Long-term effects of neonatal malnutrition on microbicide response, production of cytokines, and survival of macrophages infected by Staphylococcus aureus sensitive/resistant to methicillin / Efeitos tardios da desnutrição neonatal na resposta microbicida, produção de citocinas e viabilidade de macrófagos na infecção por Staphylococcus aureus sensível/resistente a meticilina

OBJECTIVE: To assess microbicide function and macrophage viability after in vitro cellular infection by methicillin-sensitive/resistant Staphylococcus aureus in nourished rats and rats subjected to neonatal malnutrition. METHODS: Male Wistar rats (n=40) were divided in two groups: Nourished (rats suckled by dams consuming a 17% casein diet) and Malnourished (rats suckled by dams consuming an 8% casein diet). Macrophages were recovered after tracheotomy, by bronchoalveolar lavage. After mononuclear cell isolation, four systems were established: negative control composed exclusively of phagocytes; positive control composed of macrophages plus lipopolysaccharide; and two testing systems, macrophages plus methicillin-sensitive Staphylococcus aureus and macrophages plus methicillin-resistant Staphylococcus aureus. The plates were incubated in a humid atmosphere at 37 degrees Celsius containing 5% CO2 for 24 hours. After this period tests the microbicidal response, cytokine production, and cell viability were analyzed. The statistical analysis consisted of analysis of variance (p<0.05). RESULTS: Malnutrition reduced weight gain, rate of phagocytosis, production of superoxide anion and nitric oxide, and macrophage viability. Production of nitrite and interleukin 18, and viability of macrophages infected with methicillin-resistant Staphylococcus aureus were lower. CONCLUSION: The neonatal malnutrition model compromised phagocyte function and reduced microbicidal response and cell viability. Interaction between malnutrition and the methicillin-resistant strain decreased the production of inflammatory mediators by effector cells of the immune response, which may compromise the immune system's defense ability. .

OBJETIVO: Avaliar a função microbicida e a viabilidade de macrófagos, após infecção celular in vitro, com Staphylococcus aureus sensível/resistente a meticilina, em ratos nutridos ou submetidos a desnutrição neonatal. MÉTODOS: Ratos machos Wistar (n=40) foram divididos em dois grupos distintos: Nutrido (ratos amamentados por mães submetidas a dieta com 17% de caseína) e Desnutrido (ratos amamentados por mães submetidas a dieta com 8% de caseína). Os macrófagos foram recuperados após procedimento cirúrgico de traqueostomia, através da coleta do lavado broncoalveolar. Após o isolamento dos mononucleares, foram estabelecidos quatro sistemas: controle negativo, composto apenas pelos fagócitos; controle positivo, macrófagos mais lipopolissacarídeo; e dois sistemas teste, macrófagos mais Staphylococcus aureus sensível e resistente a meticilina. As placas foram incubadas por 24 horas, à temperatura de 37ºC, com atmosfera úmida e 5% de dióxido de carbono. Transcorrido esse período, foram realizados ensaios para análise da resposta microbicida, produção de citocinas e viabilidade celular. Na análise estatística, utilizou-se analysis of variance, admitindo-se p<0,05. RESULTADOS: A desnutrição acarretou redução do crescimento ponderal dos animais, da taxa de fagocitose, da produção de óxido nítrico, do ânion superóxido e da viabilidade de macrófagos. Houve menor produção de nitrito, de interleucina 18 e da viabilidade dos macrófagos infectados com Staphylococcus aureus meticilina-resistente. CONCLUSÃO: O modelo de desnutrição neonatal adotado comprometeu a função dos fagócitos, com redução da resposta microbicida e da viabilidade celular. A interação ...

