Ethical considerations in animal research: the principle of 3r's

In the last century, progress in the knowledge of human diseases, their diagnosis and treatment have grown exponentially, due in large part to the introduction and use of laboratory animals. Along with this important progress, the need to provide training and guidance to the scientific community in all aspects related to the proper use of experimental animals has been indispensable. Animal research committees play a primary role in evaluating experimental research protocols, from their feasibility to the rational use of animals, but above all in seeking animal welfare. The Institutional Committee for the Care and Use of Animals (IACUC) has endeavored to share several relevant aspects in conducting research with laboratory animals. Here, we present and discuss the topics that we consider of utmost importance to take in the account during the design of any experimental research protocol, so we invite researchers, technicians, and undergraduate and graduate students to dive into the fascinating subject of proper animal care and use for experimentation. The main intention of these contributions is to sensitize users of laboratory animals for the proper and rational use of them in experimental research, as well as to disseminate the permitted and unpermitted procedures in laboratory animals. In the first part, the significance of experimental research, the main functions of IACUC, and the principle of the three R's (replacement, reduction, and refinement) are addressed.

Conductas alimentarias de riesgo, percepción de prácticas parentales y conducta asertiva en estudiantes de preparatoria / Risk eating behaviors, perception of parental practices and assertive behaviors in high school students / Risk eating behaviors, perception of parental practices and assertive behaviors in high school students

RESUMEN Introducción. Se considera que la adolescencia tardía es una etapa de vulnerabilidad para la salud psicológica. El objetivo de esta investigación fue evaluar la asociación entre conductas alimentarias de riesgo (CAR), prácticas parentales y conducta asertiva en estudiantes de preparatoria de acuerdo con el sexo. Método. Con un diseño no-experimental de tipo transversal, participaron 200 estudiantes mexicanos (104 hombres y 96 mujeres) de una preparatoria pública, con edad promedio de 16.52 (DE = 1.05 años), quienes después de un consentimiento informado contestaron el Test de Actitudes Alimentarias-26 (EAT, por sus siglas en inglés), la Escala de Prácticas Parentales para Adolescentes (PP-A) la cual posee nueve subescalas, cuatro hacia el padre (PPp) y cinco hacia la madre (PPm) y la Escala de Conducta Asertiva (CABS, por sus siglas en inglés), todos validados para población mexicana. Resultados. Se encontraron asociaciones diferenciales de acuerdo con el sexo: en las mujeres el EAT-26-Total se asoció con: CABS-Total, Comunicación paterna, Imposición y Control Psicológico materno (rs = -.36, .25, -.28, -.36, respectivamente); mientras que, en los hombres sólo se asoció con Imposición paterna (rs = -.30). El CABS-Total se asoció con todas las subescalas de las PPm en las mujeres (rango rs = .22 a .36) y en los hombres solo con Comunicación, Control Psicológico y Conductual (rs = .30 .35, -.23) Conclusión. En los estudiantes mexicanos de preparatoria -en las mujeres en mayor grado- a mayor CAR mayor estilo agresivo (no asertividad), mayor control psicológico materno y menor control conductual materno.

ABSTRACT Background. Late adolescence is considered a risk stage for psychological health. The objective of this research was evaluating the association among risk eating behaviors (REB), parental practices and assertive behavior in high school students according to sex. Method. With a non-experimental design and transversal study participated 200 students (104 men and 96 women) from a public high school with age mean of 16.52 (SD = 1.05 years), who after signing informed consent fulfilled the Eating Attitudes Test- 26 (EAT), the Scale of Parental Practices for Adolescents (PP-A) which has nine subscales, four towards the father (PPf) and five towards the mother (PPm) and the Assertive Behavior Scale (CABS), all of them validated for Mexican population. Results . Differential associations were found according to sex: in women, EAT-26-Total was associated with CABS-Total, parental Communication, maternal Imposition and maternal Psychological Control (rs = -.36, .25, -.28, -.36, respectively); but in men, was only associated with parental Imposition (rs = -.30). The CABS-Total was associated with all PPm subscales in women (range rs = .22 to .36) and in men only with Communication, Psychological and Behavioral Control (rs = .30 .35, -.23). Conclusion . The high school students-women to a greater degree- higher REB greater aggressive style (no assertiveness), greater maternal psychological control and less maternal behavioral control.

ABSTRACT Background : Late adolescence is considered a risk stage for psychological health. The objective of this research was evaluating the association among risk eating behaviors (REB), parental practices and assertive behavior in high school students according to sex. Method : With a non-experimental design and transversal study participated 200 students (104 men and 96 women) from a public high school with age mean of 16.52 (SD = 1.05 years), who after signing in- formed consent fulfilled the Eating Attitudes Test-26 (EAT), the Scale of Parental Practices for Adolescents (PP-A) which has nine subscales, four towards the father (PPf) and five towards the mother (PPm) and the Assertive Behavior Scale (CABS), all of them validated for Mexican population. Results : Differential associations were found according to sex: in women, EAT-26-Total was associated with CABS-Total, parental Communication, maternal Imposition and maternal Psychological Control (rs = -.36, .25, -.28, -.36, respectively); but in men, was only associated with parental Imposition (rs = -.30). The CABS-Total was associated with all PPm subscales in women (range rs = .22 to .36) and in men only with Communication, Psychological and Behavioral Control (rs = .30 .35, -.23). Conclusion : The high school students -women to a greater degree- higher REB greater aggressive style (no assertiveness), greater maternal psychological control and less maternal behavioral control.

