Training tuberculosis laboratory workers in LED-fluorescence microscopy: experience learned in Argentina / Capacitación de trabajadores de laboratorios de tuberculosis en microscopia de fluorescencia LED: experiencia en Argentina

ABSTRACT Objective To assess a LED-fluorescence microscopy (LED-FM) capacitation program for the training of laboratory technicians without previous experience in FM. Methods We evaluated a teaching program that consists of a three-day course followed by an "in situ" two-month phase in which technicians acquired skills without the help of a FM expert; in order to gain confidence to recognize auramine-stained bacillus, during this phase, technicians examined duplicate slides stained by Ziehl Neelsen (ZN) and FM in a unblinded way. Technicians with acceptable performance, continued with a blinded-training period. Testing panels and rechecking process were used to evaluate proficiency after different length of experience. Results Post-course panel results showed that 70% of trainees made Low False Positive errors (LFPs). Analysis of two other panels showed that LFPs significantly decreased (Chi-squared test, p<0.05) as the "in situ" training phase progressed. Processing at least three slides/day was associated with acceptable performance. During the blinded-training period, results of the rechecking process showed that sensitivity (96.8%) and specificity (99.8%) levels were satisfactory. Conclusion Moderate training (a three-day course) is not enough to make technicians proficient in LED-FM; however, great ability can be reached after a short "in situ" training phase even without the presence of experienced staff available in field to review doubtful results. Training was more effective in services with a minimum workload of 750 slides/year.(AU)

RESUMEN Objetivo Evaluar un programa de capacitación en microscopía de fluorescencia LED (MF-LED) para el entrenamiento de técnicos de laboratorio sin experiencia en MF. Métodos Se evaluó un programa de capacitación que consiste en un curso de tres días seguido de dos meses de entrenamiento «in situ¼, en donde los técnicos adquirieron habilidades sin presencia de un experto en la práctica diaria; para alcanzar confianza en el reconocimiento del bacilo, los técnicos, durante estos meses, examinaron en forma «no cegada¼ extendidos duplicados teñidos por Ziehl Neelsen (ZN) y MF. Aquellos laboratoristas que lograron rendimiento aceptable continuaron su entrenamiento «a ciegas¼. Su desempeño fue evaluado en distintos períodos del entrenamiento mediante paneles de láminas y relectura de extendidos. Resultados Los resultados de un panel posterior al curso mostraron que 70% de los participantes cometieron errores falsos positivos bajos (FPB). Dos paneles posteriores evidenciaron que los FPB disminuían significativamente (prueba de Chi cuadrado, p<0.05) a medida que el entrenamiento avanzaba. El procesamiento de al menos tres extendidos/ día se asoció con desempeño aceptable. Durante el período a ciegas, la relectura de láminas evidenció que la sensibilidad (96,8%) y especificidad (99,8%) fueron satisfactorias. Conclusiones Una capacitación moderada (curso de tres días) no es suficiente para adquirir competencia en MF-LED; sin embargo, se puede alcanzar habilidad después de una corta capacitación «in situ¼, incluso si no hay personal con experiencia disponible en el servicio para revisar los resultados dudosos diariamente. El entrenamiento fue más efectivo en servicios con carga de trabajo mínima de 750 extendidos/año.(AU)

Performance of LED fluorescence microscopy for the detection of acid-fast bacilli from respiratory samples in peripheral laboratories in Argentina / Rendimiento de la microscopía de fluorescencia LED para la detección de bacilos ácido-alcohol resistentes en muestras respiratorias en laboratorios periféricos de Argentina

