Neoechinorhynchus macrospinosus (Acanthocephala: Neoechinorhynchidae) in Rabbit fish Siganus rivulatus (Siganidae): morphology and phylogeny / Neoechinorhynchus macrospinosus (Acanthocephala: Neoechinorhynchidae) em peixes-coelho Siganus rivulatus (Siganidae): morfologia e filogenia

Siganids are the most important marine fish distributed along the African coast. Therefore, the current study aimed to investigate parasite fauna infects one of the most important mariculture fish species in the Red Sea, the Rabbit fish Siganus rivulatus. One acanthocephalan species has been isolated from the posterior region of fish intestine, belonging to the Neoechinorhynchidae family, and named as Neoechinorhynchus macrospinosus Amin & Nahhas, 1994 based on its morphological and morphometric features. In order to determine the accurate taxonomic position of this acanthocephalan species, molecular phylogenetic analysis was carried out based on the partial sequences of 18S rDNA gene region. The obtained data revealed that this species was associated with a close identity ˃71% for other species belonging to the Neoechinorhynchidae family. In addition, the recovered species deeply embedded in the Neoechinorhynchus genus, closely related to the previously described Neoechinorhynchus sp., N. mexicoensis, and N. golvani with identity percent of 95.14, 93.59, 93.59%, respectively. Therefore, the present study provide a better understanding about the taxonomic status of N. macrospinosus based on 18S rDNA that can be useful for achieving a proper assessment of biodiversity.

Os siganídeos são os peixes marinhos mais importantes distribuídos ao longo da costa africana. Portanto, o presente estudo teve como objetivo investigar a fauna de parasitas infectando uma das espécies mais importantes de peixes para maricultura no Mar Vermelho, o peixe-coelho Siganus rivulatus. Uma espécie de acantocéfalo foi isolada da região posterior do intestino de peixes pertencentes à família Neoechinorhynchidae, e denominadas Neoechinorhynchus macrospinosus Amin & Nahhas, 1994, com base em suas características morfológicas e morfométricas. A fim de determinar a posição taxonômica precisa dessa espécie de acantocéfalo, a análise filogenética molecular foi realizada com base nas sequências parciais da região do gene 18S rDNA e revelou que essa espécie estava associada a uma identidade próxima de até 71% para outras espécies pertencentes a família Neoechinorhynchidae e profundamente enraizada no gênero Neoechinorhynchus, intimamente relacionada a Neoechinorhynchus sp., N. mexicoensis, and N. golvani descrito anteriormente com percentual de identidade de 95,14, 93,59, 93,59%, respectivamente. Portanto, o presente estudo fornece uma melhor compreensão sobre o status taxonômico de N. macrospinosus com base no 18S rDNA que pode ser útil para obter uma avaliação adequada da biodiversidade.

[RETRACTED ARTICLE] Neoechinorhynchus macrospinosus (Acanthocephala: Neoechinorhynchidae) in Rabbit fish Siganus rivulatus (Siganidae): morphology and phylogeny / [ARTIGO RETRATADO] Neoechinorhynchus macrospinosus (Acanthocephala: Neoechinorhynchidae) em peixes-coelho Siganus rivulatus (Siganidae): morfologia e filogenia

Abstract Siganids are the most important marine fish distributed along the African coast. Therefore, the current study aimed to investigate parasite fauna infects one of the most important mariculture fish species in the Red Sea, the Rabbit fish Siganus rivulatus. One acanthocephalan species has been isolated from the posterior region of fish intestine, belonging to the Neoechinorhynchidae family, and named as Neoechinorhynchus macrospinosus Amin & Nahhas, 1994 based on its morphological and morphometric features. In order to determine the accurate taxonomic position of this acanthocephalan species, molecular phylogenetic analysis was carried out based on the partial sequences of 18S rDNA gene region. The obtained data revealed that this species was associated with a close identity ˃71% for other species belonging to the Neoechinorhynchidae family. In addition, the recovered species deeply embedded in the Neoechinorhynchus genus, closely related to the previously described Neoechinorhynchus sp., N. mexicoensis, and N. golvani with identity percent of 95.14, 93.59, 93.59%, respectively. Therefore, the present study provide a better understanding about the taxonomic status of N. macrospinosus based on 18S rDNA that can be useful for achieving a proper assessment of biodiversity.

