Construction of a questionnaire to characterise environmental exposures in patients with systemic lupus erythematosus / Construcción de un cuestionario para caracterizar exposiciones ambientales en pacientes con lupus eritematoso sistémico

ABSTRACT Introduction: As the knowledge of systemic lupus erythematosus (SLE) advances, the need to characterise the burden of environmental exposure in patients becomes increasingly relevant. However, there is currently no tool validated to measure such exposure. For this reason, the objective of this work was the construction of a questionnaire-type tool, in order to detail the exposure to multiple environmental factors previously associated with SLE. Methods: The literature was reviewed to identify relevant environmental factors associated with SLE, and the first version of the questionnaire was constructed. After expert review and feedback, the questionnaire was consolidated and applied to 40 patients and 20 healthy controls. Finally, exploratory Rasch analysis was performed to determine the performance of the tool's response function. Results: The tool showed a favourable performance in the exploratory analysis of its psychometric properties. Additionally, it allowed the characterisation of 10 environmental factors and the differences in the frequencies of exposure between patients with SLE and healthy controls. A high co-occurrence of exposures was identified, as most of the patients had positive exposures to three or more factors simultaneously. Conclusion: A practical and easy-to-apply tool has been constructed, with a favourable performance in its psychometric properties. To our knowledge, this is the first tool in the Spanish language for the characterisation of multiple environmental exposures, and constructed explicitly for patients with SLE with a validation analysis. It enabled us to identify that most of the lupus patients were exposed to the sum of three or more environmental factors.

RESUMEN Introducción: Con el avance en el conocimiento del lupus eritematoso sistémico (LES), se hace relevante la necesidad de caracterizar la carga de la exposición ambiental en los pacientes. Sin embargo, en la actualidad no se dispone de un instrumento validado para medirlo. Por consiguiente, el objetivo de este trabajo fue la construcción de un instrumento tipo cuestionario, a fin de detallar la exposición a múltiples factores ambientales previamente asociados a LES. Métodos: Se llevó a cabo una revisión de la literatura para identificar los factores ambientales asociados a LES y se construyó la primera versión del cuestionario. El instrumento se consolidó luego de la revisión y retroalimentación por expertos y se aplicó a 40 pacientes y 20 participantes sanos. Finalmente, se hizo análisis de Rasch exploratorio para determinar el desempeño en la función de respuesta. Resultados: El instrumento mostró un desempeño favorable en sus propiedades psicométricas. Adicionalmente, permitió la caracterización de 10 factores ambientales y sus diferencias en las frecuencias de exposición entre pacientes con LES y participantes sanos. Se identificó una alta co-ocurrencia de exposiciones reflejada en que la mayoría de los pacientes mostró exposición a tres o más factores simultáneamente. Conclusión: Se construyó un instrumento práctico y de fácil aplicación, con un desempeño favorable en sus propiedades psicométricas. Este instrumento, que es el primero para la caracterización de múltiples exposiciones ambientales específicamente diseñado para pacientes con LES, validado y en idioma español, permitió identificar que la mayoría de los pacientes con lupus estuvieron expuestos a la sumatoria de tres o más factores ambientales.

In vitro embryo production from cumulus-oocyte complexes type II in Bos indicus cattle / Producción in vitro de embriones a partir de complejos cúmulos oocitos tipo II en bovinos Bos indicus / Produção in vitro de embriões de cumulus oócito complexo de tipo II de bovinos Bos indicus

Abstract The morphological selection of cumulus-oocyte complexes (COCs) is an important step for in vitro embryo production. It has been suggested that COC showing signs of atresia have the ability to generate embryos. The objective of this work was to evaluate the effect of COC morphology from Bos indicus animals with signs of early atresia versus no signs of atresia on in vitro embryo production. COC were classified in: Type I (TI): homogeneous ooplasm with ≥ 4 layers of compact cumulus cells (CC) and Type II (TII): granular ooplasm and ≥ 4 layers of CC slightly expanded. The COC were matured in vitro for 24 hours in TCM199 medium and subsequently fertilized in vitro for 18 h. The suspected zygotes were cultured in vitro for seven days in modified SOFaa medium. Embryonic quality was determined by blastomeric count following staining with Hoechst 33342. Student test was used to determine statistical differences for cleavage, blastocyst rate and blastomeric counts between types of COC. The cleavage rate for TI (n = 220) and TII (n = 161) was 88 ± 4% and 89 ± 8% respectively (p> 0.05); embryo development rate was 36 ± 7% and 33 ± 8% (p>0.05) respectively. The blastomeric count for both groups was 101 and 104 cells for TI and TII respectively (n = 10), (p>0.05). These results demonstrate that there is no difference in the quantity and quality of embryos produced in vitro using COC type I or type II, suggesting that both types could be used for bovine in vitro embryo production in Bos indicus cows.