Immunological parameters of macrophages infected by methicillin resistant/sensitive Staphylococcus aureus / Parâmetros imunológicos de macrófagos frente à infecção por Staphylococcus aureus meticilina sensível/resistente

INTRODUCTION: Could changes in Staphylococcus aureus cellular walls, which are commonly associated with multidrug resistance phenotype, influence their immune evasion mechanisms? OBJECTIVE: To evaluate the microbicide response and survival of alveolar macrophages after in vitro infection with methicillin-sensitive and methicillin-resistant Staphylococcus aureus. MATERIAL AND METHODS: We used 20 adult, male, albino, Wistar rats. The alveolar macrophage samples were obtained after tracheostomy and bronchoalveolar lavage. The alveolar macrophages were cultured in the proportion of 1:1 cells/ml Roswell Park Memorial Institute (RPMI) medium/well and isolated by plate adhesion. For the assessment of immunological parameters, four systems were established: negative control, positive control, methicillin sensitive S. aureus (MSSA) and methicillin resistant S. aureus (MRSA). RESULTS: When comparing MRSA and MSSA systems, there was no significant difference as to adhesion and phagocytosis rates, superoxide anion production and macrophage viability. By analyzing the kinetics of nitric oxide production, after 4 to 10 hours of cellular culture incubation, there was lower average production of this radical in the MRSA system when compared to MSSA. However, after 12 hours, no differences were detected between both systems. CONCLUSION: It is claimed that methicillin resistance may be a factor that influences the bacteria's ability to escape from macrophage microbicide response. Although the results of some immunological parameters were similar in the surveyed systems, the oscillations occurred during the production of nitric oxide may contribute significantly to the survival of Staphylococcus aureus.

INTRODUÇÃO: Modificações nas paredes celulares das cepas de Staphylococcus aureus relacionadas com o fenótipo de multirresistência poderiam influenciar seus mecanismos de evasão frente à resposta imune? OBJETIVO: Avaliar a resposta microbicida e a sobrevivência de macrófagos alveolares após infecção in vitro com Staphylococcus aureus meticilina sensível/resistente. MATERIAL E MÉTODOS: Utilizaram-se 20 ratos adultos, machos, albinos e da linhagem Wistar. Os macrófagos alveolares foram obtidos após procedimento cirúrgico de traqueostomia, por meios da coleta do lavado broncoalveolar. Os macrófagos alveolares foram cultivados na proporção de 1:1 células/ml de Roswell Park Memorial Institute (RPMI)/poço e isolados pela capacidade de adesão à placa. Para avaliação de parâmetros imunológicos, foram estabelecidos quatro sistemas: controle negativo, controle positivo, S. aureus sensível a meticilina (MSSA) e S. aureus resistente à meticilina (MRSA). RESULTADOS: Ao comparar os sistemas de MSSA e MRSA, não foi observada diferença no índice de aderência, na taxa de fagocitose, na produção do ânion superóxido e na viabilidade dos macrófagos. Ao analisar a cinética de óxido nítrico, houve menor produção média desse radical para o MRSA quando comparado com o MSSA, no período de 4 a 10 horas de incubação das culturas celulares. Entretanto, após 12 horas, não foi detectada divergências entre esses sistemas. CONCLUSÃO: Sugere-se que a resistência à meticilina poderá ser um fator que influenciará a capacidade de evasão da bactéria à resposta microbicida dos macrófagos. Apesar dos resultados de alguns parâmetros imunológicos terem sido similares entre os sistemas analisados, as oscilações ocorridas durante a produção do óxido nítrico poderão contribuir de forma importante para a sobrevivência da bactéria Staphylococcus aureus.

Desnutrição neonatal e produção de IFN-γ IL-12 e IL-10 por macrófagos/linfócitos: estudo da infecção celular, in vitro, por Staphylococcus aureus meticilina sensível e meticilina resistente / Early malnutrition and production of IFN, IL-12 and IL-10 by macrophages/lymphocytes: in vitro study of cell infection by methicillin-sensitive and methicillin-resistant Staphylococcus aureus

