Sperm-binding to the perivitelline membrane of chicken egg yolk as a functional test for sperm evaluation in dogs / Teste de ligação espermática à membrana perivitelínica da gema de ovo de galinha como avaliação funcional do sêmen de cães

During fertilization, spermatozoa interact with the zona pellucida (ZP) through the binding between the acrosome and proteins 2 and 3 (ZP2 and ZP3). The perivitelline membrane of chicken egg yolk is homologous to the mammalian ZP3, which allows the binding of sperm of several species. The aim of this study was to standardize and evaluate the efficiency of sperm-binding to the perivitelline membrane of chicken eggs as a functional method for canine semen evaluation. For this purpose, nine post-thaw sperm samples were used, which were divided into two aliquots: the first was kept in water bath at 37ºC (live sample) and the second was submitted to cold shock to induce cellular damage (dead sample). The two aliquots were mixed on five proportions, corresponding to 0%, 25%, 50%, 75%, and 100% of viable cells, and the binding test was performed by analyzing the number of spermatozoa bonded to the perivitelline membrane by means of computerized assessment of sperm motility (CASA) or conventional microscopy. Additionally, samples were submitted to sperm motility analysis, evaluation of plasmatic and acrosomal membrane integrity, and sperm mitochondrial activity. The sperm-binding test to the perivitelline membrane of chicken egg yolk was considered a feasible sperm analysis test for both fertilizing capacity and overall sperm attributes evaluation, mainly when the analysis is performed by a conventional microscope, which expands its practicality to the majority of canine reproduction laboratories.(AU)

Durante a fecundação, os espermatozoides interagem com a zona pelúcida (ZP) por meio da ligação entre o acrossomo e as proteínas 2 e 3 (ZP2 e ZP3). A membrana perivitelínica da gema de ovo de galinhas é homóloga à ZP3 de mamíferos, possibilitando a ligação espermática de diversas espécies. Este trabalho padronizou e avaliou a eficiência do teste de ligação espermática à membrana perivitelínica da gema de ovo de galinhas como avaliação funcional do sêmen de cães. Para tal, foram utilizadas nove amostras seminais previamente criopreservadas. Cada amostra foi dividida em duas alíquotas: a primeira foi mantida em banho-maria à 37ºC (vivos) e a segunda submetida a choque térmico com o intuito de induzir dano celular (mortos). As duas alíquotas foram misturadas, correspondendo a 0, 25, 50, 75 e 100% de células viáveis. As amostras foram avaliadas quanto ao número de espermatozoides ligados à membrana perivitelínica por meio da análise computadorizada da motilidade (CASA) ou microscopia convencional. Ademais, as amostras foram avaliadas quanto à motilidade espermática, integridade das membranas acrossomal e plasmática e atividade mitocondrial espermática. O teste de ligação espermática à membrana perivitelínica de ovos de galinha foi considerado um teste de análise seminal exequível tanto para avaliar a capacidade fecundante dos espermatozoides como atributos seminais gerais, especialmente quando realizado em microscopia convencional, expandindo sua praticidade para a maioria dos laboratórios de análise de sêmen canino.(AU)

Estrogen and oxytocin receptors in the canine corpus luteum during pregnancy and parturition / Receptores de estrógeno e ocitocina no corpo lúteo durante a gestação e parto em cadelas

The expression of genes encoding the receptors for estrogen (ERαmRNA) and oxytocin (OTRmRNA) was studied in the corpus luteum during pregnancy and parturition in dogs. Real-time PCR was performed to quantify the levels of ERαmRNA and OTRmRNA in the corpus luteum of bitches during Early (up to 20 days of gestation), Mid (20 to 40 days) and Late Pregnancy (40 to 60 days), and Parturition (first stage of labor). The corpus luteum expressed mRNA for OTR, however ERα mRNA was not detected. There was a reduction of OTR mRNA expression in the corpus luteum from gestational Day 20 onward, which suggests an important role of OTR mRNA in the mechanism of pregnancy recognition in dogs. We concluded that the expression of OTR mRNA in canine corpus luteum vary over time, which support the idea that the sensitivity and response to hormone therapy can vary along the course of pregnancy and labor. Moreover, the canine CL lacks ERα mRNA expression during pregnancy.

