Biopelícula en Staphylococcus aureus sensibles y resistentes a meticilina / Biofilm in methicillin sensitive and resistant Staphylococcus aureus

La formación de biopelícula es una estrategia de vida para la mayoría de las bacterias, ya que aumenta las posibilidades de transferencia de material genético y la resistencia a antibióticos, participa en la comunicación celular y ofrece protección en condiciones adversas y variables del medio ambiente; lo que contribuye a una colonización exitosa del hospedador. Esta investigación se propuso determinar la capacidad de producir biopelícula en aislamientos de S. aureus. Se estudiaron 30 aislados (13 sensibles y 17 resistentes a meticilina) mediante ensayo sobre microplacas de cultivos celulares. Todas las cepas mostraron patrones de adherencia; 24 (80%), 4 (13%) y 2 (7%) exhibieron grados de adherencia moderado, débil y fuerte, respectivamente. 77% de las cepas sensibles resultaron moderadamente productoras, 13% débiles y 7% fuertes productoras de biopelícula. Las cepas resistentes presentaron mayormente moderada producción (82%) y el 18% débil producción. No hubo asociación entre el grado de adherencia y la susceptibilidad a la meticilina. La alta tasa de producción de biopelícula en cepas clínicas de S. aureus, sensibles y resistentes a meticilina, sugiere el peligro potencial que representan dichas cepas dentro y fuera de ambientes hospitalarios, dada la importancia que juegan las biopelículas en el desarrollo de infecciones crónicas.

The formation of biofilm is a life strategy for most bacteria, since it increases the possibilities of transfer of genetic material and resistance to antibiotics, participates in cellular communication and offers protection in adverse and variable environmental conditions; what contribute to a successful colonization of the host. This research aimed to determine the capacity to produce biofilm in isolates of S. aureus. Thirty isolates (13 sensitive and 17 resistants to methicillin) were studied by assay on cell culture microplates. All strains showed adherence patterns; 24 (80%), 4 (13%) and 2 (7%) exhibited degrees of moderate, weak and strong adhesion, respectively. 77% of sensitive strains were moderately productive, 13% weak and 7% strong producers of biofilm. The resistant strains presented a moderate production (82%) and 18% a weak production. There was no association between the degree of adherence and the susceptibility to methicillin. The high rate of biofilm production in clinical strains of S. aureus, sensitive and resistant to methicillin, suggests the potential danger posed by such strains inside and outside hospital environments, given the importance that biofilms play in the development of chronic infections.

Calidad microbiológica de ensaladas crudas que se expenden en puestos ambulantes de comida rápida de la ciudad de Maracaibo-Venezuela / Microbiological quality of raw salads that are sold at roadside food stalls quick Maracaibo-Venezuela

Las ensaladas crudas juegan un papel importante en las enfermedades transmitidas por alimentos, sobre todo si durante su procesamiento no se cumplen con las condiciones higiénicas necesarias para impedir su contaminación. El objetivo es determinar la calidad microbiológica de ensaladas crudas que se expenden en puestos ambulantes de comida rápida de Maracaibo, Venezuela. 15 establecimientos fueron estudiados mediante el doble muestreo con intervalo de un mes. Para el estudio microbiológico, las muestras fueron preparadas según la Comisión Venezolana de Normas Industriales (COVENIN N°1126-89). Del homogenizado, se determinó el contaje Aerobios Mesόfilos, Salmonella, Coliformes Totales, Fecales y Escherichia coli. En relación a Aerobios Mesofilos, de las 30 muestras, 2 (6,67%) mostraron contajes de 225.000 UFC/g; y 28 (93, 33%) con recuentos incontables. Para Coliformes Totales, 28 (93.3%) mostraron contajes que oscilaron entre 350 x 107 hasta 730 x 107 y en 2 (6.6%) el contaje promedio fue 197 UFC/g. En el 93,3% (28) de las muestras se observó recuentos elevados para Escherichia coli, y en 2 (6,6%) fue menor a 1 UFC/g. Salmonella se detectó en 4 (13,3%) muestras. Las ensaladas estudiadas no son aptas para el consumo humano, por no cumplir con los requerimientos mínimos de inocuidad, según las normativas establecidas.

