Avaliação de estratégia combinada de eletroforese capilar e PCR triplo metilação-específica para diagnóstico molecular da Síndrome do X Frágil / Assessment of a combined strategy of capillary electrophoresis and methylation-specific triple polymerase chain reaction for molecular diagnosis of the Fragile X Syndrome

Introdução: a síndrome do X frágil é a principal causa de retardo mental de natureza familiar. Suas características clínicas pouco marcantes fazem com que um diagnóstico de certeza a partir de testes moleculares seja imprescindível. Objetivo: descrever e avaliar as vantagens e desvantagens de uma estratégia combinada de PCR triplo metilação-específica e eletroforese capilar para o diagnóstico molecular da síndrome do X frágil, visando baixo custo, exequibilidade, reprodutibilidade e sensibilidade. Métodos: foram coletadas 43 amostras de sanguede pacientes com déficit cognitivo e de suas mães, quando indicado. Tais indivíduos possuíam exame citogenético positivo, fenótipo e/ou história familiar sugestivas de síndrome do X frágil. Após extração de DNA, foi realizada eletroforese capilar com marcadores fluorescentes,tratamento com bissulfito de sódio e três reações de PCR metilação-específicas em cada amostra. Resultados: foi possível determinar o genótipo em 29 pacientes: 23 (14 homens e nove mulheres) apresentavam alelos com tamanho normal e seis (todos do sexo masculino) possuíam alelos na faixa de mutação completa. Em outras seis amostras, todas do sexo feminino, foi possível determinar um alelo na faixa normal e outro alelo alterado, entretanto, sem diferenciação entre faixa de pré-mutação ou de mutação completa. Nas demais oito amostras(cinco homens e três mulheres), não se pôde determinar o genótipo. Conclusões: a técnica proposta faz uma triagem de pacientes, mas apresenta desvantagens, como não terem sido obtidos resultados satisfatórios com as reações para alelos metilados e a análise dos rastrosdas PCRs com três primers ter se mostrado difícil e dependente de observador.

Introduction: The fragile X syndrome is the main cause of inherited mental retardation. Its very small remarkable clinical characteristics make that a surely diagnosis from molecular tests be indispensable. Objective: To describe and assess the advantages and disadvantages of a combined strategy of methylation-specific triple polymerase chain reaction (PCR)and capillary electrophoresis for the molecular diagnosis of the fragile X syndrome, seeking low cost, feasibility, reproducibility, and sensibility. Methods: 43 blood samples were collected from patients with cognitive deficit and their mothers, when indicated. Such subjects presented a positive cytogenetic exam, phenotype and/or familiar history suggestive of the fragile X syndrome. After DNA extraction, capillary electrophoresis with fluorescent markers, treatment with sodium bisulfite, and three methylation-specific PCR reactions were performed in each sample. Results: It was possible to determine the genotype in 29 patients: 23 (14 men and 9 women) presented alleles with normal size and six (all male) had them in the complete mutation range. In other six female samples, it was possible to determine an allele in the normal range and another altered; nevertheless, without differentiation between the pre-mutation or complete mutation ranges. In the other eight samples (five men and threewomen), it was not possible to establish the genotype. Conclusions: The suggested technique does a patient?s screening, but it has some disadvantages such as non-satisfying results been seen with the reactions for methylated alleles and analysis of the PCRs tracks with three primers being difficult and dependent on the observer.

Psiconeuroendocrinologia e comportamento suicida / Psychoneuroendocrinology and suicidal behaviour

Objetivo: A psiconeuroendocrinologia tem sido de grande utilidade para avaliação, mesmo que indireta, do sistema límbico e, conseqüentemente, dos distúrbios associados a tal sistema. O objetivo deste artigo foi revisar as contribuições da psiconeuroendocrinologia para a compreensão do comportamento suicida. Métodos: Realizamos uma revisão crítica a partir dos estudos que investigaram possíveis disfunções dos sistemas aminérgicos e dos eixos corticotrópico e tireotrópico associadas a comportamento suicida. Resultados: Os resultados mais consistentes dizem respeito principalmente a uma redução da atividade da função serotoninérgica, traduzida por respostas inibidas de prolactina em resposta à fenfluramina. No estágio atual de conhecimento, entretanto, seria precipitado considerar a perturbação de um desses sistemas como primária de um ponto de vista etiológico. Conclusões: O estado biológico concomitante a um comportamento suicida pode ser compreendido como uma via final comum de perturbações de sistemas de neurotransmissores-hormônios envolvendo diferentes mecanismos. Uma possibilidade de estratégia de exploração é a utilização de abordagens multifatoriais (como cruzar os resultados de vários testes neuroendócrinos). Essa estratégia nos parece a mais promissora, principalmente diante do surgimento de substâncias de teste cada vez mais específicas.