A expressão dos genes que codificam os receptores de estrógeno (REα RNAm) e ocitocina (ROT RNAm) foi estudado no corpo lúteo de cadelas durante a gestação e parto. A técnica de PCR em tempo real foi realizada para quantificar a expressão do REα RNAm e ROT RNAm no corpo lúteo de cadelas durante o início (até 20 dias de gestação), meio (20 a 40 dias) e final da gestação (40 a 60 dias), e durante o parto (pródomos do parto). O corpo lúteo apresentou expressão do RNAm para o ROT, entretanto o RNAm para o REα não foi detectado. Houve redução na expressão do ROT RNAm no corpo lúteo a partir de 20 dias da gestação, indicando papel no mecanismo de reconhecimento gestacional em cadelas. Em conclusão, a expressão do ROT RNAm no corpo lúteo de cadelas apresentou variação ao longo do tempo de gestação, sugerindo que a resposta e sensibilidade à terapia hormonal pode variar conforme o momento da gestação e parto. Ademais, o corpo lúteo canino não expressa REα RNAm durante a gestação.

Influenza viruses in adult dogs raised in rural and urban areas in the state of São Paulo, Brazil / Incidência do vírus influenza em cães adultos criados em áreas rural e urbana do estado de São Paulo, Brasil

In 1970, searching for the interspecies transmission of influenza viruses led to the first study on influenza viruses in domestic animals. Birds and mammals, including human beings, are their natural hosts; however, other animals may also play a role in the virus epidemiology. The objective was to investigate the incidence of influenza viruses in adult dogs raised in rural (9, 19.56%) and urban (37, 80.43%) areas in the state of São Paulo, Brazil. Dog serum samples were examined for antibodies to influenza viruses by the hemagglutination inhibition (HI) test using the corresponding antigens from the circulating viruses in Brazil. Dogs from rural areas presented antibodies to influenza A H3N2, and influenza A H7N7 and H3N8. In rural areas, dog sera displayed mean titers as 94.37, 227.88, 168.14, 189.62 HIU/25 µL for subtypes H1N1, H3N2, H7N7, H3N8, respectively. About 84% and 92% of dogs from urban areas exhibited antibodies to human influenza A H1N1 and H3N2, respectively, with statistical difference at p < 0.05 between the mean titers of antibodies to H1N1 and H3N2. About 92% and 100% were positive for H7N7 and H3N8, respectively. In dogs from urban areas, the mean titers of antibodies against influenza A H1N1, H3N2, H7N7 and H3N8, were 213.96, 179.42, 231.76, 231.35 HIU/25 µL respectively. The difference among them was not statistically significant at p > 0.05. In conclusion, these dogs were positive for both human and equine influenza viruses. The present study suggests the first evidence that influenza viruses circulate among dogs in Brazil.

