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1.
J. appl. oral sci ; 29: e20210038, 2021. tab, graf
Article in English | LILACS | ID: biblio-1340106

ABSTRACT

Abstract Potent signaling agents stimulate and guide pulp tissue regeneration, especially in endodontic treatment of teeth with incomplete root formation. Objective This study evaluated the bioactive properties of low concentrations of extracellular matrix proteins on human apical papilla cells (hAPCs). Methodology Different concentrations (1, 5, and 10 µg/mL) of fibronectin (FN), laminin (LM), and type I collagen (COL) were applied to the bottom of non-treated wells of sterilized 96-well plates. Non-treated and pre-treated wells were used as negative (NC) and positive (PC) controls. After seeding the hAPCs (5×103 cells/well) on the different substrates, we assessed the following parameters: adhesion, proliferation, spreading, total collagen/type I collagen synthesis and gene expression (ITGA5, ITGAV, COL1A1, COL3A1) (ANOVA/Tukey; α=0.05). Results We observed greater attachment potential for cells on the FN substrate, with the effect depending on concentration. Concentrations of 5 and 10 µg/mL of FN yielded the highest cell proliferation, spreading and collagen synthesis values with 10 µg/mL concentration increasing the ITGA5, ITGAV, and COL1A1 expression compared with PC. LM (5 and 10 µg/mL) showed higher bioactivity values than NC, but those were lower than PC, and COL showed no bioactivity at all. Conclusion We conclude that FN at 10 µg/mL concentration exerted the most intense bioactive effects on hAPCs.


Subject(s)
Humans , Extracellular Matrix Proteins , Fibronectins , Cell Adhesion , Cells, Cultured , Laminin , Collagen Type I , Extracellular Matrix
2.
Braz. dent. j ; 31(3): 304-309, May-June 2020. graf
Article in English | LILACS, BBO | ID: biblio-1132294

ABSTRACT

Abstract Among other factors, types of bisphosphonates and treatment regimens seem to be strongly associated with the success or failure of installation of osseointegrated implants. This study investigated the influence of two bisphosphonates, sodium alendronate (SA) and zoledronic acid (ZA), on the metabolism of osteoblasts. Human osteoblasts (Saos-2) were seeded onto machined or acid-treated titanium discs previously placed on 24-well plates in complete culture medium. After 24 h, cells were exposed to bisphosphonates at 0.5, 1 or 5 µM for 24 h, 48 h or 7 days. The effects of SA and ZA on osteoblasts were assessed based on the adhesion of these cells to the titanium surfaces by direct fluorescence, cell viability, total protein and collagen synthesis. Alkaline phosphatase activity and mineral nodule deposition by these cells were also evaluated. Data were evaluated by ANOVA and Tukey tests (α=0.05). Decreased adhesion of cells to the titanium discs was observed when exposed to both bisphosphonates; however, this lack of cell adhesion was more evident for ZA-treated cells. In addition, the exposure of osteoblasts to ZA decreased the viability, ALP activity and mineral nodule deposition, which may be related to poor osseointegration after implant installation.


Resumo Entre outros fatores, os tipos de bisfosfonatos bem como os regimes de tratamento parecem estar diretamente associados com o sucesso ou falhas na instalação de implantes osseointegrados. Este estudo avaliou a influência de dois bisfosfonatos, o alendronato de sódio (AS) e o ácido zoledrônico (AZ), no metabolismo de osteoblastos. Osteoblastos humanos (Saos-2) foram cultivados sobre discos de titânio polidos ou submetidos a tratamento ácido superficial, previamente alocados em placas de 24 compartimentos, utilizando meio de cultura completo. Após 24 horas, as células foram expostas aos bisfosfonatos, nas concentrações de 0,5, 1 ou 5 µM, por 24 h, 48 h, ou 7 dias. Os efeitos do AZ e AZ sobre os osteoblastos foram determinados considerando a adesão destas células às superfícies de titânio, por meio de fluorescência direta, a viabilidade celular, produção de proteína total e síntese de colágeno. A atividade de fosfatase alcalina e a deposição de nódulos mineralizados também foram avaliadas. Os dados foram analisados por meio do teste ANOVA complementado por Tukey (α = 0.05). Menor adesão dos osteoblastos foi observada quando estas células foram expostas a ambos os bisfosfonatos, porém, esta falha na adesão foi mais evidente para as células tratadas com AZ. Além disso, a exposição dos osteoblastos ao AZ também resultou em diminuição da viabilidade, atividade de ALP e deposição de nódulos mineralizados, o que pode estar relacionado a uma pobre osseointegração após a instalação do implante.


Subject(s)
Humans , Titanium , Diphosphonates , Osteoblasts , Surface Properties , Cell Adhesion , Cell Differentiation , Cells, Cultured , Cell Proliferation , Alkaline Phosphatase , Zoledronic Acid
3.
J. appl. oral sci ; 27: e20180453, 2019. graf
Article in English | LILACS, BBO | ID: biblio-1012522

ABSTRACT

Abstract Objective This study was designed for the chemical activation of a 35% hydrogen peroxide (H2O2) bleaching gel to increase its whitening effectiveness and reduce its toxicity. Methodology First, the bleaching gel - associated or not with ferrous sulfate (FS), manganese chloride (MC), peroxidase (PR), or catalase (CT) - was applied (3x 15 min) to enamel/dentin discs adapted to artificial pulp chambers. Then, odontoblast-like MDPC-23 cells were exposed for 1 h to the extracts (culture medium + components released from the product), for the assessment of viability (MTT assay) and oxidative stress (H2DCFDA). Residual H2O2 and bleaching effectiveness (DE) were also evaluated. Data were analyzed with one-way ANOVA complemented with Tukey's test (n=8. p<0.05). Results All chemically activated groups minimized MDPC-23 oxidative stress generation; however, significantly higher cell viability was detected for MC, PR, and CT than for plain 35% H2O2 gel. Nevertheless, FS, MC, PR, and CT reduced the amount of residual H2O2 and increased bleaching effectiveness. Conclusion Chemical activation of 35% H2O2 gel with MC, PR, and CT minimized residual H2O2 and pulp cell toxicity; but PR duplicated the whitening potential of the bleaching gel after a single 45-minute session.


Subject(s)
Tooth Bleaching/methods , Tooth Bleaching Agents/toxicity , Tooth Bleaching Agents/chemistry , Hydrogen Peroxide/toxicity , Hydrogen Peroxide/chemistry , Reference Values , Time Factors , Ferrous Compounds/chemistry , Catalase/chemistry , Cell Survival , Cells, Cultured , Chlorides/chemistry , Reproducibility of Results , Analysis of Variance , Manganese Compounds/chemistry , Color , Peroxidase/chemistry , Statistics, Nonparametric , Dental Pulp/chemistry , Dental Pulp/diagnostic imaging , Dentin/drug effects , Dentin/chemistry , Odontoblasts/drug effects
4.
ROBRAC ; 27(80): 6-12, jan./mar. 2018. graf
Article in Portuguese | LILACS-Express | LILACS | ID: biblio-906165

ABSTRACT

Objetivo: Avaliar a citotoxicidade de um gel clareador contendo 10% de peróxido de hidrogênio (H2O2), aplicado sobre discos de esmalte/dentina simulando diferentes espessuras dentais. Material e método: Discos com 2,3; 3,5; e 4,0 mm de espessura foram obtidos para simular incisivos centrais inferiores, incisivos centrais superiores e segundos pré-molares superiores, respectivamente. Para cada espessura, o gel com 10% de H2O2 foi aplicado sobre o esmalte por 3x 15 min, 1x 15 min ou 1x 5 min. O protocolo 35% H2O2 3x 15 min foi empregado como controle positivo (CP), e nenhum tratamento foi realizado no controle negativo (CN). Células odontoblastóides MDPC-23 foram expostas por 1 h aos componentes da difusão trans-amelodentinária coletados imediatamente após o clareamento, sendo realizada análise da viabilidade celular, estresse oxidativo, deposição de nódulos de mineralização, bem como a quantificação da difusão de H2O2 pelos discos. Resultados: O gel com 10% de H2O2 não promoveu redução significativa da viabilidade celular em relação ao CN para todos os protocolos e espessuras testadas, resultando em valores de difusão de H2O2 significativamente inferiores ao CP. Apenas o protocolo 10% 3x 15 min aplicado sobre os discos simulando incisivos promoveu aumento no estresse oxidativo e reduziu a deposição de nódulos de mineralização em relação ao CN; porém, estes efeitos foram significativamente inferiores ao CP. Conclusão: De acordo com a metodologia usada neste estudo, foi possível concluir que, independente da espessura dental, a aplicação de um gel clareador com 10% de H2O2 por 5-45 min sobre o esmalte causa limitado efeito citotóxico sobre células pulpares.


