Micronuclei induced by reverse transcriptase inhibitors in mononucleated and binucleated cells as assessed by the cytokinesis-block micronucleus assay

This study evaluated the clastogenic and/or aneugenic potential of three nucleoside reverse transcriptase inhibitors (zidovudine - AZT, lamivudine - 3TC and stavudine - d4T) using the cytokinesis-block micronucleus (CBMN) assay in human lymphocyte cultures. All three inhibitors produced a positive response when tested in binucleated cells. The genotoxicity of AZT and 3TC was restricted to binucleated cells since there was no significant increase in the frequency of micronuclei in mononucleated cells. This finding indicated that AZT and 3TC caused chromosomal breakage and that their genotoxicity was related to a clastogenic action. In addition to the positive response observed with d4T in binucleated cells, this drug also increased the frequency of micronuclei in mononucleated cells, indicating clastogenic and aneugenic actions. Since the structural differences between AZT and 3TC and AZT and d4T involve the 3' position in the 2'-deoxyribonucleoside and in an unsaturated 2',3',dideoxyribose, respectively, we suggest that an unsaturated 2', 3', dideoxyribose is responsible for the clastogenic and aneugenic actions of d4T.

Determinação do limite mínimo de detecção da técnica de PCR “nested” para o vírus da hepatite B (HBV) / Evaluation of minimum detection limit to hepatitis B virus (HBV) PCR “nested”

Mundialmente, a hepatite pelo vírus B (HBV) é considerada um dos maiores problemas de saúde pública, apesar da vacinação. A Organização Mundial da Saúde (OMS) estima que mais de 2 bilhões de pessoas estejam infectadas pelo HBV. O Brasil é classificado como área de incidência intermediária pela OMS. No entanto, estudos de prevalência detectaram diferenças de índices de infecção nas regiões geográficas: 8% na região Amazônica, 2,5% nas regiões Centro-Oeste e Nordeste, 2% na Sudeste e 1% na região Sul. Um diagnóstico sensível e específico é de fundamental importância para os pacientes portadores do HBV. O objetivo deste estudo foi determinar o limite mínimo de detecção da técnica de PCR “nested” “in house” para o HBV. Diluições seriadas de uma amostra quantificada de HBV (1000 cópias/mL; 750 cópias/mL; 500 cópias/mL; 250 cópias/mL) foram submetidas à técnica de PCR “nested”. O alvo da amplificação por PCR foi a região do core e pré-core do vírus. Para extração dos ácidos nucléicos da amostra foi empregado o kit comercial QIAmp. O limite mínimo de detecção encontrado foi de 500 cópias/mL ou 10 cópias por reação de PCR.

All over the world, the hepatitis B virus (HBV) is considered one of the major problems of public health, despite vaccination. World Health Organization (WHO) estimates that more than 2 billions of persons are infected by HBV. Brazil is classified as an area of intermediary incidence by WHO. However, prevalence studies have detected differences of infection indexes in geographic regions: 8% in the Amazonian region, 2,5% in middle-west and Northeast, 2% in Southeast and 1% in South. A sensitive and specific diagnosis is very important to the HBV carrier patients. The aim of this study was to determine the minimum limit of detection of the nested PCR in house technique for HBV. Serial dilutions of one quantified sample of HBV (1000 copies/mL; 750 copies/mL; 500 copies/mL; 250 copies/mL) were submitted to a nested PCR. The target of PCR was viral core and pre-core region. Commercial kit, QiAmp, was employed to purify nucleic acids from the sample. The minimum detection limit found was 500 copies/mL or 10 copies per PCR reaction.

Determinação do limite mínimo de detecção da técnica de pcr "semi-nested" para Neisseria meningitidis, Haemophilus influenzae e Streptococcus pneumaniae / Determination of detection minimum limit by polymerase chain reaction seminested to Neisseria meningitidis, Haemophilus influenzae and Streptococcus pneumoniae