A transmissão interespecífica do vírus influenza é relatada em estudo sobre influenza com animais domésticos desde 1970. Pássaros e mamíferos, incluindo o homem, são seus hospedeiros naturais, porém outros animais podem participar da sua epidemiologia. Foi investigada a incidência do vírus influenza em cães adultos criados em zonas rural (9, 19,56%) e urbana (37, 80,43%), do Estado de São Paulo. Os soros dos cães foram examinados pelo teste de inibição da hemaglutinação (IH), usando antígeno dos vírus influenza circulantes no Brasil. Nos cães rurais foram detectados títulos médios de 94,37, 227,88, 168,14 e 189,62 UIH/25 mL (unidades inibidoras de hemaglutinação/25 mL) para os subtipos H1N1, H3N2, H7N7, H3N8 de vírus influenza A, respectivamente, com diferenças estatisticamente significativas (p<0,05) entre as médias de títulos de anticorpos contra H1N1 e H3N2. Cerca de 84% e 92% dos cães urbanos responderam aos vírus influenza A humano H1N1 e H3N2, respectivamente e destes 92% e 100% foram positivos para os vírus eqüinos H7N7 e H3N8, respectivamente. Para esses cães as médias de títulos de anticorpos para os vírus influenza A H1N1, H3N2, H7N7 e H3N8 foram 213,96, 179,42, 231,76 e 231,35UIH/25 mL, respectivamente. As diferenças entre as médias não foram estatisticamente significativas (p>0,05). Conclui-se que os cães apresentaram positividade para ambos vírus influenza humano e equino. O presente estudo sugere, pela primeira vez, evidências de que há circulação do vírus influenza em cães, no Brasil.

Avaliação clínica e hemodinâmica periparto de fêmeas bovinas da raça holandesa em diferentes condições obstétricas / Peripartum clinical and hemodynamic evaluation of Holstein cows under distinct obstetric conditions

As distocias na espécie bovina são normalmente corrigidas por manobras obstétricas, sendo a extração forçada um procedimento obstétrico de risco, podendo causar injúrias tanto maternas quanto fetais. Partos induzidos com administração de ocitocina exógena nas inércias uterinas podem levar ao comprometimento fetal pela hipotensão e bradicardia materna, pois a ocitocina participa de regulações endócrinas e neuroendócrinas de órgãos como o coração e rins. O objetivo deste estudo foi comparar as mensurações de frequência cardíaca (FC), pressão arterial não-invasiva (PA) e eletrocardiograma de fêmeas bovinas da raça Holandesa agrupadas segundo a condição obstétrica: eutocia (G EUT; n = 10); distocia com manobra obstétrica (G DIST; n = 10); inércia uterina com infusão de ocitocina (G OCT; n = 10); nos seguintes momentos: pré-parto, intraparto, pós-parto imediato e uma hora após o parto. Os traçados eletrocardiográficos denotaram ritmo sinusal normal em todos os períodos. Observou-se taquicardia em todos os grupos, sendo que apenas no G OCT a FC pós-parto (111 ± 23 bpm) elevou-se estatisticamente em relação ao pré-parto (94 ± 11 bpm). Houve acréscimo significativo da PA no intraparto do G DIST (PA média = 101 ± 24 mmHg), decorrente de contrações uterinas e abdominais mais intensas. As fêmeas bovinas do Grupo OCT não apresentaram aumento significativo da PA diastólica intraparto em relação ao pré-parto como observado nos G EUT e G DIST. Os resultados apresentados demonstram que a distocia com correção manual eleva a pressão arterial das fêmeas bovinas, enquanto a administração de ocitocina altera momentaneamente as variáveis hemodinâmicas com possível efeito bradicárdico e hipotensor intraparto, impondo adaptação circulatória materna frente às alterações do parto.

Bovine dystocias are commonly assisted through obstetric procedures. However, manual traction delivery can be a dangerous strategy for the treatment of dystocia as it may lead to maternal and fetal injuries. Use of oxytocin for uterine atonia or hypotonia to induce contractions may compromise fetal welfare due to maternal hypotension and bradycardia, because this hormone regulates renal and heart endocrine and neuroendocrine actions. The aims of this study were to compare heart rate (HR) measurement, non-invasive blood pressure (BP) and electrocardiograms records of Holstein cows during the first stage of labour, intrapartum, immediately after calving and one hour later of physiological birth and dystocia. The animals were allocated in: group EUT – eutocia (n = 10); group DYST – dystocia with obstetric assistance (n = 10); group OCT – uterine inertia treated with oxytocin (n = 10). The electrocardiograph tracing showed a normal sinus rhythm during all parturition. Tachycardia was observed in all groups, however, group OCT showed higher heart rate immediately after calving (111 ± 23 bpm) than prepartum evaluation (94 ± 11 bpm). During labor, DYST G presented significantly higher BP (Medium BP = 101 ± 24 mmHg), due to uterine and abdominal strengthened contractions. Group OCT cows didn't show significative elevation on diastolic BP during calving as occurred on EUT and DYST groups. The present results indicate superior blood pressure on manual traction delivery of bovine females, while oxytocin infusion altered transitorily hemodynamic variables with a possible bradicardiac effect and intrapartum hypotension and impose maternal circulatory adaptation during parturition.

