Aseptic meningitis caused by Leptospira spp diagnosed by polymerase chain reaction

Leptospirosis is a zoonotic disease caused by the pathogenic Leptospira spp. The clinical presentations are diverse, ranging from undifferentiated fever to fulminant disease including meningeal forms. The neurological leptospirosis forms are usually neglected. The aim of this study was to investigate leptospirosis as the cause of aseptic meningitis using different diagnostic techniques including the polymerase chain reaction (PCR). Thirty-nine cerebrospinal fluid (CSF) samples from patients presenting with meningeal abnormalities, predominance of lymphocytes and negative results by traditional microbiological tests were processed by leptospiral culture, anti-leptospiral antibody response and PCR. Leptospira spp DNA was detected in 23 (58.97 percent) of the CSF samples. Anti-leptospiral antibodies were found in 13 (33.33 percent) CSF samples. Twelve CSF samples were positive by PCR assay and negative by microscopic agglutination test (MAT) assay. Two CSF samples were positive by MAT and negative by PCR. The positive and negative agreement between both tests was 11 and 14, respectively. CSF samples from six cases of unknown diagnosis were positive by PCR assay. Eight cases showed positive results using PCR and MAT. Leptospirosis could be detected by PCR assay from the 3rd-26th day after illness onset. The sensitivity of the PCR was assessed with confirmed cases of leptospirosis (by MAT) and found to be 89.5 percent. All CSFs were negative by culture. PCR was found to be a powerful tool for diagnosing meningitis cases of leptospirosis. We recommend that it may be used as a supplementary diagnostic tool, especially in the early stages of the disease, when other diagnostic techniques such as serology are not sensitive.

Molecular characterization of Leptospira sp. strains isolated from human subjects in São Paulo, Brazil using a polymerase chain reaction-based assay: a public health tool

A polymerase chain reaction (PCR)-based assay which amplifies repetitive DNA elements present within bacterial genomes was used to characterize and differentiate Leptospira sp. Thirty-five strains from a reference culture collection and 18 clinical isolates which had been previously analyzed by cross agglutinin absorption test (CAAT) were evaluated by this technique. PCR results from analysis of the reference culture collection showed no bands corresponding to serogroups Australis, Autumnalis, Bataviae, Celledoni, Cynopteri, Djasiman, Panama, Pomona, Pyrogenes, and Tarassovi. However, the PCR method was able to clearly discriminate the serogroups Andamana, Ballum, Canicola, Grippotyphosa, Hebdomadis, Icterohaemorrhagiae, Javanica, Sejroe, Semaranga, and Shermani. Clinical isolates previously characterized by CAAT as serovar Copenhageni, serovar Castellonis, and as serovar Canicola were in agreement with PCR results. The clinical isolate previously characterized as serovar Pomona was not differentiated by PCR. Forty additional clinical isolates from patients with leptospirosis obtained in São Paulo, Brazil were also evaluated by this PCR method. Thirty-nine of these were determined to belong to serogroup Icterohaemorrhagiae (97.5 percent) and one to serogroup Sejroe (2.5 percent). These results demonstrate that the PCR method described in this study has utility for rapid typing of Leptospira sp. at the serogroup level and can be used in epidemiological survey.

Human leptospirosis: a twenty-nine-year serological study in São Paulo, Brazil

Estudo retrospectivo com 9.335 casos de leptospirose humana no Estado de São Paulo, Brasil, diagnosticados entre 1969 e 1997 mostrou que a doença é endêmica no estado. Adultos com idade entre 20-39 anos foram os mais infectados (32,40 por cento) sendo 87,0 por cento dos casos do sexo masculino. A incidência anual média foi de 0,53 por uma população de 100.000. Casos ocorreram principalmente em janeiro a abril de cada ano. O maior número de casos foi observado em 1991 e 1996 com média pluviométrica de 159,9 e 160,3, respectivamente. Estes dados enfatizam a importância da leptospirose na saúde pública no Estado de São Paulo, Brasil.