RESUMEN Introducción : Se considera que la adolescencia tardía es una etapa de vulnerabilidad para la salud psicológica. El objetivo de esta investigación fue evaluar la asociación entre conductas alimentarias de riesgo (CAR), prácticas parentalesPublication published by the Instituto Peruano de Orientación Psicológica - IPOPS Work under Creative Commons Attribution 4.0 International license (CC BY 4.0)conducta asertiva en estudiantes de preparatoria de acuerdo con el sexo. Método : Con un diseño no-experimental de tipo transversal, participaron 200 estudiantes mexicanos (104 hombres y 96 mujeres) de una preparatoria pública, con edad promedio de 16.52 (DE = 1.05 años), quienes después de un consentimiento informado contestaron el Test de Actitudes Alimentarias-26 (EAT, por sus siglas en inglés), la Escala de Prácticas Parentales para Adolescentes (PP-A) la cual posee nueve subescalas, cuatro hacia el padre (PPp) y cinco hacia la madre (PPm) y la Escala de Conducta Asertiva (CABS, por sus siglas en inglés), todos validados para población mexicana. Resultados : Se encontraron asociaciones diferenciales de acuerdo con el sexo: en las mujeres el EAT- 26-Total se asoció con: CABS-Total, Comunicación paterna, Imposición y Control Psicológico materno (rs = -.36, .25, -.28, -.36, respectivamente); mientras que, en los hombres sólo se asoció con Imposición paterna (rs = -.30). El CABS-Total se asoció con todas las subescalas de las PPm en las mujeres (rango rs = .22 a .36) y en los hombres solo con Comunicación, Control Psicológico y Conductual (rs = .30 .35, -.23). Conclusión : En los estudiantes mexicanos de preparatoria -en las mujeres en mayor grado- a mayor CAR mayor estilo agresivo (no asertividad), mayor control psicológico materno y menor control conductual materno.

Nutrigenomics as a tool in the prevention of lipotoxicity: the case of soy protein

Abstract Obesity is associated with an increase of several metabolic disorders leading to the development of diseases such as type 2 diabetes and cardiovascular disease. This is due in part to the ectopic accumulation of triglycerides in organs that are non-adipose tissues, leading to lipotoxicity. Particularly, in the liver, the accumulation of lipids, mainly of triglycerides, leads to the formation of fatty liver. The accumulation of lipids in skeletal muscle and pancreas associates with insulin resistance and a decrease in insulin secretion, respectively. In addition, it has been suggested that dysbiosis of the gut microbiota can contribute to the process of lipid accumulation in non-adipose tissues, especially in the liver. The aim of the present review is to highlight the mechanisms associated with the development of lipotoxicity, and how with the advances in nutrigenomics, it is now possible to understand the molecular mechanisms by which some nutrients can attenuate the ectopic accumulation of triglycerides in non-adipose tissues. Particularly, we emphasize research conducted on the molecular mechanisms of action of soy protein and some of its isoflavones, and how these can reduce lipotoxicity by preventing the accumulation of lipids in the liver, skeletal muscle, and pancreas, as well as their role on the gut microbiota to attenuate the development of fatty liver. Thus, nutrigenomics is opening new dietary strategies based on several functional foods that can be used to ameliorate the pathologies associated with lipotoxicity.

Comparación del empleo de nisina y cultivos de lactococcus lactis subsp. lactis para la biopreservación de queso blanco / Comparation of nisin and lactococcus lactis subsp. lactis culturues for biopreservation of white cheese

La principal enfermedad transmitida por alimentos en Venezuela es la intoxicación estafilocóccica y es el queso blanco el principal alimento involucrado. La nisina es una bacteriocina capaz de frenar el crecimiento de microorganismos Gram positivos, entre ellos Staphylococcus aureus. Una de las limitaciones de su uso es su alto costo. El empleo de cultivos iniciadores productores de bacteriocinas, representa una alternativapara elaboración de quesos con mejor calidad microbiológica. El objetivo del presente estudio fue evaluar el efecto biopreservador del Lactococcus lactis subsp. lactis (ATCC 11454) y compararlo con la adición de nisina a la leche. Para ello se elaboraron cinco tipos de quesos con leche pasteurizada: control; con L. lactis; con L. lactis y S. aureus; con S. aureus; con S. aureus y nisina. Las determinaciones microbiológicas y físico-químicas se realizaron de acuerdo a las normas COVENIN. La concentración de nisina se determinó mediante la técnica de difusión en agar. Los datos se analizaron utilizando el análisis de varianza y se probaron las medias por el método de losmínimos cuadrados. Se encontró producción de nisina por parte del cultivo iniciador, pero en bajas concentraciones. En los quesos elaborados con leche a la que se le inoculó S. aureus (103 ufc/mL) no se encontró efecto inhibidor del cultivo sobre este microorganismo patógeno. Sin embargo, los quesos elaborados con Lactococcus sin inoculación de Staphylococcus y los quesos elaborados con nisina, presentaron escaso crecimiento de estafilococos y de bacterias coliformes. La nisina resultó ser más eficiente para lograr biopreservación de los quesos blancos, aunque la utilización del cultivo iniciador productor de la bacteriocina, permitió obtener quesos con bajo conteo de patógenos, cuando la carga microbiana inicial en la leche era escasa.