OBJETIVO: Avaliar a influência da desnutrição neonatal sobre a produção de Interferon gama, Interleucina-12 e Interleucina-10 em cultura de macrófagos alveolares e linfócitos infectados, in vitro, com Staphylococcus aureus sensível/resistente à meticilina. MÉTODOS: Ratos machos Wistar foram amamentados por mães cuja dieta, durante a lactação, continha 17% de proteína no grupo nutrido e 8% no grupo desnutrido. Após desmame, ambos os grupos receberam a dieta normoproteica. Os macrófagos foram obtidos após traqueostomia, através da coleta do lavado broncoalveolar. Para obtenção dos linfócitos, foi realizado o procedimento cirúrgico de punção cardíaca. Após o isolamento dos diferentes tipos celulares, procedeuse à realização dos estímulos com as cepas de estudo. A dosagem das citocinas foi realizada pelo método de Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, a partir de amostras coletadas do sobrenadante das culturas após 24 horas de incubação. RESULTADOS: A desnutrição acarretou diminuição do crescimento ponderal, redução na produção de Interferon gama em cultura de macrófagos alveolares e linfócitos e diminuição na produção de Interleucina-12 em cultura de macrófagos alveolares. Apenas a produção de Interferon gama e Interleucina-10 em cultura de macrófagos alveolares apresentou diferença entre as cepas analisadas, em ambos os grupos estudados. CONCLUSÃO: O modelo de desnutrição neonatal produziu sequela no peso corporal e reduziu a produção de citocinas próinflamatórias (Interleucina-12 e Interferon gama), indicando que esse modelo de desnutrição pode comprometer a resolução de um processo infeccioso. A cepa de Staphylococcus aureus resistente à meticilina estimulou uma maior produção de Interferon gama e Interleucina-10 por macrófagos alveolares, o que sugeriu estimulação imunológica mais intensa, por essa cepa, nesse tipo celular especificamente.

OBJECTIVE: The present study assessed the influence of neonatal malnutrition on the production of interferon gamma, interleukin-12 and interleukin-10 in cultured macrophages and lymphocytes infected in vitro with methicillin-sensitive or methicillin-resistant Staphylococcus aureus. METHODS: Male Wistar rats were suckled by mothers fed during lactation a chow containing 17% protein for the nourished group and 8% for the undernourished group. After weaning, both groups received a normal diet in terms of protein content. The macrophages were obtained by bronchoalveolar lavage after tracheostomy. Cardiac puncture was used for the collection of lymphocytes. After isolation of different cell types, the challenge with the different strains was performed. Cytokines were measured by enzymelinked immunosorbent assay (ELISA), using samples collected from the culture supernatant after an incubation period of 24 hours. RESULTS: Malnutrition let to slow weight gain, low interferon gamma in cultured alveolar macrophages and lymphocytes and low production of interleukin-12 in cultured alveolar macrophages. Only interferon gamma and interleukin-10 in cultured alveolar macrophages differed between the two groups and study strains. CONCLUSION: The neonatal malnutrition model used impaired weight gain and reduced production of proinflammatory cytokines (interleukin-12 and interferon gamma), indicating that protein malnutrition may result in an inability to fight infections. The methicillin-resistant Staphylococcus aureus strain stimulated macrophages to produce interferon gamma and interleukin-10, suggesting that this strain better provokes the immune system, specifically for this cell type.

Flora bacteriana conjuntival após uso tópico de ciprofloxacino e gatifloxacino em cirurgia de catarata / Conjunctival bacterial flora after topical use of ciprofloxacin and gatifloxacin in cataract surgery

