación de la infección causada por las especies de Brucella y referencia artículos originales que dan cuenta del avance logrado mediante la utilización de diferentes modelos animales.

Inmunobiología de la infección por Brucella spp: Fundamentos para una estrategia vacunal / Immunobiology of infection by Brucella spp: Funfamental principles for a vaccine strategy

Las especies de Brucella causan enfermedades en animales domésticos y salvajes incluyendo bovinos, ovinos, caprinos, suinos, caninos. Esta bacteria representa una serio problema económico para la ganadería mundial; en Colombia por ejemplo, se calculan pérdidas anuales por 28 mil millones de pesos representados en la incapacidad de incursionar en los mercados internacionales, los trastornos reproductivos y los abortos que sufren los animales infectados. Además, esta bacteria representa un gran peligro para la salud pública ya que produce una enfermedad zoonótica. Aunque varios modelos para el control han sido llevados a cabo, como los sacrificios de los animales infectados y los tratamientos con antimicrobianos, varios países en el mundo como Colombia han mantenido un programa de vacunación como estrategia de control. La cepa 19 de B. abortus, viva atenuada, es la vacuna más utilizada actualmente e induce una amplia protección en varios modelos animales. Sin embargo, su similitud antigénica con cepas de campo impide la discriminación entre animales vacunados e infectados naturalmente. Para obviar estos inconvenientes se han diseñado varias vacunas utilizando diferentes estrategias, entre ellas la delección de genes que codifican proteínas inmunodominates de la B. abortus, que no afectan la respuesta inmune protectora como, vacunas de polisacáridos, vacunas de ácidos nucleicos y la expresión de proteínas foráneas en las cepas vacunales. La cepa rugosa RB51, carente de LPS, hasta el momento una de las cepas utilizadas con más éxito ya que no induce respuesta humoral, por lo que no interfiere con el diagnóstico de la infección por las cepas de campo. Además, esta cepa ofrece gran seguridad en los animales vacunados e induce una inmunidad esencialmente celular, donde las citoquinas producidas por los linfocitos, han mostrado ser de gran importancia en la resistencia a la infección por esta bacteria.

Ganado Blanco Orejinegro (BON): Una alternativa para la producción en Colombia / BON cattle: an alternative for production in Colombia

El ganado Blanco Orejinegro descendiente del ganado traído por Colón durante su segundo viaje, ha sobrevivido durante casi 500 años en las áreas tropicales colombianas productoras de café. Además de su capacidad adaptativa este ganado ha mostrado otras características como: docilidad, habilidad para aprovechar forrajes de mala calidad, gran habilidad materna, mayor precocidad sexual, alta fertilidad, mayor productividad en cruces F1 (carne y leche) y marcada resistencia a ectoparásitos. Estas características, en conjunto con hallazgos moleculares recientes que sugieren alta variabilidad genética y resistencia a patógenos bacterianos y vírales demuestran que esta raza, que en la actualidad se encuentra en vía de extinción, es portadora de información genética importante que la convierte en una alternativa para la producción en las condiciones tropicales. El objetivo de esta revisión es hacer una recopilación de trabajos realizados con ganado BON; además, mostrar las perspectivas de investigación, basados en los trabajos actualmente llevados a cabo en la Universidad de Antioquia, con el fin de demostrar el potencial genético de esta raza, que quizás no ha podido ser expresado debido a las condiciones de manejo a que esta raza ha sido sometida.

Genes y plásmidos de la Salmonella spp. asociados con virulencia / Genes and Plasmids of Salmonella spp associated with virulence

Las serovariedades de Salmonella, patógenos intracelulares gram negativos, afectan varias especies animales como las aves, los cerdos, los bovinos y el hombre. Después de la ingestión de alimentoso aguas contaminadas, la bacteria se localiza en la porción distal del intestino delgado donde hace contacto con la mucosa intestinal. Estos microorganismos requieren la expresión coordinada de muchos de sus genes para causar una infección productiva en su hospedero. La expresión se inicia cuando la Salmonella entra en contacto con el medio ambiente hostil que representa el tracto gastrointestinal del hospedero, donde encuentra una gran variedad de condiciones como: la osmolaridad, la tensión de oxígeno y el pH; que actúan como señales para que inicie la transcripción de genes que codifican factores de virulencia, los cuales favorecen la interacción con la célula blanco durante la patogénesis. La Salmonella utiliza, además, un sistema de secreción tipo III como un mecanismo básico de virulencia, este sistema es el encargado de translocar proteínas hacia el citosol, las cuales interfieren con las señales de transducción y otros procesos celulares, facilitando la patogénesis de la bacteria, algunos de estos genes han sido descritos y caracterizados mediante la obtención de mutantes in vitro, las cuales han mostrado defectos en ciertas características que parecen ser importantes para cumplir algunas funciones básicas y para la virulencia in vivo, porejemplo: la capacidad para invadir células epiteliales en cultivo, la sobrevivencia dentro de células fagocíticas, la citotoxicidad de macrófagos, la regulación de la inflamación y la secreción de fluidos.Muchos de los genes que codifican estos factores de virulencia son regulados por sistemas presentes en especies patógenas y no patógenas. Algunas cepas de Salmonella contienen plásmidos que codifican genes de virulencia que están altamente asociados con bacteremia y con la diseminación de la infección. El conocimiento de lo...