Effects of estrogen and raloxifene on synaptic density in the hippocampal CA1 region of ovariectomized rats

Abstract Introduction The CA1 region of the hippocampus has an important role in learning and memory. It has been shown that estrogen deficiency may reduce the synaptic density in the region and that hormone replacement therapy may attenuate the reduction. Objectives This study aimed to evaluate the effects of estrogen and raloxifene on the synaptic density profile in the CA1 region of the hippocampus in ovariectomized rats. Methods Sixty ovariectomized three-month-old virgin rats were randomized into six groups (n = 10). Treatments started either three days (early treatment) or sixty days (late treatment) after ovariectomy. The groups received propylene glycol vehicle (0.5 mL/animal/day), equine conjugated estrogens (50 μg/animal/day), or raloxifene (3 mg/kg/day) either early or late after ovariectomy. The drugs were administered orally by gavage for 30 days. At the end of the treatments, the animals were anesthetized and transcardially perfused with ether and saline solution. The brains were removed and prepared for analysis under transmission electron microscopy and later fixed. Results Results showed a significant increase in the synaptic density profile of the hippocampal CA1 region in both the early estrogen (0.534 ± 0.026 µ/m2) and the early raloxifene (0.437 ± 0.012 µ/m2) treatment groups compared to the early or late vehicle-treated control groups (0.338 ± 0.038 µ/m2 and 0.277 ± 0.015 µ/m2 respectively). Conclusions The present data suggest that the raloxifene effect may be lower than that of estrogen, even early or late treatment, on synaptic density in the hippocampus.

Melatonin may prevent or reverse polycystic ovary syndrome in rats

SUMMARY OBJECTIVE To evaluate the ovarian effects of melatonin (Mel) in a rat model of polycystic-ovary-syndrome (PCOS) before and after permanent estrus induction. METHODS Thirty-two adult-female rats with regular estrous cycle were equally divided into four groups: 1) GCtrl - at estrous phase. 2) GPCOS - at permanent-estrous phase. 3) GMel1 - treated for 60 days with Mel (0.4 mg/Kg) during permanent estrus induction and 4) GMel2 - rats with PCOS and treated for 60 days with Mel. After that, the animals were euthanized, and the ovaries were removed and processed for paraffin embedding. Sections were stained with H.E. for histomorphometry or subjected to immunohistochemistry for Ki-67 and cleaved caspase-3 (Casp-3) detections. RESULTS The GPCOS showed lack of corpus luteum and several ovarian cysts, as well as interstitial-like cells. The presence of corpus luteum and a significant increase in primary and antral follicles were observed in Mel-treated groups, which also showed a decrease in the number of ovarian cysts and in the area occupied by interstitial-like cells. These results were more evident in GMel1. The percentage of Ki-67-positive cells was significantly higher in the Mel-treated groups, mainly in the GMel2, as compared to GPCOS. On the other hand, the percentage of Casp-3-positive cells was significantly lower in granulosa cells of GMel1, whereas it was significantly higher in the interstitial-like cells of GMel2, in comparison to GPCOS. CONCLUSION Melatonin administration prevents the permanent estrus state in the PCOS rat model. This effect is more efficient when melatonin is administered before permanent estrus induction.