Objective: To evaluate the cytotoxicity of a bleaching gel with 10% hydrogen peroxide (H2O2) applied onto enamel/dentin discs simulating different dental thicknesses. Material and methods: Discs with 2.3; 3.5; and 4.0 mm thickness were obtained to simulate low central incisors, upper central incisors and upper second pre-molars, respectively. For each thickness, the 10% H2O2 gel was applied for 3x 15 min, 1x 15 min or 1x 5 min. A gel with 35% H2O2 applied for 3x 15 min was used as positive control (PC) and no treatment was performed in negative control (NC). Odontoblast- like MDPC-23 cells were exposed for 1 h to the transenamel and trans-dentinal components collected immediately after bleaching. Cell viability, oxidative stress and mineralized nodule deposition were assessed as well as the quantification of H2O2 diffused through the discs. Results: The 10% H2O2 gel did not promote significant reduction on cell viability in comparison to NC for all tested protocols and thicknesses, resulting in H2O2 diffusion values significantly lower than PC. Only the protocol 10% H2O2 3x 15 min applied onto discs simulating incisors increased significantly the oxidative stress and reduced mineralized nodule deposition compared to NC; however, these effects were significantly lower than PC. Conclusion: According to the methodology employed in this laboratorial study, the application of a bleaching gel with 10% H2O2 for 5-45 min onto dental structure featured limited cytotoxicity to pulp cells, disregarding the enamel/dentin thicknesses.

5.
ROBRAC ; 26(77): 37-42, abr./jun. 2017. graf
Article in Portuguese | LILACS-Express | LILACS | ID: biblio-875370

ABSTRACT

Objetivo: Avaliar a citotoxicidade de um agente clareador contendo 2% de gluconato de cálcio (GC) sobre células pulpares humanas (HDPCs). Materiais e Métodos: Discos de esmalte-dentina adaptados em câmaras pulpares artificiais (CPAs) foram posicionados em compartimentos de forma que a dentina permaneceu imersa em meio de cultura, enquanto que o esmalte foi submetido ao clareamento com géis a 20% de H2O2 contendo ou não GC, durante 1x 45, 1x15 ou 1x5 minutos. No controle positivo foi realizado clareamento com 35% de H2O2 aplicado por 1x 45 minutos, sendo que no controle negativo nenhum tratamento foi realizado sobre o esmalte. A viabilidade celular (teste do MTT) e a difusão trans-amelodentinária de H2O2 (violeta leuco- -cristal/peroxidase) foram avaliadas (ANOVA/Tukey α = 5%; n = 8). Resultados: Foi observada redução significativa na viabilidade celular em todos os grupos clareados quando comparados ao controle negativo (p < 0,05); no entanto, os grupos expostos aos géis contendo 20% de H2O2, com ou sem GC, apresentaram valores de viabilidade celular significativamente superiores ao controle positivo (p < 0,05). A redução da viabilidade celular e a difusão de H2O2 residual para os grupos clareados com 20% de H2O2 foi proporcional ao tempo de contato dos produtos com a superfície dental, sendo que a presença de GC resultou em minimização significativo do efeito tóxico/difusão de H2O2 para os protocolos 1x 15 e 1x 5 min (p < 0,05). Conclusão: A presença de 2% de GC nos géis com 20% de H2O2 resulta em redução da difusão de H2O2 residual pela estrutura dental e do efeito citotóxico sobre células pulpares humanas, quando o produto é aplicado por curtos períodos sobre a superfície dental.


Objective: To evaluate the cytotoxicity of a bleaching agent containing 2% calcium gluconate (CG) on human pulp cells (HDPCs). Materials and Methods: Enamel-dentin disks adapted in artificial pulp chambers (CPAs) were placed in compartments so that dentin remained immersed in culture medium, while the enamel was subjected to bleaching with 20% H2O2 gels containing or not CG for 1x 45, 1x15 or 1x5 minutes. In the positive control, bleaching was performed with 35% H2O2 applied for 1x 45 minutes, and in the negative control no treatment was performed on the enamel. Cell viability (MTT test) and transenamel and trans-dentinal diffusion of H2O2 (leuco-crystal violet / peroxidase) were evaluated (ANOVA / Tukey α = 5%, n = 8). Results: A significant reduction in cell viability was observed in all bleached groups when compared to the negative control (p <0.05); However, groups exposed to gels containing 20% H2O2, with or without CG, had significantly higher values of cell viability than the positive control (p <0.05). The reduction of cell viability and the diffusion of residual H2O2 to the bleached groups with 20% H2O2 was proportional to the contact time of the products with the dental surface, and the presence of CG resulted in a significant minimization of the toxic /diffusion effect of H2O2 For the 1x15 and 1x5min protocols (p <0.05). Conclusion: The presence of 2% GC in gels with 20% H2O2 results in reduction of residual H2O2 diffusion by dental structure and cytotoxic effect on human pulp cells when the product is applied for short periods on the dental surface.

6.
Braz. dent. j ; 28(2): 165-171, mar.-Apr. 2017. tab, graf
Article in English | LILACS | ID: biblio-839141

ABSTRACT

Abstract The aim of the present study was to evaluate the cytotoxicity of root canal sealers under conditions closely resembling a clinical reality. A primary human fibroblast cell line was seeded in 24-well acrylic plates with Dulbecco’s modified Eagle’s medium supplemented with 10% serum fetal bovine (SFB) and incubated for 24 h. Root canals from premolars were filled and individually attached to nylon devices to be stabilized in the wells with the already seeded cells. Specimens were divided into groups as follows: Control: gutta-percha cones (GPC); AH Plus+GPC; Sealapex+GPC; MTA Fillapex+GPC and Endofill+GPC. After 24 and 48 h, cell viability and morphology were evaluated by MTT assay and scanning electron microscopy (SEM), respectively. Statistical analysis was performed by Mann-Whitney test, complemented by Kruskal Wallis test (p<0.05). Only Endofill presented cytotoxicity after 24 h. MTA Fillapex and Endofill reduced the production of succinic desidrogenase after 48 h. AH Plus was non-toxic at any time point. SEM showed that the AH Plus and MTA Fillapex groups presented fibroblasts with morphology close to the control group, while the Endofill group presented few cells with thin extensions cells. The present study showed that good results were present in AH Plus and Sealapex, but not the Endofill group after 48 h. The method used enabled evaluation of the cytotoxicity of the studied sealers that diffused through the root apex.