Resumen La selección morfológica de los complejos cúmulo-oocito (COC) es crucial para la producción de embriones in vitro. Se ha sugerido que COC que muestran signos de atresia poseen capacidad de generar embriones. El objetivo de este trabajo fue evaluar el efecto de la morfología de los COC provenientes de animales Bos indicus con signos de atresia temprana y sin signos de atresia sobre la producción de embriones in vitro. Se clasificaron COC obtenidos de ovarios de faenado en dos grupos: Tipo I (TI): ooplasma homogéneo con ≥ 4 capas de células del cumulo (CC) compactas y Tipo II (TII): ooplasma granular y ≥ 4 capas de CC ligeramente expandidas. Los COC fueron madurados por 24 horas en medio TCM199 y posteriormente fueron fertilizados in vitro durante 18 h. Los presuntos cigotos se cultivaron in vitro por siete días en medio SOF modificado. La calidad embrionaria se determinó por conteo de blastómeras posterior a tinción con Hoechst 33342. Se usó la prueba t para determinar diferencias estadísticas. La tasa de clivaje para los COC, TI (n=220) y TII (n=161), fue 88 ± 4% y 89 ± 8% respectivamente (p>0,05); la tasa de desarrollo embrionario fue 36 ± 7% y 33 ± 8% (p>0,05) respectivamente. El conteo de blastómeras para ambos grupos fue de (TI:101,TII:104) (n=10), (p>0,05). Los resultados de este trabajo permiten concluir que no hay diferencia en la cantidad y calidad de embriones producidos in vitro utilizando COC tipo I o tipo II, sugiriendo que ambas calidades podrían ser usadas en la producción de embriones in vitro a partir de animales Bos indicus.

Resumo A seleção morfológica dos complexos cumulus-oócito (COC) é crucial para a produção in vitro de embriões. Relata-se que COC que apresentam sinais de atresia têm a capacidade de gerar embriões. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito morfológico dos COC de animais Bos indicus com sinais de atresia precoce ou sim sinais de atresia sobre a produção in vitro de embriões. COC obtidos de ovários de animais abatidos foram classificados em dois grupos: tipo I (TI): ooplasma homogéneo com ≥ 4 camadas de células do cúmulos (CC) compactos e Tipo II (TII): ooplasma granular e ≥ 4 camadas CC levemente expandidas. Os COC foram submetidos à maturação por 24 horas em meio TCM199 e depois fertilizados in vitro por 18 h. Os prováveis zigotos foram cultivados in vitro por sete dias em meio SOFaa modificado. A qualidade embrionária foi determinada pela contagem dos blastômeros após coloração com Hoechst 33342. O teste t foi utilizado para determinar diferenças estatísticas significativas. A taxa de clivagem para os COC TI (n = 220) e TII (n = 161) foi de 88 ± 4% e 89 ± 8%, respectivamente (p>0,05); a taxa de desenvolvimento embrionário foi de 36 ±7% e 33 ±8% (p>0,05), respectivamente. E a contagem de blastômeros para ambos os grupos foi (TI: 101, TII: 104) (n = 10) (p>0,05). Com base nos resultados deste trabalho conclui-se que não existe diferença na quantidade e qualidade dos embriões produzidos in vitro, utilizando COC tipo I ou tipo II, sugerindo que ambas as qualidades podem ser utilizadas na produção in vitro de embriões em animaes Bos indicus.