The main disease transmitted by foods in Venezuela is the staphylococci poisoning, and it is white cheeses the most involved food. The nisin is a bacteriocin able to inhibit the growthof Gram positive microorganisms; among them, Staphylococcus aureus. One of the limitations of its use is its high cost. The use of bacteriocin producing starter cultures represents an alternative for milk industry. The objective of the present study was to evaluate the biopreservating effect of the Lactococcus lactis subsp. lactis (ATCC 11454) and to compare it with the addition of nisin to milk. Five types of cheese from pasteurized milk were elaborated: control; addition of L. lactis; addition of L. lactis and S. aureus; addition of S. aureus; addition of nisinaand S. aureus. Both, microbiological and physical-chemical determinations were made according to COVENIN. The nisinconcentration was measured using the agar diffusion technique. The data was analyzed with an analysis of variance and testing the means by the method of least squares means. The starter cultures produced nisin, but in low amounts. In cheeses elaborated with milk inoculated whit S. aureus (103 ufc/mL), no inhibiting effect of the culture on this pathogenic microorganismwas observed. Nevertheless, cheeses elaborated with both, Lactococcus without inoculation of Staphylococcus and with nisin, presented little growth of Staphylococcus and coliforms. Nisin was more efficient to obtain biopreservation of white cheeses, although the use of producing bacteriocin starter culture, allowed to obtain cheeses with low counts of pathogens, if the initial contamination of the milk was low.

Algunos parámetros de composición y calidad en leche cruda de vacas doble propósito en el municipio Machiques de Perijá estado Zulia Venezuela / Some composition parameters and quality on raw milk of dual purpose cows in the Machiques of Perijá country Zulia state Venezuela

El objetivo de este estudio fue evaluar los efectos de etapa de lactación, mestizaje, época del año y número de partos sobre la producción de leche (PL), crioscopía (CR), pH, acidez titulable (AT), proteínas totales (PT) y caseínas (CA) en leche cruda de un rebaño doble propósito. Se analizaron 926 muestras de leche del ordeño vespertino de un rebaño mestizo doble propósito (Holstein, Pardo suizo, Cebú, Criollo y Mosaico) mantenidos en un sistema de explotación semi-intensivo en Machiques, estado Zulia, Venezuela. Las vacas se agruparon de acuerdo al mestizaje (6 grupos), etapa de lactación (1 a 90 días, 91 a 180 días y > de 181 días) y número de partos (1, 2, y 3 o más partos). Fueron muestreadas durante el periodo de un año abarcando dos épocas del año (seca de noviembre a marzo y lluviosa de abril a octubre). Los datos fueron analizados a través del paquete estadístico SAS, utilizando un análisis de varianza y probando las medias por el método de los mínimos cuadrados, complementado con un análisis de correlación de Pearson para las variables dependientes. Se obtuvieron medias generales para PL de 3,109 Kg, CR -0,541, pH 6,72, AT 17,60 mL de NaOH 0,1 N/100 mL de leche, PT 3,66% y CA 2,40%. Se observaron diferencias significativas (P£0,05) entre mestizajes y etapas de lactación sobre todas las variables estudiadas, a diferencia de la época del año que solo afectó a la CA, y el número de partos que afectó a la PL, PT y CA. Se encontraron correlaciones significativas entre PL con CR, PT y CA, del pH con AT y la PT con CA. Se concluye que el mestizaje y la etapa de lactancia representan los factores que introducen mayor variabilidad en la calidad y composición proteica de la leche en animales mestizos doble propósito.

The aim of this research was to evaluate the effect of lactation stage, breed, year season and parity number on milk yield (MY), cryoscopy (CR), pH, acidity (TA), total protein (TP) and casein (CA) in raw milk of an herd of dual purpose. An evaluation was performed in 926 milk samples for the evening milking of a herd of dual purpose cattle (Holstein, Brown Swiss, Creole Zebu and Mosaic) maintained in a semi-intensive production system in Machiques, Zulia State, Venezuela. Cows were grouped according to the breed (6 groups), lactation stage (1 to 90 days, 91 to 180 days and > of 181 days) and parity number (1, 2, and 3 or more parturitions). Cows were sampled during a year period, including two seasons (dry of November to March and rainy of April to October). Data were analyzed through the statistical package SAS, using a variance analysis by testing mean differences through least square means procedure. In addition, Pearson product moment correlation analysis was performed. Overall means were for MY 3.109 Kg, CR -0.541, pH 6.72, TA 17.60 ml of NaOH 0.1 N/100 ml of milk, TP 3.66% and CA 2.40%. Statistical differences were observed (P<0.05) for breed and lactation stage in all the variables studied. However, year season only had effect on CA. On the other hand, parity number had effects on Y, TP, and CA. Significant correlation coefficients were found among MY with CR, TP and CA, of the pH with TA, and TP with CA. It is concluded that the breed and lactation stage represent the factors that introduce greater variation in the quality and protean composition of the raw milk of dual purpose cows.