Resumo Os siganídeos são os peixes marinhos mais importantes distribuídos ao longo da costa africana. Portanto, o presente estudo teve como objetivo investigar a fauna de parasitas infectando uma das espécies mais importantes de peixes para maricultura no Mar Vermelho, o peixe-coelho Siganus rivulatus. Uma espécie de acantocéfalo foi isolada da região posterior do intestino de peixes pertencentes à família Neoechinorhynchidae, e denominadas Neoechinorhynchus macrospinosus Amin & Nahhas, 1994, com base em suas características morfológicas e morfométricas. A fim de determinar a posição taxonômica precisa dessa espécie de acantocéfalo, a análise filogenética molecular foi realizada com base nas sequências parciais da região do gene 18S rDNA e revelou que essa espécie estava associada a uma identidade próxima de até 71% para outras espécies pertencentes a família Neoechinorhynchidae e profundamente enraizada no gênero Neoechinorhynchus, intimamente relacionada a Neoechinorhynchus sp., N. mexicoensis, and N. golvani descrito anteriormente com percentual de identidade de 95,14, 93,59, 93,59%, respectivamente. Portanto, o presente estudo fornece uma melhor compreensão sobre o status taxonômico de N. macrospinosus com base no 18S rDNA que pode ser útil para obter uma avaliação adequada da biodiversidade.

First record of Pseudoterranova decipiens (Nematoda, Anisakidae) infecting the Red spot emperor Lethrinus lentjan in the Red Sea / Primeiro registro de Pseudoterranova decipiens (Nematoda, Anisakidae) infectando o imperador da mancha vermelha Lethrinus lentjan no Mar Vermelho

Abstract The current parasitological study was carried out to investigate helminth parasites infecting the Red spot emperor Lethrinus lentjan inhabiting Hurghada City at the Gulf of Suez, Red Sea, Egypt. Third-stage larvae of nematode parasite was isolated from the intestine as well as body cavity of the examined fish. Light and scanning electron microscopy revealed that this parasite belonged to Anisakidae family within the genus Pseudoterranova. The present species is named Pseudoterranova decipiens based on the presence of triangular mouth aperture with prominent boring teeth and soft swellings of the cuticle, long muscular esophagus, ventrally excretory pore, and narrow transverse slit of anal opening followed by a short mucron. The morphological characteristics of this species were confirmed by molecular analysis of 18S rDNA gene region of the present parasite. It demonstrated a close identity ≥89% with taxa under family Anisakidae, 85% with Raphidascarididae, and 79-84% with Toxocaridae. A preliminary genetic comparison between gene sequence of the present parasite and other oxyurid species placeed it as a putative sister taxon to other Pseudoterranova decipiens described previously. This study demonstrated that the 18S rDNA gene region of Pseudoterranova decipiens yielded a unique sequence that confirmed its taxonomic position in Anisakidae.

Resumo O presente estudo parasitológico foi realizado para investigar os helmintos parasitos que infectam o peixe imperador Lethrinus lentjan, que habita a cidade de Hurghada no Golfo de Suez, Mar Vermelho, no Egito. Larvas de terceiro estágio de parasitos nematoides foram isoladas do intestino e da cavidade do corpo do peixe examinado. Microscopia eletrônica de luz e de varredura revelou que este parasita pertence à família Anisakidae dentro do gênero Pseudoterranova. A espécie atual é denominada Pseudoterranova decipiens baseada na presença de abertura triangular da boca com dentes proeminentes chatos e inchaços moles da cutícula, esôfago muscular longo, poro ventralmente excretor e fenda transversal estreita da abertura anal seguida por um mucron curto. As características morfológicas desta espécie foram confirmadas pela análise molecular da região do gene 18S rDNA do presente parasito. Demonstrou uma identidade próxima ≥89% com taxa sob família Anisakidae, 85% com Raphidascarididae, e 79-84% com Toxocaridae. Uma comparação genética preliminar entre a sequência genética do presente parasito e outras espécies de oxiurídeos coloca-o como um taxon irmão putativo para outros Pseudoterranova descritos anteriormente. Este estudo demonstra que a região do gene 18S rDNA de Pseudoterranova decipiens produz uma sequência única que confirma sua posição taxonômica em Anisakidae.

