Implementación de la técnica de PCR enla identificación de Babesia ssp en equinos / Implementation or PCR techinique in the equine identification of Babesia ssp

Aunque las técnicas de referencias citadas por la USDA y OIE son IFI y FC, para el diagnóstico de las infecciones por Babesia equi y Babesia caballi, éstas no permite la diferenciación entre las especies y no descartan resultados falsos negativos. La implementación de la PCR como técnica directa, en la identificación y carac-terización de estos parásitos, sin duda constituye un soporte al diagnóstico clínico de la piroplasmosis equina. Dado lo anteriormente expuesto en el presente trabajo se estandarizó la PCr para la identificación de B. equi y B. caballi. El procedimiento contempló la implementación de un protocolo de extracción de DNA, a partir de muestras de sangre y la optimización de PCR, tanto para la mezcla de reacción como para el programa de termociclación, junto a 4 partidores: P1 y P2 para B equi y P3 y P4 para B caballi. Ambos amplifican en forma selectiva una secuencia conservada de los genes de 16S rDNA, equivalentes a 659 bp para B. caballi y 664 bp para B. equi. La sensibilidad técnica fue de 0,1ng/ml para B. equi y 1ng/ml para B. caballi. El estudio de especificidad técnica no mostró productos de amplificación al utilizar DNAs de Toxoplasma gondii, Trypanosoma cruzi, Echinococcus granulosus, Fasciola hepatica. Se estudiaron 77 muestras de sangre de equinos provenientes de la Región Metropolitana de Chile con y sin sospecha clínica, de las cuales 15 resultaron positivas (14 a B. equi y 1 a B. caballi). Nuestros resultados crearon la necesidad de una evaluación epidemiológica de la PCR y su confrontación con otras técnicas de diagnóstico directo, para lo cual en la actualidad se estudian muestras de sangre equina con sospecha a piroplasmosis.

Aproximación a una caracterización molecular de fasciola hepática por la técnica RAPDs - PCR / Molecular characterization approach of fasciola hepatica by technique RAPDs-PCR

El presente estudio muestra la caracterización molecular de Fasciola hepatica obtenidas de bovino, equino y ovino, utilizando la técnica de Amplificación al Azar de Fragmentos de ADN Polimórficos (RAPDs-PCR). Para este fin, se lograron estandarizar las condiciones óptimas de amplificación y programa de termociclación de RAPDs-PCR para F. hepatica, así como marcadores genéticos de identificación poli-mórfica características para cada especie. La metodología utilizada consideró comparar los patrones genéticos interespecie e intraespecie, a partir de muestras de F. hepatica. Los resultados obtenidos muestran marcadores genéticos al azar, que evidencian variabilidad genética de F. hepatica intra e interespecie (polimorfismo), y cuyos fragmentos de amplificación fluctuaron entre los 135 y 741 pares de bases (pb).

Equinococosis/hidatidosis en la VII Región de Chile: diagnóstico e intervención educativa / Echinococcosis/hydatidosis in Region VII of Chile: diagnosis and educational intervention

El presente estudio se proyectó para un trabajo simultáneo en tres ámbitos: a) diagnóstico serológico y radiológico y tratamiento quirúrgico de la hidatidosis en la población humana asintomática; b) diagnóstico animal y tratamiento de los perros, y c) evaluación de conocimientos e intervención educativa en familias campesinas y en profesionales y técnicos en salud, agropecuaria y educación, con el fin de contribuir al control del ciclo de transmisión de la enfermedad. Se efectuaron pruebas de hemaglutinación indirecta y ELISA a 5.566 personas aparentemente sanas. Los 42 (0,8 por ciento) casos con resultados positivos en ambas pruebas (seroprevalencia de 754,6 por 100.000) fueron citados para ser sometidos a una ecografía hepática y una radiografía de tórax y, de los 26 que acudieron, 16 presentaron imágenes compatibles con quiste hidatídico. Estos 16 casos fueron enviados al hospital para ser intervenidos y en los 9 que acudieron se confirmó el diagnóstico quirúrgicamente, lo cual representa una prevalencia de 161,7 por 100.000. En 2.358 perros se procedió a la detección de la forma estrobilar de Echinococcus granulosus mediante purga con bromhidrato de arecolina y se obtuvieron resultados positivos en 11 por ciento. Los datos oficiales registrados en los mataderos revelaron la presencia de quistes hidatídicos en 13 por ciento de los bovinos, 4,4 por ciento de los ovinos y 4,2 por ciento de los porcinos sacrificados en la región. El programa educativo comprendió una evaluación de conocimientos mediante una encuesta al cabeza de familia, la intervención educativa entre las familias por un proceso participatorio activo no formal de carácter lúdico en el que participaron 1.082 familias, y la intervención educativa entre profesionales y técnicos mediante metodología a distancia y presencial. Para evaluar los resultados del programa se compararon los resultados de las pruebas de conocimientos antes y después de la intervención educativa en 200 familias que participaron en ella (casos) y en 95 que no participaron (controles). Del análisis de los conocimientos sobre equinococosis/hidatidosis, 783 familias (55 por ciento) demostraron no saber nada sobre la infección. Se observó que las técnicas participatorias lúdicas se adaptan a la forma de ser del campesino y permiten obtener cambios. Se capacitaron 276 profesionales de la salud, 201 auxiliares técnicos y 453 profesores rurales