Modelos cinéticos aplicados al crecimiento de Lactococcus lactis subsp lactis en leche / Growth kinetics models applied to Lactococcus lactis subsp lactis in milk

El Lactococcus lactis subsp, lactis es una bacteria ácido-láctica muy utilizada como cultivo iniciador principalmente en quesos madurados, capaz de producir algunas bacteriocinas, entre estas la nisina, por lo cual su uso como preservador en importante. En el presente trabajo se utilizaron modelos cinéticos con el objeto de describir el crecimiento de este microorganismo en leche en polvo reconstituida, con los cuales es posible predecir su dinámica dentro del rango de temperatura estudiado, entre 9 y 39°C. Se utilizó la ecuación de Gompertz con cuatro parámetros de regresión para modelar cada una de las curvas de crecimiento obtenidas experimentalmente. Como resultado de este proceso, se obtuvieron los parámetros necesarios para calcular la fase de adaptación, tasa de crecimiento exponencial (µm) y el tiempo de generación (Tg). Estos parámetros microbiológicos fueron relacionados con la temperatura en un modelo secundario, en el cual, la fase de adaptación y el tiempo de generación fueron bien ajustados utilizando una ecuación hiperbólica, obteniendo un R²= 0,922 y 0,991 respectivamente, mientras que la tasa de crecimiento se modeló utilizando la ecuación de la raíz cuadrada de Ratkowsky (R²= 0,991). Se recomienda utilizar la metodología descrita para estudiar el crecimiento de este microorganismo en quesos frescos, incluyendo en el modelo la cinética de producción de nisina.

Regulación del metabolismo del colesterol y ácidos grasos en el síndrome nefrótico experimental por las proteínas que se unen a los elementos regulatorios de esteroles (SREBP's): efecto de la soya / Metabolism of cholesterol and fatty acids in nephrotic syndrome and its regulation by sterol regulatory element brinding proteins (SREBP's): Effect of soy protein consumption

El síndrome nefrótico (SN) cursa con hiperlipidemia. Se conoce que la biosíntesis del colesterol y de los ácidos grasos es regulada por los factores transcripcionales que se unen a los elementos de respuesta a esteroles (SREBP's). El consumo de proteína de soya disminuye la concentración de estos lípidos, aunque su mecanismo de acción no es del todo conocido. El objetivo de este estudio fue conocer si el consumo de la proteína de soya reduce los niveles de colesterol y triglicéridos a través de una regulación de las SREBP 's. Se estudiaron ratas Wistar macho con SN experimental por 64 días. Se observó que las concentraciones plasmáticos de colesterol y triglicéridos plasmáticos, así como de la proteinuria eran significativamente menores en las ratas alimentadas con proteína de soya que aquellas que consumían caseína. Estos cambios se asociaron con disminución de la expresión del ARNm SREBP 1 y de las enzimas de la síntesis de ácidos grasos. Los análisis por Western Blot revelaron que en los núcleos de hepatocitos obtenidos de ratas alimentadas con proteína de soya hubo menor presencia del factor transcripcional SREBP 1. Los resultados de este estudio indican que el consumo de proteína de soya produce efectos benéficos durante el síndrome nefrótico.

Hyperlipidemia occurs during nephrotic syndrome (NS). It is known that cholesterol and fatty acid biosynthesis is controlled by the transcription factors sterol regulatory element binding proteins (SREBPs). Soy protein consumption reduces the concentration of these lipids, although its mechanism of action is not well known. The aim of the present study was to establish whether soy protein consumption reduces cholesterol and triglycerides levels by regulating of SREBPs. Male Wistar rats with experimental NS were studied for 64 days. The results showed that rats fed with soy protein had significantly lower plasma cholesterol and triglyceride concentrations as well as proteinuria than rats fed with casein diet. These decrements were associated with a decrease in the expression of SREBP 1 and fatty acid biosynthetic enzymes. In addition, Western blot analysis revealed that in nuclear extracts from hepatocytes of rats fed with soy protein, there was a lower concentration of SREBP 1 than in rats fed with casein. The results of this study indicate that consumption of a soy protein diet has beneficial effects on nephrotic syndrome.

