Expresión de TLR2, 4, 9 y presencia de células tipo NK CD56 positivas en lesiones de pacientes con diferentes formas de clínicas de leismaniasis cutánea americana / Expression of TLR2, 4, 9 and presence NK type CD56 positive cells lesions of patients with different clinical forms of American cutaneous leishmaniasis

La leishmaniasis cutánea americana (LCA) presenta varias manifestaciones clínicas e inmunitarias: La leishmaniasis cutánea localizada (LCL), cuya respuesta inmunitaria es tipo Th1, la leishmaniasis cutánea difusa (LCD) con una respuesta Th2, y la leishmaniasis cutánea intermedia (LCI) cuya respuesta inmunitaria es exacerbada con un patrón mixto de citocinas. Se ha demostrado la importancia de los receptores tipo toll (TLR) en la respuesta inmunitaria frente a Leishmania promoviendo la transcripción y síntesis de citocinas inflamatorias. El reconocimiento de componentes del parásito por los TLRs activa a macrófagos, células dendríticas y células NK. En este estudio, evaluamos la presencia TLR2, TLR4, TLR9 y células tipo NK (NK y NKT CD56+) en las lesiones de pacientes con LCL, LCI y LCD mediante inmunocitoquímica. Las lesiones de LCL y LCD mostraron una alta densidad de células TLR2 y TLR4+ con respecto a LCI, mientras que LCD mostró una mayor densidad de células TLR9+. Se observó también la expresión de TLR2 en los queratinocitos y el TLR9 se localizó en el interior de los macrófagos infectados asociado con los parásitos. La densidad de células CD56+ fue mayor en LCL en comparación con LCI y LCD. Los resultados demuestran la participación de los TLR2, 4 y 9 en la respuesta inmunitaria durante la LCA, mostrando evidencia del reconocimiento del parásito por TLR9 y una mayor densidad de células NK en LCL que se puede asociar a la respuesta Th1 que prevalece en estos pacientes.

American cutaneous leishmaniasis (ACL) has several clinical and immunological manifestations: localized cutaneous leishmaniasis (LCL) that produces a Th1 immune response, diffuse cutaneous leishmaniasis (DCL) that produces a Th2 response, and intermediate cutaneous leishmaniasis (ICL) that promotes an exacerbated immune response with a mixed pattern of cytokines. The importance of toll-like receptors (TLRs) to the immune response has been demonstrated against Leishmania, as these promote the transcription and synthesis of inflammatory cytokines. Parasite components are recognized by TLRs leading to the activation of macrophages, dendritic cells and NK cells. In this study, we evaluated the presence of TLR2, TLR4, TLR9 and NK/NKT CD56+ cells by immunocytochemistry in the lesions of patients with LCL, ICL and DCL. LCL and DCL lesions showed higher densities of TLR2 and TLR4 cells than ICL, while DCL showed an increase in TLR9 + cell density. The expression of TLR2 in keratinocytes was also observed, and TLR9 was located inside the infected macrophages in contact with the parasites. NK cell density was higher in LCL compared with ICL and DCL. These results demonstrate the participation of TLR2, 4 and 9 in the immune response during ACL, and show evidence of parasite recognition by TLR9 and increased CD56+ cell density in LCL associated with the Th1 response which prevails in these patients.

Patrón de citocinas en hígado y bazo de perros con Leishmaniasis visceral natural

En el presente estudio se caracterizó el patrón de citocinas del bazo e hígado de perros infectados en forma natural por Leishmania infantum (chagasi) provenientes del estado Nueva Esparta, Venezuela. Los perros fueron clasificados como sintomáticos y asintomáticos considerando tres signos principales de esta patología como hepatoesplenomegalia, caquexia y onicogrifosis. Muestras de hígado y bazo fueron tomadas para evaluar carga parasitaria y la expresión de citocinas y quimiocinas por inmunohistoquímica. En los perros sintomáticos se observó una mayor carga parasitaria tanto en el hígado como en bazo. En el bazo se observó una densidad de células positivas para interferón gamma (IFN-g), interlucinas (IL-12, IL-10, IL-4, IL-8) y Proteína 1 quimioatrayente de monocito (MCP-1), similar en perros asintomáticos y sintomáticos. Mientras que en el hígado la evaluación de las citocinas IFN-g, IL-12, IL-10 IL-8 y MCP-1, mostró una tendencia al aumento en el grupo de perros sintomáticos, con incremento significativo de las células IL-4+ en los perros sintomáticos, con respecto a los asintomáticos. La densidad de células IL-4+ en el hígado se correlacionó positivamente con la hepatomegalia. Al cuantificar las concentraciones séricas de la quimiocina Proteina 1 alfa inflamatoria de macrófago (MIP-1a) se observó una alta producción en los perros asintomáticos. Estos resultados confirman laexistencia de una respuesta órgano-especifica frente a L. infantum (chagasi), del tipo T cooperador 2 (Th2) en el hígado de los perros sintomáticos, caracterizada por un marcado predominio de IL-4 sobre IFN-g e IL-12. La elevada producción de IL-4 fue directamente relacionada con la hepatomegalia.