Raw salads play an important role in foodborne, especially during processing is not necessary meet to prevent its contamination hygienic conditions. The objective is to determine the microbiological quality of raw salads that are sold in fast food stalls Maracaibo, Venezuela. 15 establishments were studied by double sampling interval of one month. For microbiological study, samples were prepared according to the Venezuelan Industrial Standards Commission (COVENIN No. 1126-1189). Homogenate, counting mesophilic aerobics, Salmonella, Total and Fecal Coliforms and Escherichia coli by the method most probable number and rehydratable plate with dry films was determined. Regarding mesophilic aerobics, of the 30 samples, 2 (6.67%) showed counts of 225,000 CFU/g; and 28 (93, 33%) had countless counts. For Total Coliforms, 28 (93.3%) showed counts ranging from 350 to 730 x107 x 107 and 2 (6.6%) the average count was 197 CFU/g. Escherichia coli in 93.3% (28) of the samples was observed high counts, and in 2 (6.6%) counting was less than 1 CFU/g. Salmonella was detected in 4 (13.3%) samples. The salads studied are unfit for human consumption, not to meet the minimum safety requirements, according to established regulations.

Capacidad de formación de biopelícula y limo en Staphylococcus que causan mastitis subclínica bovina en el estado Zulia-Venezuela / Biofilm formation and slime producing ability in Staphylococci causing subclinic bovine mastitis in the Zulia state-Venezuela

Un total de 79 cepas de S. aureus y 47 cepas de Staphylococcus coagulasa negativa (SCN) aislados de muestras de leche de vaca con mastitis subclínica fueron evaluadas para establecer su propiedad para formar biopelícula como uno de los factores de virulencia más importantes. Usando el método de Rojo Congo Agar, 80% de las cepas de S. aureus fueron productores de limo, mientras que en las cepas de SCN el porcentaje fue de 32%. Por el método de microplaca, 55%, 17% y 28% de los aislamientos de S. aureus fueron fuerte, moderadas y débiles productoras de biopelícula, mientras en los SCN el porcentaje fue 43%, 17% y 40%, respectivamente. Se realizó un ensayo de Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) a todos los aislamientos con la finalidad de identificar el gen A de adhesión intracelular (icaA). En las cepas de S. aureus el gen icaA estuvo presente en el 65% de los aislamientos, y en los SCN en el 11%. La mayoría de las cepas de S. aureus caracterizados en el estudio fueron formadores de biopelícula, lo cual sugiere que está tiene un importante papel en la virulencia de S. aureus aislados de infecciones intramamarias en bovinos del estado Zulia.

A total of 79 S. aureus strains and 47 coagulase negative Staphylococcus (CNS) isolates from cow milk suffering subclinical mastitis were investigated for their ability to form biofilm as one of the most important virulence factors. Using Congo Red Agar method, 80% of S. aureus strains were slime producers, while in CNS was 32%. By microtiter plate method, 55%, 17%, and 28% of S. aureus isolates were strong, moderate, and weak biofilm producers, respectively, while in CNS the percentages were 43%, 17%, and 40%, respectively. All isolates were screened by Polymerase chain reaction (PCR) for amplification of intercellular adhesion gene A (icaA). In S. aureus isolates the icaA gene was present in 65 % while in CNS was 11%. The majority of S. aureus characterized in this study formed biofilm, which suggests that biofilm formation has an important role in the virulence of S. aureus isolated from bovine intramammary infections in Zulia state.