Evaluation of the counterimmunoelectrophoresis reaction as a serodiagnosis test for swine leptospirosis

Avaliou-se a reação de contraimunoeletroforese (CIE) como teste gênero-específico para diagnóstico da leptospirose suína, usando-se três extratos solúveis de Leptospira sp, sorovares pomona, icterohaemorrhagiae e patoc, obtidos pelo tratamento com Triton X-100 a quente e aplicados a amostras de soro de suínos subdivididos em três grupos: Grupo 1, 10 suínos experimentalmente infectados com estirpe Pomona; Grupo 2, 50 suínos naturalmente infectados e Grupo 3, controle. As amostras de soros foram submetidas à reação de CIE e os resultados comparados aos da Soroaglutinação Microscópica (SAM), técnica de referência pela WHO. Os Grupos 1 e 3 foram monitorados por 93 dias após a inoculação (p.i.). Pela SAM a soroconversão do Grupo 1 ocorreu por volta do 10º dia p.i., enquanto pela CIE, empregando-se qualquer extrato antigênico, foi anterior à SAM. Quando a CIE foi realizada frente a antigeno homólogo à infecção, seus resultados foram equivalentes aos da SAM, não se verificando o mesmo frente aos antígenos heterólogos. Neste aspecto, os Grupos 1 e 3 mostraram comportamento diferente pois não houve diferença significativa entre os resultados da CIE frente aos três antígenos, o que poderia significar serem independentes do sorovar responsável pelo surto ou infectante. Embora a CIE seja segura, rápida, de fácil execução, de baixo custo e ideal para análise em grande escala de amostras, revelou-se de limitada capacidade gênero-específica, o que não é desejavel para testes de triagem de campo; mas poderia ser útil na detecção precoce de resposta sorológica em relação à SAM.

Persistence of leptospiral agglutinins titers in human sera diagnosed by the microscopic agglutination test

A persistencia de aglutininas detectadas por MAT tem criado problemas na interpretacao dos resultados. O objetivo deste trabalho foi examinar os resultados da sorologia de 70 pacientes com confirmacao sorologica de leptospirose durante 3-13 meses apos terem sido infectados para se poder elucidar a interpretacao da persistencia de aglutininas detectadas por MAT. Sessenta e um soros de pacientes (87,14 por cento) apresentaram titulos iguais, ou maiores, que 800. Destes, 2 individuos mantiveram titulos de 800 treze meses apos terem sido infectados. Este estudo mostra que apenas uma amostra de soro, mesmo com alto titulo de aglutininas, nao pode ser considerada para determinar a fase da doenca

Search for agglutinating antibodies to Leptospira and Leptonema in horses, São Paulo, Brazil / Anticorpos aglutinantes para Leptospira e Leptonema em eqüinos, São Paulo, Brasil

Sera from 922 apparently health equines intended for therapeutic sera production in a farm of the Instituto Butantã in São Roque, State of São Paulo. Brazil, were examined for detection of antibodies to serovars of Leptospira interrogans and to Leptonema illini by the microscopic agglutination (MA) test. Significant antibody titres were found in 807 sera (87.5%) and 659 (81.7%) of those sera reacted to more than one serovar at titres ranging from 1: 100 to 1:6,400 with predominance of low titres ( 1:400). From the 23 screening serovars, only tarassovi did not react. The most common reactions among positive sera occurred to antigens from the Icterohaemorrhagiae serogroup (84%) and to Leptonema illini (79.2%).

Soros de 922 eqüinos aparentemente sadios, mantidos na Fazenda do Instituto Butantan (São Roque, SP) para produção de soros hiperimunes, foram analisados quanto à presença de anticorpos para sorovares de Leptospira interrogans e para Leptonema illini, através da reação de aglutinação microscópica (MA). Entre os 807 (87,5%) animais positivos, 659 (81,7%) reagiram com mais de um sorovar, com títulos entre 1:100 e 1:6.400, havendo predomínio de títulos baixos ( 1:400); 84% dos soros positivos reagiram com representantes do sorogrupo Icterohaemorrhagiae e 79,2% com Leptonema illini. Dos 23 sorovares utilizados, apenas o tarassovi não reagiu.

Estudo epidemiologico da doenca de Lyme no Brasil / Epidemiological study of Lyme's disease in Brazil

A doenca de Lyme, uma espiroquetose transmitida por carrapatos, foi inicialmente relatada nos Estados Unidos da America em 1977, por Allen C. Steere, que descreveu a doenca no estado de Conecticut. Posteriormente, seguiu-se relatos da doenca nao somente em outros estados americanos, bem como em outros paises e continentes, como Canada, Uniao Sovietica, Japao, China, Australia e no Leste Europeu. Com o intuito de se realizar a pesquisa desta doenca no Brasil criou-se uma equipe multidisciplinar para realizacao deste projeto com a participacao de microbiologistas, entomologistas e clinicos da area reumatologica, pertencentes ao quadro da Universidade de Sao Paulo. O presente trabalho tem por objetivo descrever a elaboracao e a evolucao e uma infraestrutura para esta pesquisa, incluindo montagem de laboratorios para pesquisa imunologica, sorologica e cultura para borrelias, cooperacao com diferentes instituicoes nacionais de saude, elaboracao de pesquisa de campo, bem como mostrar os resultados preliminares encontrados por esta equipe.