ABSTRACT Introduction: Light-emitting diode fluorescence microscopy (LED-FM) has been endorsed by the World Health Organization (WHO) for tuberculosis diagnosis, but its accuracy in HIV-infected patients remains controversial, and only some few studies have explored procedural factors that may affect its performance. Objective: To evaluate the performance of LED-FM for tuberculosis diagnosis in patients with and without HIV infection using a newer, less expensive LED lamp. Materials and methods: We compared the performance of LED-FM and Ziehl-Neelsen (ZN) microscopy on respiratory specimen smears from tuberculosis (TB) suspects and patients on treatment examined by different technicians blinded for HIV-status and for the result of the comparative test. We analyzed the effect of concentrating specimens prior to microscopy using different examination schemes and user-appraisal of the LED device. Results: Of the 6,968 diagnostic specimens collected, 869 (12.5%) had positive Mycobacterium tuberculosis cultures. LED-FM was 11.4% more sensitive than ZN (p<0.01). Among HIV-positive TB patients, sensitivity differences between LED-FM and ZN (20.6%) doubled the figure obtained in HIV-negative patients or in those with unknown HIV status (9.3%). After stratifying by direct and concentrated slides, the superiority of LED-FM remained. High specificity values were obtained both with LED-FM (99.9%) and ZN (99.9%).The second reading of a sample of slides showed a significantly higher positive detection yield using 200x magnification (49.4 %) than 400x magnification (33.8%) (p<0.05). The LED-device had a very good acceptance among the technicians. Conclusion: LED-FM better performance compared with ZN in HIV-infected patients and user-appraisal support the rapid roll-out of LED-FM. Screening at 200x magnification was essential to achieve LED-FM increased sensitivity.

RESUMEN Introducción. La microscopía de fluorescencia con lámpara LED (MF-LED) ha sido recomendada por la Organización Mundial de la Salud (OMS) para el diagnóstico de la tuberculosis, pero su precisión en pacientes con HIV continúa siendo controversial y en pocos estudios se han explorado los factores metodológicos que pueden afectar su utilidad. Objetivo. Evaluar el rendimiento de la MF-LED en el diagnóstico de la tuberculosis en pacientes con HIV y sin él mediante un novedoso dispositivo LED. Materiales y métodos. Se comparó el rendimiento de la MF-LED y la microscopía en frotis de muestras respiratorias con tinción de Ziehl-Neelsen (M-ZN) examinados por técnicos cegados en cuanto al estado de HIV y el resultado de la prueba comparativa. Se analizó el efecto de concentrar muestras antes de la microscopía, usar diferentes esquemas de observación y la valoración con el dispositivo LED. Resultados. De las 6.968 muestras recolectadas, 869 (12,5 %) resultaron con cultivo positivo para Mycobacterium tuberculosis. La MF-LED fue 11,4 % más sensible que la M-ZN (p<0,01). Entre los pacientes con tuberculosis positivos para HIV, la diferencia de sensibilidad entre la MF-LED y la M-ZN (20,6 %) duplicó la cifra obtenida en pacientes negativos para HIV o con estatus desconocido (9,3 %). Al estratificar los frotis en directos y concentrados, se mantuvo la superioridad de la MF-LED. Las especificidades de la MF-LED (99,9 %) y la M-ZN (99,9 %) resultaron elevadas. La lectura de una muestra de frotis mostró una positividad significativamente mayor con un aumento de 200X (49,4 %) que con uno de 400X (33,8 %) (p<0,05). El dispositivo LED tuvo una buena aceptación entre los técnicos. Conclusión. Debido al mejor desempeño de la MF-LED comparada con la M-ZN en pacientes con HIV y su fácil utilización, se recomienda su adopción. La utilización del aumento de 200X fue esencial para el incremento de la sensibilidad de la MF-LED.

Aislamiento de micobacterias medioambientales en suelos de la ciudad de Córdoba / Isolation of environmental mycobacteria from soils of Córdoba city Argentina

Durante los últimos años ha resurgido el interés por el estudio de las micobacterias medioambientales debido al aumento en incidencia de las micobacteriosis atípicas. Estudios realizados en todo el mundo señalan al suelo como una fuente importante de contaminación humana. En el país existen trabajos que documentan la prevalencia de las micobacteriosis atípicas en Córdoba (1997). y su aislamiento en suelos de La Pampa (1999). El objetivo fue demostrar la existencia de micobacterias mdioambientales en suelos de la ciudade de Córdoba. Se dividió la ciudad en nueve regiones. Se recogieron un total de 120 muestrars en lugares de fácil acceso a suelos orgánicos; cada una se obtuvo en un área cuadrada de 10 cm de lado, hasta 1 cm de profundidad. Se conservaron en heladera hasta 7 días. Fueron homogeneizadas con agua tridestilada en relación 1:1, y decontaminadas según el método de Petroff. Se procedió a la siembra en medio de Lowestein-Jensen, y se incubó en stufa a 37ºC con controles cada 7 días durante 2 meses. Se realizó tinción de Ziehl-Neelsen a los cultivos positivos. Veintitrés muestras (19) fueron descartadas por contaminación. En 20 muestras (17) se observaron bacilos ácido-alcohol resistentes. Las colonias obtenidas fueron enviadas para su identificación al Servicio de Micobacterias del Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas Dr. Carlos G. Malbrán, a cargo de la Lic. Lucía Barrera. Hast el momento uno de los aislameientos fue identificado como Mycobacterium triviale. Con respecto a la distribución redional de los aislamientos, se observó correlación entre el porcentaje de muestras positivas y el número de muestras obtenidas en espacios parquizados. Se demostró la presencia de micobacterias medioambientales en suelos de micobacterias medioambientales en suelos de la ciudad de Córdoba. Los resultados sugieren mayores probabilidades de aislamiento en parquizaciones y suelos habitados por animales. Nuevos trabajos permitirán aclarar características del suelo que favorecen la proliferación de micobacterias, el microorganismo aislado más frecuente, y tal vez brindar armas para la prevención de la enfermedad