A genética na fibrose cística / Genetics of cystic fibrosis

A fibrose cística (FC) é a doença autossômica recessiva mais comum em euro-descendentes, com uma incidência estimada de 1 caso a cada 2.500 nascimentos. A FC é uma doença multissistêmica, caracterizada principalmente por doença pulmonar progressiva, disfunção pancreática exócrina e concentração elevada de eletrólitos no suor. O gene associado a essa doença é denominado CFTR e se localiza no cromossomo 7, sendo dividido em 27 éxons. Até o momento, mais de 1.800 variações de sequência foram identificadas no gene CFTR, sendo que a mutação p.Phe508del é a mais frequente entre os pacientes de FC. No Brasil, a frequência dessa mutação não é tão elevada, devido provavelmente à miscigenação e, consequentemente, o locus CFTR apresenta maior heterogeneidade alélica. A probabilidade de um filho afetado com FC é de 1 em 4, ou 25%, para filhos de um casal em que ambos são portadores de uma mutação. O risco de um indivíduo com FC ter filhos afetados depende de seu parceiro – se o parceiro for portador da doença o risco será de 50%. Para casais em risco de terem filhos com FC e com mutação ou mutações identificadas, é possível oferecer diagnóstico pré-natal (DPN) e diagnóstico genético pré-implantacional (DPI). Considerando a complexidade da informação genética relacionada à FC e das alternativas reprodutivas que estão surgindo, é muito importante a disponibilização do aconselhamento genético para o paciente e sua família.

Cystic fibrosis (CF) is the most common autosomal recessive disease in European-derived populations, with an estimated incidence of 1/2,500 live births. CF is a multisystem disease, mainly characterized by progressive obstructive pulmonary disease, pancreatic insufficiency, and high electrolyte levels in sweat. The gene responsible for CF (CFTR) is located on chromosome 7, which comprises 27 exons. More than 1,800 sequence variations have been reported in the CFTR gene so far, and the p.Phe508del mutation is the most frequent among patients with CF. In Brazil, the frequency of p.Phe508del is lower than in other countries probably because of population admixture. This indicates that the CFTR locus may be more heterogeneous. For a couple with both parents carrying CF mutations, the probability of having a child with CF is 1 in 4, or 25%. The risk of having a child with CF for a CF patient depends on his/her partner – if the partner is a carrier of a CF mutation, the risk is 50%. For couples at risk of having a child with CF and with known CF mutations, it is possible to offer prenatal diagnosis (PND) and preimplantation genetic diagnosis (PGD). Considering the complexity of the genetic information related to CF and the reproductive alternatives that are emerging, it is very important to offer genetic counseling for patients and their families.

First identification of natural infection of Rickettsia rickettsii in the Rhipicephalus sanguineus tick, in the State of Rio de Janeiro / Primeira identificação de infecção natural por Rickettsia rickettsii no carrapato Rhipicephalus sanguineus no Rio de Janeiro