Mundialmente, as meningites bacterianas constituem importante causa de morbimortalidade na infância, exigindo um diagnóstico rápido e preciso no manejo dos pacientes. O objetivo deste estudo foi determinar o limite mínimo de detecção da técnica de PCR “semi-nested” “in house” para os três principais agentes causadores de meningites bacterianas: Neisseria meningitidis, Haemophilus influenzae e Streptococcus pneumoniae. Diluições seriadas de cada bactéria foram submetidas à técnica de PCR “semi-nested” para detecção simultânea dos três microrganismos, pela amplificação de uma região do gene bacteriano 16S rRNA. Os produtos finais foram amplicons específicos de diferentes pesos moleculares para N. meningitidis, H. influenzae e gênero-específico para Streptococcus sp. A forma de visualização dos resultados foi através de eletroforese em gel de agarose para a detecção dos produtos da PCR. Determinou-se que o limite mínimo de detecção para Neisseria meningitidis, Haemophilus influenzae e Streptococcus pneumoniae foi respectivamente de 103, 102 e 104 UFC/mL

Formaldeído na odontologia: aspectos antimicrobianos, carcinogênicos e mutagênicos. Um estudo da sua viabilidade na clínica odontológica / Formaldehyde in dentistry: antimicrobial, carcinogenic, and mutagenic aspects. A study of its viability in dentistry

O formaldeído é um medicamento usado na prática odontológica desde o século XVIII. Ele foi um dos agentes medicamentosos mais usados na Odontologia, ao se tratar de terapêutica pulpar. Porém, apesar de apresentar alto índice de sucesso clínico e radiográfico, têm-se dado atenção especial para as propriedades tóxicas deste material. O presente artigo visa revisar a ação do formaldeído sobre os tecidos dentários, enfatizando os aspectos citotóxicos e antimicrobianos, considerando sua ação sobre cultura de células e de bactérias, em diferentes concentrações, e seus efeitos mutagênicos e carcinogênicos. Pode-se concluir que, apesar de ser um eficiente antimicrobiano, o formaldeído apresenta numerosos efeitos citopatológicos, além de ser mutagênico e carcinogênico.

Comportamento da hepatite viral C nos pacientes em programa de hemodiálise do Hospital São Lucas de PUCRS / Behavior of viral hepatitis C in patients from hemodialysis program from Hospital São Lucas da PUCCRS

Objetivos: Avaliar a prevalência de anticorpos positivos para hepatite C nos pacientes em programa de hemodiálise, quanto à permanência em hemodiálise, realização transplante renal, mortalidade e influência do vírus da hepatite C sobre mortalidade entre aqueles com PCR para HCV-RNA positivo. Métodos: Foram identificados os pacientes em programa de hemodiálise no Hospital São Lucas da PUCRS em maio de 2006, analisando a sorologia positiva para hepatite C, através de anti-HCV reagente. Também foram estudados, retrospectivamente, 71 pacientes que estavam em hemodiálise no período de 2000 a 2002 e que participaram de estudo prévio a respeito de prevalência de anti-HCV positivo e/ou HCV-RNA positivo. Foi realizado o seguimento destes pacientes através de revisão de prontuário médico. Os resultados foram apresentados de forma descritiva e comparados com a literatura. Resultados: 70 pacientes estavam em programa de hemodiálise no mês de maio de 2006, entre os quais 7 (10%) tinham anticorpos positivos para hepatite C. Dos 71 pacientes que participaram do estudo entre 2000 e 2002 , 24(33,8%) permaneciam em acompanhamento no HSL-PUCRS, sendo que 12 (16,9%) em programa de hemodiálise e 12 (16,9%) realizaram transplante renal. 22 pacientes (31%) foram a óbto, sendo que as causas mais frequentes foram as cardiovasculares (36,3%). 25 pacientes (35,2%) perderam o vículo com a instituição. Entre os 71 pacientes, 15 apresentaram anticorpos para virus C e 7 tinham sorologia (anti-HCV) negativa. Entretanto, a detecção do HCV-RNA era positiva. Os restantes tinham tanto anti-HCV qunto HCV-RNA neativos. Conclusões: A prevalência atual e anticorpos positivos para hepatite C nos pacientes em hemodiálise não se alterou significaivamente em relação ao período de 2002. Não foi possível identificar influência da infecção pelo vírus da hepatite C na mortalidade e no prognóstico dos pacientes em programa de hemodiálise. A causa de óbto mais frequentemente encontrada foi a cardiovascular.

