Diagnóstico da Leishmaniose Visceral Canina pelas técnicas de imunoistoquímica e PCR em tecidos cutâneos em associação com a RIFI e ELISA-teste / Canine Visceral Leishmaniasis diagnosis by immunohistochemistry and PCR in skin tissues in association with RIFI and ELISA-test

O objetivo deste trabalho foi avaliar as técnicas de imunoistoquímica (IMIQ) e de PCR (Reação em Cadeia da Polimerase) em tecidos cutâneos para o diagnóstico da Leishmaniose Visceral Canina (LVC) e compará-los com os exames parasitológicos em tecidos corados histoquimicamente (hematoxilina-eosina, HE) e com testes sorológicos, como a Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI) e ensaio imunoenzimático (ELISA). Dos 34 cães naturalmente infectados, classificados em assintomáticos, oligossintomáticos e polissintomáticos, foram coletadas amostras de pele sadia ou com lesão para a realização da IMIQ, HE e PCR. Não somente peles lesionadas (56,5 por cento), mas também sadias (31,8 por cento) encontravam-se positivas pela IMIQ, confirmadas posteriormente pela PCR em 97,8 por cento das amostras. No grupo assintomático, 87,5 por cento estavam negativos pelos testes sorológicos, mas positivos em 50 por cento dos casos pela IMIQ e 100 por cento pela PCR. Entre os oligossintomáticos, 100 por cento, 85,7 por cento e 28,6 por cento encontravam-se positivos, respectivamente, pela PCR, sorologia e IMIQ. Os cães polissintomáticos eram 91,7 por cento soropositivos e tinham parasitas na pele. Em geral, a técnica PCR teve maior positividade (100 por cento). A eficiência dos testes variou de acordo com a evolução da doença, demonstrando a necessidade da associação de técnicas, usando-se IMIQ para confirmação da sorologia e a PCR apenas nos casos suspeitos após a IMIQ. Dessa forma, pode-se aumentar os níveis de positividade e contribuir para o controle desta zoonose.

The purpose of the present study was to evaluate the immunohistochemistry (IMHC) and PCR (Polymerase Chain Reaction) tests for Canine Visceral Leishmaniasis (CVL) diagnosis and compare the results with serological tests such as the indirect fluorescence antibody test (IFAT), ELISA and a parasitological test (microscopic direct examination of the parasite stained with haematoxylin and eosin - HE). For this study, samples of healthy or lesion skin tissues were obtained from 34 CVL naturally infected dogs classified in three groups: asymptomatic, oligosymptomatic and polisymptomatic. Not only lesion (56.5 percent) but also healthy skins (31.8 percent) were positives by IMHC and confirmed by PCR in 97.8 percent of skin samples. In asymptomatic group, 87.5 percent dogs were negatives by serological tests, but positives by IMHC in 50 percent and by PCR in 100 percent. In oligosymptomatic group, 100 percent, 85.7 percent and 28.6 percent of dogs were positives, respectively by PCR, serological and IMHC tests. In addition, 91.7 percent of polisymptomatic dogs were serum positive and had intact parasites in the skin. In general, PCR showed higher positivity (100 percent). The efficiency of each test varied with the evolution of the disease. IMHC may be used to confirm the results of the serology and PCR in inconclusive cases after HE and IMHC. The association of techniques proposed in this study may increase the positivity and contributed to the control of this canine disease.

Diagnóstico da Leishmaniose Visceral Canina pelas técnicas de imunoistoquímica e PCR em tecidos cutâneos em associação com a RIFI e ELISA-teste / Canine Visceral Leishmaniasis diagnosis by immunohistochemistry and PCR

O objetivo deste trabalho foi avaliar as técnicas de imunoistoquímica (IMIQ) e de PCR (Reação em Cadeia da Polimerase) em tecidos cutâneos para o diagnóstico da Leishmaniose Visceral Canina (LVC) e compará-los com os exames parasitológicos em tecidos corados histoquimicamente (hematoxilina-eosina, HE) e com testes sorológicos, como a Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI) e ensaio imunoenzimático (ELISA). Dos 34 cães naturalmente infectados, classificados em assintomáticos, oligossintomáticos e polissintomáticos, foram coletadas amostras de pele sadia ou com lesão para a realização da IMIQ, HE e PCR. Não somente peles lesionadas (56,5%), mas também sadias (31,8%) encontravam-se positivas pela IMIQ, confirmadas posteriormente pela PCR em 97,8% das amostras. Nogrupo assintomático, 87,5% estavam negativos pelos testes sorológicos, mas positivos em 50% dos casos pela IMIQ e 100% pela PCR. Entre os oligossintomáticos, 100%, 85,7% e 28,6% encontravam-se positivos, respectivamente, pela PCR, sorologia e IMIQ. Os cães polissintomáticos eram 91,7% soropositivos e tinham parasitas na pele. Em geral, a técnica PCR teve maior positividade (100%). A eficiência dos testes variou de acordo com a evolução da doença, demonstrando a necessidade da associação de técnicas, usando-se IMIQ para confirmação da sorologia e a PCR apenas nos casos suspeitos apos a IMIQ. Dessa forma, pode-se aumentar os níveis de positividade e contribuir para o controle desta zoonose.