The Brazilian Spotted Fever (BSF) is a zoonotic disease caused by Rickettsia rickettsii and transmitted by ticks of the genus Amblyomma, more frequently, Amblyomma cajennense. The aim of this paper was to report the first molecular detection of R. rickettsii on R. sanguineus naturally infected in Rio de Janeiro, Brazil. Ticks were collected from dogs in a rural region of Resende municipality, Rio de Janeiro State, Brazil (22º30'9.46"S, 44º42'44.29"WO), where occurred five human cases of BSF in 2006. The ticks were identified under a stereoscopic microscope and separated in pools by stages, species and sex. DNA extraction was carried out using QIAamp DNA Mini Kit (QIAGEN®). The DNA was submitted to PCR amplification using 04 set of primers: Rr190.70p/Rr190.602n (OmpA, 532bp), BG1-21/BG2-20 (OmpB, 650bp), Tz15/Tz16 (17 kDa protein-encoding gene, 246bp) and RpCS.877p/RpCS.1258n (gltA, 381bp). PCR products were separated by electrophoresis on 1 percent agarose gels and visualized under ultraviolet light with ethidium bromide. PCR products of the expected sizes were purified by QIAquick® and sequenced by ABI PRISM®. The generated nucleotide sequences were edited with using Bioedit® software and compared with the corresponding homologous sequences available through GenBank, using Discontiguous Mega Blast (http://www.ncbi.nlm.nih.gov). It was confirmed R. rickettsii by sequencing of the material (GenBank FJ356230). The molecular characterization of R. rickettsii in the tick R. sanguineus emphasizes the role of dogs as carriers of ticks from the environment to home. Moreover, this result suggests that there is a considerable chance for active participation of R. sanguineus as one of tick species in the transmission of R. ricketsii to human being in the Brazilian territory.

A Febre Maculosa Brasileira (FMB) é uma zoonose causada por Rickettsia rickettsii e transmitida por carrapatos do gênero Amblyomma, mais freqüentemente pela espécie Amblyomma cajennense. Este trabalho tem como objetivo relatar a primeira detecção molecular de R. rickettsii em Rhipicephalus sanguineus naturalmente infectado no Rio de Janeiro, Brasil. Carrapatos foram coletados de cães, procedentes de uma região rural do município de Resende, estado do Rio de Janeiro, Brasil (22º30'9.46"S, 44º42'44.29"WO), onde ocorreram cinco casos humanos de FMB em 2006. Todos os carrapatos foram identificados segundo chave dicotômica, utilizando-se lupa estereoscópica e separados de acordo com estágio, espécie e sexo. Para a extração de DNA utilizou-se o kit comercial QIAamp DNA (QIAGEN ®). O DNA foi submetido à técnica de PCR utilizando 04 conjuntos de iniciadores para a amplificação dos genes: Rr190.70p/Rr190.602n (OmpA, 532bp), BG1-21/BG2-20 (OmpB, 650bp), Tz15/Tz16 (17 kDa gene que codifica a proteína, 246bp) e RPCs .877p/RpCS.1258n (gltA, 381bp). Os produtos da PCR foram separados por eletroforese em gel agarose 1 por cento corados com brometo de etídio e visualizados sob luz ultravioleta e, aqueles que apresentaram bandas amplificadas foram purificados utilizando-se o kit comercial QIAquick ® e seqüenciados pelo ABI PRISM®. As seqüências nucleotídicas foram geradas usando Bioedit®, editado em software e comparados os correspondentes homólogos com as sequências disponíveis através GenBank, utilizando Discontiguous Mega Blast (http://www.ncbi.nlm.nih.gov). Confirmou-se R. rickettsii (GenBank FJ356230) no seqüenciamento de apenas um espécime, adulto de carrapato R. sanguineus. A caracterização molecular de R. rickettsii em exemplar de carrapato R. sanguineus confirma que esta espécie pode ter importante papel na transmissão de R. rickettsii para humanos no território brasileiro.

Identification of the recently described new type of bovine papillomavirus (BPV-8) in a Brazilian beef cattle herd: [revision] / Identificação do novo tipo de papilomavírus bovino (BPV-8) recentemente descrito num rebanho bovino no Brasil: [revisão]

Bovine papillomavirus type 8 (BPV-8) was first detected and described in teat warts as well as in healthy teat skin from cattle raised in Japan. The entire viral genome was sequenced in 2007. Additionally, a variant of BPV-8, BPV-8-EB, was also identified from papillomatous lesions of a European bison in Slovakia. In Brazil, despite the relatively common occurrence of BPV infections, the identification and determination of viral types present in cattle is still sporadic. The aim of this study is to report the occurrence of the recently described BPV-8 in Brazil. The virus was identified in a skin warts obtained from a beef cattle herd located in Parana state, southern Brazil. The papilloma had a macular, non-verrucous gross aspect and was located on the dorsal thorax of a cow. Polymerase chain reaction (PCR) was performed using generic primers for partial amplification of L1 gene. The obtained amplicon (480bp) was cloned and two selected clones were sequenced. The nucleotide sequence was compared to existing papillomaviral genomic sequences, identifying the virus as BPV type 8. This study represents the first report of BPV-8 occurrence in Brazil, what suggests its presence among Brazilian cattle.

