Estabilidad del producto hemoclasificador Hemo-CIM® Anti-B: Evaluación durante 2 años / Stability of the Anti-B Hemo-CIM® hemoclassifier product: A 2-year evaluation

Los estudios de estabilidad de los reactivos frabricados a partir de anticuerpos monoclonales de origen murino, permiten establecer adecuadamente la vida de estos productos, y su realización constituye un requisito indispensable en el cumplimiento de las buenas prácticas de producción. Se usaron los métodos de hemaglutinación para medir la actividad biológica del producto Hemo-CIM® Anti-B expresada en la potencia, la avidez y la intensidad, frente a un panel de eritrocitos del grupo B y A1B, para demostrar más efectivamente cualquier deterioro del reactivo. Se estableció que la vida útil del hemoclasificador producido en el Centro de Inmunología Molecular es de 2 años con una temperatura de almacenamiento entre 2 y 8 oC. La evaluación que simula las condiciones a la que los usuarios someten a estos reactivos, demostró que el reactivo mantiene las características de calidad que se requieren para su uso. La estabilidad lograda con el Hemo-CIM® Anti-B es similar a la informada con el producto hemoclasificador monoclonal murino Hemo-CIM® Anti-A.

The stability studies of the reagents made from monoclonal antibodies of murine origin allow to establish the life of these products adequately and are an indispensable requisite for the fulfillment of the good practices of production. The hemagglutination methods were used to measure the biological activity of the Anti-B Hemo-CIMâ product expressed in the potency, avidity and intensity against a panel of erythrocytes of the group B and A1B in order to show in a more effective way any deterioration of the reagent. It was established that the useful life of the hemoclassifier produced at the Center of Mollecular Biology is of 2 years at a storage temperature between 2 and 8ºC. The evaluation that simulates the conditions to which the users subject these reagents showed that the reagent maintains the quality characteristics required for its use. The stability attained with the Anti-B Hemo-CIMâ is similiar to that reported with the murine monoclonal Anti-A Hemo-CIMâ hemoclassifier product.

Procedimientos para la obtención de ratones Balb/c hiperinmunes contra el antígeno B del sistema ABO de grupos sanguíneos humanos / Production of Balb-c mice hyperimmunized against B antigen from ABO human blood groups

Los antígenos del sistema ABO de grupos sanguíneos son oligosacáridos presentes en la membrana celular que forman parte de las glicoproteínas y glicolípidos. La introducción de la tecnología de hibridomas murinos para la obtención de anticuerpos monoclonales (AcM) con especificidad para los antígenos ABO ha permitido iniciar en Cuba la producción de reactivos hemoclasificadores basados en AcM. El perfeccionamiento de los reactivos requiere la búsqueda de nuevos clones de hibridomas, para lo que se necesita la sensibilización de ratones Balb/c con los antígenos. Se presentan los resultados de la evaluación de dos vías de inoculación (intraperitoneal e intraesplénica) y tres formas de presentación del antígeno (hematíes completos del grupo B, sustancia específica B y sustancia B tratada con alúmina) en ratones Balb/c a los que se les determinó el título de anticuerpos hemaglutinantes por la técnica de microplacas frente a un panel de hematíes de los grupos A, B y O antes y durante el período de inmunización. La vía intraperitoneal con hematíes completos del grupo B resultó adecuada para alcanzar altos títulos de anticuerpos aglutinantes contra hematíes B, aunque también reaccionaron con los hematíes de otros grupos.

Características serológicas y análisis inmunohistológico del anticuerpo monoclonal IHI-15 ANTI-A: resultados de su evaluacion en Nantes / Serological characteristics and immnunohistological analysis of the IHI-15 anti-A monoclonal antibody: results of the evaluation at Nantes