Mecanismos moleculares de acción de los ácidos grasos poliinsaturados y sus beneficios en la salud / Molecular mechanisms of action and health benefits of polyunsaturated fatty acids

Essential polyunsaturated fatty acids (PUFAs), linoleic acid n6 (LA) and linolenic acid (ALA) n3 obtained from the diet are precursors of the long-chain polyunsaturated fatty acids (Lc-PUFAs) arachidonic acid (AA) and docosahexaenoic acid (DHA) respectively. Consumption of PUFAs is related with a better neurological and cognitive development in newborns. It has been demonstrated that consumption of n-6 and n-3 PUFAs decreases blood triglycerides by increasing fatty acid oxidation through activation of PPARα or by reducing the activation of SREBP-1 inhibiting lipogenesis. Dietary PUFAs activate PPARα and PPARγ increasing lipid oxidation, and decreasing insulin resistance leading in a reduction of hepatic steatosis. Beneficial effects of PUFAs have been observed in humans and in animals models of diabetes, obesity, cancer, and cardiovascular diseases. It is important to promote the consumption of PUFAs. Main food sources of PUFAs n-6 are corn, soy and safflower oil, and for PUFAs n-3 are fish, soy, canola oil and, flaxseed. Finally FAO/WHO recommends an optimal daily intake of n6/n3 of 5-10:1.

Los ácidos grasos poliinsaturados indispensables (AGPIs), ácido linoleico n-6 y ácido linolénico n-3 se obtienen a través de la dieta y son precursores de los ácidos grasos poliinsaturados de cadena larga (AGPIs-CL) araquidónico (AA) y docosahexaenoico (ADH), respectivamente. El consumo de AGPIs está relacionado con un mejor desarrollo cerebral fetal y cognoscitivo del recién nacido. Los AGPIs pueden reducir la concentración de triacilgliceroles en la sangre a través de la oxidación de ácidos grasos por medio de la activación de PPARα o a través de la represión de SREBP-1 que inhibe la lipogénesis. El consumo de AGPIs puede ser benéfico en el control de ciertas enfermedades como la diabetes mellitus y la obesidad en la que los AGPIs activan a PPARα estimulando la oxidación de lípidos y disminuyendo la resistencia a la insulina y la esteatosis hepática. En el caso del cáncer los AGPIs pueden servir como agentes citotóxicos para ciertas células tumorales. Debido a su efecto hipolipémico y a su efecto antiinflamatorio, los AGPIs podrían tener efectos benéficos en la prevención de enfermedades cardiovasculares. Las principales fuentes alimenticias de AGPIs n-6 son los aceites de maíz, de cártamo y de soya, y las de AGPIs n-3 son la linaza y los aceites de pescados, canola y de soya. Finalmente, la FAO/ OMS recomienda un consumo óptimo de AGPIs diario en una proporción n-6: n-3 de 5-10: 1/día.

Calidad microbiológica de las principales marcas de leche pasteurizada distribuidas en la ciudad de Maracaibo Venezuela / Bacteriological quality of main pasteurized milk brands distributed in Maracaibo city Venezuela

El principal producto lácteo fluido que se consume en Venezuela es la leche pasteurizada, esta es suceptible a la contaminación bacteriana por diversas fuentes, anteriores y posteriores a la pasteurización. Con el fin de evaluar las condiciones microbiológicas de cinco marcas de elevado consumo (A, B, C, D y E), se analizaron 216 muestras obtenidas en panaderías y supermercados distribuidas en la ciudad de Maracaibo, a las cuales se les practicaron las pruebas de recuento de aeróbios mesófilos (RAM), coliformes, termodúricos, psicrótrofos, pruebas para evaluar la eficiencia de la pasteurización, entre otras. Entre los resultados obtenidos se encontró un RAM promedio de 4,3 x 10 elevado a la 4 ufc/mL, resultando el 14,35 por ciento de las muestras superando el límite establecido por la Comisión Venezolana de Normas Industriales (COVENIN). Los coliformes promediaron 2,8 x 10² ufc/mL, con 50,93 por ciento de las muestras por encima de 1,0 x 10² ufc/mL. Los termodúricos y psicrótrofos arrojaron promedios de 5,9 x 10³ ufc/mL y 8,7 x 10² ufc/mL respectivamente. Se obtuvo una elevada carga bacteriana, más del 99 por ciento de las muestras resultaron negativas a la prueba de peroxidasa, indicando un marcado sobrecalentamiento en el procesamiento térmico, por lo cual se concluye que las muestras analizadas fueron con mucha frecuencia, contamindas después de la pasteurización, probablemente por fallas en la aplicación de las buenas prácticas de manufactura

Production of recombinant rat hepatic histidase / Producción de histidasa recombinante de hígado de rata

Rat liver histidase was expressed in E. coli by using a PCR product of the coding sequence obtained from the rat liver cDNA of histidase cloned in the expression vector pRSET. The construct (pRSET-HAL) produced a fusion protein containing a tail of polyhistidine. The expression product was purified with a resin containing Ni+ that retains proteins with polyhistidine fragments. pRSET-HAL was analyzed by restriction enzyme mapping and by sequencing confirming the correct orientation and nucleotide sequence. Native rat liver histidase was also purified and it had a Mr of 72 kDa. An antiserum against native histidase was obtained in rabbit. Western blot analysis revealed one band of 72 kDa observed in membranes containing purified histidase or rat liver high speed supernatants. The same antiserum also detected in cell lysates of E. coli transformed with the pRSET-HAL plasmid a single band of 74 kDa of the recombinant histidase before cleavage with enterokinase. After the proteolysis, the Western blot analysis showed a single band of approximately 72 kDa. Kinetic analysis of the recombinant histidase showed similar Km and Vmax compared with native histidase.

