Estudo dos mecanismos de migração e ativação de lifócitos T gamma delta em respostas inflamatórias / Study of the mechanisms of migration and activation of T lymphocytes in inflammatory responses gamma delta

Os linfócitos T gamma delta apresentam um papel importante durante reações alérgicas, desempenhando funções efetoras e regulatórias. No entanto, o papel destas células na resposta alérgica não está totalmente esclarecido. Quimiocinas, mediadores lipídicos e moléculas de adesão são fundamentais para a migração e ativação de linfócitos T durante a resposta inflamatória. Resultados obtidos durante a minha dissertação de mestrado demonstraram que a injeção intrapleural (i.pl.) de ovalbumina (OVA) induziu o aumento no número de linfócitos T gamma delta expressando CCR2, CCR5, CCR9, L-selectina e integrina alpha4beta7 na pleura, no sangue e em linfonodos de camundongos C57BL/6 previamente sensibilizados. Ainda, a migração destas células para o sítio alérgico foi mediado por adesão, quimioicinas e leucotrieno (LT)B4 na migração e na ativação de linfócitos T gamma delta, assim como avaliar o papel destas células no influxo de eosinófilos durante a resposta alérgica. Nós observamos que a L-selectina é importante para a ativação e a proliferação de linfócitos T gamma delta nos linfonodos, assim como para sua migração para a pleura durante a resposta alérgica. Em adição, o bloqueio in vivo da L-selectina inibiu o acúmulo pleural de eosinófilos, o que ocorreu através de um mecanismo indireto, dependente (ao menos em parte) da migração de linfócitos T gamma delta para o sítio inflamatório. De acordo, observamos que a depleção de linfócitos T Vgamma4, que acumulam na cavidade pleural durante o curso da resposta alérgica, inibiu a migração de eosinófilos para sítio inflamatório após o desafio com OVA. Em adição à CCL2, nós demonstramos que o LTB4 induziu a migração de linfócitos T gamma delta in vitro e in vivo via BLT1, revelando um importante papel deste mediador no recrutamento destes linfócitos em diferentes modelos de inflamação pleural. O LTB4 induziu ainda a migração de linfócitos T gamma delta de forma indireta, através da indução da produção de CCL2. Observamos também que, durante a pleurisia alérgica, oicorreu o aumento da produção de CCL25 em paralelo ao acúmulo de linfócitos T gamma delta CCR9+/alpha4beta7+ na cavidade pleural de animais desafiados com alérgeno. A neutralização da CCL25 inibiu seletivamente o aumento do número de linfócitos T gamma delta alpha4beta7+ e IL-17+. Em adição, o estímulo i.pl. de CCL25 em camundongos induziu a migração de linfócitos T gamma delta alpha4beta7+ e IL-17+. De fato, a CCL25 induziu a quimiotaxia in vitro de linfócitos T gamma delta IL-17+; entretanto, não alterou a produção de IL-17 por linfócitos T gamma delta estimulados in vitro. Além disso, o bloqueio da delta4beta7 inibiu a migração de linfócitos T gamma delta induzida por CCL25 durante a resposta alérgica in vitro e in vivo. Estes dados demonstram que: i) A L-selectina é crucial para a ativação de linfócitos T gamma delta nos linfonodos, para a migração destes para o sítio inflamatório e conseqüente modulação do influxo de eosinófilos durante a resposta alérgica; ii) o LTB4 induz a migração de linfócitos Tgamma delta diretamente via BLT1 e indiretamente via CCL2 para o tecido inflamado em diferentes modelos deinflamação pleural; iii) A CCL25 participa da resposta alégica induzindo a migração de subpopulações de linfócitos Tgamma delta espressando alpha4beta7 para cavidade pleural, modulando indiretamente a produção de IL-17.

Estudo do envolvimento de CC quimiocinas e moléculas de adesão no recrutamento de linfócitos T γδ em reações inflamatórias de origem alérgica / Study of the envolvement of CC-chemokines and adhesion moleculares conscription of lymphocyte T γδ into the inflammatory reactions of allergic origin

Os linfócitos T gd apresentam um papel importante durante reações alérgicas, desempenhando funções efetoras e regulatórias.Quimiocinas e moléculas de adesão são fundamentais para a migração de linfócitos em resposta a diversos estímulos.No entanto, os mecanismos pelos quais os linfócitos T migram para o sítio inflamatório durante reações de origem alérgica não foram descritos.Neste estudo, pretendemos investigar o papel das quimiocinas, selectinas e integrinas na migração de linfócitos T após o desafio intratorácico com ovoalbumina em camundongos previamente sensibilizados.O estímulo com ovoalbumina induziu um aumento no número de linfócitos T na cavidade pleural após 12 horas, permanecendo significativo até 96 horas, acompanhado por um aumento no sangue em 48 horas. O desafio antigênico também induziu um aumento no número de linfócitos T expressando CCR2, CCR5 e CCR9 na pleura entre 12 e 72 horas e no sangue em 48 horas, assim como o aumento da expressão dessas moléculas no linfonodo torácico 48 horas após o estímulo.Os níveis de cc quimiocinas CCL2, CCL3, CCL5 e CCL25 encontraram-se aumentados nos lavados pleurais recolhidos 24 horas após o estímulo, e foram produzidas principalmente por macrófagos pleurais...A neutralização in vitro de CCL2 inibiu a quimiotaxia de linfócitos Td induzida por lavados pleurais de animais estimulados, confirmando o papel direto desta quimiocina nos linfócitos Td.Confirmando este dado, o desafio antigênico falhou em induzir um aumento no número de linfócitos T d na cavidade pleural, no sangue e em linfonodos de camundongos deficientes de CCR2.Foi também observado um aumento na expressão de L-selectina em linfócitos T ?d recolhidos dos linfonodos torácicos de animais desafiados. Linfócitos T recolhidos do sangue de animais estimulados apresentaram uma expressão maior de L-selectina quando comparados com as células da cavidade pleural, sugerindo o shedding desta molécula.O desafio antigênico também induziu um acúmulo de linfócito...