ABSTRACT
A doença de Chagas (DC), causada pelo protozoário Trypanosoma cruzi, é uma doença negligenciada endêmica em diferentes regiões empobrecidas da América Latina. O tratamento, baseado em dois nitroderivados, Nifurtimox e Benzonidazol(Bz), é insatisfatório, demandando a busca de novos fármacos com ação tripanocida que sejam mais seletivos e eficazes. Nesse âmbito, o presente trabalho busca a identificação de novos agentes antiparasitários para a DC, explorando a avaliação fenotípica de novas amidinas aromáticas sintéticas in vitro incluindo ensaios de combinação entre estes compostos. Dez novas amidinas foram testadas sobre tripomastigotas sanguíneos e amastigotas de diferentes cepas do T. cruzi (Y eTulahuen) e também sobre células de mamífero hospedeiras (linhagem L929 ecélulas cardíacas) para determinar seu perfil eficácia e de toxicidade,respectivamente. Dentre as moléculas testadas (apresentando um ou dois grupamentos catiônicos terminais), cinco foram mais ativas sobre tripomastigotas sanguíneos que o fármaco de referência (Bz), sendo uma delas, a DB2267(molécula dicatiônica) a mais eficaz, exibindo EC50 de 0,23 miM e um índice de seletividade (IS) de 417. Esta diamidina foi 28 vezes mais ativa e cerca de três vezes mais seletiva que Bz. Para determinar se a combinação de duas amidinas teria um efeito tripanocida superior ao seu uso em monoterapia, tripomastigotas sanguíneos foram incubados com DB2267 e DB2236 em proporções fixas e os resultados mostraram apenas um efeito aditivo com sigmaFIC<4. Interessantemente,quando formas intracelulares foram expostas à DB2267, sua atividade foi relacionada à cepa do parasito, sendo eficaz (EC50 = 0.87 ± 0.05 miM) contra DTU II(cepa Y), mas não contra um representante da DTU VI (Tulahuen), mesmo quando utilizamos veículo diferente do DMSO (beta-ciclodextrina)...
Chagas disease (CD), caused by the protozoan Trypanosoma cruzi, is a neglecteddisease endemic in different poor areas of Latin America. The treatment, based ontwo nitroderivatives, Nifurtimox and Benznidazole (Bz), is unsatisfactory, demandingthe screening of new potential trypanocidal drugs more selective and potent. In thisscope, the present work deals with the identification of new anti-parasitic agents forCD, exploring the phenotypic screening of novel synthetic aromatic amidines in vitroand also combination assays between these compounds. The novel ten amidineswere tested against bloodstream trypomastigotes (BT) and amastigote forms ofdifferent T.cruzi strains (Y and Tulahuen) and were also evaluated on mammalianhost cells (L929 cells and cardiac cells) to check their toxicity profile. Among thesemolecules, five were more active against BT than the reference drug (Bz), being oneof them, the DB2267 (a dicationic molecule) the most potent, exhibiting an EC50value of 0.23 µM and a selectivity index (SI) of 417. This diamidine was 28-fold moreactive and about 3 times more selective than Bz. To ascertain if the combination oftwo amidines could improve their trypanocidal activity, BT were incubated withDB2267 and DB2236 in fixed-ratio proportions and the data showed only an additiveeffect with sigmaFIC<4. Interestingly, when intracellular forms were exposed to DB2267,its activity was related to the parasite strain, being effective (EC50 = 0.87 ± 0.05 miM)against DTU II (Y strain) but not against one representative of DTU VI (Tulahuen)even using different vehicles (beta-cyclodextrins and DMSO)...