Se revisan los resultados de la evaluación del anticuerpo monoclonal IHI-15 anti-A en el III Taller/Simposio Internacional de Anticuerpos Monoclonales contra Antígenos de Grupos Sanguíneos y Relacionados efectuado en Nantes, Francia. El IHI-15 es una molécula de IgM que aglutina a los eritrocitos humanos que expresan al antígeno A del sistema ABO. Se comprobó su especificidad, avidez, título y potencia por distintos métodos de hemaglutinación frente a los principales subgrupos de A y frente a las variantes débiles. En el método de hemaglutinación por centrifugación en microplacas reaccionó con una muestra de la variante Ax y otras débiles (A3 y A2B) con un título mayor que otros de referencia. Su reactividad inmunohistológica lo identifica con los anticuerpos dirigidos contra estructura A tipo 3/4 porque marca preferentemente a las células epiteliales en la mucosa pilórica y duodenal de secretores A en el área del aparato de Golgi. No reaccionó por ELISA con los trisacáridos A, ni tetrasacáridos A tipo 1 sintéticos. El IHI-15 anti-A es la base del reactivo hemoclasificador Hemo-CIM anti-A que cumple con las especificaciones de la OMS para los métodos de hemaglutinación por centrifugación en tubos y láminas portaobjeto, que comercializa CIMAB, S.A

Ensayo de terreno de los rectivos hemoclasificadores monoclonales HEMO-CIM anti-A y HEMO-CIM anti-B como productos terminados / Field assay of HEMO-CIM anti-A and HEMO-CIM anti-B monoclonal hemoclassifying reactives as finished products

En Cuba, el registro sanitario de los diagnosticadores está regulado por normas estatales y en el caso de los reactivos hemoclasificadores se exige el ensayo de terreno en comparación con productos similares de calidad reconocida. Se evaluaron los productos terminados Hemo-CIM anti-A y anti-B elaborados en el Centro de Inmunología Molecular/CIMAB S.A., La Habana, en paralelo con los sueros policlonales humanos (MediCuba, La Habana) y con reactivos monoclonales equivalentes (Biotest AG, RFA), mediante un estudio multicéntrico en un servicio de transfusiones, 2 bancos de sangre provinciales y 2 municipales, con 1 130 muestras de sangre, de ellas 202 seleccionadas según criterios específicos de inclusión, por los métodos de hemaglutinación en láminas portaobjeto y centrifugación en tubos. Se encontró una especificidad diagnóstica del 100 porciento y una sensibilidad siempre superior al 99,5 porciento para ambos reactivos. Las opiniones de los posibles clientes sobre calidad, presentación y utilidad de los productos fueron satisfactorias

Introduccion de un ultramicrometodo inmunocitoquimico para la cuantificacion de subpoblaciones linfocitarias identificadas con anticuerpos monoclonales

Se introdujo en nuestro laboratorio un ulktramicrometodo inmunocitoquimico (UMICIQ) para la cuantificacion de las principales subpoblaciones de linfocitos T identificadas con los anticuerpos monoclonales anti-CD3, anti-CD4 y anti-CD8. Las deteminaciones se realizaron en celulas mononucleares de sangre periferica de donantes de sangre supuestamente sanos, con edades entre 21 y 47 anos. El estudio de los 15 primeros individuos se realizo tanto por el UMICIQ como por un micrometodo de inmunofluorescencia indirecta (IFI), y cuando se compararon los resultados, no se encontraron diferencias estadisiticamente significativas. Para establecer los valores de referencia para el UMICIQ se tomaron las muestras de 30 donantes. Con la aplicacion de este metodo se pueden evaluar las subpoblaciones linfocitarias con una sensibilidad y especificidad similares a las observadas con la microtecnica del IFI; sin embargo, se introducen una serie de ventajas como: uso de menores concentraciones de celulas y por ende menor volumen de sangre para cada determinacion, uso de diluciones mayores de los anticuerpos y conjugados, se hace innecesario el uso del microscopio de luz UV y de la centrifuga refrigerada, se pueden distinguir la morfologia y el linaje de las celulas simultaneamente con la reactividad inmunologica de sus antigenos

Ultramicrometodo inmunocitoquimico. Titulacion de anticuerpos utilizados para el inmunofenotipaje celular

Se describe el procedimiento para la titulacion de los anticuerpos primarios y los antisueros conjugados, que hizo posible la introduccion en el Instituto de Hematologia Inmunologia, de un ultrametodo inmunocitoquimico para el estudio del inmunofenotipo en enfermedades inmunologicas y en las hemopatias malignas. Este metodo emplea celulas no deshidratadas adheridas a laminas portaobjetostratadas con poli-lisina. Al determinar la dilucion de trabajo de 32 anticuerpos monoclonales y 3 policlonales, se observo que con la misma cantidad de estos reactivos se pueden realizar entre 5 y 100 veces mas determinaciones con respecto al metodo de inmunofluorescencia indirecta. Entre otras ventajas, este metodo permite realizar 21 determinaciones en una misma lamina portaobjeto, requiere una menor cantidad de celulas, los resultados se evaluan en un microscopio de luz visible y las colaboraciones no se desvanecen con el tiempo, lo que permite realizar estudios retrospectivos