Enterotoxinas, biofilm y resistencia a los agentes antimicrobianos de cepas de Staphylococcus coagulasa negativa aisladas de hemocultivos / Enterotoxins, Biofilm and Resistance to Antimicrobial Agents of Coagulase-Negative Staphylococcus Strains Isolated from Blood Cultures

Staphylococcus coagulasa negativa (SCN) es el microorganismo que se aísla con mayor frecuencia en los hemocultivos. Sin embargo, es poco el conocimiento que se tiene sobre los factores de virulencia producidos por SCN que contribuyen a la patogénesis de las infecciones causadas por estos microorganismos. El presente estudio se realizó para determinar la producción de enterotoxinas estafilocócicas, la producción de biofilm y la resistencia a los agentes antimicrobianos. Con este propósito, un total 48 cepas de SCN aisladas de hemocultivo en el Hospital Universitario de Maracaibo, Zulia, Venezuela fueron estudiadas. Las enterotoxinas estafilocócicas fueron detectadas por aglutinación en látex pasiva reversa. La producción de biofilm fue evaluada por un ensayo cuantitativo usando microplacas. La susceptibilidad contra los agentes antimicrobianos fue probada por el método de difusión del disco. Seis cepas (12,5%) aisladas de estafilococos fueron enterotoxigénicas. De estas, 3 fueron positivas para enterotoxina estafilocócica D (EED), 2 para enterotoxina estafilocócica A (EEA) y 1 de los aislamientos fueron positivos para enterotoxina estafilocócica B (EEB), enterotoxina estafilocócica C (EEC) y EED. Veintiuno de los aislamientos (44%) fueron productores de biofilm. Alta frecuencia de resistencia fue observada contra oxacilina (90%), gentamicina (83%) y eritromicina (67%). Ningún aislamiento mostró resistencia a vancomicina. Teniendo en cuenta que la importancia etiológica de SCN a menudo ha sido ignorada, la presente investigación confirmó que estos microorganismos no deben ser ignorados o clasificados como contaminantes.

Coagulase-negative staphylococci (CNS) have been identified as the etiological agent in various infections and are currently the microorganisms most frequently isolated in blood cultures. However, little is known about the virulence factors produced by CNS that contribute to the pathogenesis of infections caused by these microorganisms. This study was designed to determine the production of staphylococcal enterotoxins, biofilm production and resistance to antimicrobial agents. For this purpose, a total of 48CNS strains isolated from blood cultures at the University Hospital in Maracaibo, Zulia, Venezuela, were studied. Staphylococcal enterotoxins were detected by reversed passive latex agglutination. Biofilm production was assessed in a quantitative assay using a microtiter-plate. Susceptibility against antimicrobial agents was tested by the disk diffusion method. Six strains of staphylococci isolates (12.5%) were found to be enterotoxigenic. Of these, 3 strains were positive for staphylococcal enterotoxin D (SED), 2 for SEA and 1 of the isolates was positive for SEB, SEC and SED.Twenty-one isolates (44%) were found to be biofilm producers. A high frequency of resistance was observed with oxacillin (90%), gentamicin (83%) and erythromycin (67%). None of the isolates showed resistance to vancomycin. Taking into consideration that the etiological importance of CNS has often been neglected, the present investigation confirmed that these microorganisms should not be ignored or classified as mere contaminants.

Patógenos contagiosos y ambientales aislados de cuartos mamarios con mastitis subclínica de alto riesgo en tres fincas del estado Zulia / Contagious and Environmental Pathogens Isolated from Mammary Quarters With Subclinical Mastitis of Risk High in Three Farms of Zulia State