RESUMO OBJETIVO Avaliar os efeitos ovarianos da melatonina (Mel) em ratas com síndrome dos ovários policísticos (SOP) antes e após a indução do estro-permanente. MÉTODOS Trinta e duas ratas com ciclos estrais regulares foram igualmente divididas em quatro grupos: 1) GCtrl - fase de estro. 2) GSOP - fase de estro-permanente. 3) GMel1 - tratadas por 60 dias com Mel (0,4 mg/kg) durante a indução do estro-permanente e 4) GMel2 - ratas com SOP e tratadas com Mel. Após eutanásia dos animais, os ovários foram processados para inclusão em parafina. Cortes foram corados com H.E ou submetidos à imuno-histoquímica para detecção de Ki-67 e caspase-3 clivada (Casp-3). RESULTADOS O GSOP mostrou ausência de corpos lúteos e vários cistos ovarianos, além de inúmeras células intersticiais. A presença de corpos lúteos e o aumento significativo dos folículos primários e antrais foram observados nos grupos tratados com Mel, os quais também mostraram diminuição no número de cistos ovarianos e na área ocupada pelas células intersticiais. Esses resultados foram mais evidentes no GMel1 do que no GMel2. A porcentagem de células Ki-67 positivas foi significativamente maior no GMel1 e no GMel2, sendo mais evidente no GMel2, em comparação ao GSOP. Por outro lado, a porcentagem de células positivas à Casp-3 foi menor nas células da granulosa do GMel1 e maior nas células intersticiais do GMel2, em comparação ao GSOP. CONCLUSÃO A administração de melatonina previne o estado de estro-permanente em ratas com SOP. Esse efeito é mais eficiente quando a melatonina é administrada após indução do estado de estro-permanente.

Isoflavones in gynecology

SUMMARY

Glycosaminoglycan distribution in the rat uterine cervix during the estrous cycle

OBJECTIVE: To analyze the amount of glycosaminoglycans in the uterine cervix during each phase of the rat estrous cycle. DESIGN: Based on vaginal smears, forty female, regularly cycling rats were divided into four groups (n = 10 for each group): GI - proestrous, GII - estrous, GIII - metaestrous and GIV - diestrous. Animals were sacrificed at each phase of the cycle, and the cervix was immediately removed and submitted to biochemical extraction and determination of sulfated glycosaminoglycans and hyaluronic acid. The results were analyzed by ANOVA followed by the Bonferroni post-hoc test. RESULTS: The uterine cervix had the highest amount of total sulfated glycosaminoglycans and dermatan sulfate during the estrous phase (8.90 ± 0.55 mg/g of cetonic extract, p<0.001; and 8.86 ± 0.57 mg/g of cetonic extract, p<0.001). In addition, there was more heparan sulfate at the cervix during the proestrous phase (0.185 ± 0.03 mg/g of cetonic extract) than during any other phase (p<0.001). There were no significant changes in the concentration of hyaluronic acid in the uterine cervix during the estrous cycle. CONCLUSION: Our data suggest that the amount of total sulfated glycosaminoglycans may be influenced by hormonal fluctuations related to the estrous cycle, with dermatan sulfate and heparan sulfate being the glycosaminoglycans most sensitive to hormonal change.

Aspectos histomorfológicos e respiratórios em modelo de lesão pulmonar aguda por sepse em ratos tratados com pentoxifilina / Histomorphologic and respiratory aspects of acute lung injury in rats induced by experimental sepsis and under pentoxifylline treatment

OBJETIVO: Analisar as alterações histomorfológicas e respiratórias em modelo de lesão pulmonar aguda por sepse em ratos tratados com pentoxifilina. MÉTODOS: Foram utilizados 15 ratos adultos distribuídos em três grupos (n=5, por grupo), assim constituídos: GC - receberam apenas ventilação mecânica; GS - Animais sépticos tratados com solução salina e mecanicamente ventilados; GS+PTX - Animais sépticos, com infusão de pentoxifilina e mecanicamente ventilados. Todos os animais foram ventilados por um período de 180 minutos. Ao final deste período, foram avaliadas variáveis gasométricas (gasometria arterial), gravimétricas (relação peso úmido/peso seco), concentração de proteínas totais no lavado broncoalveolar e histomorfométricas (espessura dos septos alveolares). Os dados obtidos foram submetidos a análise estatística (P < 0,05) RESULTADOS: A pressão parcial de oxigênio ao final do experimento mostrou-se elevada no grupo GS+PTX (460,0 ± 38,2 mmHg) em relação ao grupo GS (336,0 ± 14,6 mmHg) (P < 0,05). No grupo GS, a concentração de proteínas no lavado broncoalveolar encontrou-se aumentada em relação aos demais grupos; no entanto, se mostrou atenuada após a administração de pentoxifilina. Notamos, pela morfologia em todos os grupos avaliados, vasodilatação nos septos alveolares e no grupo S alguns alvéolos apresentaram-se repletos de macrófagos. Estes aspectos foram atenuados no GS+PTX. A espessura dos septos alveolares mostrou uma significante redução no grupo GS+PTX quando comparado com o grupo GS (P < 0,05). CONCLUSÃO: A pentoxifilina restabelece a oxigenação e reduz os efeitos deletérios do processo de sepse em associação à ventilação mecânica com baixo volume corrente.

