Tetanus toxoid: 1. purification in 50 kD molecular weight cut-off membrane

The tetanus anatoxin (M.W.=150,000 dALTONS) is the fundamental component for Tetanus Toxoid (TT) combined vaccines production and must follow the parameters established by World Health Organization (WHO). Among other qualifications the purity degree must be equal or greater than 1,000 Lf/mg PN and the residual formaldehyde must be at maximum level of 0,02 per cent. The Tangential Flow Filtration technique with 50,000 Nominal Molecular Weight Limit (NMWL) membranes and gel filtration in Sephadex G-50 were associated to purify 18 consecutive lots of tetanus anatoxin

Diphtheria anatoxin industrial purification by gel filtration

Diphtheria toxoid is prepared from the toxin produced by fermentative process, of the Park-Williams N§8 strain of Corynebacterium diphteriae grown on F-20 medium. The toxin separeted from the organisms is detoxified and purified. Diphtheria toxoid is the immunizing antigen protecting against the adverse effects of infection by diphtheria organisms and rarely is used alone. It is used in associated vaccines with tetanus toxoid and pertussis vacine. This paper describes the separation of diphtheria anatoxin proteins on Sephadex G-50, Sephacryl S-100 HR and Superdex 75 prep grade

Otimizaçäo do processo de purificaçäo industrial de toxóide tetânico por gel filtraçäo / Improvement in the industrial purification of tetanus toxoid by gel filtration

A metodologia industrial para obtençäo de Toxóide Tetânico(T.T.) atual, consiste na pré-precipitaçäo pelo (NH4)2SO4 seguida de gel filtraçäo em Sephadex G-50, com o qual obtém-se grau médio de pureza de 2.300 Lf/mgNP, sendo que o mínimo exigido pela O.M.S. é 1.000Lf/mgNP. Visando basicamente a diminuiçäo do tempo empregado no processo de purificaçäo do T.T., utilizamos resinas cromatográficas de 2§ e 3§ geraçäo, o Sephacryl S-100HR e o Superdex 75 prepgrade, respectivamente, que possibilitaram a eliminaçäo da etapa de pré-precipitaçäo pelo (NH4)2SO4 obtendo-se resultados com grau de pureza ao redor de 3.000Lf/mgNP. A atividade imunogênica destes produtos quando absorvidos pelo Al (OH)3 em concentraçäo de 15Lf/ml foi de 4,5UI/ml em cobaios. A O.M.S. recomenda que o T.T. induza a formaçäo de no mínimo 2UI/ml nestes animais. O rendimento do processo de purificaçäo foi de 88,46//, que é similar ao obtido no processo atual. A metodologia introduzida permitiu a diminuiçäo do tempo empregado neste processamento assim como a possibilidade de trabalhar-se com purificaçäo em sistema fechado (coluna cromatográfica)

Toxina tetânica: produçäo e purificaçäo em escala industrial / Tetanus toxin: production and purification in large scale

A obtençäo de toxina tetânica purificada em grandes volumes é um passo fundamental para a produçäo de Toxóide Tetânico. A utilizaçäo de vapor para a esterilizaçäo do meio de cultura para a produçäo desta toxina apresentava títulos baixos de toxina tetânica. O emprego da filtraçäo convencional teve como consequência índices insatisfatórios de pureza (Lf/mgNP) e de rendimento (porcentagem) do processo. Com o objetivo de encontrar soluçöes para estas etapas do processo produtivo, foi utilizada a esterilizaçäo por cartuchos para o meio de cultura e a filtraçäo tangencial através de um sistema Prostak, associado à ultrafiltraçäo molecular em 30Kd para a toxina tetânica. A nova metodologia trouxe aumentos significativos em pureza (Lf/mgNP) e em rendimento (porcentagem). A tecnologia empregada e a comparaçäo dos resultados obtidos nos diferentes processos säo apresentadas neste trabalho

Purificaçäo industrial do toxóide tetânico por gel filtraçäo / Industrial purification of tetanus toxoids by gel filtration

Com o fracionamento pelo sulfato de amônio ou com a precipitaçäo alcoólica, säo obtidos toxóides tetânicos com pureza ao redor de 500 Lf/mg N.P. incompatíveis com as exigências da OMS, de 1000 a 1200 Lf/mg N.P. Foram descritas técnicas eficazes com a utilizaçäo da gel filtraçäo em Sephadex G200, G100 e G75 que, no entanto, pela longa duraçäo do processo, dificultam a produçäo em escala industrial. Introduzimos , assim, uma metodologia baseada na combinaçäo da pré-precipitaçäo pelo sulfato de amônio com a gel filtraçäo em Sephadex G50 com a qual obtivemos toxóides tetânicos com grau médio reprodutivo de pureza ao redor de 2.312,75 Lf/mg N.P. e resposta imunogênica satisfatória

Novo método de dosagem de soros antipeçonhentos em camundongos lactentes: I. Dosagem do soro anticrotálico. / New method for dosage of antivenoms sera in suckling mice: I. Anti-crotalid sera dosage

A atividade biológica dos soros antipeçonhentos pode ser determinada "in vivo" em pombos, coelhos, cobaios e camundongos adultos, näo existindo, entretanto, nenhum método que possa ser recomendado internacionalmente. Estudou-se comparativamente aos métodos tradicionais de dosagem de soros em pombos e camundongos adultos, a validade do uso de camundongos lactentes de 6 a 7 dias, pesando 4 a 5g, inoculados pela via subcutânea. Inicialmente foi determinada a toxidez do veneno de Crotalus durissus terrificus através do estudo da sintomatologia do envenenamento e da atividade letal. O estudo comparativo dos três métodos forneceu maior concordância de resultados em DE100 entre as dosagens realizadas com camundongos lactentes e adultos. A DE100 e DL50 determinadas em camundongos lactentes forneceu resultados mais constantes que os dos métodos de camundongos adultos e pombos. O uso deste novo método permite eliminar a dificuldade de obtençäo do atual animal de prova; a utilizaçäo de um maior número de animais por ponto de avaliaçäo biológica, possibilitando uma maior precisäo e conseguindo-se uma uniformidade nas características exigidas neste tipo de dosagem como peso, idade e linhagem, visando a reproduçäo sistemática dos resultados