Resumo O objetivo do presente estudo foi avaliar a citotoxicidade dos cimentos dos canais radiculares em condições próximas à realidade clinica. Uma linhagem primária de fibrolastos humanos foi semeada em placas acrílicas de 24-poços com meio de cultura Dulbecco’s modified Eagle’s medium suplementado com 10% de soro fetal bovino e incubados por 24 h. Os canais radiculares de pré-molares foram obturados e individualmente adaptados aos dispositivos de nylon para serem estabilizados nos poços com as células já semeadas. Amostras foram dividas de acordo com os grupos: Controle: cones de gutta-percha (CGP); AH Plus+CGP; Sealapex+CGP; MTA Fillapex+CGP e Endofill+CGP. Após 24 e 48 h, a viabilidade e a morfologia celular foram avaliadas pelo ensaio de MTT e microscopia eletrônica de varredura (MEV), respectivamente. Análises estatísticas foram realizadas pelo teste de Mann-Whitney, complementadas por Kruskal Wallis (p<0,05). Apenas o Endofill apresentou citotoxicidade após 24 h. MTA Fillapex e Endofill reduziram a produção da enzima desidrogenase succinica após 48 h. AH Plus não apresentou toxicidade em nenhum momento. MEV mostrou que os grupos AH Plus e o MTA Fillapex apresentaram fibroblastos com morfologia próxima ao grupo controle, enquanto que o grupo do Endofill apresentou poucas células com finos prolongamentos. O presente estudo demonstrou que resultados satisfatórios foram apresentados nos grupos AH Plus e Sealapex, mas não para o Endofill após 48 h. O método utilizado permitiu avaliar a citotoxicidade dos cimentos que se difundem pelo ápice radicular.


Subject(s)
Humans , Root Canal Filling Materials/toxicity , Tooth Root/drug effects , Models, Biological , In Vitro Techniques , Microscopy, Electron, Scanning , Cell Line , Culture Media
7.
Braz. dent. j ; 28(1): 57-64, Jan.-Feb. 2017. tab, graf
Article in English | LILACS | ID: biblio-839113

ABSTRACT

Abstract This study aimed to evaluate the cytotoxicity of a calcium aluminate cement (EndoBinder) containing different radiopacifiers, Bi2O3, ZnO or ZrO2, compared with Mineral Trioxide Aggregate (MTA). According to ISO 10993-12:2012 (E) recommendations, 0.2 g of each cement were applied in transwell inserts and placed in 24-well culture plates containing 1 mL of culture medium (DMEM). After 24 h of incubation, the extracts (DMEM containing components released from the cements) were applied to immortalized odontoblast-like MDPC-23 cells. Cell viability (MTT test), alkaline phosphatase activity (ALP), total protein production and cell morphology (Scanning Electron Microscopy - SEM) were evaluated. The volume of 50 µL of extract was used to determine the chemical elements released by the cements using Energy Dispersive Spectroscopy (EDS). The following groups were established (n=6): NC - negative control (without treatment); EB - EndoBinder without radiopacifier; EBBO - EndoBinder+Bi2O3; EBZnO - EndoBinder+ZnO; EBZrO - EndoBinder+ZrO2 and WMTA - White MTA. Data were subjected to statistical analysis (Kruskal-Wallis test, level of significance=5%). Cells exposed to the different versions of EndoBinder presented small reduction in viability, total protein production and ALP activity, with values similar to the NC and WMTA groups (p>0.05). Different elements (C, O, Na, Al, P, Si, Cl, Bi, K) released by the cements were detected in the extracts. However, the cells had no significant changes in their morphology. EndoBinder and MTA did not affect negatively the metabolism of the odontoblastic-like cells, showing it to be cytocompatible, irrespective of the used radiopacifier.


Resumo Este estudo avaliou a citotoxicidade de um cimento de aluminato de cálcio (EndoBinder) contendo diferentes radiopacificadores, Bi2O3, ZnO ou ZrO2, comparativamente ao trióxido mineral agregado (MTA). Seguindo a norma ISO 10993-12:2012 (E), 0,2 g de cada cimento foi aplicada em insertos transwell, que foram colocados em placas de cultura de 24 wells contendo 1 mL de meio de cultura (DMEM). Após 24 h de incubação, os extratos (DMEM contendo componentes liberados dos cimentos) foram aplicados sobre células pulpares imortalizadas MDPC-23. Viabilidade celular (teste de MTT), atividade da fosfatase alcalina (ALP), produção de proteína total e a morfologia das células (Microscópio Eletrônico de Varredura - MEV) foram avaliadas. Um volume de 50 µL do extrato foi utilizado para determinar, através de Espectroscopia de Energia Dispersiva (EDS), os elementos químicos liberados pelos cimentos. Os seguintes grupos foram estabelecidos (n=6): NC - controle negativo (sem tratamento); EB - EndoBinder sem radiopacificador; EBBO - EndoBinder+Bi2O3; EBZnO - EndoBinder+ZnO; EBZrO - EndoBinder+ZrO2 e WMTA - MTA branco. Os dados foram submetidos à análise estatística (teste de Kruskal-Wallis, nível de significância=5%). Células expostas às diferentes versões de EndoBinder apresentaram pequena redução na viabilidade, produção de proteína total e atividade da ALP, com valores semelhantes aos grupos NC e WMTA (p>0,05). Diversos elementos (C, O, Na, Al, P, Si, Cl, Bi, K) liberados pelos cimentos foram detectados nos extratos. Entretanto, as células não apresentaram alterações significativas em sua morfologia. EndoBinder e MTA, não afetaram negativamente o metabolismo das células odontoblastóides, mostrando-se citocompatíveis, independente do radiopacificador utilizado.


Subject(s)
Animals , Calcium Compounds/toxicity , Aluminum Compounds/toxicity , Dental Cements/toxicity , Oxides/toxicity , Spectrometry, X-Ray Emission , Cell Line, Transformed , Microscopy, Electron, Scanning , Cell Survival/drug effects , Silicates/toxicity , Drug Combinations
8.
Rev. bras. ciênc. saúde ; 21(2): 133-138, 2017. tab, ilus
Article in Portuguese | LILACS | ID: biblio-970116

ABSTRACT

Introdução: A candidose oral é uma infecção fúngica que se manifesta frequentemente em pacientes imunocomprometidos ou naqueles que fazem uso de prótese dental removível, associada a hábitos de higiene deficitários. Antifúngicos sintéticos, a exemplo do fluconazol, são utilizados no tratamento desta infecção; entretanto algumas cepas apresentam resistência a estes fármacos. Objetivo: Este estudo avaliou o efeito antifúngico dos óleos essenciais de Persea americana (abacate), Cinnamomumzeylanicum (canela ­ folha), Cinnamomumcassia (canela ­ casca) e Cymbopogonwinterianus (citronela), frente à Candidaglabrata. Material e Métodos: O screening da atividade antifúngica dos óleos foi determinado por difusão em meio sólido, utilizando um inóculofúngico ajustado em 1 × 106 UFC/mL. A Concentração Inibitória Mínima (CIM) foi determinada pela técnica da microdiluição. Os óleos essenciais foram avaliados em concentrações entre 1000 µg/mL e 7,81 µg/mL, enquanto que os fármacos Fluconazol e Nistatina foram avaliados nas concentrações que entre 64 µg/mL e 0,5 µg/mL. Resultados: Os halos de inibição mensurados variaram entre 8,2 e 9,2 mm de diâmetro, respectivamente para C. winterianuse C. cassia.Os óleos essenciais de C. winterianuse C. zeylanicumapresentaram CIM de 125 µg/mL, enquanto a CIM de C. cassiafoi 62,5 µg/mL. A CIM dos fármacos utilizados como controle foram estabelecidasem 16 µg/mL(fluconazol) e 2,0 µg/mL(nistatina). O óleo essencial de P. americana não apresentou atividade antifúngica nas concentrações avaliadas. Conclusão: Conclui-se que os óleos essenciais de canela (casca e folha) e citronela apresentaram atividade antifúngica frente a cepa de C. glabrataresistente a fluconazol. (AU)