La histidasa de hígado de rata se expresó a partir del producto de amplificación por PCR de la región codificante del DNAc de la histidasa, el cual se clonó en el vector de expresión pRSET. La construcción (pRSET-HAL) permitió la producción de una proteína de fusión que contenía una cola de polihistidinas. El producto de expresión se purificó con una resina que contiene Ni+, la cual retiene proteínas con fragmentos de polihistidina. El pRSET-HAL se analizó por medio de un análisis con enzimas de restricción y por secuenciación de DNA para confirmar su correcta orientación así como tambièn su secuencia nucleotídica. La histidasa nativa hepática fue tambièn purificada y tuvo un Mr de 72 kDa. A partir de la enzima purificada nativa se preparó un antisuero contra la histidasa en conejo. El análisis por Western blot mostró una sola banda de 72 kDa en membranas que contenían histidasa purificada o en la fracción citosólica de hígado de rata. El mismo anticuerpo tambièn detectó en lisados de E. coli transformados con el plásmido pRSET-HAL una sola banda de 74 kDa correspondientes a la histidasa recombinante antes de su hidrólisis con enterocinasa. Despuès de la proteólisis, el análisis por Western blot mostró una sola banda de aproximadamente 72 kDa correspondiente a la histidasa. Análisis cinèticos de la histidasa recombinante mostraron Km y Vmax similares a las observadas con la histidasa nativa.

Efectos del mestizaje, época del año, etapa de lactancia y número de partos sobre la composición de leche cruda de vacas mestizas / Effects of breed, season lactation stage and parity number on composition of raw milk of crossbreed cows

La composición de la leche cruda de vaca puede ser afectada por factores genéticos, fisiológicos, ambientales y de manejo , por lo que es de interés para muchos investigadores y para la industria láctea. Con el objetivo de evaluar el efecto de mestizaje (M), época del año (EA), etapa de lactación (EL) y número de partos (NP) sobre la grasa (GR), sólidos totales (ST), sólidos no grasos (SNG) y lactosa mineral (LM), se analizaron 926 muestras de leche de un rebaño mestizo en Machiques, estado Zulia, Venezuela. Las vacas se agruparon de acuerdo al M en (6 grupos). El (1 a 90 días, 91 a 180 días y > de 181 días) y NP (1, 2 y 3 o más partos), muestreadas durante el período de un año abarcando dos EA (seca de noviembre a marzo y lluviosa de abril a octubre). Los datos se analizaron a través del paquete estadístico SAS, utilizando un análisis de varianza y probando las medias por el método de los mínimos cuadrados, complementando con un análisis de correlación de Pearson para las variables dependientes. Se obtuvieron medias generales para GR 4,73 por ciento ST 14,30 por ciento, SNG 9,56 por ciento y LM 5,85 por ciento. Se observaron diferencias significativas (P menor o igual 0,05) de M y El sobre todas las variables estudiadas a excepción de la GR, a diferencia de la EA que sólo afectó a los ST, y el NP que afectó a ST, GR. Se apreciaron correlaciones significativas entre GR y ST, de los ST con SNG y LM. Se concluye que la leche de vaca difiere en los porcentaje de sus componentes de acuerdo al M, EA, EL y NP

Metabolismo de la homocisteína y riesgo de enfermedades cardiovasculares: Importancia del estado nutricio en ácido fólico, vitaminas B6 y B12 / Metabolism of homocysteine and risk of cardiovascular diseass: Importance of folic acid, vitamins B6 and B12 nutritional status

La homocisteína es un aminoácido azufrado que se sintetiza en el organismo a partir de la metionina. Este compuesto puede seguir dos rutas es su metabolismo, la de remetilación y la de transulfuración. La primera da lugar a la regeneración de metionina y la segunda a la formación de cisteína. Debido a su rápida utilización metabólica, este aminoácido se encuentra en bajas concentraciones en el plasma. La homocisteína circula en la sangre como tiol puro en bajas concentraciones y la mayoría se encuentra como disulfuro libre unido a residuos de cisteína de las proteínas. Sin embargo, en el caso de defectos genéticos en alguna de las enzimas del metabolismo de la homocistéina o de deficiencia nutricia de ácido fólico, vitamina B6 y B12, cuyas formas coenzimáticas se requieren para la utilización de homocisteína, se produce una elevación significativa de la concentración de este aminoácido en plasma asociado a un incremento en el desarrollo de enfermedades cardiovasculares. En base a estudios clínicos y epidemiológicos en la actualidad se considera la concentración de homocisteína en plasma como un factor independiente de riesgo de desarrollo de enfermedades aterotrombóticas y cardiovasculares. En la presente revisión se describe el metabolismo de la homocisteína, y la evidencia epidemiológica que muestra la asociación de la homocisteína con la incidencia de enfermedades cardiovasculares, así como valores de referencia. Se indican los mecanísmos a través de los cuales este aminoácido azufrado produce daño vascular. Finalmente, se dan algunas recomendaciones para el tratamiento nutricio de pacientes con hiperhomocisteinemia.