Avaliacao da contraimunoeletroforese com antigenos dos sorovars icterohaemorrhagiae E patoc no diagnostico sorologico da leptospirose humana / Evaluation of counterimmunoelectrophoresis with antigens of icterohaemorrhagiae and patoc serovars in serodiagnosis of human leptospirosis

Avaliou-se o desempenho da contraimunoeletroforese (CIE) no diagnostico sorologico da leptospirose humana utilizando tres tipos de antigenos derivados da L. interrogans sorovar icterohaemorrhagiae e do sorovar patoc da L. biflexa. Comparuo-se os resultados obtidos na CIE com a prova de referencia a soroaglutinacao microscopica (SAM). Soros pareados de 135 pacientes com leptospirose foram subdivididos em 4 grupos de acordo com os resultados da SAM. Como controle coletou-se sangue de 69 individuos sadios. A concordancia entre as duas tecnicas variou de 92,64 a 94,11 por cento. Os resultados obtidos pela CIE com os antigenos do sorovar icterohaemorrhagiae foram mais favoraveis do que aqueles derivados do patoc. Ressaltam-se as caracteristicas de elevada sensibilidade detectando anticorpos antileptospiras mais precocemente do que a microaglutinacao. As caracteristicas encontradas no presente estudo credenciam o emprego da CIE como um metodo util e pratico para o diagnostico da leptospirose humana na fase aguda da doenca.

Consideraçöes sobre a ocorrência de casos de leptospirose no Recife - Pernambuco / Leptospirosis in Recife: considerations

Entre maio de 1985 a abril de 1986 diagnosticaram-se, através de soraglutinaçäo microscópica, 170 casos de Leptospirose. Isso representou 23,7% de todos os internamento do serviço de Doenças Infecciosas e Parasitárias do Hospital Oswaldo Cruz. O estudo epidemiológico mostrou que a incidência da infecçäo foi mais freqüente no sexo masculino. A idade foi de 32 anos e näo houve correlaçäo entre procedência e ocupaçäo. Os casos predominaram nos meses em que ocorreu maior preciptaçäo pluviométrica. O sorovar icterohaemorrhagiae foi o mais encontrado, representando 89,0% dos sorovars definidos. Este foi o responsável por todos os casos letais (7,06%), os quais somente ocorreram em maiores de 40 anos

Surto de leptospirose humana por atividade recreacional no município de Säo José dos Campos, Säo Paulo: estudo soroepidemiológico / Outbreak of human leptospirosis by recreational activity in the municipality of Säo José dos Campos, Säo Paulo: seroepidemiological study

Um surto de leptospirose humana por atividade recreacional ocorreu no município de Säo José dos Campos em novembro de 1987, envolvendo um grupo de pessoas que, ao participarem de uma festa de confraternizaçäo em um clube na periferia da cidade, banharam-se em uma piscina de água natural. Após a realizaçäo da investigaçäo epidemiológica e laboratorial, observou-se alta prevalência do sorotipo pomona na análise sorológica (91%) e näo se conseguiu isolar o agente etiológico nas amostras de água da piscina do clube. Os dados epidemiológicos e laboratoriais sugerem que a fonte de infecçäo tenha sido a água da piscina contaminada por dejetos de suínos e de outros animais domésticos dos locais adjacentes a água do córrego que alimentava a piscina do clube

Microscopia ótica de alta resoluçäo: adaptaçäo do método e sua aplicaçäo ao estudo da leptospirose experimental em cobaias / High resolution light microscopy: adaptation of the method and its use in the study of experimental leptospirosis in guinea pigs

As lesöes morfológicas em parênquina e vasos de fígado e rim foram estudadas em um lote de cobaias infectadas experimentalmente com Leptospira interrogans sorogrupos icterohaemorrhagiae, em comparaçäo com um grupo de cobaias normais näo infectadas. O material foi analisado a microscopia óptica convencional (MOC), através da inclusäo em parafina, e a de alta resoluçäo (MOAR), esta com cortes de um micrômetro de espessura e até-96 mm2 de superfície, em tecido incluido em glicol-metacrilato. A utilizaçäo pela primeira vez da microscopia óptica de alta resoluçäo para o estudo da leptospirose revelou novos aspectos da doença, na medida em que permitiu análise de detalhes celulares e visäo de conjunto do quadro histológico na mesma amostra. Assim foi possível constatar se tanto alteraçöes da coesäo intercelular como especializaçöes de membranas, incluindo borda em escova, e vesículas de pinocitose, além da distribuiçäo intracelular de organelas saculares, provavelmente mitocondrias. A introduçäo desta metodologia de baixo custo e fácil execuçäo poderátrazer contribuiçöes úteis a histotecnologia com objetivos diagnósticos e em pesquisa.