Listeriosis: meningoencefalitis en adultos / Listeriosis: meningoencephalitis in adults

Se presentan 13 pacientes asistidos en el Hospital Rawson de Córdoba durante el período 1965-1985, con meningoencefalitis por Listeria monocytogenes. De acuerdo con nuestros resultados esta entidad no difiere de las causadas por otras etiologías en el aspecto clínico ni en las características físico-químicas y citológicas del líquido cefalorraquídeo; el diagnóstico se apoya en los exámenes bacteriológicos. Prácticamente en la mitad de los casos (53,8%) ocurrió como infección oportunista; sólo 39% correspondió a pacientes de zonas rurales. Se aplicó la asociación penicilina-cloranfenicol con resultados favorables

Identificación de especies y sensibilidad a diez antibióticos del género Staphylococcus / Species identification and susceptibility to 10 antibiotics of Staphylococcus

Se estudiaron retrospectivamente 418 cepas de Staphylococcus sp, provenientes de diversos especímenes clínicos recogidos en el Hospital Rawson de Córdoba durante un período de tres años (1981-1984). Se identificaron cono S. aureus 221 cepas (52,8%); cono S. epidermidis, 140 (33,49%), y cono S. saprophyticus, 57 (13,63%). S. aureus fue igualmente la especie aislada con mayor frecuencia en cada sector del hospital en particular: Sala general (S.G.), 52,02%; consultorio externo de guardia (C.E.), 54,09%, y Unidad de Terapia Intensiva (U.T.I), 52,78%. Se estudió la sensibilidad de cada especie a diez agentes antimicrobianos. Como ejemplo fueron resistentes a penicilina 86,12% de S. aureus; 84,88% de S. epidermidis y 86,04% de S. saprophyticus. Fueron multirresistentes 20,11% de S. aureus. 45,49% de S. epidermidis y 62,79% de S. saprophyticus. Los patrones de multirresistencia permiten sospechar el origen hospitalario de las cepas y plantean un potencial problema terapéutico. Las pruebas de susceptibilidad antimicrobina deben ser realizadas a todos los estafilococos considerados la causa de la infección, debido a su resistencia a un amplio espectro de antibióticos

El diagnóstico bacteriológico en el paciente con sonda vesical / Bacteriological diagnosis in the patient with vesical probe

El objetivo de este trabajo es estudiar la posibilidad de sustituir la punción suprapúbica, método cruento, considerado óptimo para la toma de orina para estudio bacteriológico en pacientes con sonda vesical permanente, por un método incruento: la punción de la sonda. Esta última se realizó a 10 cm del meato uretral, habiendo pinzado la sonda previamente durante un tiempo mínimo de 3 horas. Se procesaron 30 muestras dobles de orina, obtenidas por punción suprapúbica y por punción de la sonda vesical (simultánea), de 28 pacientes con sonda vesical permanente y sistema cerrado de recolección. Se obtuvo desarrollo en 21 muestras y fueron negativos los 9 cultivos restantes (por ambos métodos). Ocho fueron infecciones mixtas y 13 monomicrobianas, con un franco predominio de bacilos Gram negativos (16 muestras). Se estudió la sensibilidad antimicrobiana in vitro de los microorganismos aislados. Los resultados obtenidos por punción de la sonda fueron iguales a los recogidos por punción suprapúbica en 28 de los 30 casos (93,33%)