Effect of nutritional rehabilitation of undernourished rats on serum insulin-like growth factor (IGF)-I and IGF-binding proteins

El propósito del presente trabajo fue estudiar el efecto de la rehabilitación nutricia con dietas que contenían diferente concentración de proteína (6, 18 o 50 por ciento) en ratas previamente desnutridas sobre los niveles del factor de crecimiento semejante a la insulina (IGF-I) y de las proteínas que unen al factor semejante a la insulina (IGFBPs). La desnutrición se indujo alimentando ratas en crecimiento con 0.5 por ciento de caseína por cinco semanas. En este periodo, el crecimiento, las proteínas totales en el suero, las concentraciones de IGF-I en suero y la relación IGFBP-3/IGFBP-2 se encontraron significativamente disminuidas comparados con el grupo con libre acceso a una dieta con 18 por ciento de caseína. La rehabilitación nutricia por 21 días con 6 por ciento de caseína no cambió ninguno de estos parámetros. La rehabilitación nutricia con una dieta con 18 o 50 por ciento de caseína por un día no inició el restablecimiento de las concentraciones de IGF-I y la relación IGFBP-3/IGFBP-2. Sin embargo, después de 10 días con dietas al 18 o 50 por ciento de caseína por un día no inició el restablecimiento de las concentraciones de IGF-I y la relación IGFBP-3/IGFBP-2. Sin embargo, después de 10 días con dietas al 18 o 50 por ciento de caseína, las ratas aumentaron 12 veces las concentraciones de IGF-I y siete veces la relación IGFBP-3/IGFBP-2. Finalmente, la rehabilitación por 21 días con 18 o 50 por ciento de caseína produjo un incremento de 21 y 16 veces en las concentraciones de IGF-I y 6.1 y 14.5 veces en la relación IGFBP-3/IGFBP-2 respectivamente. Estos resultados sugieren que la rehabilitación nutricia con 18 por ciento o 50 por ciento de caseína son más efectivas que dietas que contienen 6 por ciento de caseína para restablecer el peso corporal. Las concentraciones de IGF-I e IGFBP-3 fueron indicadores sensibles de la evolución del estado nutricio dependiendo de la concentración de proteína en la dieta

Aminoácidos libres en plasma y leche de mujeres lactantes rurales / Free aminoacids in plasma and milk of mexican rural lactating women

Objetivo. Determinar el contenido de aminoácidos libres en plasma y en leche de mujeres lactantes del medio rural. Métodos. Veintiocho mujeres de una comunidad rural con edad de 24 ñ 5.0 años, (ñ DE) peso corporal de 50 ñ 4.9 kg y talla de 148 ñ 4.8 cm, fueron estudiadas en condiciones de balance metabólico. Las participantes fueron divididas en 5 grupos (3 grupos en el 1º, 3º, y 6º mes de lactancia, uno de post-destete y un grupo control de no embarazadas y no lactantes). La dieta del balance fue similar a la dieta habitual local. La concentración de aminoácidos en la dieta, plasma y leche se determinó en un autoanalizador de aminoácidos. Resultados. El aspartato plasmático fue mayor (p< 0.05) en el 6º mes de lactancia y leucemia, valina e isoleucina menores en el 3er. mes. En leche, valina, prolina y taurina presentaron concentraciones gradualmente menores a lo largo de la lactancia (p < 0.05), en tanto que la serina y treonina fueron mayores en el 3er mes (4 veces el control). La concentración de aminoácidos de cadena ramificada, y la de los básicos, aromáticos y neutros fue cuatro veces mayor en plasma versus leche, mientras que la de glutamato fue 40 veces mayor en leche que en plasma. Conclusiones. No existió una relación entre la concentración de aminoácidos libres de plasma versus los de leche durante los seis primeros meses de lactancia. Las variaciones observadas en el patrón de aminoácidos libres de leche y plasma estuvieron posiblemente mediados por cambios metabólicos

leucine catabolism in mammary tissue, liver and skeletal muscle of dam rat during lactation and weaning