Associação entre o polimorfismo no códon 72 da p53 e as lesões pré-malignas e malignas cervicais / Association of codon 72 polymorphism with premalignant and malignant cervical lesions

OBJETIVOS: testar a hipótese de que o polimorfismo no códon 72 do gene TP53 é fator de risco para as lesões pré-malignas e malignas cervicais associadas ou não ao papilomavírus humano (HPV). MÉTODOS: foram incluídas amostras de cérvice uterina, para pesquisa de DNA de HPV e do polimorfismo no códon 72 da p53 com o uso da reação em cadeia da polimerase (PCR), de 155 pacientes que se submeteram à biópsia cervical. Foram formados três grupos de acordo com o diagnóstico histológico: lesão escamosa intra-epitelial de baixo grau (LSIL), lesão escamosa intra-epitelial de alto grau (HSIL) e carcinoma cervical. Aquelas pacientes sem alterações displásicas, citológicas e histológicas, foram consideradas controles. Para testar a associação entre o polimorfismo no códon 72 do gene TP53 e os grupos, foi utilizado o teste de chi2. Considerou-se como significativo o intervalo de confiança no nível de 95 por cento (alfa=0,05). RESULTADOS: quarenta pacientes tiveram o diagnóstico histológico de carcinoma cervical, 18 tinham HSIL, 24 tinham LSIL e 73 foram consideradas controles. O genótipo Arg/Arg p53 foi encontrado em 60,0 por cento das pacientes com câncer, 50,0 por cento dos casos com HSIL, 45,8 por cento dos casos com LSIL e em 45,2 por cento dos controles. Não houve diferença significativa entre as proporções de cada genótipo da p53 nos diferentes grupos independente da presença do HPV (chi2: 3,7; p=0,716). CONCLUSÕES: nossos dados não suportam a hipótese de que o polimorfismo no códon 72 do gene TP53 é importante no desenvolvimento de lesões cervicais pré-malignas e malignas associadas ou não ao HPV.

Bronquiolite aguda por rinovírus em lactentes jovens / Rhinovirus and acute bronchiolitis in young infants

OBJETIVO: Determinar a prevalência de infecção por rinovírus em lactentes menores de 6 meses hospitalizados por bronquiolite aguda. MÉTODOS: Foram selecionados de forma prospectiva lactentes hospitalizados com diagnóstico de bronquiolite aguda, no Hospital São Lucas da Pontifícia Universidade Católica do Rio Grande do Sul, no período entre maio e setembro de 2002. Foi pesquisada a presença de vírus respiratórios no aspirado nasofaríngeo (ANF), através de imunofluorescência direta para vírus sincicial respiratório, parainfluenza, influenza e adenovírus. Para detecção do rinovírus, foi utilizada a reação de transcrição reversa, seguida de reação em cadeia da polimerase, específicas para picornavírus, seguidas de hibridização com sonda específica para rinovírus. RESULTADOS: Foram selecionados 45 lactentes hospitalizados com diagnóstico de bronquiolite aguda. A mediana da idade dos pacientes selecionados foi de 2 meses. Foram encontradas amostras positivas para vírus respiratórios em 35/45 (77,8 por cento) casos. Foi detectado mais de um vírus em 7/35 (20 por cento) amostras. Das amostras positivas, o vírus sincicial respiratório foi detectado em 33/35 (94 por cento) casos. O rinovírus foi detectado em 6/35 casos (17 por cento). CONCLUSÕES: O rinovírus foi o segundo agente mais freqüentemente detectado em secreção nasal de lactentes jovens hospitalizados por bronquiolite aguda.

Estudo fenotípico e genotípico da resistência aos macrolídeos de "Streptococcus pneumoniae" isolados em hospitais de Porto Alegre - RS / Phenotypic and genotypic study of macrolide resistance of Streptococcus pneumoniae strains isolated in hospitals in Porto Alegre, in the state of Rio Grande do Sul, Brazil