Utilización de glioblastomas en la obtención de medios condicionados para la generación de hibridomas muridos secretores de anticuerpos monoclonales / Use of glioblastomas in the obtention of conditioned media for the generation of murine hybridomas secreting monoclonal antibodies

Se ha demostrado que las células de glioblastoma humanoproducen interleucemia 6, la cual estimula la proliferación de plasmocitomas secretores de anticuerpos monoclonales. Con el objetivo de obtener medios condicionados se establecieron cultivos primarios de glioblastoma. Estos medios se utilizaron como suplemento en las fusiones de células de mieloma de ratón P3-X63Ag8.653 y esplenocitos de ratones BALB/C hiperinmunes. Se observaron cultivos con una eficiencia de fusión mayor con estos medios condicionados como suplemento, se se compara con aquéllos realizados con capas alimentadoras de macrófagos de la cavidad peritoneal de ratón o sin suplementos. Además ,en los clonajes y reclonajes se usó un clono secretor de anticuerpo monoclonal anti-A, que resultó muy estable, lo que sugiere que es posible obtener un incremento de hibridomas secretores de anticuerpos monoclonales de especificidad deseada en cultivos con factor de crecimiento de hibridoma derivado de glioblastoma

Estandarización de un método citoquímico para el estudio de la enzima esto 5'-nucleotidasa en linfocitos / Standarization of a cytochemical method for the study of Ecto-5'nucleotidase enzyme on lymphocytes

Se describe un método para la detección de la enzima ecto 5'nucleotidasa (5'NT) en linfocitos de sangre periférica. El estudio se realizó en 25 adultos sanos (10 mujeres y 15 hombres) con un rango de edad entre 19 y 44 años y una edad promedio de 30 años. La cantidad de células y de reactivos se redujo con respecto a otras técnicas. El rango de células 5'NT+ obtenido es de 18 a 40 por ciento , lo que se corresponde con lo informado por otros autores

Métodos para el pesquisaje de anticuerpos contra antigenos de grupos sanguineos del sistema ABO humano / Methods for the screeninig antibodies of the human ABO blood group system

Para el pesquisaje inicial de anticuerpos contra antígenos de grupos sanguíneos (tanto en los sueros de ratón como en los sobrenadantes de hibridomas) se utilizó la técnica de aglutinación en microplacas empléandose hematíes A1,A2,Ax, B y O tratados con bromelina. Una vez identificados los clones de hibridomas productores, se estudiaron sus correspondientes líquidos ascíticos por los métodos de aglutinación en microplacas, en tubos por centrifugación y sedimentación y en láminas, lo que permitió demostrar que con el método de pesquisaje inicial se puede procesar un elevado número de muestras y utilizar pequeñas cantidades de sobredonantes, además de que permite seleccionar reactivos adecuados para el fenotipo de grupos sanguíneos en tubos, en láminas y microplacas, que son las 3 técnicas más usadas en el mundo para el inmunofenotipaje de los donantes

Efecto de diferentes sueros y factores de crecimiento en las líneas de plasmacitomas de ratón P3/X-63-Ag8.653 y P3/NS-1/1 Ag 4-1 / Effect of different sera and growth factors in P3/x-63-Ag8.653 and P3/NS'1/1 Ag 4-1 lines of mouse plasmacytomas

Se estudió el efecto de diferentes sueros y medios condicionados en el crecimiento de las líneas X-63 y NS-1. Se utilizaron sueros: fetal bovino, de caballo, de terneros recién nacidos y de condón umbilical humano, a una concentración del 10 por ciento solos o en combinación con 2 por ciento de interleucina-6 o de factor estimulador de colonias no purificados (en medios condicionados). En condiciones de altas densidades celulares se obtuvo la mayor proliferación con el suero de caballo y con el de cordón umbilical y la adición de los factores estimuló preferencialmente el crecimiento de las células NS-1. A bajas densidades celulares se obtuvieron colonias multicelulares, con inóculos iniciales de 5-10 células/pozo, en presencia del suero de caballo o de cordón umbilical y en menor medida con el suero fetal bovino. Las eficiencias de siembre en placas también fueron superiores con ambos sueros