OBJECTIVE: Respiratory repercussion on acute lung injury in a model of induced sepsis intraperitoneally. METHODS: Fifteen animals taken at random were submitted to adult male Wistar rats. The rats were randomly divided into 3 groups (n=15): Group C - control group received only mechanical ventilation; Group S - rats received live Escherichia coli (E. coli) intraperitoneally (septic) and after 6 hours they were treated with normal saline infusion and ventilated with a low tidal volume. Group S+PTX - rats received live Escherichia coli intraperitoneally (septic) and after 6 hours they were treated with pentoxifylline (PTX) infusion and ventilated with a low tidal volume. All animals were ventilated during 180 minutes. We analyzed the arterial blood gases, gravimetric indices and histomorphometric analysis. RESULTS: Blood gases, wet to dry ratios, and total protein concentrations in the bronchoalveolar lavage were analyzed in all experimental groups. In the end of the experiment the partial pressure of oxygen was higher in the GS+PTX (460,0 ± 38,2 mmHg) compared with GS (336,0 ± 14,6 mmHg). Pentoxifylline with low tidal volume attenuated significantly total protein in the bronchoalveolar lavage. The septal diameter was significantly reduced in the group GS compared with group GS+PTX (P < 0,05). CONCLUSIONS:The pentoxifylline ameliorated the oxygenation and decreased the deleterious effects of sepsis in the associated mechanical ventilation.

The effects of pentoxifylline into the kidneys of rats in a model of unilateral hindlimb ischemia/reperfusion injury

PURPOSE: To study the role of pentoxifylline (PTX) on remote kidney injury caused by muscle ischemia of left hindlimb of rats. METHODS: After xylazine and ketamine anesthesia, the left hindlimb of rats (n=66) were submitted to 6 hours ischemia (clamping the left common iliac artery). Three groups were used: sham group (SG, n=6), early group (EG, n=30) with reperfusion after 4 hours and late group (LG, n=30) with reperfusion after 24 hours. The saline solution (EG1, n=10 and LG1, n=10) or PTX (40mg.Kg-1) was administered in the reperfusion beginning (EG2, n=10/LG2, n=10) or divided in two doses in the ischemia beginning and reperfusion beginning (EG3, n=10/LG3, n=10). The plasmatic creatinokinase, urea, creatinine, sodium and potassium values were measure and histological samples from left kidney were prepared and H&E stained for scored cellular necrosis and degeneration of kidney tubules and thickness glomerulus determination. The apoptosis index was determined by immunohistochemical expression of the caspase-3. The tests of Mann-Whitney and Kruskal-Wallis (p < 0.05) were applied. RESULTS: The urea (90.5 ± 30.96 mg.dL-1), creatinine (2.28 ± 0.54 mg.dL-1), potassium (16 ± 3.66 mmol.dL-1) and mesangium thickness (0.97 ± 0.42 µm) values were significantly higher in group LG3. There was no significantly difference of caspase 3 expression between EG2 (16.35 ± 1.65 percent) and LG3 (15.57 ± 2.54 percent), and both were significantly worse than SG (9.8 ± 1.98 percent). CONCLUSIONS: The PTX has some protecting effect on remote kidney injury due to hindlimb ischemia/reperfusion injury only in the early phase of reperfusion.