Efeito da concentraçäo do soro sobre a sensibilidade e a especificidade da reaçäo de soroaglutinaçäo microscópica aplicada ao diagnóstico da leptospirose suína, tendo como antígeno a L. biflexa estirpe Buenos Aires / The influence of serum concentration on the sensitivity and specificity of the microscopic aglutination test, using the L. biflexa, Buenos Aires strain, as antigen for diagnosing swine leptospirosis

Foi estudada a influência da variável concentraçäo de soro sobre os resultados da reaçäo de soroaglutinaçäo microscópica (SAM) aplicada ao exame de grupos de suínos controlados. Dos 29 animais utilizados, nove permaneceram como testemunhos (Grupo "A"), dez receberam, durante três dias, água de bebida contaminada por L. biflexa estirpe Buenos Aires (Grupo "B") e dez foram inoculados pela via intraperitoneal com uma estirpe virulenta de L. interrogans sorotipo pomona (Grupo "C"). As amostras de soro examinadas foram obtidas no 5§, 15§m 30§, 39§ e 51§ dia da investigaçäo, perfazendo um total de 145 amostras. Os soros foram examinados nas diluiç*es de 1:10; 1:40; 1:80 e 1:100. A análise dos resultados considerou como especificidade absoluta o percentual de resultados negativos no grupo "A" e como sensibilidade absoluta o percentual de resultados positivos obtidos no grupo "C". Os resultados obtidos demonstratam que a medida em que se aumentou a concentraçäo do soro houve concomitentemente um aumento na sensibilidade e uma diminuiçäo na especificidade dos resultados obtidos com o antígeno de L biflexa estirpe Buenos Aires. Para este antígeno o maior valor encontrado simultaneamente para as características de sensibilidade e de especificidade foi o de 60% na diluiçäo do soro de 1:20.

Fentiazaco em amigdalite aguda / Fentiazac in acute tonsillitis

Foram estudados 60 pacientes com amigdalite aguda eritêmato-pultácea, distribuídos randomicamente de forma duplo-cega em dois grupos. Um grupo com 31 pacientes recebeu fentiazaco 200 mg, duas vezes ao dia por sete dias e outro grupo com 29 pacientes recebeu placebo nas mesmas condiçöes. Todos os pacientes receberam benzilpenicilina benzatina como única medicaçäo antimicrobiana no primeiro dia de tratamento em dose única, intra-muscular. Todos os pacientes foram avaliados no pré-tratamento e três e sete dias após. Noventa e cinco (95%) de todos os pacientes apresentaram cura clínica após sete dias de tratamento, sendo 100% no grupo fentiazaco e 89,66% no placebo. Houve melhora estatisticamente significante para o grupo do fentiazaco em relaçäo ao grupo placebo para o edema, hiperemia e dor de garganta. Os autores discutem aspectos de etiologia e tratamento da amigdalite aguda eritêmato-pultácea

Avaliaçäo da eficiência de estirpes de Leptospira biflexa no diagnóstico sorológico de triagem da leptospirose animal / Efficiency evaluation of leptospira biflexa strains on screening serological diagnosis of the animal leptospirosis

Avaliou-se a eficiência de estirpes de Leptospira biflexa, como antígenos na técnica de soroaglutinaçäo microscópica (SAM), para diagnóstico de triagem da leptospirose animal. Foi selecionado um total de 559 soros das espécies bovina, suína, bubalina, equina e canina; de animais provenientes na sua maioria de rebanhos problemas e/ou de casos suspeitos da doença. Esses soros foram inicialmente submetidos a SAM com 20 sorotipos de Leptospira interrogans e posteriormente com as estirpes Buenos Aires, Patoc-1, Rufino e Säo Paulo. Foram determinados os índices de sensibilidade, especificidade, concordância, valores preditivos do positivo e do negativo e resultados falsos. As estirpes aquicolas estudadas näo se mostraram eficientes para serem recomendadas como antígeno único ou em conjunto, para diagnóstico de triagem da leptospirose animal

Isolamento de Leptospiras a partir do tecido renal de hamsters experimentalmente infectados com Leptospira interrogans sorotipo pomona: emprego das tecnicas da pipeta Pasteur e a das diluiçöes seriadas em meio de cultura de Fletcher tratado com ... / Isolation of Leptospires from the renal tissues of hamsters experimentally infected by leptospira interrogans servar pomona: use of the Pasteur pipette and the serial dilution techniques and their cultivation in Fletcher-s medium added with ...

