Cultivos de célllas de nervio ciático y de ganglio de la raíz dorsal de ratón adulto / Cell Cultures of the Sciatic Nerve and Dorsal Root Ganglia from Adult Mouse

Las células de Schwann (CS) son la glía de sistema nervio periférico. El diseño de prótesis nerviosas se ha centrado en la producción de CS autólogas cultivadas a partir de nervios ciáticos (NC) y de ganglios de la raíz dorsal (GRD). Muy poca literatura reporta cultivo de células perineurales (CP) y fibroblastos endoneurales (FE), y no son consideradas como elementos a incluir en una prótesis. En este trabajo, se describe la importancia de la microdisección del nervio ciático y de los GRD para obtener cultivos de CS, FE y CP con 98%±2 de purificación. Las CS crecen sobre diferentes soportes, con y sin mitógenos. Se obtuvo un porcentaje de CS elevado cuando se elimina el epineuro y perineuro de los NC 90%±3 y la cápsula de los GRD 94%±3 antes de la disociación enzimática, comparado a 70%±4,2 sin microdisección u 80%±3,5 sin epineuro. Los FE se adhieren preferencialmente en las primeras 24 h y 20% de suero favorece su crecimiento. En el primer sub-cultivo, son 99% CS o FE, siendo confluentes a los 6 y 8 días respectivamente. Las CP o de la cápsula de GRD no se disocian y no crecen en sub-cultivos, únicamente crecen a partir de explantes de perineuro; no forman monocapa sino una "lámina" de múltiples capas celulares. En conclusión, la microdisección del GRD y del NC y su disociación son indispensables para obtener en pocos días CS, FE y CP de animales adultos en cultivos altamente purificados.

The Schwann cells (SC) are glial of system peripheral nerve. The nervous prostheses are related to the production of autologous SC obtained from the peripheral nervous and from the dorsal root ganglia (DRG). There is a small amount of literature that reports perineural cells (PC) and endoneural fibroblast (EF) cultures as elements to take account of prostheses. In this work, the micro dissection importance is described in the sciatic nerve (SN) and in the DRG to achieve SC, EF and PC culture with a purity of 98%. The SC grows up on different supports with and without mitogens. An elevated percentage of SC was obtained when the epineurium and the perineurium were removed in the SN (90%±3) and in the GRD (94%±3) before the enzymatic dissociation compared to seventy percentage when the micro dissection was omitted or eighty percentage without the epineurium micro dissection. The EF was adhered in the first twenty four hours and the twenty percentage of serum improved their growth. In the first passage, there is 99 percentage SC or EF, and they get the confluence in the six and eight day, respectively. The PC or the cells of the DRG don´t have neither a good dissociation, nor a growth in subcultures, they only grow from the perineurium explants that forms a lamina of several cellular layers more than a monolayer. In conclusion, the DRG and SN micro dissection and dissociated are indispensable to acquire in few days SC, EF and PC cultures with a high purity from adult animals.

Análisis de los medios de transporte y cultivo de piel para auto o aloinjerto humano / Analysis of transport and culture skin medium for human auto or aloinjert

Las condiciones óptimas para la conservación y transporte de piel humana destinada al cultivo de queratinocitos para autotransplante son el motivo de este estudio. Se simularon condiciones de transporte, colocando muestras de piel humana tanto joven (prepucios de niños, n=305) como maduras (piel de mastectomías, n=616) en cinco diferentes medios: Medio de crecimiento de queratinocitos (KGM, n=276), Medio de crecimiento 3T3 (3T3GM, n=220), Solución Ringer (SR, n=174), Solución Salina Isotónica (SS, n=128) y Solución Buffer Fosfato (PBS, n=123), a 21ºC y 4ºC respectivamente, por 1,24 y 72 horas, al cabo de las cuales se prepararon cultivos de queratinocitos a partir de dichas muestras. Se determinó tanto la Eficacia Formadora de Colonias (EFC) como el porcentaje de células muertas. El medio óptimo para el transporte y/o preservación de piel humana es el KGM, a 4ºC y hasta por 72 horas expresado por los valores significativamente más altos de EFC=0,67 por ciento (p<0,001) al compararlo a los restantes medios. PBS y SS mostraron la EFC más baja (0,28 y 0,26 por ciento respectivamente, p<0,001). La prueba de viabilidad celular con azul tripán, luego de la preservación de la piel, no se correlacionó con los valores de la EFC (r=-0,05; p>0,05), siendo éste último el método más confiable y adecuado para evaluar el potencial formador de colonias de las células provenientes de las muestras de piel. Los queratinocitos provenientes de piel de donantes jóvenes (prepucio de niños) tienen un potencial mayor de formar colonias (EFC=0,70) que la piel de adultos (de mastectomía) (EFC=0,38; p<0,001). Estos resultados caracterizan las condiciones óptimas de un potencial sistema de envío de muestras de piel destinadas a la preparación de injertos de queratinocitos para pacientes hospitalizados a distancia del laboratorio de cultivo

Tratamiento de úlceras crónicas en miembros inferiores con autoinjertos de queratinocitos cultivados / Treatment of chronic ulcer in leg with keratinocytes cultured grafts

El cultivo de queratinocitos humanos y su preparación como injertos abre un horizonte muy amplio para el tratamiento de heridas de la más diversa etiología. En este estudio se presentan los resultados del tratamiento de pacientes portadores