ABSTRACT
Se estandarizó la reacción de polimerización en cadena (PCR) para el diagnóstico parasitológico de la enfermedad de Chagas. Se determinó condiciones de estandarización de DNA, así como las concentraciones óptimas de dNTPs, partidores, Taq DNA polimerasa y las condiciones de termociclación. Se determinó que el ensayo es capaz de amplificar hasta 100 fg de DNa templado de trypasonoma cruzi, con una sensibilidad diagnóstica de 2x10² parásitos/ml. Los productos de PCR amplificados demostraron ser específicos mediante ensayos de hibridación con una sonda de DNA kinetoplastídico de T. cruzi
Subject(s)
Animals , Mice , Blood/parasitology , Polymerase Chain Reaction , Trypanosoma cruzi/isolation & purification , Chagas Disease/diagnosis , Mice/blood , Mice/parasitology , Reference Standards , Sensitivity and Specificity , Immunologic Tests , Trypanosoma cruzi/immunologyABSTRACT
Chilean T. cruzi populations from different endemic areas and transmission cycles were characterized at several biochemical levels, to mention: hybridization with kinetoplast DNA probes, molecular karyotype, isoenzyme studies and kinetoplast DNA restriction fragment length polymorphism. Furthermore, an immunological approach with immune sera from Balb/c infected mice with different T. cruzi populations was used to differentiate among parasite types by the in vitro complement-mediated lysis assay. Parasite grouping by the above described methods allows to classify T. cruzi populations on a very defined number, suggesting that they have a clonal structure