Perfil hormonal del envejecimiento muscular / Hormonal profile of muscle aging

El concepto de sarcopenia implica la pérdida de la masa y la fuerza musculares asociadas con el envejecimiento. Se produce por múltiples factores, como el daño oxidativo, pérdida de unidades motoras alfa de la médula espinal, disminución de la calidad y masa musculares, descenso de hormonas anabólicas como dehidroepiandrosterona, testosterona, estrógenos, hormona del crecimiento, factor de crecimiento ligado a la insulina tipo IGF-1, hormona paratiroidea e insulina, así como aumento de diferentes interleuquinas y del cortisol, inactividad física voluntaria y dieta hipocalórica. En esta revisión analizamos el papel de algunas hormonas que afectan el balance dinámico entre estímulos anabólicos y catabólicos en el músculo y la relación entre estos cambios hormonales y el desarrollo de sarcopenia.

The concept, sarcopenia, implies the loss of muscle mass and strength with aging. It is produced by multiple factors, such as oxidative damage, loss of alpha motor units of the spinal medulla, reduction of muscle quality and mass, reduction of anabolic hormones such as dehydroepiandrosterone, testosterone, estrogens, human growth hormone, insulin like growth factor IGF-1, parathyroid hormone and insulin, as well as increase in various interleukins and cortisol, voluntary physical inactivity and a hypocaloric diet. In this review we discuss the role of some hormones which affect the dynamic balance between the anabolic and catabolic stimuli in the muscle and the relation of these hormonal changes with the development of sarcopenia.

Simplificación de la fertilización de ovocitos durante la producción in vitro de embriones bovinos / Simplificação da fecundação de oócitos durante produção in vitro de embriões de bovinos / Simplification of oocytes fertilization during in vitro production of bovine embryos

El objetivo de este estudio fue evaluar un nuevo procedimiento de fertilización in vitro (FIV) de ovocitos bovinos, en el cual se omitió la centrifugación de los espermatozoides para los procesos de lavado y selección espermática. Dentro de cada uno de los pozos de los platos convencionales de cuatro pozos (pozos externos) se introdujo un nuevo pozo más pequeño (pozos internos) de aproximadamente 50 μl hecho en material de vidrio (0.3 mm de alto por 0.8 mm de diámetro). El procedimiento consistió en llenar los pozos interno y externo con 700 μl de medio de fertilización, hasta que el pozo interno quedara cubierto de medio, luego se depositaron 10 CCOs por pozo interno; luego 30 μl de semen previamente descongelado se depositaron en el fondo del pozo externo. Después de una hora se removió todo el contenido del pozo externo y se dejó el contenido del pozo interno con el medio y las células germinales por un periodo de incubación de 16 h. Los presuntos cigotos fueron cultivados en medio CR1aa por un periodo de siete días con un cambio de medio a las 72h. Como control, se utilizó un gradiente de Percoll 45-90% para la selección espermática. La tasa de de ovocitos divididos fue de (70.8 vs. 73.1) y la proporción de ovocitos que llegaron al estadio de morúla y blastocisto fue de (18.8 vs. 20.3), respectivamente. Los resultados obtenidos con la nueva propuesta metodológica son similares a los obtenidos con la metodología convencional (p<0.05). Estos resultados indican que ambos métodos producen resultados similares pero la nueva propuesta metodológica permite ahorrar tiempo, es menos laboriosa, consume menos reactivos y permite reducir la manipulación de las células espermáticas con buenos efectos eventuales en el mejoramiento de los procedimientos de reproducción in vitro.

This study was conducted to evaluate an in vitro fertilization (IVF) procedure that avoids the washing-selection-centrifugation of spermatozoa prior to coincubation with oocytes. A special dish was constructed as follows: in the middle of each of the 4-wells of a conventional plastic dish (larger wells), another little (≈50 μl) glass dish (inner well) was placed (0.3 mm-tall x 0.8 mm in diameter), in such a way that when the larger plate was filled with 700 μl of IVF media (Fert–TALP), the inner well was also filled up to overflowing. Ten in vitro matured oocytes were set into the inner well, and 30 μl of thawed semen were placed on the bottom of the outer well. After one hour of incubation, the media from the outer well was removed, and the well with the remaining media and the germ cells, were incubated for 16 hours. Presumptive zygotes were cultured in a CR1aa media for seven days with a culture media replace at 72 h. As a control, a conventional IVF, using the classical 45%-90% Percoll gradient selection, was carried out. The cleavage rates (70.8 vs. 73.1) and the proportion of oocytes reaching morula and blastocyst stages (18.8 vs. 20.3) by the “easy-IVF” were similar to the results obtained by the classical method (p<0.05). These results indicate that the two methods yield similar results but the “easy-IVF” definitely saves time, human effort, reagents, and after all reduces the manipulation of the sperm with eventual good effects in the long run toward improving in vitro reproduction procedures.