La mastitis es la enfermedad más común y costosa del ganado lechero en la mayor parte del mundo. En el presente estudio se investigó la frecuencia de aislamientos de patógenos contagiosos y ambientales a partir de ganado vacuno con mastitis subclínica, en tres fincas del estado Zulia. Se determinó la asociación de los grupos de patógenos con los diferentes sistemas de ordeño empleados, así como el probable efecto de las estaciones climáticas sobre la frecuencia de aislamiento de microorganismos. A nivel de campo se practicó la prueba de California para mastitis (CMT) a 2.416 cuartos mamarios. A los 758 cuartos que fueron clasificados de alto riesgo por el CMT se les realizó cultivo bacteriológico. Los principales patógenos aislados fueron Streptococcus agalactiae (26%), Staphylococcus coagulasa negativa (23%), Streptococcus spp. (20%) y S. aureus (17%). El 73% de los patógenos aislados fueron contagiosos. El carácter contagioso de la infección intramamaria se observó en las tres fincas, la cual se presentó en un 75; 86 y 68% en las fincas A, B y C, respectivamente. No se observó un patrón estacional definido para la presencia de patógenos contagiosos y ambientales.

Mastitis is the commonest and most expensive disease in dairy cattle in most countries. In the present study it was investigated the frequency of isolates of contagious and environmental pathogens of subclinical mastitis on three farms of Zulia State. Was determined association by groups of pathogens with different milking systems used in each farm and the likely effect of the seasons. At the field level, California Mastitis Test (CMT) was performed to 2,416 mammary quarters. A 758 quarters that were classified as risks high by the CMT, also were cultured bacteriologically. In general, the most frequently isolated bacteria were S. agalactiae (26%), coagulase-negative Staphylococcus (23%), Streptococcus spp. (20%) and S. aureus (17%). Seventy three percent of isolated pathogens were contagious. The contagious nature of intramammary infection was observed in the three farms with a frequency of 75, 86 and 68% in farms A, B and C, respectively. The results did not allow inferring a clear seasonal pattern for the presence of contagious and environmental pathogens.

Comparación de la calidad microbiógica de hamburgesa de pollo elaborada en forma artesanal e industrial / Comparison of microbiological quality of chicken hamburger elaborated artisan and industrially form

Se evaluó la calidad microbiológica de hamburguesa de pollo (HP) elaborada en forma artesanal e industrial mediante la determinación de sus recuentos de aerobios mesófilos (AM), coliformes totales (CT), coliformes fecales (CF), Escherichia coli (EC) y presencia de Salmonella, siguiendo metodologías de la Comisión Venezolana de Normas Industriales (COVENIN). La HP artesanal (marca A), provenía de un supermercado con permiso sanitario para su elaboración y venta en el mismo establecimiento. La HP industrial (marca B), fue obtenida a nivel del productor. Se analizaron 60 muestras, 30 por marca, recolectadas en 6 muestreos, efectuados cada 15 días durante tres meses, obteniéndose en cada uno 5 muestras por marca. Los resultados fueron analizados con análisis de varianza en bloque y comparación múltiple de medias. Los recuentos medios fueron: marca A: 7,33 log10 ufc/g AM, 5,17 log10 NMP/g CT, 3,62 log10 NMP/g CF y 2,40 log10 NMP/g EC, marca B: 1,55 log10 ufc/g AM, 2,27 log10 NMP/g CT, 1,66 log10 NMP/g CF, 1,25 log10 NMP/g EC. Los recuentos fueron significativamente (P<0,05) más elevados en la marca A. De acuerdo a los límites establecidos por COVENIN, el 56,6% de las muestras fueron de calidad inaceptable. Se aisló Salmonella enterica subsp enterica serovar gaminara en la marca A, en el primer muestreo. Se concluye que la HP elaborada artesanalmente representa un riesgo de salud pública por su deficiente calidad microbiológica.