OBJETIVO: Estudar o papel da pentoxifilina (PTX) nas lesões à distância no rim causadas pela isquemia no membro posterior esquerdo de ratos. MÉTODOS: Sob anestesia com xilazina e quetamina, o membro posterior de ratos (n=66) foi submetido a 6 horas de isquemia pelo clampeamento da artéria ilíaca comum esquerda. Foram estudados três grupos: grupo simulado (SG, n=6), grupo precoce (EG, n=30) após quatro horas de reperfusão e grupo tardio (LG, n=30) após 24 de reperfusão. A solução salina (EG1, n=10 e LG1, n=10) ou a PTX (40mg.Kg-1) foram administradas no início da reperfusão(EG2, n=10/LG2, n=10) ou divididas em duas aplicações no início da isquemia e no início da reperfusão (EG3, n=10/LG3, n=10). Foram medidos os valores plasmáticos da creatinofosfoquinase, uréia, creatinina, sódio e potássio. Amostras do rim esquerdo foram preparadas e coradas em HE para realizar o escore de necrose de células tubulares renais ou presença de obstrução tubular renal na área do córtex renal e da presença do espessamento do mesângio glomerular. O índice de apoptose foi determinado pela expressão imunoistoquímica da caspase-3. Foram aplicados os testes de Mann-Whitney e Kruskal-Wallis (p < 0.05). RESULTADOS: a dosagem de uréia (90,5 ± 30,96 mg.dL-1), creatinina (2,28 ± 0,54 mg.dL-1), potássio (16 ± 3,66 mmol.dL-1) e a espessura do mesângio(0,97 ± 0,42 µm) foram significantemente maiores nos animais do grupo LG3. Não houve diferença significante na expressão da caspase-3 entre os grupos EG2 (16,35 ± 1,65 por cento) e LG3 (15,57 ± 2,54 por cento) e ambos foram significantemente piores que o grupo SG (9,8 ± 1,98 por cento). CONCLUSÃO: A PTX oferece algum efeito protetor nas lesões à distância nos rins de animais submetidos à lesão de isquemia e reperfusão de membro posterior, no período de até quatro horas após a reperfusão.

Effect of Lamivudine on the Rat Pregnancy Outcome / Efecto de la Lamivudina en la Rata Preñada

Human immunodeficiency virus (HIV) infection is in growing incidence throughout the world. Due to the increasing proportion of affected women in reproductive years, the association of pregnancy with HIV infection becomes a matter of major Public Health concern. Antiretroviral drug administration turned out to be imperative during pregnancy in order to prevent the vertical transmission; accordingly, new antiretroviral drugs and anti-HIV drug associations have been tested in experimental pregnancy models before they are approved to be included in protocols for use during human pregnancy. Lamivudine is a nucleoside reverse transcriptase inhibitor currently used in association with other antiretrovirals. Since no data exist on the perinatal safety of lamivudine alone, as it is used in combination with other antiretroviral agents, and, until now, only preliminary data on the lamivudine-zidovudine combination were available, we decided to examine the gross maternal and fetal effects of lamivudine administered alone during the entire period of rat pregnancy. Forty pregnant animals were assigned at random to 4 groups (G1, G2, G3 and G4). G1 received drug vehicle; G2, G3 and G4 received daily oral doses of 5, 15 or 45 mg/kg of lamivudine, respectively. Rats were weighed on days 0, 7, 14 and 20 of pregnancy. On day 20 they were killed, their fetuses and placentas counted and weighed. The body weight gain of the rats was that normally expected for the gestation progression; no differences were noticed among the groups. In addition, no effects were observed regarding the fetal or placental number and weight, nor in the number of implantations, reabsortions, fetal or maternal deaths. In conclusion, the adverse effects reported for the lamivudine-zidovudine combination therapy may well be not due to lamivudine; further research involving a variety of strategies is needed to definitively ascertain the safety of that combination for preventing maternal-infant ...