Com o objetivo de estudar comparativamente os métodos de isolamento de leptospiras, através das técnicas da pipeta Pasteur e a das deluiçöes seriadas, em meio de cultura de Fletcher tratado com os antimicrobianos 5-fluoruracil (5-FU) na concentraçäo de 100 microgramas por mililitro ou o sulfato de neomicina na concentraçäo de 2,5 microgramas por mililitro, foram examinados 60 pares de rins obtidos de hamsters jovens, experimentalmente inoculados com estirpes virulentas de leptospira interrogans sorotipo pomona. Os trinta animais do grupo "A" foram inoculados com uma estirpe que apresenta 39 passagens em hamsters. O grupo "B" foi constituido por outros trinta animais inoculados com a estirpe que contemplava apenas duas passagens em hamsters. Decorridos três a sete dias da inoculaçäo, todos os animais vieram a óbito ou foram sacrificados em estado gônico. Nesta oportunidade, a existência de leptpospiras em todos os rins processados foi confirmada por pelo menos um de três métodos utilizados para a visualizaçäo do agente: exame direto e, microscopia de campo escuro, coloraçäo de Levaditi, e a reaçäo de imunofluorescência direta. Segundo estas técnicas, os materiais provenientes do grupo "A" foram caracterizados como apresentados maior riqueza em Leptospiras do que aqueles originários do grupo "B". Os resultados das provas culturais variaram conforme a estirpe de leptospira utilizada. Para o grupo "A" o método de isolamento mais sensivel foi a técnica das diluiçöes seriadas em meio tratado com o 5-Fu. Para o grupo "B" as diferenças observadas entre as técnicas ensaiadas foram desprovidas de valor estatistico ao nivel de significância adotado (alfa = 0,05), no entanto, o meio tratado com o 5-FU foi o que apresentou o melhor comportamento: p < 0,001 e p = 0,024, respectivamente para as técnicas da pipeta Pasteur e a das diluiçöes seriadas

An immunohistochemic assay to localize leptospires in tissue specimens

Os autores apresentam uma técnica de imunoperoxidase para a identificaçäo de leptospiras em cortes de rim fixados em formol e emblocados em parafina. A variante metodológica inclui a utilizaçäo do complexo peroxidase-antiperoxidase, conferindo alta sensibilidade à reaçäo. Säo, ainda, discutidas algumas possíveis aplicaçöes do método ao estudo do acometimento renal na leptospirose

Leptospira biflexa sorotipo ranarum isolado de feto abortado de equino / Leptospira biflexa serotype ranarum isolated from aborted equine fetus

É relatado o isolamento do sorotipo ranarum, pertencente ao grupo de leptospiras saprófitas, de feto abortado de eqüino. Provavelmente é o primeiro isolamento dessa variedade sorológica a partir de um animal de sangue quente. Aspectos taxonômicos entre leptospiras patogênicas e näo patogênicas säo discutidos

Salmonelose associada à esquistossomose mansônica hepato-esplênica: açäo do praziquantel / Salmonellosis associated with hepatosplenic schistosomiasis mansoni: effect of the praziquantel

Cinco pacientes portadores de esquistossomose mansônica hépato-esplênica, associada à salmonelose, foram tratados com dose única de praziquantel (60 mg/kg peso), havendo desaparecimento da hipertermia do 1§ ao 3§ dia após a terapêutica e cura clínica subseqüente da salmonelose e da esquistossomose. O estudo da sensibilidade "in vitro" das bactérias isoladas: Salmonella minnesota, Salmonella dublin, Salmonella panama e Salmonella typhi (2 pacientes) näo mostrou açäo direta do praziquantel sobre tais esterobactérias. Os soros coletados antes e 24 horas após o tratamento näo foram capazes de inibir o crescimento das bactérias isoladas dos respectivos pacientes