In the present study, we characterized the cytokine pattern in the spleen and liver of naturally infected dogs with Leishmania infantum (chagasi) from the Nueva Esparta state of Venezuela. The dogs were classified as symptomatic and asymptomatic considering three main signs of this disease: hepatosplenomegalia, cachexia and onichogriphosis. Tissue samples from liver and spleen were taken to evaluate parasite load, cytokines and chemokines expression by immunohistochemistry. In symptomatic dogs, a higher parasitic load was observed in the liver and spleen as compared to asymptomatic dogs. In the spleen, the density of gamma interferón (IFN-g), interleukins (IL-12, IL-10, IL-4, IL-8) and Monocyte Chemoattractant Protein-1 (MCP-1), it was similar between asymptomatic and symptomatic dogs. Whereas, in the liver IFN-g, IL-12, IL-10 IL-8 and MCP-1 showed a tendency to increase in symptomatic dogs, with a significant increment of IL-4 + cells. In the liver, the density of IL-4+ cells was positively correlated with hepatomegaly. In addition, higher concentrations of Macrophage inflammatory protein 1 alpha (MIP-1a) were observed in the serum of asymptomatic than in symptomatic dogs. These results corroborate the existence of an organ-specific immune respose against L. infantum (chagasi), with a T helper 2 (Th2) immune response in the liver of symptomatic dogs, with prevalence of IL-4 over IFN-g and IL-12. The high production of IL-4 is directly related with hepatomegalia.

Estudio ultraestructural de la fagocitosis de promastigotes y amastigotes de Leishmania mexicana por la línea de células dendríticas FSDC / Phagocytosis of promastigotes and amastigotes of Leishmania mexicana by the FSDC

Introducción. Las células dendríticas están presentes en la mayoría de los tejidos, ellas capturan y presentan antígenos para activar a los linfocitos T. Objetivo. Se describe ultraestructuralmente la fagocitosis de Leishmania mexicana por la línea de células dendríticas FSDC, una línea de células de Langerhans obtenida de la epidermis fetal de ratón, e inmortalizada por la transducción retroviral del oncogen v-myc. Materiales y métodos. Se obtuvieron amastigotes de la lesión de ratones Balb/c y promastigotes a partir del cultivo (24°C) de la lesión. Las FSDC se cultivaron con los parásitos en una proporción de 5 parásitos por célula, en medio IMDM, durante 24 horas. Los cultivos infectados y los controles se procesaron para microscopía electrónica de transmisión. Se hicieron cortes semifinos contrastados con azul de toluidina para evaluar porcentaje de fagocitosis y finos, contrastados con acetato de uranilo y citrato de plomo. Resultados. El 13,42 por ciento de las FSDC fagocitaron promastigotes; de ellas el 8 por ciento contenían un parásito y el restante 5,2 por ciento fagocitó dos o más. El 20 por ciento de las FSDC fagocitaron amastigotes; 10 por ciento contenían un parásito y 10 por ciento dos o más. Ultraestructuralmente se observaron promastigotes en contacto con las células por el flagelo o por el polo posterior. Los fagosomas que contenían promastigotes eran organelos estrechos con uno ó dos parásitos. Los que contenían amastigotes eran de gran tamaño (8 µm) con uno o varios parásitos, libres o adosados a la membrana del fagosoma por su polo posterior. Conclusión. La infección de las FSDC se caracterizó por una baja tasa de células infectadas al ser expuestas a promastigotes o amastigotes. La vacuola parasitofora presentó características similares a las de los macrófagos. En su mayoría las FSDC presentaban 1 a 3 parásitos por célula. Las observaciones plantean la necesidad de estudiar la relación entre capacidad de fagocitosis y función...