Introduction: Oral candidiasis is a fungal infection diagnosed mainly in patients with immunosuppression or in denture wearers with deficient hygiene habits. Synthetic antifungal agents, such as fluconazole, have been used to treat this infection, but some strains are resistant to these drugs. Objective: This study aimed to evaluate the antifungal effect of the essential oils from Persia americana (avocado), Cinnamomum zeylanicum (cinnamon - leaf), Cinnamomum cassia (cinnamon - bark) and Cymbopogon winterianus (citronella) against Candida glabrata. Materials and Methods: The essential oils were screened for their antifungal activity using the solid medium diffusion method, with fungal inoculum adjusted to 1 x 106 CFU/mL. The Minimum Inhibitory Concentration (MIC) was determined by the microdilution technique. The essential oils were evaluated at concentrations ranging between 1,000 µg/mL and 7.81 µg/mL, while fluconazole and nystatin were evaluated at concentrations between 64 µg/mL and 0.5 µg/ mL. Results: The zones of inhibition measured varied between 8.2 and 9.2 mm diameter for C. winterianus and C. cassia, respectively. The essential oils from C. winterianusand and C. zeylanicum had MIC of 125 µg/ml, while C. cassia essential oil had MIC of 62.5 µg/ml. The drugs used as controls showed MIC values of 16 µg/mL (fluconazole) and 2.0 µg/mL (nystatin). P. americana essential oil showed no antifungal activity at the concentrations evaluated. Conclusion: We conclude that the essential oils from cinnamon (bark and leaf) and citronella showed antifungal activity against fluconazole-resistant C. glabrata. (AU)


Subject(s)
Humans , Candida , Phytotherapy , Products with Antimicrobial Action
9.
Braz. dent. j ; 27(5): 485-491, Sept.-Oct. 2016. graf
Article in English | LILACS | ID: biblio-828049

ABSTRACT

Abstract Fibroblasts participate in the wound repair process through proliferation and migration as well as the synthesis of factors growth and extracellular matrix molecules. However, cell aging and the individual himself can lead to reduction of cell functions and consequently, the ability of tissue repair. This study evaluated the activity of gingival fibroblasts from young (Y) and elderly (Y) patients and their responsiveness to tumor necrosis factor alpha (TNF-a). Gingival fibroblasts were isolated from six patients (3Y; and 3E) and seeded in complete culture medium (DMEM). For cell viability analysis, total protein production and collagen synthesis, fibroblasts were cultured in 96-well plates for 24, 48 or 72 h (n=36). Cell responses to TNF-a, was evaluated by application of this cytokine to cultured cells (100 ng/mL) for 24 h, followed by evaluation of reactive oxygen species (ROS), nitric oxide (NO) and CCL5 production (n=36). Data were analyzed by Kruskal-Wallis and the Mann-Whitney U tests (a = 0.05). Viability of E fibroblasts was higher than Y fibroblasts for 24 and 48 h, but these cells showed gradual reduction of viability over the course of time. For Y cells, reduced collagen synthesis was observed at 48 h. No difference was observed in ROS production for both cells after TNF-a exposure. However, both cultures showed increased production of NO and CCL5 in the presence of TNF-a. Functional differences and distinct responsiveness to TNF-a were observed according to patient's age.


Resumo Fibroblastos participam no processo de reparação de ferida através da proliferação e migração, bem como a síntese de fatores de crescimento e moléculas da matriz extracelular. No entanto, o envelhecimento celular e o próprio indivíduo podem levar à redução de funções celulares e, consequentemente, a capacidade de reparação de tecidos. Este estudo avaliou a atividade dos fibroblastos gengivais de pacientes jovens (J) e idosos (I) e sua capacidade de resposta frente ao fator de necrose tumoral alfa (TNF-a). Fibroblastos gengivais foram isolados de seis pacientes (3J e 3I) e semeados em meio de cultura completo (DMEM). Para a análise de viabilidade celular, a produção de proteína total e a síntese de colágeno, fibroblastos foram cultivados em placas de 96 poços, durante 24, 48 ou 72 h (n = 36). Respostas celulares frente ao TNF-a, foram avaliadas por aplicação desta citocina (100 ng/mL) nas células cultivadas durante 24 h, seguida por avaliação de espécies reativas de oxigênio (EROs), produção de óxido nítrico (NO) e produção CCL5 (n= 36). Os dados foram analisados por testes de Kruskal-Wallis e Mann-Whitney U (a = 0,05). A viabilidade de fibroblastos I foi mais elevada do que os fibroblastos J para 24 e 48 h, mas estas células mostraram uma redução gradual de viabilidade ao longo do tempo. Para as células de J, foi observada redução da síntese de colágeno em 48 h. Não foi observada diferença na produção de EROs para ambas as células após exposição ao TNF-a. No entanto, ambas as culturas apresentaram aumento da produção de NO e CCL5 na presença de TNF-a. Diferenças funcionais e alteração na capacidade de resposta ao TNF-a foram observadas de acordo com a idade do paciente.


Subject(s)
Humans , Male , Female , Adult , Middle Aged , Aged , Gingiva/cytology , Fibroblasts/cytology
10.
Braz. dent. j ; 27(4): 375-380, July-Aug. 2016. graf
Article in English | LILACS | ID: lil-794611

ABSTRACT

Abstract Phototherapy has been indicated as an adjunctive treatment for tissue repair, including the pulp tissue. However, there are no defined irradiation parameters, which is a great challenge to the clinical use of phototherapy. The aim of this study was to evaluate the effect of phototherapy with red LED on odontoblast-like MDPC-23 cells, using different parameter settings. Cells were seeded (104 cells/cm²), incubated for 12 h in complete DMEM and then the culture medium was replaced by DMEM supplemented with 0.5% FBS. After 12 h incubation, irradiations were performed (630±10 nm) using a LEDTable device with a 20 or 40 mW/cm² power density and 2 J/cm² energy dose. The cells were irradiated 1 or 3 times, at 1 min intervals. Non-irradiated cells served as control. The cells were evaluated for viability (MTT assay), total protein dosage (Lowry method) and number of viable cells (Trypan blue). The data (n=12 per group) were submitted to Kruskal-Wallis and Mann-Whitney tests (p=0.05). A single irradiation with 20 or 40 mW/cm² enhanced cell viability, which was negatively affected after 3 consecutive irradiations. Cells irradiated only once with 20 mW/cm² produced more proteins compared with those irradiated with 40 mW/cm². Reduction in the number of viable cells occurred only after 3 consecutive irradiations with 40 mW/cm². In conclusion, red LED was capable of biomodulating the metabolic activities of cultured MDPC-23 odontoblast-like cells. The best cell biostimulation was obtained when a single irradiation with 2 J/cm2 energy dose and 20 mW/cm2 power density was delivered to the pulp cells.


Resumo Fototerapia tem sido indicada como um tratamento adjuvante para o reparo de tecidos, incluindo o tecido pulpar. Entretanto, não há parâmetros de irradiação definidos, o que representa um grande desafio para o uso clínico da fototerapia. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da fototerapia com LED vermelho em células MDPC-23 com fenótipo odontoblastóide, usando vários parâmetros. As células foram semeadas (104 células/cm2), incubadas por 12 h em DMEM completo e então o meio de cultura foi trocado por DMEM com 0,5% SFB. Após 12 h de incubação, as irradiações foram realizadas (630±10 nm) usando um dispositivo com densidade de potência de 20 ou 40 mW/cm2 e dose de energia de 2 J/cm2. As células foram irradiadas 1 ou 3 vezes, com intervalos de 1 min. Células não irradiadas serviram como controle. Foram avaliadas a viabilidade (ensaio de MTT), dosagem de proteína total (método de Lowry) e número de células viáveis (ensaio de Trypan blue). Os dados (n=12 por grupo) foram submetidos aos testes de Kruskal-Wallis e Mann-Whitney (p=0,05). Uma única irradiação com 20 ou 40 mW/cm2 aumentou a viabilidade celular, a qual foi negativamente afetada após 3 irradiações. Células irradiadas apenas uma vez com 20 mW/cm2 produziram mais proteínas comparadas com aquelas irradiadas com 40 mW/cm2. Redução no número de células viáveis ocorreu apenas após 3 irradiações com 40 mw/cm2. Em conclusão, o LED vermelho foi capaz de biomodular a atividade metabólica de células MDPC-23. A melhor bioestimulação celular foi obtida quando uma única irradiação com dose de energia de 2 J/cm2 e densidade de potência de 20 mW/cm2 foi administrada às células pulpares.