La infección por el virus de la inmunodeficiencia humana (HIV) presenta incidencia creciente en todo el mundo. Debido al aumento en la proporción de mujeres afectadas en sus años reproductivos, el binomio embarazo/infección con HIV constituyen un tema preocupante en Salud Pública. Por esto que, la administración de fármacos antirretrovirales ha sido considerada obligatoria durante la gestación para prevenir la transmisión vertical del HIV; de este modo, nuevos fármacos y combinaciones de fármacos con actividad anti-HIV han sido desarollados y testeados en modelos de preñez experimental, previo a su empleo en estrategias de terapia antirretroviral durante la gestación humana. Lamivudina es un inhibidor nucleosídico de la transcriptasa reversa usada en combinación con otros antirretrovirales, pero no hay datos sobre la seguridad de su uso aislado. En el presente trabajo son estudiados los posibles efectos de la lamivudine cuando es administrada durante toda la preñez de la rata albina. Cuarenta ratas preñadas fueron tratadas durante toda la preñez (desde el día 0 hasta el día 20 de la gestación) con 5, 15 o 45 mg/kg de lamivudina, una vez al día. Los controles recibieron el vehículo de la droga. La evolución del peso corporal de los animales fue lo esperado para la progresión normal del peso durante la preñez, sin diferencias significativas entre los grupos. Igualmente no hubo diferencias en cuanto al número de fetos y de placentas y tampoco en cuanto a sus pesos. Ningún efecto fue notado con respecto al número de implantaciones o de reabsorciones. Se concluye que los efectos adversos reportados para la combinación zidovudina-lamivudina no deben, en principio, ser atribuidos a la presencia de la lamivudina.

Os efeitos do tabagismo na densidade das células de Langerhans do colo uterino / Effects of smoking on the density of the uterine cervix Langerhans’ cells

A importância do tabagismo na oncogênese do colo uterino é conhecida, e a elevada concentração de derivados de tabaco como a nicotina tem sido associada à depressão das células de Langerhans (CL). A alta taxa de regressão da infecção por HPV e a evolução de alguns casos para malignização sugerem a existência de múltiplos fatores associados na imunodepressão. Objetivou-se estudar a influência do fumo nas alterações das CLs em mulheres com Captura Híbrida negativa. Foram estudadas 30 mulheres por meio do método clínico colposcópico. histopatológico, imuno-histoquímico, histométrico e teste de hibridização molecular. Dividiu-se a amostra em dois grupos: fumantes (n=8) e não-fumantes (n=22). Utilizou-se o teste não paramétrico de Wilcoxon (Ran sun test). As médias das densidade das CLs no epitélio foram de 232,41 células/mm2 para fumantes e de 221,08 células/mm2 para não-fumantes, sendo estes valores não significativos. Concluiu-se não haver diferença significativa na densidade dessas células entre fumantes e não-fumantes

Estudo morfológico e morfométrico da mama de ratas em estro permanente, tratadas com danazol / Morphological and morphometrical study of permanent estrus rat mammary gland treated with danazol

Objetivo: estudar os efeitos do danazol sobre a mama da rata em estro permanente. Métodos: os animais foram divididos em três grupos: os do grupo A (n=12) receberam água (placebo), como grupo controle; os do grupo B (n=13) foram expostos a 20 mg/kg de danazol por dia; os do grupo C (n=10) foram expostos a 80 mg/kg de danazol por dia. A droga foi administrada durante 35 dias consecutivos. O estudo microscópico dos cortes avaliou a distribuição ductal e acinar. A histometria da relação ducto/estroma foi feita baseada nos princípios da estereologia, com ocular k-l0X da Zeiss, com retículo de integração (lntegrationsplatte l-retículo de Weibel de 25 hits), com aumento final de 100 vezes. Para cada lâmina estudada, foram contados 10 campos aleatórios, num total de 250 pontos. O teste aplicado foi a análise de variância por postos de Kruskal-Wallis, para comparar os três grupos em relação ao número médio de alvéolos e ductos nas mamas (a = 0,05). Resultados: em todos os grupos, os lóbulos apresentaram ao estudo morfológico alvéolos revestidos com células cúbicas com núcleos na sua porção central ou basal. Pequenas quantidades de material eosinofílico foram observadas em alguns casos na sua luz. À morfometria (magnificação de 100X) encontraram-se em média 28,6 ductos 110 campos no grupo A, 28,4 no grupo B e 29,2 no grupo C (análise de Kruskal-Wallis: Hcrit = 0,1). As médias dos números de alvéolos 110 campos foram 5,9 (grupo A), 9,3 (grupo B) e 6,5 (grupo C) (Kruskal-Wallis Hcrit= 2,9), sem diferença significativa entre os grupos. Conclusão: o danazol não causou nenhuma alteração significante na morfologia e morfometria do epitélio das mamas das ratas em estro permanente.