Introduction. Dendritic cells, which capture and present antigen to activate unprimed T cell, are found in most tissues. Objective. This work describes the ultrastructure of Leishmania mexicana phagocytosis by the fetal skin dendritic cell (FSDC) line, a Langerhans cell line isolated from mouse fetal epidermis immortalized by retroviral transduction of the v-myc oncogene. Materials and methods. Leishmania amastigotes were obtained from mouse (BALB/c) lesion and promastigotes from culture ( 24°C) of the lesion. FSDC cells were cultured with parasites (5 parasites per cell) using IMDM medium, during 24 hours. Control and infected cultures were processed for transmission electron microscopy. Semi-thin sections counterstained with toluidine blue to evaluate phagocytosis and thin sections counterstained with uranyl acetate and lead citrate were made. Results. 13.42% of the FSDC phagocytosed promastigotes; 8% contained a single parasite and 5.2% phagocytosed 2 or more. 20% of the FSDC phagocytosed amastigotes; 10% contained a single parasite and 10% phagocytosed 2 or more. Ultrastructurally, promastigotes in contact with FSDC by the flagellum or the posterior pole were observed. The parasitophorous vacuoles harbouring promastigotes were small organelles containing one or two parasites each. Parasitophorous vacuoles containing amastigotes were larger (8µm diameter) with one or several parasites free or attached to the vacuole at the posterior pole. Conclusion. The low rate of infected FSDC cells was characteristic and the parasitophorous vacuole showed similar characteristics to those observed in macrophages. The parasite density in the infected cells was 1 to 3 parasites per cell. These observations highlight the need to study the relationship between phagocytic capacity and function.

Inmunopatolia de la leishmaniasis tegumentaria americana / Immunology of american tegumentary leishmaniasis

En el presente trabajo se presentan los resultados de inmunidad celular en sangre periférica y lesión cutánea en las tres formas clínicas de la leishmaniasis tegumentaria. Estas formas clínicas, que conforman un espectro clínico, histológico e inmunológico son la leishmaniasis cutánea localizada (LCL), cutánea difusa (LCD); y el área intermedia que comprende las lesiones mucosas y verrugosas (LCM). El conjunto de resultados sugiere que el patrón de citoquinas determinado en sangre periférica y en las lesiones que presentan los pacientes con LCL, es un patrón mixto tipo Th1 y THO, lo cual conduce a la curación de las lesiones en estos pacientes, ya sea espontaneamente o luego de una terapia apropiada. Los pacientes con LCD, resistentes a la quimioterapia, se caracterizan por un patrón de citoquinas tipo Th2, con una ausencia total de producción de IL-2 e INF-gamma por parte de los linfocitos específicos para el antígeno. Este tipo de respuesta Th2 probablemente es la responsable de que estos pacientes sean incapaces de controlar la infección, lo cual conduce a la diseminación del parásito por toda la superficie cutánea. En el área intermedia se encuentran los pacientes con LCM, con lesiones destructivas de las mucosas orales y nasofaringeas, con tendencia a la cronicidad. Se acaracterizan por un patrón de citoquinas mixto tipo Th1 y Th2 que coexisten simultaneamente. Esta situación puede ser la responsanble de la no resolución de la enfermedad en estos pacientes, ya que cuando ambos tipos de citoquinas se producen es posible que las citoquinas tipo Th2 predominen sobre las tipo Th1. El análisis de las lesiones cutáneas demonstró que la epidermis en la LCD carece de las señales accesorias ICAM-1 y MHC-II por parte de lo queratinocitos, y presenta un número variable de células de Langerhans. En LCM, la expresión de ICAM-1 y MHC-II está exacerbada, y las células de Langerhans están ausentes del epitelio lesionado. Por su parte, la epidermis de la LCL manifesta las señales accesorias adecuadas, ICAM-1 en parches y MHC expresado universalmente por los queratinocitos...

Células dendríticas epidérmicas Thy-1 positivas un nuevo grupo celular asociado con inmunovigilancia cutánea / Dendritic epidermal cells thy-1 positives. A new cell group asociated with cutaneous immune surveillance

Las células dendríticas epidérmicas Thy-1 positivas (CDE Thy-1) son un tipo celular recientemente descubierto en la epidermis de ratones. Estás células se caracterizan por presentar en su superficie el antígeno Thy-1, que hasta 1975 se había encontrado sólo en timocitos y células nerviosas. Las CDE Thy-1 expresan las glicoproteínas CD3 y gamma delta (* *) del receptor antígenico de linfocitos T, lo cual las relaciona consistentemente con este grupo celular. Hasta el presente se desconoce la función específica de este nuevo tipo celular. Sin embargo, experimentos in vitro han demostrado que estas células presentan citotoxicidad frente a los grupos de células tumorales. Por otra parte, pruebas in vivo demuestran que las CDE Thy-1 ejercen una función derreguladora en las repuestas de hipersensibilidad por contacto. Además su ubicación en el epitelio y la expresión del receptor antigénico **, han permitido asociarlas a mecanismos de vigilancia inmunológica de la integridad cutánea a través del reconocimiento antigénico de proteínas de stress