Subject(s)
Humans , Odontoblasts/metabolism , Phototherapy , Cells, Cultured
11.
ROBRAC ; 25(73): 88-93, abr./jun. 2016. tab, ilus
Article in Portuguese | LILACS-Express | LILACS | ID: biblio-875232

ABSTRACT

Objetivo: Avaliar os efeitos citotóxicos de agentes clareadores com diferentes concentrações de PH sobre células odontoblastóides, quando aplicados diretamente sobre a superfície de dentina humana. Material e método: Cinquenta discos de dentina (0,5 mm de espessura) foram adaptados em câmaras pulpares artificiais (CPAs) e células MDPC-23 foram semeadas na superfície pulpar dos discos. Cinco grupos (n=10) foram estabelecidos: G1: 7,5% PH; G2: 20% PH; G3: 35% PH; G4: gel sem PH; G5: DMEN (controle). Os produtos foram aplicados na superfície oclusal dos discos por 2x de 15 minutos. A viabilidade (ensaio de MTT) e a morfologia celular (MEV) foram avaliadas imediatamente após o clareamento. Os dados de viabilidade celular foram submetidos ao teste de Kruskal-Wallis e Mann-Whitney (α=0,05). Resultados: Redução significante na viabilidade celular em relação ao controle (G5) foi observada para todas as concentrações de PH (p<0,05), associada a intensas alterações na morfologia celular. Entretanto, nenhuma diferença significante foi observada entre as três concentrações de PH. Também, não houve diferença estatística entre o grupo controle e o grupo gel sem PH (G5 e G4). Conclusão: Todas as concentrações de PH causaram efeitos citotóxicos de severos sobre as células MDPC-23, quando aplicados diretamente sobre a dentina. Entretanto, a intensidade do efeito tóxico não foi influenciada pela concentração de PH no agente clareador. Relevância clínica: Apesar das limitações deste estudo in vitro, os resultados indicam que o clareamento dental não deve ser realizado diretamente em áreas com exposição da dentina.


Objective: To evaluate the cytotoxic effects of bleaching gels with different concentrations of hydrogen peroxide (HP) on odontoblast-like cells, when applied directly on dentin. Material and method: Fifty dentin discs (0.5 mm thick) were adapted in artificial pulp chambers (APC) and MDPC-23 cells were seed on the pulpal side. The discs were divided into 5 groups (n=10): G1: HP 7.5%; G2: HP 20%; G3: HP 35%; G4: gel with no HP; and G5: no treatment (control). The gels were applied on the occlusal side of the discs for 2x of 15 min. Cellular viability (MTT assay) and morphology (SEM) were analyzed immediately after the bleaching procedure. Data of cellular viability were submitted to Kruskal-Wallis and Mann-Whitney tests (α=0.05). Results: Significant reduction in cellular viability was seen for all HP concentrations in comparison to the control (G5). However, no statistical significant difference was seen among the concentrations of HP. Likewise, there was no statistical difference between the control group (G5) and the group where the gel with no HP was applied (G4). Conclusion: All HP concentrations caused severe cytotoxic effects on the odontoblast-like cells when applied directly on dentin. However, the intensity of the cytotoxic effect was not influenced by the concentration of the HP included in the bleaching gel. Clinical significance: Within the limitations of this in vitro study, the results strongly indicate that dental bleaching procedures should not be performed directly on areas of dentin exposure.

12.
Braz. oral res. (Online) ; 30(1): e54, 2016. graf
Article in English | LILACS | ID: biblio-952061

ABSTRACT

Abstract The development of biomaterials capable of driving dental pulp stem cell differentiation into odontoblast-like cells able to secrete reparative dentin is the goal of current conservative dentistry. In the present investigation, a biomembrane (BM) composed of a chitosan/collagen matrix embedded with calcium-aluminate microparticles was tested. The BM was produced by mixing collagen gel with a chitosan solution (2:1), and then adding bioactive calcium-aluminate cement as the mineral phase. An inert material (polystyrene) was used as the negative control. Human dental pulp cells were seeded onto the surface of certain materials, and the cytocompatibility was evaluated by cell proliferation and cell morphology, assessed after 1, 7, 14 and 28 days in culture. The odontoblastic differentiation was evaluated by measuring alkaline phosphatase (ALP) activity, total protein production, gene expression of DMP-1/DSPP and mineralized nodule deposition. The pulp cells were able to attach onto the BM surface and spread, displaying a faster proliferative rate at initial periods than that of the control cells. The BM also acted on the cells to induce more intense ALP activity, protein production at 14 days, and higher gene expression of DSPP and DMP-1 at 28 days, leading to the deposition of about five times more mineralized matrix than the cells in the control group. Therefore, the experimental biomembrane induced the differentiation of pulp cells into odontoblast-like cells featuring a highly secretory phenotype. This innovative bioactive material can drive other protocols for dental pulp exposure treatment by inducing the regeneration of dentin tissue mediated by resident cells.


Subject(s)
Humans , Stem Cells/drug effects , Biocompatible Materials/pharmacology , Collagen/pharmacology , Calcium Compounds/pharmacology , Aluminum Compounds/pharmacology , Dental Pulp/chemistry , Chitosan/pharmacology , Membranes, Artificial , Time Factors , Biocompatible Materials/chemistry , Microscopy, Electron, Scanning , Gene Expression , Cell Differentiation/drug effects , Cell Survival/drug effects , Cells, Cultured , Reproducibility of Results , Analysis of Variance , Collagen/chemistry , Calcium Compounds/chemistry , Aluminum Compounds/chemistry , Dentin/drug effects , Dentinogenesis , Chitosan/chemistry , Cell Proliferation/drug effects , Alkaline Phosphatase , Odontoblasts/drug effects
13.
Braz. oral res. (Online) ; 30(1): e122, 2016. graf
Article in English | LILACS | ID: biblio-951982

ABSTRACT

Abstract Osteonecrosis of the jaw is an adverse effect of bisphosphonates. While the etiopathogenesis of this condition has been investigated, the interactions and effects of bisphosphonates on oral mucosa cells remain unclear. It is hypothesized that cell culture models, such as co-culture or three-dimensional cell culture models, can provide valuable insight. Therefore, the aim of this study was to evaluate the effects of zoledronic acid (ZA) on epithelial cells and gingival fibroblasts in a co-culture model. Briefly, epithelial cells were seeded on transwell inserts and gingival fibroblasts were seeded in the lower well of 24-well plates. The latter were treated with ZA (5 μM) for 24 or 48 h. Cell viability and synthesis of the inflammatory chemokine, CCL2, were subsequently assessed. Data were subjected to statistical analysis with a 5% significance level. In the presence of ZA, the epithelial cells exhibited significant toxicity in both cell culture models and at both time points. However, greater cytotoxicity was observed in the co-culture model. Greater viability for the gingival fibroblasts was also associated with the co-culture model, and ZA-mediated toxicity was observed for the 48 h time point. ZA promoted a significant increase in CCL2 synthesis in both sets of cells, with greater CCL2 synthesis detected in the gingival fibroblasts. However, this effect was diminished in the co-culture model. Taken together, these results confirm the specific response patterns of the cells seeded in the co-culture model and also demonstrate the protective mechanism that is mediated by epithelial/mesenchymal cell interactions upon exposure to ZA.