O objetivo deste estudo foi avaliar um novo procedimento de fertilização in vitro (FIV) de oócitos bovinos, que foi omitida na centrífuga esperma lavar os processos de seleção e de esperma. Dentro de cada um dos poços pratos convencionais quatro poços (poços externa) um novo bem menor (poços internos) cerca de 50 μl fato em vidro (0,3 mm de altura por 0,8 mm de diâmetro) foram introduziu. O procedimento foi de encher poços interna e externamente com 700 μ l meio de fertilização, até que a fossa foi coberto por meios internos e, em seguida, depositadas 10 CCOs em poços internos; então 30 μl previamente descongelados sêmen foi depositado no fundo da cova fora. Depois de uma hora é retirada a todo o conteúdo da cova, e foi deixada fora da doméstica no conteúdo do bem com o ambiente e células germinativas por um período de incubação de 16 h. A alegada zygotes foram cultivados em meio CR1aa por um período de 7 dias com uma mudança no meio-72h. Como um controle, utilizado uma gradiente de Percoll 45-90% de selecção de espermatozóides. A taxa de oócitos foi dividida (70.8 vs 73.1) e da proporção de oócitos que atingiu o estádio e foi Mórula blastocisto (18.8 vs 20.3), respectivamente. Os resultados obtidos com a nova metodologia proposta são semelhantes aos obtidos com a metodologia convencional (p<0.05). Estes resultados indicam que ambos os métodos produzem resultados semelhantes, mas a nova proposta metodológica economiza tempo, é menos trabalhoso, consome menos reativo e reduzem a manipulação de células espermáticas com bons potenciais efeitos na melhoria dos procedimentos reprodução in vitro.

Efecto de la centrifugación sobre la membrana plasmática y el ADN de espermatozoides bovinos / Efeito da centrifugação sobre a membrana plasmática e o DNA de espermatozóides bovinos / Effect of centrifugation on plasma membrane and DNA of bovine spermatozoa

El objetivo de este estudio fue determinar si la integridad de la membrana plasmática y el ADN de los espermatozoides pueden ser afectados por la centrifugación realizada en el proceso de lavado y selección. Los espermatozoides fueron sometidos a diferentes tiempos de centrifugación (10, 30 y 45 min); se utilizó un control negativo con espermatozoides no centrifugados y un control positivo con espermatozoides sometidos a estrés oxidativo con peroxido de hidrógeno (H2O2) (200 μM). Para evaluar la integridad de la membrana se utilizó la prueba hipoosmótica (HOST) y para evaluar la fragmentación del ADN se utilizó el ensayo cometa: El análisis estadístico se realizó mediante la prueba de Fisher. La centrifugación durante 10, 30 y 45 min, presentó un efecto estadísticamente significativo sobre el daño en el ADN, respecto de los espermatozoides no centrifugados (p<0.05). Además, se observó diferencia estadística significa (p<0.05) entre los espermatozoides centrifugados a diferentes tiempos con respecto al control positivo realizado con H2O2 (200 μM). La comparación de medias no indicó diferencia estadística significativa entre los espermatozoides no centrifugados y los centrifugados por un periodo de 10 y 30 min (p>0.05) en la reacción positiva a la prueba HOST, lo cual sí sucedió (p<0.05) al comparar los no centrifugados y los centrifugados por 45 min. El control positivo realizado con H2O2 presentó diferencia significativa (p<0.05) con el resto de los tratamientos. En conclusión, los resultados del presente trabajo sugieren que la centrifugación de los espermatozoides durante 10, 30 ó 45 min a 700 x g para la realización del gradiente diferencial de Percoll, tiene un efecto deletéreo sobre el ADN de los espermatozoides bovinos y que la centrifugación por 45 min además de causar daño en el ADN produce pérdida de la integridad de la membrana plasmática.