The purpose of the present study was to evaluate the immunohistochemistry (IMHC) and PCR (Polymerase Chain Reaction) tests for Canine Visceral Leishmaniasis (CVL) diagnosis and compare the results with serological tests such as the indirect fluorescence antibody test (IFAT), ELISA and a parasitological test (microscopic direct examination of the parasite stained with haematoxylin and eosin - HE). For this study, samples of healthy or lesion skin tissues were obtained from 34 CVL naturally infected dogs classified in three groups: asymptomatic, oligosymptomatic and polisymptomatic. Not only lesion (56.5%) but also healthy skins (31.8%) were positives by IMHC and confirmed by PCR in 97.8% of skin samples. In asymptomatic group, 87.5% dogs were negatives by serological tests, but positivesby IMHC in 50% and by PCR in 100%. In oligosymptomatic group, 100%, 85.7% and 28.6% of dogs were positives, respectively by PCR, serological and IMHC tests. In addition, 91.7% of polisymptomatic dogs were serum positive and had intact parasites in the skin. In general, PCR showed higher positivity (100%). The efficiency of each test varied with the evolution of the disease. IMHC may be used to confirm the results of the serology and PCR in inconclusive cases after HE and IMHC. The association of techniques proposed in this study may increase the positivity and contributed to the control of this canine disease.

Resposta imune-humoral de búfalos (Bubalus bubalis) contra Anaplasma marginale (Theiler, 1910) / Immune-humoral response of water buffalo (Bubalus bubalis) against Anaplasma marginale (Theiler, 1910)

O objetivo do presente estudo foi analisar a resposta imune humoral anti-Anaplasma marginale em búfalos (Bubalus bubalis) naturalmente infectados. Amostras de soro e de colostro/leite coletadas de búfalas adultas por um período de 335 dias após o parto e de soros dos seus bezerros do nascimento até 365 dias de vida, foram usadas para a realização do método ELISA indireto. Os dados foram analisados como a média de um grupo de animais, em diferentes faixas etárias, durantes os anos de 1999/2000 e individualmente (duas búfalas e dois bezerros), no ano de 2005. Os soros dos animais analisados em grupos apresentaram títulos de anticorpos abaixo do ponto de corte (D.O. = 0,265 e NE > 3) durante os primeiros 90 e 105 dias, para as búfalas e para os seus bezerros, respectivamente, mas em seguida, elevaram-se para níveis acima do ponto de corte até o final do trabalho, ou seja, um ano após, indicando uma imunidade ativa adquirida. Das duas búfalas examinadas individualmente, os anticorpos colostrais foram detectados em altos níveis, mas os sorológicos em baixos níveis durante os primeiros sete dias após o parto, sugerindo uma transferência de anticorpos do soro para a glândula mamária. Da mesma forma, os dois bezerros tiveram títulos de anticorpos detectáveis já nas primeiras 24 horas após mamarem o colostro, indicando uma imunidade colostral passiva. Em conclusão, os búfalos desenvolveram uma resposta imune humoral específica contra A. marginale e foram considerados portadores deste parasita.

The aim of the present study was to analyze the humoral-immune response of water buffalo (Bubalus bubalis) naturally infected against Anaplasma marginale. For this work, colostrums/milk and blood samples were sequentially collected from buffalo cows prior and after partum for a period of 335 days and from buffalo calves from birth to 365 days after. The antibodies in the colostrums/milk and serum samples of these animals were determined using an ELISA indirect method and the data were analyzed as a mean of a group of animals with the matched ages during the period of 1999/2000 or individually during the year of 2005. The data from animals analyzed in group showed that the antibodies against A. marginale were in low concentration (below the cut off point: D.O. = 0.265 and ELISA levels, EL > 3), in the sera of buffalo, during the first 90 and 105 days, respectively for cows and calves. Then, the levels of antibodies in the serum samples of buffalo calves, slightly raised to above the cut off point and kept in higher levels up to approximately 365 days after birth, indicating active acquired immunity. Furthermore, when the animals were individually examined, the buffalo cows showed high antibody levels in the colostrums, but low levels in the blood stream during the first seven days post-partum, suggesting antibody transference from blood to mammary gland n addition to that, buffalo calves showed high antibody levels during the first 24 hours after suckling colostrum, indicating a colostral passive immunity. By conclusion, the buffalos were able to arm a humoral immune response against A. marginale and were considered reservoir of this parasite.