Subject(s)
Humans , Cell Culture Techniques/methods , Diphosphonates/pharmacology , Epithelial Cells/drug effects , Bone Density Conservation Agents/pharmacology , Fibroblasts/drug effects , Imidazoles/pharmacology , Time Factors , Enzyme-Linked Immunosorbent Assay , Cell Survival/drug effects , Cells, Cultured , Reproducibility of Results , Analysis of Variance , Statistics, Nonparametric , Coculture Techniques , Cell Proliferation/drug effects , Zoledronic Acid , Gingiva/cytology
14.
Rev. odontol. UNESP (Online) ; 44(6): 355-359, tab
Article in Portuguese | LILACS-Express | LILACS | ID: lil-764659

ABSTRACT

ResumoIntroduçãoAgentes promotores de ligações cruzadas têm sido investigados como inibidores da atividade enzimática da dentina, o que favoreceria a longevidade das restaurações adesivas.ObjetivoAvaliar o efeito do tratamento da dentina com proantocianidina (PA), em curtos períodos de tempo, na inibição da atividade de MMPs in situ.Material e métodoQuarenta espécimes de dentina (1×1×6 mm) foram obtidos de molares hígidos e divididos em quatro grupos (n=10). Os espécimes foram condicionados com ácido fosfórico por 15 s, seguido de lavagem em água deionizada. A dentina condicionada foi tratada com: água, 5% PA por 5 s, 15 s ou 30 s. A atividade de MMP foi analisada colorimetricamente (SensoLyte®) e os dados de absorbância (412 nm) foram submetidos aos testes de ANOVA e Tukey (α=0,05).ResultadoTodos os períodos de tratamento foram capazes de reduzir a atividade de MMPs, sendo que os melhores resultados foram observados para a dentina tratada com PA por 15 s (63,1% redução) e 30 s (70,2%). O tratamento por 5 s foi capaz de inibir 39,9% das MMPs.ConclusãoA aplicação de PA sobre a dentina condicionada foi capaz de reduzir a atividade de MMPs mesmo em períodos de tempo extremamente curtos, como 5 s. No entanto, melhores resultados foram obtidos com os maiores períodos de tratamento.


AbstractIntroductionCollagen cross-linkers have been investigated as inhibitors of the enzymatic activity of dentin, therefore improving the longevity of adhesive restorations.PurposeTo evaluate the effect of etched dentin treatment with proanthocyanidin (PA) in short periods of time on the inhibition of dentin metalloproteinases (MMP) activity in situ.Material and methodForty dentin specimens (1x1x6mm) were obtained from sound third molars and divided into 4 groups (n=10). The specimens were etched with 37% phosphoric acid for 15s and rinsed in deionized water. Then they were treated with the following solutions: water, 5% PA for 5s, 15s or 30s. The total MMP activity was analyzed by a colorimetric test (SensoLyte®). Absorbance data (412nm) were submitted to ANOVA and Tukey tests (α=0.05).ResultAll treatment periods were able to reduce the total activity of MMPs. The best results were observed for dentine treated with PA for 15s (63.1% reduction) and 30s (70.2%). Treatment for 5s was capable of inhibiting only 39.9% of the total MMP activity.ConclusionApplication of PA on the etched dentin in extremely short periods of time reduced the MMPs activity of dentin, even after 5s. However, the best results were obtained for the longer periods.

15.
Braz. dent. j ; 26(4): 409-415, July-Aug. 2015. tab, ilus
Article in English | LILACS | ID: lil-756394

ABSTRACT

Despite several reports regarding tissue regeneration, including pulp repair induced by different light sources, only limited data have been reported concerning the effects of light-emitting diodes (LED) on stem cells from human exfoliated deciduous teeth (SHEDs). The aim of this study was to evaluate the effects of different energy densities of infrared LED on the cell viability, number of cells and mineralized tissue production by SHEDs. SHEDs were obtained from near-exfoliation primary teeth (n=3), seeded in plain DMEM (104 cells/cm2), and irradiated by a LED prototype (LEDTable 850 nm, 40 mW/cm2) delivering 0 (control), 2, 4, 8, 15 or 30 J/cm2 (n=9). Cell viability (MTT assay), cell proliferation (trypan blue assay), and mineralized nodule (MN) formation (alizarin red stain) were assessed 12 and 72 h post-irradiation. Data were subjected to Kruskal-Wallis and Mann-Whitney tests (α=0.05). Cells irradiated with 2 or 4 J/cm2 exhibited higher metabolism at 72 h, and all energy densities provided increase in cell proliferation after 12 h. Regarding MN formation, the best results were observed at 72 h after SHED irradiation with 8 and 15 J/cm2. It was concluded that the cell viability, cell number and MN formation by pulp cells are enhanced after exposure to infrared LED irradiation. Overall, the greatest SHED biostimulation was obtained with 4 and 8 J/cm2.

.

Apesar de diversos estudos envolvendo regeneração tecidual, incluindo o reparo pulpar induzido por diferentes fontes de luz, dados limitados têm sido reportados a respeito dos efeitos da irradiação com diodos emissores de luz (LED) sobre células-tronco de dentes decíduos esfoliados (SHEDs). O objetivo do presente estudo foi avaliar os efeitos de diferentes doses de energia (DE) do LED infravermelho sobre a viabilidade celular, número de células viáveis e produção de nódulos mineralizados (NM) por SHEDs. As células foram obtidas a partir de dentes decíduos próximos ao período de esfoliação (n=3), semeadas em DMEM completo (104 células/cm2) e irradiadas utilizando um protótipo de LED (LEDTable 850 nm, 40 mW/cm2) com as doses de 0 (controle), 2, 4, 8, 15 ou 30 J/cm2 (n=9). A viabilidade celular (MTT), o número de células viáveis (trypan blue assay) e a formação de NM (alizarin red stain) foram realizados 12 e 72 h após a irradiação. Os dados foram avaliados utilizando os testes Kruskal-Wallis e Mann-Whitney (α=0,05). As células irradiadas com 2 ou 4 J/cm2 exibiram uma maior viabilidade em 72 h, e todas as DE aumentaram o número de células viáveis após 12 h. Para a formação de NM, os melhores resultados foram observados 72 h após a irradição das SHEDs, com as doses de 8 e 15 J/cm2. Concluiu-se que a viabilidade celular, o número de células e a formação de NM por células pulpares são aumentados após exposição ao LED infravermelho. De um modo geral, a melhor bioestimulação celular (SHEDs) foi obtida com 4 e 8 J/cm2.

.


Subject(s)
Humans , Infrared Rays , Stem Cells/drug effects , Tooth/radiation effects , Dose-Response Relationship, Radiation , Tooth/cytology
16.
Braz. dent. j ; 26(3): 242-248, May-Jun/2015. tab, graf
Article in English | LILACS | ID: lil-751867

ABSTRACT

This study evaluated a whitening effect and the likely side effect (tooth sensitivity and pulp response) of human teeth subjected to different in-office bleaching (IOB) techniques and materials, mainly the presence of calcium in the IOB materials. A calcium-free (CF) and a calcium-containing (CC) 35% hydrogen peroxide (HP) gels were evaluated. The CF was refreshed every 15 minutes, three times (CF 3-15) or in a single 45-min application (CF 1-45) at one bleaching appointment. The CC was used only in a single 45-min application (CC 1-45). Each technique was applied in 5 mandibular incisors scheduled for extraction for different patients. In control group, no tooth bleaching was performed. The tooth colour (TC) and tooth sensitivity (TS) were recorded at baseline and after IOB. The teeth were extracted 2 days after the application of IOB and subjected to histological analysis. The data was submitted to appropriate statistical analysis (α=0.05). The changes of TC were similar between groups and statistically different from the control (p<0.05). However, TS of groups bleached with CF was statistically higher than that recorded for CC and the control (p<0.05). In CF 3-15 and CF 1-45 groups, the coronal pulp tissue exhibited partial necrosis associated with tertiary dentin deposition. In CC 1-45 group smaller area of necrosis occurred only in three bleached teeth in which tertiary dentin deposition was observed. The calcium-containing 35%HP gel could be preferable for in-office bleaching because it caused less tooth sensibility and pulp damage.


