ABSTRACT
The objective of this work was to determine by PCR the presence of Salmonella Enteritidis FT-13A (SE) and Salmonella Issatschenko (SI) in different samples of organs from 4 days old chicks experimentally infected. Four days old chicks were inoculated with SE and SI and their organs were frozen for DNAextraction to perform classic and nested PCR. It was possible to demonstrate the presence of SE and SI after 6 hours after experimental infection (AEI), but as time passed AEI positive results were inconsistent, obtaining negative results until 174 hours AEI. PCR is useful for detecting SE and SI in the early hours AEI. It is recommended to use pre-enrichment of the samples, in order to facilitate the DNA extraction and the detection of Salmonella by PCR.
El objetivo del presente trabajo fue determinar por medio de esta prueba, la presencia de Salmonella Enteritidis FT-13A (SE) y de Salmonella Issatschenko (SI), en diferentes muestras de órganos de pollitos de 4 días de edad infectados experimentalmente. Se emplearon órganos congelados de pollitos de 4 días de edad inoculados experimentalmente con SE y SI, para extraer el ADN y realizar la PCR clásica y anidada. Se logró detectar SE y SI desde las 6 horas posinfección experimental (PIE), pero conforme pasó el tiempo PIE, los resultados positivos fueron inconsistentes, obteniendo resultados negativos hasta las 174 horas PIE. Se concluyó que la PCR es útil para detectar SE y SI en las primeras horas PIE. Se sugiere utilizar pre-enriquecimiento de las muestras, para facilitar la extracción de ADN y la detección de Salmonella por medio de la PCR.
ABSTRACT
The objective of this study was to determine Salmonella enteritidis phage type 13a (SE PT 13a) and Salmonella enteritidis biovar Issatschenko phage type 6a (SI) pathogenesis in 4 days old broiler chickens. Twenty-eight birds per treatment were inoculated with a dose of 1x10(8) (SE PT 13a) and 1x10(9) (SI), respectively, and fourteen chickens were inoculated with physiological saline solution (PSS) as negative controls. Samples from liver, spleen, heart, lung, crop, duodenum, jejunum, ileum and blind guts were taken during fourteen different times postinfection (6, 18, 30, 42, 54, 78, 102, 126, 150, 174, 198, 222, 246 and 270 hours postinfection (hpi) in order to obtain Salmonella spp isolation for bacteriological, histopathological and ultrastructural examination. During the first week, some depressed birds were observed, and the second week birds were found with yolk sac retention in both treatments. SE PT 13a was isolated at 18, 30, 42, 54, 78, 102, 126, 150, 174, 198, 246 and 270 hpi from all organs previously described. SI was isolated at 42, 150, 174 and 222 hpi, from crop, jejunum, ileum and blind gut samples. Ileum was the main organ where more frequently SE PT 13a and SI were isolated. There was no mortality in either treatments. Histopathology revealed inflammation, coagulative necrosis, congestion and hemorrhages in gastrointestinal tract (GIT) and visceral organs since 6 hpi in both treatments, with lesions from mild to severe. Ultrastructurally changes in enterocytes' cytoplasm: degeneration, necrosis, invasion and penetration of SE PT 13a and SI were observed. Results of this research showed the ability of SE PT 13a as well as SI to penetrate and invade enterocytes in experimentally infected broiler chicken, demonstrating that SI is able to infect broiler chickens and not only Muridae family.
El objetivo del presente estudio fue determinar la patogenia de Salmonella enteritidis fagotipo 13a (SE FT 13a) y de Salmonella enteritidis biovar Issatschenko fagotipo 6a (SI) en pollitos de engorda de cuatro días de edad. Veintiocho aves por tratamiento fueron inoculadas con dosis de 1 x 10(8) (SE FT 13a) y 1 x 10(9) (SI), respectivamente, y 14 pollitos fueron inoculados con solución salina fisiológica (SSF), como testigos negativos. Se tomaron muestras de hígado, bazo, corazón, pulmón, buche, duodeno, yeyuno, íleon y ciegos durante 14 tiempos posinfección (6, 18, 30, 42, 54, 78, 102, 126, 150, 174, 198, 222, 246 y 270 horas posinfección (hpi)), para realizar el aislamiento bacteriológico de Salmonella spp, exámenes histopatológico y ultraestructural. Durante la primera semana, se observó que algunas aves estaban deprimidas, y en la segunda semana se encontraron aves con retención de saco vitelino en ambos tratamientos. Se aisló SE FT 13a a partir de las 18, 30, 42, 54, 78, 102, 126, 150, 174, 198, 246 y 270 hpi, en todos los órganos previamente descritos. SI fue aislada a las 42, 150, 174 y 222 hpi de muestras de buche, yeyuno, íleon y ciegos. El íleon fue el órgano de donde se aisló SE FT 13a y SI con mayor frecuencia. No se registró mortalidad en ningún tratamiento. El examen histopatológico reveló inflamación, necrosis coagulativa, congestión y hemorragias en tracto gastrointestinal (TGI) y órganos viscerales a partir de las 6 hpi en ambos tratamientos, con grados de lesión de leve a severo. Ultraestructuralmente se observaron cambios en el citoplasma celular de enterocitos: degeneración, necrosis, invasión y penetración de SE FT 13a y SI. Los resultados de la presente investigación evidenciaron la capacidad de SE FT 13a y SI para penetrar e invadir enterocitos de los pollitos infectados experimentalmente, demostrando que SI es capaz de infectar pollos de engorda y no sólo a la familia Muridae.