O objetivo de este estudo foi determinar se a integridade da membrana plasmática e o DNA dos espermatozóides podem ser afetados pela centrifugação realizada no processo de lavado e seleção. Os espermatozóides foram submetidos a diferentes tempos de centrifugação (10, 30 e 45 min); foi utilizado um controle negativo com espermatozóides não centrifugados e um controle positivo com espermatozóides submetidos a estresse oxidativo com peróxido de hidrogênio (H2O2) (200 μM). Para avaliar a integridade da membrana foi utilizado o teste hipoosmótica (HOST) e para avaliar a fragmentação do DNA Fo utilizado o ensaio cometa: A análise estatística se realizou mediante o teste de Fisher. A centrifugação durante 10, 30 e 45 min, apresentou um efeito estatisticamente significativo sobre o dano no DNA, em relação aos espermatozóides não centrifugados (p<0.05). Além disto, observou-se diferença estatisticamente significativa (p<0.05) entre os espermatozóides centrifugados a diferentes tempos em relação ao controle positivo realizado com H2O2 (200 μM). A comparação de medias não detectou diferença estatisticamente significativa entre os espermatozóides não centrifugados e os centrifugados por um período de 10 e 30 min (p>0.05) na reação positiva à prova HOST, o qual ocorreu ao comparar os não centrifugados e os centrifugados por 45 min (p<0,05). O controle positivo realizado com H2O2 apresentou diferença significativa (p<0.05) quando comparado contra os outros tratamentos. Em conclusão, os resultados do presente trabalho sugerem que a centrifugação dos espermatozóides durante 10, 30 ou 45 min a 700 x g para realização do gradiente diferencial de percoll, têm um efeito deletério sobre o DNA dos espermatozóides bovinos e que a centrifugação por 45 min além de causar dano no DNA produz perda da integridade da membrana plasmática.

The aim of this study was to evaluate the effects of different times of centrifugation on plasma membrane integrity and DNA of bovine sperm cells, by means of the hyposmotic test (HOST) and the comet assay, respectively. The sperm cells were centrifuged at 700 x g for 10, 30 or 45 min. No-centrifuged thawed semen served as negative control whereas hydrogen peroxide (H2O2) (200 mM) treated sperm cells were used as a positive control. The results indicate that while the integrity of the plasma membrane was not affected by centrifugation, bovine sperm DNA was damaged independently of centrifugation times. Significant differences between negative control and treatments were found (p<0.05) and in the same way, between treatments and positive control, where the damage for oxidative stress was greater. These results indicate that centrifugation could be detrimental for in vitro bovine embryo production. Additionally, some grade of DNA fragmentation in not centrifuged sperm cells (negative control) was registered, suggesting that DNA of bovine sperm cells could be affected by other factors, probably freezing procedure.

El Ensayo Cometa: una técnica para evaluar genotoxicidad en el ADN de oocitos bovinos / The Comet Assay: a technic to evaluate genotoxicity in DNA bovine oocytes

La electroforesis en gel de células individuales o Ensayo Cometa

Actividad antioxidativa de algunos extractos vegetales / Antioxidant activity of some vegetable extracts

La información acerca de extractos vegetales con actividad antioxidativa tiene gran interés para la medicina, las industrias farmacéutica y de alimentos. En este trabajo es evaluada la capacidad antioxidativa de varios extractos vegetales utilizando dos métodos: la decoloración del radical libre estable 1,1-difenil-2-picril hidracilo (DPPH) y la inhibición de la lipoperoxidación de las biomembranas de cerebro de rata. Se encuentra que los extractos activos en la decoloración del DPPH inhiben también la lipoperoxidación de biomembranas inducida por Fe2+-ascorbato, pero no se observa una correlación alta entre la decoloración del DPPH en el medio metanólico y la inhibición de la lipoperoxidación de biomembranas en el medio acuoso. Además, se muestra que los extractos difieren no solamente por la cantidad del material antioxidativo, sino también por las características cinéticas de la reacción de los antioxidantes presentes con radicales libres. Para dos extractos de mayor actividad antioxidativa, se evalúa la cito- y genotóxicidad, mostrando que no poseen efectos tóxicos considerables.