O objetivo do estudo foi avaliar o efeito clareador e seus efeitos adversos (sensibilidade e resposta pulpar) de dentes humanos submetidos a diferentes técnicas e materiais para o clareamento em consultório (CLCO), principalmente a presença de cálcio nos materiais para CLCO. Um agente clareador a base de peróxido de hidrogênio (PH) a 35% sem cálcio (SC) e com cálcio (CC) foram avaliados. O agente clareador SC foi usado em duas técnicas de aplicação: o gel clareador foi reaplicado a cada 15 minutos, três vezes (SC 3-15) ou 1 x 45-min por aplicação (SC 1-45) em uma sessão clínica. O agente clareador CC foi usado apenas em 1 x 45-min por aplicação (CC 1-45). Cada técnica foi aplicada em 5 incisivos inferiores indicados para extração de pacientes diferentes. No grupo controle, o clareamento não foi realizado. O efeito clareador (EC) e a sensibilidade dental (SD) foram registrados inicialmente e após o CLCO. Os dentes foram extraídos após 2 dias da aplicação do CLCO e foram submetidos ao análise histológica. Os dados foram submetidos a análise estatística apropriada (α=0.05). As mudanças foram semelhantes entre os grupos e significativamente diferentes do controle (p<0.05). Entretanto, a SD nos grupos clareados com SC foi estatisticamente maior do que a registrada nos grupos CC e do grupo controle (p<0.05). Nos grupos SC 3-15 e SC CF 1-45, o tecido pulpar da região coronária exibia necrose parcial associada a deposição de dentina terciária. No grupo CC 1-45, pequenas áreas de necrose ocorreram somente em 3 dentes clareados, nos quais deposição de dentina terciária também foi observada. O gel CC de HP a 35%HP gel poderia ser preferível para a realização de CLCO devido ao fato de causar menos danos ao tecido pulpar.


Subject(s)
Humans , Dental Pulp , Tooth Bleaching , Color , Dentin Sensitivity , Tooth Bleaching Agents/adverse effects , Tooth Bleaching/adverse effects
17.
Braz. dent. j ; 25(5): 367-371, Sep-Oct/2014. tab
Article in English | LILACS | ID: lil-731047

ABSTRACT

This in vitro study evaluated the potential protective effect of vitamin E alpha-tocopherol (α-T) isomer against the toxicity of hydrogen peroxide (HP) applied on dental pulp cells. Odontoblast-like MDPC-23 cells were seeded on 96-well plates for 72 h, treated with different concentrations of α-T (1, 3, 5, and 10 mM) for different times (1, 4, 8, and 24 h) and then exposed or not to a 0.018% HP solution for 30 min. In positive and negative control groups, cells were exposed to HP or culture medium (DMEM containing 5% DMSO), respectively. Cell viability was assessed by the MTT assay and the absorbance numeric data, expressed as percentage values, were subjected to the statistical analysis by Kruskal-Wallis and Mann-Whitney tests (α=5%). Considering the cells in the negative control as having 100% of cell viability, all combinations of α-T concentrations and pretreatment times showed a protective effect against HP cytotoxicity. Significant reduction of cell viability (59%) was observed in the positive control compared with the negative control. The highest values of pulp cell viability were obtained after pretreatment with 1 and 3 mM α-T concentrations for 24 h followed by exposure to HP (126% and 97% of cell viability, respectively). Under the tested conditions, the most effective cell protection against the cytotoxic effects of HP was provided by the lowest concentrations of α-T (1 and 3 mM) applied for 24 h.


Neste estudo, foi avaliado o potencial protetor do isômero alfa-tocoferol da vitamina E (-T) contra a ação tóxica do peróxido de hidrogênio (PH) aplicado sobre células pulpares. Células odontoblastóides MDPC-23 foram semeadas em placas de 96 compartimentos por 72 h, tratadas com diferentes concentrações de α-T (1, 3, 5 e 10 mM) por diferentes períodos (1, 4, 8 e 24 h) e, então, expostas ou não a uma solução com 0,0018% de PH por 30 min. Nos controles positivo e negativo, as células foram expostas ao PH ou meio de cultura (DMEM contendo 5% de DMSO), respectivamente. A viabilidade celular foi avaliada pelo teste do MTT e os valores numéricos de absorbância, expressos em porcentagem, foram submetidos a análise estatística pelos testes de Kruskal-Wallis e Mann-Whitney (α=5%). Considerando as células do grupo controle negativo como apresentando 100% de viabilidade celular, todas as combinações de α-T, nas diferentes concentrações, e tempos de pré-tratamento demonstraram um efeito protetor contra a citotoxicidade do PH. Redução significativa da viabilidade (59%) foi observada para o grupo controle positivo comparado ao controle negativo. Os maiores valores de viabilidade celular foram obtidos após pré-tratamento com 1 e 3 mM de α-T por 24 h seguido de exposição ao PH (126% e 97% de viabilidade celular, respectivamente). Assim, de acordo com as condições experimentais, o efeito protetor mais efetivo contra os efeitos tóxicos do PH foi observado para as menores concentrações de α-T (1 e 3 mM) aplicado por 24 h.


Subject(s)
Humans , Cell Transformation, Neoplastic , Epithelial Cells/metabolism , Esophagus/cytology , Telomerase/metabolism , Telomere/metabolism , Apoptosis/physiology , Cell Line , Cell Size , Cell Division/physiology , Epithelial Cells/cytology , In Situ Nick-End Labeling , Papillomaviridae/genetics , Papillomaviridae/metabolism
18.
Braz. dent. j ; 24(6): 551-558, Nov-Dec/2013. tab, graf
Article in English | LILACS | ID: lil-697652

ABSTRACT

Bisphosphonate-induced osteonecrosis has been related to the cytotoxicity of these drugs on oral mucosa cells. A previous study showed that 5 µM of zoledronic acid (ZA), a nitrogen-containing bisphosphonate, is the highest concentration of this drug found in the oral cavity of patients under treatment. Therefore, in order to simulate an osteonecrosis clinical condition, the aim of this study was to evaluate the highest concentration of ZA applied on human epithelial cells (HaCaT) and gingival fibroblasts. For this purpose, cells (3×104 cells/cm2) were seeded in wells for 48 h using complete culture medium (cDMEM). After 48 h incubation, the cDMEM was replaced by fresh serum-free culture medium (DMEM-FBS) in which the cells were maintained for additional 24 h. Then, 5 µM ZA were added to the DMEM–FBS and the cells incubated in contact with the drug for 48 h. After this period, the number of viable cells (trypan blue), cell viability (MTT assay), total protein (TP) production and cell morphology (SEM analysis) were assessed. Data were analyzed statistically by Mann-Whitney, ANOVA and Tukey's test (α=0.05). ZA caused a significant reduction in the number of viable cells and decreased the metabolic activity of both cell lines. However, decrease of TP production occurred only in the epithelial cell cultures. Morphological alterations were observed in both cell types treated with ZA. In conclusion, ZA (5 µM) was cytotoxic to human epithelial cells and gingival fibroblast cultures, which could be associated, clinically, with the development of bisphosphonate-induced osteonecrosis.