Variables epidemiológicas asociadas a hidatidosis en población rural asintomática / Epidemiological variables associated to human hydatidosis in asymptomatic rural population

A 30 casos presuntivamente portadores de hidatidosis, diagnosticados en 165 localidades rurales de Cauquenes y Linares, VII Región, Chile por seropositividad a las reacciones de Dot-ELISA, ELISA y RHAI, y a 53 controles seronegativos elegidos de las mismas localidades por edad y sexo, se les aplicó estudio comparativo de variables demográficas y socioculturales para conocer el perfil con que estas características diferenciaban a ambos grupos. Se estudió: parentesco, escolaridad, función ejercida en el núcleo familiar; recepción de información por radio o TV; hábitos de ingesta de verduras crudas, calidad de agua de bebida; posesión de perros, actividad de éstos y resultados del diagnóstico para equinococosis; prácticas de matanza de animales para el autoconsumo, conducta con las vísceras infectadas y conocimientos relacionados con mecanismos de infección del perro, del hombre y sobre las medidas de prevención de hidatidosis.Las diferencias más resaltantes, por su clara significación estadística, fueron el analfabetismo (13,3 por ciento en el grupo de casos y 1,9 por ciento en el de controles), escolaridad básica (56,7 por ciento y 81,1 por ciento respectivamente) y la posesión de perros infectados con E. granulosus (46,7 por ciento versus 20,8 por ciento). A la inversa, la práctica de alimentar perros con vísceras infectadas con quistes hidatídicos resultó mayor en el grupo de controles (85,1 por ciento) que en el de los casos (59,2 por ciento). En el resto de las variables estudiadas no se encontró asociación estadística que discriminara entre ambos grupos

Técnicas inmunoenzimáticas en el diagnóstico de la trichinellosis porcina / Immunoenzymatic assays in the diagnosis of swine trichenellosis

Se estandarizó un protocolo de ELISA como técnica de diagnóstico de la triquinosis porcina. Se verificó la parasitosis, en cerdos alimentados con diferentes dosis de carne de ratas infectadas con larvas de triquina, a los 30 y 60 días postinfección. No se observaron diferencia de porcentaje por distribución normal, no mostró diferencias significativas entre los valores de densidad óptica a 490 nm entre los sueros de cerdos infectados con una misma dosis de carne a los 30 y 60 días postinfección. Resultados similares se obtuvieron con los sueros de cerdos infectados con una misma dosis de carne a los 30 y 60 días postinfección. Resultados similares se obtuvieron con los sueros de animales infectados con diferentes dosis de carne. Estos sueros constituyeron controles positivos de infección para triquinosis porcina y se utilizaron para identificar epítopes antigénicos característicos de esta parasitosis. Por SDS-PAGE se caracterizó el componente peptídico del extracto crudo de proteínas de larvas de Trichinella spiralis. Se identificaron 10 péptidos, cuya movilidad electroforética se determinó por el programa computacional "Gel-perfect".Por electroinmuno transferencia se identificaron 4 polipéptidos de 77, 66, 47 y 43 KDa. Los polipéptidos de 47 y 43 KDa que presentan una señal más intensa,no fueron encontrados en los preparados antigénicos de Cysticercus cellulosae y líquido de quiste hidatídico. Dichos polipéptidos son detectados desde los 30 días postinfección con una intensidad de señal permanente en el tiempo e independiente de la dosis de infección de los cerdos

Estandarización de la reacción de polimerización en cadena en muestras de sangre de ratones infectados con Trypasonoma cruzi / Standarization of the polymerase chain reaction in blood samples of mice infected with Trypasonoma cruzi

Se estandarizó la reacción de polimerización en cadena (PCR) para el diagnóstico parasitológico de la enfermedad de Chagas. Se determinó condiciones de estandarización de DNA, así como las concentraciones óptimas de dNTPs, partidores, Taq DNA polimerasa y las condiciones de termociclación. Se determinó que el ensayo es capaz de amplificar hasta 100 fg de DNa templado de trypasonoma cruzi, con una sensibilidad diagnóstica de 2x10² parásitos/ml. Los productos de PCR amplificados demostraron ser específicos mediante ensayos de hibridación con una sonda de DNA kinetoplastídico de T. cruzi

DOT-ELISA en el diagnóstico presuntivo de la hidatidosis humana / DOT-ELISA in the presumptive diagnosis of the human hydatidosis

Se aplicó Dot-ELISA como método de diagnóstico presuntivo de la hidatidosis humana en 1616 muestras de sangre de personas aparentemente sanas procedentes de áreas rurales de la Provincia de Linares, VII Región, Chile. Las muestras se precesaron y ensayaron en el laboratorio del Hospital Base de Linares. La reacción de hemaglutinación indirecta (RHAI) y doble difusión con pesquisa del arco 5 de Caprón (DD5) se ejecutaron en el Laboratorio de Parasitología Campus Sur, como métodos diagnósticos de referencia. Con Dot-ELISA se observaron 112 sueros positivos (7,0 por ciento), con RHAI (2,4 por ciento) y con DD5 6 (0,4 por ciento). Se usó como criterio de probable infección por hidatidosis, cuando se constató positividad a las tres reacciones serológicas, que se observó en 5 casos (0,31 or ciento). Como criterio de sospecha de probable infección hidatídica con dos reacciones serológicas, situación que se presentó en 11 casos (0,68 por ciento). En estos momentos se estudian por exámenes de imagenología los individuos con posible infección hidatídica