Producción y caracterización de anticuerpos monoclonales específicos para la toxina de vibrio cholerae 01: informe preliminar

El vibrio cholerae es el agente causal de la enfermedad del cólera. El serotipo 01 puede ser subdividido en los biotipos el tor y clásico. En el diagnóstico de la enfermedad del cólera se utilizan kits comerciales con el uso de anticuerpos monoclonales (AM), éstos existen a nivel mundial, pero el país no cuenta todavía con un centro de elaboración y mantenimiento de producción de AM, por lo que se propuso la creación de un centro de elaboración de anticuerpos monoclonales. En este informe preliminar mencionamos la producción y caracterización de AM contra la toxina colérica (TC) para lo que se utilizó como antígeno el extracto total del V. cholerae 01 (AC). La purificación se realizó mediante cromatografía de afinidad...

Spontaneous cytokine gene expression by cultured skin fibroblasts of systemic sclerosis. Correlation with collagen synthesis

Objetivo. Investigar la expresión espóntanea de los genes de citocinas en fibroblastos de pacientes con esclerosis generalizada progresiva y correlacionarla con la producción de colágena. Métodos. Los fibroblastos se obtuvieron de biopsias de piel de nueve pacientes con diagnóstico de esclerosis generalizada progresiva (duración de la enfermedad, media 16 ñ 8.7 años) y diez sujetos controles. La expresión de los genes de citocinas fue detectada mediante transcriptasa reversa seguida de la reacción en cadena de polimerasa para las interleucinas (IL) IL-1 beta, IL-6, IL-8, factor de necrosis tumoral-alfa, factor transformador de crecimiento-beta. Además, se midió la síntesis de colágena mediante incorporación de prolina [14C] en los cultivos de fibroblastos. Resultados. Todos los fibroblastos de pacientes expresaron el gen de la IL-8 (p=0.02 comparado con los controles). Cuatro de ellos expresaron el gen del factor transformador de crecimiento-beta y dos expresaron débilmente el gen del factor de necrosis tumoral-alfa. Solamente un paciente expresó el gen de la IL-1 beta. La producción de colágena fue mayor en fibroblastos de pacientes con esclerosis generalizada progresiva (p=0.028) comparados con los controles. Hubo correlación entre la expresión de los genes de la IL-6 y la producción de colágena (rs=1). Conclusiones. La mayor expresión constitutiva de los genes de la IL-6 y de la IL-8 por los fibroblastos puede desempeñar un papel importante en la perpetuación de la regulación inmune alterada y en la activación permanente del fibroblasto en sitio de lesión de los pacientes con esclerosis generalizada progresiva de larga evolución

Apoptosis en infección bacteriana in vitro / Apoptosis in in vivo bacterial infection

La muerte celular programada o apoptosis es un mecanismo importante en la homeostasis y desarrollo de organismos multicelulares. La necrosis y la apoptosis son dos formas de muerte celular; la primera es un proceso pasivo, en contrarse con la segunda, que es un proceso activo, resultado de un programa genético; estos dos tipos de muerte también se distinguen por cambios morfológicos. Hay evidencias de que existe un programa genético de la muerte celular programada, y el nematodo Caenorhabditis elegans ha sido el instrumento para demostrarlo. Hay genes que son necesarios para inhibir o bloquear la apoptosis y se han identificado por lo menos doce. También otras moléculas son indispensables para inducir la apoptosis y, recientemente, se ha demostrado que las bacterias puedan provocar la apoptosis. A pesar de que en las células huésped no se ha demostrado la expresión o inhibición de algún gen, se han propuesto cuatro modelos hipotéticos para que las bacterias y/o toxinas induzcan apoptosis en las células huésped, a saber: activación o mimetización de segundos mensajeros, efecto directo tóxico y que el microorganismo interfiera con señales constitutivas de sobrevivencia. La primera bacteria implicada fue la Shigella flexneri, causante de disentería, cuyos mecanismos de activación no se conocen, aunque se han propuesto por lo menos tres. También se ha demostrado que la Bordetella pertussis, patógeno de la tor ferina, considerada inicialmente como una bacteria extracelular, es capaz de invadir a macrófagos alveolares y otras células. Esta invasión intracelular es mediada por la expresión del gen vir; esta bacteria también induce apoptosis. Por otro lado, las bacterias extracelulares liberan toxinas, que, dentro de la célula huésped, inducen apoptosis. Hay por lo menos tres mecanismos por medio de los cuales las exotoxinas ingresan a las células. La forma como producen apoptosis es desconocida, pero se ha especulado que la ADP ribosilación del factor 2 de elongación (EF-2) es requerida para la fragmentación del ADN, como es el caso de la toxina diftérica (TXD) y la toxina A de la Pseudomonas aeruginosa (PEA). Otras toxinas, como son la leucotoxina del Actinobacillus actinomycetemcomitans y la toxina Shiga de la Shigella dysenteriae, también producen fragmentación del ADN y cambios morfológicos de la Célula huésped. Recientemente se ha reportado que la toxina A de Clostridium difficile induce apoptosis en células cebadas de rata. Así mismo, lipopéptidos sintéticos bacterianos y superantígenos bacterianos son capaces de inducir apoptosis (este último in vivo). La inducción de apoptosis por microorganismos intracelulares puede ser un mecanismo importante de citotoxicidad y una vía efectiva para que éstos combatan eficazmente a las células del sistema inmune, lo que podría contribuir a la patogénesis de las enfermedades causadas por estos microorganismos.