OBJETIVO: O objetivo deste estudo foi determinar a prevalência do S. pneumoniae resistente aos macrolídeos e identificar suas características fenotípicas e genotípicas. MÉTODOS: Amostras de S. pneumoniae isoladas entre maio de 2002 e agosto de 2004, em Porto Alegre (RS), a partir de materiais clínicos coletados de diferentes sítios anatômicos foram analisadas. Para o teste de difusão em ágar foram utilizados discos de eritromicina, claritromicina, azitromicina e clindamicina. As concentrações inibitórias mínimas de eritromicina foram determinadas nos isolados resistentes aos macrolídeos pelo método de diluição em ágar. Os fenótipos dos isolados resistentes aos macrolídeos foram investigados pelo teste de difusão em ágar e a genotipagem pela reação em cadeia da polimerase. RESULTADOS: Foram avaliados 229 isolados de pneumococos, e 12 mostraram-se resistentes aos macrolídeos (5,2 por cento). Entre estes, 9 apresentaram o fenótipo MLSB (75 por cento) e 3 o fenótipo M (25 por cento). A reação em cadeia da polimerase indicou que 8 isolados com o fenótipo MLSB portavam apenas o gene ermB, enquanto que o gene mefE estava presente em todos os 3 isolados com o fenótipo M. Um isolado com o fenótipo MLSB apresentou ambos os genes. CONCLUSÃO: A resistência aos macrolídeos do S. pneumoniae em Porto Alegre permanece baixa, sendo devida principalmente à presença do gene ermB, com expressão do fenótipo MLSB.

Angiotensin converting enzyme ( ACE ) DD genotype: relationship with venous thrombosis

O troemboembolismo venoso (TEV) é uma doenca multifatorial associada com fatores de risco adquiridos e hereditários. Vários polimorfismos, tais como fator V de Leiden, mutacão G20210A da protrombina e as deficiências de proteína C, proteína S e anti-trombina são considerados fatores de risco para TEV. A enzima conversora da angiotensina (ECA) afeta a hemostasia diminuindo a fibrinólise. O polimorfismo no gene da ECA, caracterizado pela insercão/delecão de um fragmento de 287 pb no intron16, está relacionado a variacões nos níveis séricos da enzima. O genótipo DD foi associado com aumento de risco para TEV. Este estudo examinou a freqüência dos alelos I e D e a sua associacão com trombose venosa em um grupo de indivíduos do Sul do Brasil. Foram analisados 71 pacientes com trombose venosa profunda e/ou tromboembolismo pulmonar e 71 indivíduos sem história de trombose. A genotipagem foi realizada através da reacão em cadeia da polimerase. As freqüências do alelo D e do genótipo DD foram, respectivamente, 51,4% e 22,5% para os pacientes, e 64,7% e 45,0% para os controles. A razão de chance (odds ratio = OR) para a hipótese dominante (genótipos DD+ID versus genótipo II) foi 0,75 (IC 95%; 0,29-1,93) e a OR para a hipótese recessiva (genótipo DD versus genótipos ID+II) foi 0,35 (IC 95%; 0,16-0,78). Concluindo, nossos resultados sugerem que o genótipo DD não representa um fator de risco para TEV e pode exercer um efeito protetor para trombose venosa.

Abordagem diagnóstica da Hepatite B / Boarding diagnostic Hepatitis B

Os autores fazem uma revisão bibliográfica sobre a infecção causada pelo vírus da hepatite B nos seres humanos, seus aspectos epidemiológicos e fisiopatológicos; a história natural da doença hepática; seus marcadores sorológicos e moleculares. Abordam ainda o câncer hepático, carcinoma hepatocelular e realizam uma análise dos tratamentos disponíveis até o momento

Associação do polimorfismo do gene da enzima conversora de angiotensina com doença arterial coronariana: um estudo controlado por angiografia / Association of the angiotensin converting enzyme gene polymorphism and coronary artery disease: an angiographically controlled study