OBJETIVO: Avaliar alterações da flora conjuntival após uso dos colírios de ciprofloxacino e gatifloxacino 0,3 por cento na profilaxia dos pacientes submetidos à facectomia. MÉTODOS: Quarenta pacientes submetidos a facectomia foram alocados em dois grupos, conforme o colírio antibiótico utilizado: Grupo A: ciprofloxacino 0,3 por cento e Grupo B: gatifloxacino 0,3 por cento. Os pacientes usaram os colírios 1 hora antes da cirurgia e nos primeiros 14 dias pós-operatórios. Foi coletado material da conjuntiva em cinco momentos: 1 hora antes da cirurgia, sem medicações tópicas (t0); imediatamente antes da aplicação de iodopovidona (PVPI) (t1), antes do início da cirurgia, após iodopovidona (t2), 14 dias após a cirurgia (t3) e 28 dias após a cirurgia (t4). RESULTADOS: O uso de antibióticos no pré-operatório diminuiu a positividade das culturas anteriores ao uso do iodopovidona em ambos os grupos; no Grupo A esta redução não alcançou significância estatística (Grupo A - p=0,07 e Grupo B - p=0,04). A positividade das culturas foi reduzida nos dois grupos após aplicação de iodopovidona e 14 dias após a cirurgia (p<0,05). Em t4 a freqüência do Staphylococcus coagulase-negativo foi menor no grupo A quando comparado ao grupo B (p<0,05) e a sensibilidade ao ciprofloxacino em relação a t0 foi menor em todos grupos. CONCLUSÃO: O colírio de gatifloxacino aplicado 1 hora antes da cirurgia reduziu significantemente a positividade das culturas. Ambos antibióticos promoveram redução da flora quando administrados no pós-operatório.

PURPOSE: To evaluate alterations of the conjunctival flora after the use of 0.3 percent ciprofloxacin and gatifloxacin in the prophylaxis of patients undergoing cataract surgery. METHODS: 40 patients undergoing cataract surgery were distributed into two groups according to the use of antibiotic eye drops: Group A: 0.3 percent ciprofloxacin and Group B: 0.3 percent gatifloxacin. Both groups used antibiotic eye drops 1 hour before surgery and 14 days after surgery. Conjunctival material was collected at 5 time points: 1 hour before surgery, without any topical medication (t0); immediately before the application of povidone-iodine (PVPI) (t1), before the beginning of surgery, after povidone-iodine (t2), 14 days (t3) and 28 days after surgery (t4). RESULTS: Preoperative antibiotics reduced the positivity of the cultures before the use of PVPI in both groups, although in Group A this reduction was not significant (Group A - p=0.07 and Group B - p=0.04). The number of positive cultures was reduced in all groups after the use of povidone-iodine and on the 14th postoperative day (p<0.05). In t4 there was a reduction in the frequency of coagulase-negative Staphylococcus in Group A compared with Group B (p<0.05); the susceptibility to ciprofloxacin was also reduced in all groups, when compared with t0. CONCLUSIONS: Gatifloxacin eye drops applied one hour before surgery significantly reduced the number of positive conjunctival cultures. Both antibiotics reduced the conjunctival flora when administered in the postoperative period.

Conjunctival bacterial flora and antibiotic resistance pattern in patients undergoing cataract surgery

PURPOSE: To evaluate the conjunctival bacterial flora and its antibiotic resistance pattern in eyes of patients undergoing cataract surgery. METHODS: From August to October 2004, 50 patients undergoing cataract surgery in the "Fundacão Altino Ventura", Recife, Brazil, were prospectively evaluated. Conjunctival material was obtained on the day of surgery, before the application of topical anesthetic, antibiotic or povidone-iodine. The collected material was inoculated and bacterioscopic analysis was carried out. In the cases where there was bacterial growth, antibiotic susceptibility tests and cultures, for isolation and identification of the bacteria, were performed. RESULTS: Of the 50 eyes, 43 (86.0 percent) had positive cultures. The coagulase-negative Staphylococcus (CNS), found in 27 (54.0 percent) eyes, was the most frequent organism. More than 90 percent of the isolates of this bacterium were susceptible to cephalotin, vancomycin, chloramphenicol, ofloxacin and gatifloxacin; 70 to 90 percent were susceptible to gentamicin, cefotaxime, oxacillin and ciprofloxacin; and less than 70 percent were sensible to neomycin. Four (10.5 percent) of the bacterial isolates were resistant to four or more antibiotics, two of them were CNS. CONCLUSION: The most frequent bacterium in the conjunctival flora is the coagulase-negative Staphylococcus. The isolates of this organism showed low susceptibility rate to neomycin, and high susceptibility rates to cephalotin, vancomycin, chloramphenicol, ofloxacin and gatifloxacin.