The microbiological quality of hamburger of chicken (HP) elaborated in artisan and industrial form was evaluated by means of the determination of mesophiles aerobics (AM), total coliforms (CT), fecal coliforms (CF) Escherichia coli (EC) and Salmonella’s presence, following methodologies of the Venezuelan Commission of Industrial Norms (COVENIN). The artisan HP (brand A), was obtained from supermarket with sanitary permission for its production and sale in the same establishment. The industrial HP (brand B), was obtained at level of the producer. Sixty samples, 30 by brand, collected in 6 samplings, were carried out every 15 days for three months, being obtained in each one it 5 show for mark. The results were analyzed with analysis of variance in block and multiple comparison of means. The means counts were. Brand A: 7.33 log10cfu/g AM, 5.17 log10 NMP/g CT, 3.62 log10 NMP/g CF and 2.40 log10 NMP/g EC; brand B: 1.55 log10 cfu/g AM, 2.27 log10 NMP/g CT, 1.66 log10NMP/g CF, 1.25 log10 NMP/g EC. The counts were significantly (P<0.05) higher in the brand A. In agreement to the limits established by COVENIN, the 56.6% of the samples was of unacceptable quality. Salmonella enterica subsp enterica serovar gaminara was found in brand A, in the first sampling. That result of this study indicates that the elaborated HP artisan represents a health hazard by its deficient microbiological quality.

Efecto del tiempo y temperatura del almacenamiento sobre la calidad microbiológica de carne de hamburguesa / Effect of time and storage temperature on microbiological quality of hamburguer meat

Las carnes de hamburguesas son suceptibles al ataque microbiano debido a diversos factores (potencial redox, pH, aw, disponibilidad de nutrientes, procesamiento), siendo necesario considerar las condiciones de almacenamiento. Esta investigación tuvo como objeto evaluar el efecto de tres tiempos y tres temperaturas de almacenamiento sobre la calidad microbiológica de carne de hamburguesa preparada en tres establecimientos comerciales. Se analizaron 81 muestras (27 de cada establecimiento comercial) almacenadas a temperaturas de -15°C (temperatura de los establecimientos de venta), 5°C (temperatura del producto recién elaborado) y 15°C (temperatura de los expendios de comida ambulante) a 0, 48 y 96 horas considerando el tiempo que transcurre desde la elaboración de estas carnes hasta su consumo. Se realizaron recuentos de aerobios mesófilos según ICMSF, Staphylococcus aureus, coliformes totales, coliformes fecales y Escherichia coli por COVENIN; además se investigó la presencia de Salmonella por COVENIN y RAMBACH. Se observó diferencias significativas (P<0,05) en los parámetros microbiológicos por efecto del establecimiento comercial. Los microorganismos estudiados mostraron una tendencia a la disminución por efecto del tiempo. Las temperaturas de almacenamiento no afectaron significativamente los parámetros microbiológicos investigados, sin embargo se encontró que la temperatura de los expendios de comida ambulante (15°C) puede favorecer el crecimientode Salmonella. La carne preparada en dos establecimientos comerciales excedió los límites máximos establecidos por organismos internacionales para aerobios mesófilos. Se detectó variabilidad por efecto del muestreo, lo que evidencia una falta de control en el procesamiento de este alimento.

Agentes bacterianos y contaje de células somáticas en leche de cuartos de bovinos mestizos doble propósito ordeñados en forma manual o mecánica en cuatro fincas lecheras del Estado Zulia Venezuela / Bacterial agents and somatic cell counts in milk from dual purpose bovines milked by hand or by mechanical procedures in four dairy from Zulia State Venezuela