Aspectos morfológicos e morfométricos do processo inflamatório provocado por fio de categute simples na tela subcutânea de ratos tratados com ampicilina / Morphological and morphometric aspects of the inflammatory process caused by catgut suture in subcutaneous tissue of rats treated with ampicillin

Este trabalho tem por objetivo estudar alguns aspectos morfológicos e morfométricos do processo inflamatório provocado por fio de categute simples na tela subcutânea de ratos tratados com ampicilina. Trinta e seis ratos, da linhagem EPM-1 , Wistar, foram divididos em dois grupos. Grupo A (controle), recebeu soro fisiológico, por via subcutânea em volume correspondente ao da ampicilina e o grupo B (tratado), recebeu ampicilina na dose de 100mg/kg de peso. Os animais foram sacrificados no 3§ , 7§ e 14§ dias após o implante do fio. O segmento da tela subcutânea contendo o fio foi submetido a estudo morfológico e morfométrico. O processo inflamatório causado pelo implante do fio foi reduzido pela adminsitraçäo da droga no 3§ e 7§ períodos

Aspectos morfológicos e morfométricos da reaçäo tecidual a película celulósica introduzida no plano muscular da parede abdominal de ratos / Morphological and morphometric aspects of the tissular reaction to a cellulosical pellicle inserted in the muscular plan of the abdominal wall rats

O objetivo deste trabalho experimental foi analisar os aspectos morfológicos e os resultados da histometria de leucócitos, fibroblastos e fibras colágenas no tecido inflamatório provocado pela inclusäo de película celulósica no plano muscular da parede abdominal de ratos machos da linhagem Wistar. Foram utilizados 15 animais e reoperados em grupos iguais no 7§, l4§ e 28§ dias de pós-operatório, com retirada de parte da parede abdominal contendo a película e os tecidos adjacentes para realizaçäo de estudo histológico. Os resultados obtidos mostraram reaçäo inflamatória exsudativa intensa que vai diminuindo com o evoluir do processo, e aparecimento de células gigantes de corpo estranho. Houve diminuiçäo significante da proporçäo de leucócitos e aumento significante da proporçäo de fibroblastos e fibras colágenas. Concluímos que a inclusäo de película celulósica provoca reaçäo inflamatória, que diminui no evoluir do processo de reparaçäo, com formaçäo de grnauloma de corpo estranho, envolto por fibrose

Aspectos morfológicos e morfométricos do processo inflamatório provocado por fio de categute simples no subcutâneo de ratos tratados com cetoprofeno / Morphological and morphometric aspects features of the inflammatory rection caused by plan catgut suture in subcutaneous tissue of rats treated with ketoprofen

O objetivo deste experimento foi estudar alguns aspectos morfológicos e morfométricos da reaçäo tecidual ao implante de fio de categute simples no subcutâneo de ratos tratados com cetoprofeno. Foram utilizados 40 ratos machos, Wistar. Um grupo de 20 animais (grupo tratado) recebeu cetoprofeno, na dose de 10 mg/kg de peso corporal ao dia, por via subcutânea e outros 20 animais (grupo controle) receberam soro fisiológico a 0,9%, pela mesma via. Os animais foram sacrificados no 3§, 7§, 14§ e 21§ dias após o implante do fio. Os estudos morfológicos e morfométricos da reaçäo tecidual ao fio implantado mostraram atenuaçäo do processo inflamatório nos animais tratados em relaçäo ao controle, durante o período de açäo do cetoprofeno