In vitro viability of canine spermatozoa frozen in tris-fructose-citric acid extender with ethylene glycol

A utilização de sêmen congelado tornou-se extremamente comum na prática da inseminação artificial em cães, estimulando a pesquisa de métodos de congelação e diluidores. Neste estudo foram avaliadas as propriedades criopreservativas do etileno glicol na concentração final de 5%, utilizado em 3 diferentes protocolos de congelação. No Método I, uma parte de sêmen foi adicionada a duas partes de tris-frutose-ácido cítrico, contendo 7,5% de etileno glicol e congelado sem prévia refrigeração. No Método II, uma parte de sêmen foi adicionada a duas partes de tris-frutose-ácido cítrico contendo 7,5% de etileno glicol e resfrigerado até 5ºC por 1 hora antes da congelação. No Método III, uma parte de sêmen foi adicionada a uma parte de tris-frutose-ácido cítrico sem etileno glicol e refrigerado até 5ºC por 1 hora, sendo em seguida adicionada uma parte de tris-frutose-ácido cítrico, previamente refrigerado até 5ºC, contendo 15% de etileno glicol, mantido a 5ºC por mais 1 hora e congelado. Para a congelação em cada método, o sêmen foi envasado em palhetas plásticas de 0,5 ml, colocadas em vapor de nitrogênio a 5 cm da coluna líquida por 20 minutos, mergulhadas no nitrogênio líquido e armazenadas. Todas as amostras foram descongeladas em banho-maria a 37ºC durante 30 segundos e imediatamente avaliadas. O Método III não apresentou decréscimo significante da motilidade retilínea progressiva após a descongelação e apresentou os melhores resultados para o vigor espermático, comparando-se aos demais métodos. Entretanto, os 3 métodos não apresentaram diferença significativa com relação aos defeitos espermáticos pós-descongelação. Os tipos de defeitos mais freqüentemente encontrados foram cabeça solta normal, cauda dobrada, fortemente dobrada e fortemente enrolada. Foi possível concluir que o tempo de equilíbrio maior no diluidor tris-frutose-ácido cítrico seguido pela diluição em etileno glicol antes da congelação parece produzir para os espermatozóides de cães a melhor motilidade retilínea progressiva e vigor após a descongelação.

Comparison of five extenders for canine semen freezing

Semen was collected from six stud dogs to compare five extenders in the semen freezing process. Each ejaculate was divided in five parts and added to tris-fructose-citric acid, glicine, lactose, skim milk and tris-fructose-citrate extenders. The semen was diluted at 37ºC in extenders without glycerol, in the ratio 1:1 and cooled for 60 minutes to reach a 5ºC temperature. Then, extenders with glycerol in the ratio of 2:1 were added to give the final prefreezing concentration of 4 per cent of glycerol. The diluted semen with the cryoprotectant was maintained for a further 60 minutes in refrigeration to equilibrate the spermatozoa in the glycerol and packaged in 0.5 ml plastic straws. The straws were maintained for 30 minutes in vapor, plunged and stored in liquid nitrogen. Sperm morphology was evaluated before and after freezing, whereas progressive motility (per cent) and velocity of forward progression (0-5) were appraised in different periods of the freezing process. The extender tris-fructose-citric acid showed the best post thaw progressive motility and velocity of forward progression compared to the others extenders. Semen freezing increased major sperm morphological abnormalities, regardless of the extender