A osteonecrose induzida por bisfosfonatos tem sido associada a um efeito citotóxico destes medicamentos sobre as células da mucosa oral. Um estudo recente demonstrou que 5 µM de ácido zoledrônico (AZ), um potente bisfosfonato nitrogenado, foi a maior concentração encontrada na cavidade oral da pacientes em tratamento com este medicamento. Portanto, para simular esta condição in vivo, o objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da aplicação desta concentração de AZ sobre células epiteliais (HaCaT) e fibroblasto de gengiva. As células foram semeadas (3×104 células/cm2) e incubadas por 48 h em placas de 24 compartimentos, utilizando meio de cultura completo (cDMEM). Após permanecer por 24 h em DMEM sem soro fetal bovino (DMEM-SFB), 5 µM do AZ foram adicionados a este meio de cultura, o qual foi incubado em contato com as células por 48 h. Após este período, foram avaliados o número de células viáveis (trypan blue), viabilidade celular (teste de MTT), produção de proteína total e a morfologia celular (MEV). Os dados obtidos foram submetidos aos testes estatísticos de Mann-Whitney e ANOVA complementada por testes de Tukey (p>0,05). Foi demonstrado que o AZ causou diminuição significativa no número de células viáveis, além de redução do metabolismo celular para ambos os tipos celulares avaliados. Porém, redução na produção de proteína total ocorreu apenas para as células epiteliais. Alterações morfológicas foram observadas em ambos os tipos celulares tratados com AZ. Estes dados científicos indicam que a concentração de AZ avaliada neste estudo (5 µM) apresenta ação citotóxica sobre células epiteliais e fibroblastos de gengiva, o que poderia estar associado, clinicamente, ao desenvolvimento da osteonecrose induzida por bisfosfonatos.


Subject(s)
Humans , Bone Density Conservation Agents/toxicity , Diphosphonates/toxicity , Epithelial Cells/drug effects , Fibroblasts/drug effects , Gingiva/cytology , Imidazoles/toxicity , Bisphosphonate-Associated Osteonecrosis of the Jaw/etiology , Cell Count , Cells, Cultured , Cell Survival/drug effects , Enzyme-Linked Immunosorbent Assay , In Vitro Techniques , Microscopy, Electron, Scanning
19.
J. bras. patol. med. lab ; 49(5): 368-371, Oct. 2013. tab
Article in English | LILACS-Express | LILACS | ID: lil-697113

ABSTRACT

INTRODUCTION: Patients treated with nitrogen-containing bisphosphonates, such as zoledronic acid (ZA), have frequently shown oral bone exposure areas, termed osteonecrosis. In addition, these patients may also present low repair and regeneration potential, mainly after tooth extractions. These side-effects caused by bisphosphonates may be due to their inhibitory effects on oral mucosa and local bone cells. OBJECTIVE: To evaluate the effects of ZA on the mineralization capacity of cultured osteoblasts. MATERIALS AND METHODS: Human immortalized osteoblasts (SaOs-2) were grown in plain culture medium (Dulbecco's Modified Eagle Medium [DMEM] + 10% fetal bovine serum [FBS]) in wells of 24-well plates. After 48-hour incubation, the plain DMEM was replaced by a solution with ZA at 5 µM which was maintained in contact with cells for seven, 14 or 21 days. After these periods, cells were evaluated regarding alkaline phosphatase (ALP) activity and mineral nodule formation (alizarin red). Data were statistically analyzed by Mann-Whitney test, at 5% of significance level. RESULTS: ZA caused significant reduction on ALP activity and mineral nodules formation by cultured osteoblasts in all evaluated periods (p < 0.05). CONCLUSION: These data indicate that ZA causes inhibition on the osteogenic phenotype of cultured human osteoblasts, which, in turn, may reduce bone repair in patients subjected to ZA therapy.


INTRODUÇÃO: Pacientes em tratamento com bisfosfonatos, sobretudo com os nitrogenados, como o ácido zoledrônico (AZ), têm apresentado áreas de exposição de tecido ósseo na cavidade oral, caracterizadas como osteonecrose. Essas áreas apresentam limitada capacidade de reparo, principalmente após exodontias. Esses efeitos podem ser resultado do efeito inibitório causado por esse tipo de medicamento sobre as células da mucosa e do tecido ósseo local. OBJETIVO: Avaliar o efeito do AZ sobre a capacidade de mineralização de osteoblastos in vitro. MATERIAIS E MÉTODOS: Foi utilizada uma linhagem celular de osteoblastos humanos (SaOs-2). As células foram cultivadas em meio de cultura completo (Dulbecco's Modified Eagle Medium [DMEM] + 10% de soro fetal bovino [SFB]). Após 48 horas de incubação, o DMEM completo foi substituído por um novo DMEM sem SFB, ao qual foram adicionados 5 µM de AZ. Essa solução foi mantida em contato com as células por sete, 14 ou 21 dias. Após esse período, as células foram avaliadas quanto à atividade de fosfatase alcalina (ALP) e à produção de nódulos de mineralização (alizarin red). Os dados foram submetidos ao teste estatístico de Mann-Whitney, considerando nível de significância de 5%. RESULTADOS: A exposição das células ao AZ causou redução significativa na atividade de ALP e na formação de nódulos mineralizados em todos os períodos avaliados (p < 0,05). CONCLUSÃO: Esses resultados revelam que o AZ causa alteração inibitória no fenótipo osteogênico das células humanas em cultura, o que pode reduzir a capacidade de reparo do tecido ósseo após o contato com esse tipo de medicamento.

20.
Braz. dent. j ; 24(5): 517-521, Sep-Oct/2013. tab, graf
Article in English | LILACS | ID: lil-697629

ABSTRACT

The aim of this study was to compare the effect of a 16% carbamide peroxide (CP) gel and a 10% CP gel on mineralized enamel content and morphology. Enamel blocks from bovine incisors were subjected to a 14-day treatment (8 h/day) with 10% or 16% CP gels. Knoop microhardness was evaluated before bleaching and at 1, 7 or 14 days after this treatment (50 g/15 s). Mineral content (energy-dispersive x-ray spectroscopy), surface roughness and topography (atomic force microscopy) were evaluated at the 14-day period. Data were analyzed statistically by two-way ANOVA and Tukey's test (α=0.05). Significant microhardness reduction was observed at the 7 th and 14 th days for 10% CP gel, and for all bleaching times for 16% CP gel (p<0.05). At the 14-day period, a significant decrease in Ca and P content, increase on surface roughness (p<0.05) as well as on picks and valleys distance were observed when both bleaching gels were used. These enamel alterations were more intense for 16% CP gel. It was concluded that both CP-based gels promoted loss of mineral structure from enamel, resulting in a rough and porous surface. However, 16% CP gel caused the most intense adverse effects on enamel.


O objetivo do presente estudo foi comparar o efeito de um gel com 16% de peróxido de carbamida (PC) sobre a estrutura mineral e morfologia do esmalte dental com os efeitos de um gel com 10% de PC. Blocos de esmalte provenientes de incisivos bovinos foram submetidos a 14 dias de tratamento (8 h/dia) com géis com 10 ou 16% de PC. A microdureza Knoop foi avaliada antes do clareamento e 1, 7 e 14 dias pós-tratamento (50 g/15 s). O conteúdo mineral (EDX), rugosidade de superfície e topografia (MFA) foram avaliados no período de 14 dias (ANOVA a dois critérios e teste de Tukey; α=0,05). Redução significante na microdureza foi observada nos períodos de 7 e 14 dias para o gel com 10% de PC, e em todos os períodos para o gel com 16% de PC (p<0,05). No período de 14 dias, uma diminuição significante no conteúdo de Ca e P, aumento na rugosidade de superfície (p<0,05), bem como na distância entre picos e vales foram observados para ambos os agentes clareadores usados. Estas alterações foram mais intensas para o gel com 16% de PC. Pôde-se concluir que ambos os géis à base de PC promoveram perda de estrutura mineral do esmalte, resultando em superfície mais rugosa e porosa. Porém, o gel com 16% de PC causou efeitos adversos mais intensos no esmalte dental.


Subject(s)
Humans , Dental Enamel/drug effects , Peroxides/adverse effects , Tooth Bleaching/methods , Tooth Demineralization/chemically induced , Urea/analogs & derivatives , Gels , Hardness Tests , Microscopy, Atomic Force , Peroxides/administration & dosage , Spectrometry, X-Ray Emission , Urea/administration & dosage , Urea/adverse effects
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