Background. This study designed to determine the effect of lactation and weaning on the catabolism of branched-chain amino acids (BCAA). Methods. Rates of transamination and oxidation of leucine and branched chain a-ketoacid dehydrogenase(BCKD) activity were mesured in homogenates of mammary gland, skeletal muscle and liver on day 12 of lactation and 24 h after separation of dams from the litter (weaning). Results. Lactating dams consumed 250 percent more protein than control rats, extra protein is required for protein synthesis by the mammary gland, the extent to which the excess of amino acids consumed during lactation is utilized or oxidized by different tissues is not known. The rate of transamination of [1-14C] leucine by mammary tissue of lactating dams was sixfold higher than in virgin rats. The rate of transamination remained elevated fourfold in post-weaning dams. Rates of transamination were three times higher in mammary tissue than in muscle of lactating dams. Rate of oxidation [1-14C] leucine by lactanting mammary tissue was tenfold higher than in control tissue. Conclusions. The capacity of mammary tissue for transamination and oxidation of leucine increased greatly during lactation, suggesting that the mammary gland may play an important role in the catabolism of BCAA during lactation

Hepatic phenylalanine-hydroxylase and tyrosine-aminotransferase mRNA levels in rats adapted to diets with different concentrations of protein

Se estudió el efecto de la concentración de la proteína de la dieta sobre concentraciones de ARNm de la tirosina aminotransferasa (TAT) y la fenilalanina hidroxilasa (PAH) hepáticas en ratas adaptadas a consumir dietas con 18 ó 50 por ciento de caseína en un horario restringido de 7 horas (9 a 16 h) durante 5 días. Las concentraciones de ARNm de TAT de ratas adaptadas a una dieta de 18 por ciento de caseína y alimentadas en forma aguda con dietas que contenían 6, 18 ó 50 por ciento de caseína, fueron 0.15, 0.84 y 5.08 veces más altas a las 6 horas en comparación con las concentraciones de ARNm antes de la administración de la dieta. Las concentraciones de ARNm de TAT después de 17 horas de ayuno en las ratas alimentadas con 6, 18 ó 50 por ciento de caseína fueron respectivamente -0.45, 1.76 y 9.11 veces mayores en comparación con el valor basal. Las concentraciones ARNm de PAH mostraron un patrón similar; en las ratas adaptadas a 18 por ciento de caseína se observó un aumento de -.68, 1.63 y 2.5 veces en las concentraciones de ARNm de PAH en las ratas alimentadas en forma aguda con 6, 18 y 50 por ciento de casína respectivmanete y un aumento de -0.86, 2.32 y 9.33 veces después de 17 horas de ayuno. La concentraciones de ARNm de TAT y PAH en ratas adaptadas a consumir 50 por ciento de caseína y luego alimentadas con 6 ó 50 por ciento de caseína mostraron un pico máximo a las 6 horas de ayuno. Estos resultados sugieren que las concentraciones crecientes de proteína en la dieta son capaces de producir aumentos en la concentración de los ARNm de las dos enzimas, posiblemente para eliminar el exceso de aminoácidos consumidos, ya que la concentración de los ARNm dependió más del contenido de proteína de la dieta de adaptación

Regulación de la expresión génetica por nutrimentos / Regulation of gene expression by nutrients

Los nutrimentos pueden, de manera directa o indirecta, regular la vía de expresión de genes que codifican para proteinas, principalmente enzimas involucradas en las rutas metabólicas relacionadas con la utilización de hidratos de carbono, lípidos y aminóacidos. Estos nutrimentos pueden actuar directamente o generar un estado hormonal específico en el organismo que regulen algunos genes. La presente revisión tiene como objetivo mostrar ejemplos específicos de regulación dietaria y hormonal de genes de enzimas involucradas en el metabolismo de hidratos de carbono (fosfoenol piruvato carboxicinasa), lípidos (enxima málica) y aminoácidos (serina deshidratasa)

Riboflavin and pyridoxine status in a group of pregnant Mexican women

In order to assess the nutritional status of riboflavin and pyridoxine during pregnancy, 24 Mexican women were studied during the second trimester and 17 during the third trimester of gestation. The biochemical evaluation of the riboflavin and pyridoxine status was performed by measuring the activation coefficients (AC) of the erythrocyte glutathione reductase (eGR) and aspartate aminotranferase (eAAT), respectively. Dietary protein, riboflavin, thiamin, and calcium intake decreased significantly in the last trimester of gestation. The women presented biochemical deficiency of pyridoxine in the second and third trimester of pregnancy, but they developed biochemical deficiency of riboflavin and pyridoxine deficiency. None showed clincial signg of vitamin deficiency. No significant correlation was found between individual serum concentrations of estradiol or progesterone and eGR-AC or eAAT-AC in both trimesters of pregnancy. Six newborns studied showed normal eGR-AC and eAAT-AC

Toxoplasmosis y virus: riesgo perinatal de infección; primera parte / Toxoplasmosis and virus: perinatal risk of infection; part first

La embarazada y el feto son huéspedes susceptibles de infección durante los meses de gestación. Es posible reconocer los riesgos específicos de algunas infecciones, como los incluidos en el síndrome de TORCH; sin embargo, es indispensable establecer un sistema de prevención que limite o impida el daño a la salud materna y fetal, más que el mismo diagnóstico de la enfermedad. En este trabajo se analizan las características sobresalientes de los problemas de los padecimientos infecciosos durante el embarazo, tratando de orientar algunas acciones concretas en determinadas enfermedades