O trabalho teve como objetivo investigar a associação do polimorfismo de inserção/ delegação do gene da enzima conversora de angiotensina (ECA) com a presença de infarto do miocárdio e a extensão da doença arterial coronariana (DAC). Na literatura o alelo D da ECA tem sido relacionado com o desenvolvimento de doenças cardiovasculares, porém os resultados dos estudos publicados permanecem controversos. A associação do genótipo DD da ECA com infarto do miocárdio tem sido inconstante e atualmente sugere-se que esta associação estaria limitada a certos grupos raciais. A população do estudo consistiu de pacientes masculinos com idade entre 35 e 70 anos e que foram submetidos a cateterismo cardíaco para investigação de DAC. Definiu-se como grupo caso os indivíduos com diagnóstico de DAC e como grupo controle os pacientes com coronárias normais ao exame. A extensão do envolvimento caronariano foi classificado de acordo com o número de artérias coronarianas que apresentavam estenoses moderada ou severa. A genotipagem foi realizada através da técnica de reação em cadeia da polimerase (PCR) e os fatores de risco clássicos para DAC avaliados através de questionário, exame físico e exames laboratoriais. Participaram do estudo 34 pacientes, sendo 19 casos e 15 controles. A média de idade foi de 56 anos, sem diferença significativa entre os grupos. Na amostra estudada o genótipo da ECA não esteve associado à idade, índice de massa corporal, dislipidemia, níveis de glicemia em jejum elevados, tabagismo e história de hipertensão ou tratamento anti-hipertensivo. Não houve associação significativa entre o genótipo DD da ECA e a presença de infarto do miocárdio (P = 0,257). Também não se evidenciou associação entre o genótipo DD da ECA e o grau de extensão da DAC (P = 0,355). A maior prevalência do Genótipo DD no grupo de pacientes com DAC, levanta a hipótese de que com o aumento do número da amostra poderemos obter dados mais consistentes.

Análise da prevalência do papilomavírus humano em relação ao grau da lesão cervical / Analysis of human papillomavirus prevalence in relation to the grade of cervical lesion

O objetivo deste estudo é demonstrar a prevalência do papilomavírus humano em pacientes com câncer cervical (CA), lesão escamosa intra-epitelial de alto grau (HSIL), lesão escamosa intraepitelial de baixo grau (LSIL) e em pacientes com citologia e histologia cervicais normais (Normal). Foram arroladas no estudo pacientes referidas à nossa instituição para realizarem exame colposcópico. As pacientes deste estudo foram submetidas à coleta de amostras cervicais para exames citológicos, pesquisa de HPV (PCR) e histologia. 142 pacientes encaminhadas a nossa instituição para avaliação de anormalidades cervicais se submeteram à colposcopia com biópsia, teste do HPV e citologia. O HPV foi detectado através de PCR em 82% das amostras com CA (18/22), em 83% das amostras com HSIL (39/47), em 40% de LSIL (6/15) e em 10% das amostras normais (6/58). Nossos resultados mostraram uma relação significativa entre a presença do HPV e o grau da lesão cervical (p < 0,05), concordando com os dados da literatura. A importância do conhecimento da prevalência do HPV em pacientes com LSIL e normais pode residir no cuidado mais apurado que estas possam necessitar no seguimento, com colposcopia, citologia e rastreamento para o HPV.

Estudo sobre as possíveis vias de transmissão do herpesvírus humano tipo 8 / Study about possible routes in the transmission of human herpesvirus 8

O Herpesvírus Humano Tipo 8 (HHV-8) ou Herpesvírus associado ao Sarcoma de Kaposi (KSHV) é conhecido como o agente causador do Sarcoma de Kaposi (SK). O contato sexual entre homens é uma importante via de transmissão do HHV-8, pois esse é o principal fator de risco de contágio em pacientes soropositivos para HIV. Em algumas regiões da Africa onde o SK tem sido evidenciado em crianças, mesmo depois da descoberta da Síndrome da Imunodeficiência Adquirida (AIDS), outras rotas de transmissão também têm sido discutidas.

O papilomavírus humano nas lesões pré-malignas e malignas da cérvice uterina: aspectos imunológicos e moleculares / The human papillomavirus in premalignant and malignant lesions of the uterine cervix: immunologic and molecular aspects

Objetivos: Salientar a importância do conhecimento sobre a infecção pelo papilomavírus humano (HPV)na cérvice uterina. Revisar os aspectos imunológicos e moleculares da interação HPV e células do colo uterino. Métodos: Foi realizada revisão bibliográfica através do Public Medline e consulta a livros texto sobre o asssunto. Conclusão: O HPV provoca alterações na cérvice uterina, através da interação com proteína do hospedeiro, que levam ao desenvolvimento de lesões pré-malignas e malignas. A infecção viral é um aspecto essencial para este processo de transformação, todavia não é único. A resposta imunológica do hospedeiro pode influenciar na progressão da infecção pelo HPV