Se identificaron agentes bacterianos y se determinó contaje de células somáticas (CSS) en leche de 160 cuartos de 40 bovinos mestizos doble propósito, 20 ordeñados en forma manual (AOM) y 20 en forma mecánica (AOME), de 4 fincas del estado Zulia, Venezuela. Las bacterias se identificaron por métodos bioquímicos convencionles y el CCS se determinó por el método rápido SomaLite. Se encontró que 68,83 por ciento de los cuartos presentaron al menos un patógeno mastitogénico: 54,66 por ciento en los AOM y 82,27 por ciento en los AOME. Se identificaron 139 cepas, 39 por ciento aisladas de AOM y 61 por ciento de AOME. Los principales géneros en AOM fueron Staphylococcus spp. (65 por ciento) y Corynebacterium spp (24 por ciento), mientras que para AOME fueron Staphylococcus spp. (67 por ciento) y Streptococcus spp. (20 por ciento). Las principales especies aisladas de AOM fueron C. bovis, St intermedius, St. caseolyticus y St. simulans y para AOME fueron St. intermedius, S. agalactiae, St. aureus y St. hominis. El CCS de AOME (6,54 Log10 CCS) fue más elevado que para AOM (5,77 Log10 CCS), esta tendencia se mantuvo para todos los géneros bacterianos. El CCS más elevado de acuerdo a género correspondió a Streptococcus spp. y Bacillus spp. Para AOM se encontraron los más elevados CCS para las muestras infectadas con B. polymyxa, S, bovis, St. capitis, St. piscifermentas y St.aureus. Para AOME correspondieron a B. marcerans, B. polymixa, S. agalacitiae, St. simulans y St. ureus. Se concluye que en la leche obtenida de animales ordeñados mecánicamente predomina la presencia de patógenos mayores que provocan inflamación de la glándula mamaría reflejada en un elevado contaje de células somáticas

Aspectos clínicos y microbiológicos en pacientes diabéticos con infecciones en miembros inferiores / Clinical and microbiological aspects in diabetic patients with infections in inferior limbs

Entre octubre de 2001 y Febrero de 2002, se estudiaron 45 pacientes diabéticos con infección en los miembros inferiores, para determinar los aspectos clínicos y microbiológicos presentes. Las características clínicas más relevantes fueron: el 86,67 por ciento eran diabéticos tipo 2. Los valores promedios para la edad, duración de la diabetes, niveles de glucosa sanguínea e índice de masa corporal fueron: 57 ± 12 años, 12,55 años, 274 mg/dl y 21,73 ± 4,24 kg/talla², respectivamente. La mayoría de las lesiones se presentaron en los dedos (45 por ciento), el 48 por ciento fueron úlceras profundas. Se aislaron 124 microorganismos; el 64 por ciento eran bacilos Gram negativos con predominio de Pseudomonas aeruginosa y klebsiella pneumoniae, 31 por ciento fueron cocos Gram positivos, 4 por ciento bacilos Gram positivos (Corynebacterium spp), se aisló un solo coco Gram positivo anaerobio estricto (1 por ciento). El 84 por ciento de las muestras tuvieron aislamiento polimicrobiano

Aislamiento de bacterias gram positivas de leche crudas con residuos de antimicrobianos / Isolation of gram-positive bacteria from raw milk with antimicrobial residues

Se recolectaron 200 muestras de leche cruda a nivel de cántaras en receptorías ubicadas en tres zonas de alta producción lechera del estado Zulia-Venezuela. Se aplicaron las pruebas del cloruro de trifenil tetrazolio (CTT) y el disco ensayo para detectar presencia de antimicrobianos. Las muestras positivas se sembraron en caldo soya tripticasa, agar sangre humana y agar manitol salado para realizar el aislamiento de bacterias Gram positivas. La identificación de especies se realizó a través de pruebas bioquímicas. Se encontró que 45 muestras (22,5 por ciento) de leche analizadas contenían antimicrobianos, obteniéndose crecimiento bacteriano en 35 de ellas. Se aislaron 100 cepas, que se distribuyeron en los siguientes géneros: 44 Staphylococcus, 19 Streptococcus, 17 Enterococcus, 9 Bacillus, 4 Micrococcus, 4 Corynebacterium y 3 Lactococcus. La especie más frecuentemente aislada fue el S. aureus, principal agente productor de mastitis bovina en el estado Zulia, y microorganismo frecuentemente asociado en el país con intoxicaciones alimentarias vehiculizadas por queso elaborado con leche cruda. Se recomienda aplicar programas de control para el uso de antibióticos