A primeira descrição do papilomavírus bovino tipo 8 (BPV-8) foi realizada em amostras de papilomas de teto e de pele saudável de tetos de bovinos no Japão. Em 2007, a seqüência genômica completa do BPV-8 foi determinada. Ainda em 2007, uma variante do BPV-8 (BPV-8-EB) foi identificada em lesões papilomatosas de um bisão europeu na Eslováquia. No Brasil, apesar da infecção pelo BPV ser comumente observada em bovinos, a determinação dos tipos virais associados com a infecção ainda é esporádica. Este estudo tem o objetivo de relatar a ocorrência do BPV-8 no país. A amostra clínica foi obtida em um rebanho de corte do estado do Paraná, região sul do Brasil. O papiloma cutâneo, de aspecto macular e não-verrucoso, estava localizado na região dorsal torácica do animal. A identificação do vírus foi realizada pela reação em cadeia da polimerase (PCR) utilizando primers genéricos para a amplificação parcial do gene L1. O produto amplificado, com aproximadamente 480 pb, foi clonado e os fragmentos presentes em dois clones foram seqüenciados. A comparação da seqüência de nucleotídeos com a de outros papilomavírus demonstrou 100 por cento de identidade com o BPV-8. Assim, esta é a primeira descrição da ocorrência do BPV-8 no Brasil, o que sugere a sua presença nos rebanhos bovinos brasileiros.

Quantitative analysis of Terminal Restriction Fragment Length Polymorphism (T-RFLP) microbial community profiles: peak height data showed to be more reproducible than peak area / Análise quantitativa de perfis de T-RFLP de comunidades microbianas: dados de altura de picos mostraram-se mais reprodutíveis do que os de área

Terminal Restriction Fragment Length Polymorphism (T-RFLP) is a culture-independent fingerprinting method for microbial community analysis. Profiles generated by an automated electrophoresis system can be analysed quantitatively using either peak height or peak area data. Statistical testing demontrated that peak height data showed to be more reproducible than peak area data.

Terminal Restriction Fragment Length Polymorphism (T-RFLP) é um método molecular, independente de cultivo, para análise de comunidades microbianas. Perfis gerados por um sistema automatizado de eletroforese podem ser analisados quantitativamente usando dados de altura ou área dos picos. Os dados de altura mostraram-se mais reprodutíveis do que os de área.

Correlação entre dados audiométricos e mutação 35delG em dez pacientes / Correlation between audiometric data and the 35delG mutation in ten patients

Mutações no gene da conexina 26 parecem ser extremamente comuns na gênese da surdez hereditária não-sindrômica, especialmente, a mutação 35delG, mas ainda há poucos estudos que descrevem as características audiométricas dos pacientes portadores dessas mutações. OBJETIVO: Analisar as características audiométricas em pacientes com mutações no gene da conexina 26 para se delinear uma correlação genótipo-fenótipo. CASUÍSTICA E MÉTODO: Foram avaliadas audiometrias tonal de 33 casos-índice com surdez sensorioneural não-sindrômica e de 8 familiares afetados. Testes moleculares específicos foram realizados para analisar mutações no gene da conexina 26. FORMA DE ESTUDO: Estudo de casos, retrospectivo, em corte transversal. RESULTADOS: Foram encontradas as prevalências de 27,3 por cento da mutação 35delG nos casos-índice e de 12,5 por cento nos familiares afetados. Em relação aos graus de perda, foram encontrados, 41,5 por cento dos pacientes com grau profundo, 39,0 por cento com grau grave e 19,5 por cento com grau moderado com, os pacientes homozigotos e heterozigotos para 35delG, predominando nos graus moderado-grave. CONCLUSÃO: Estes resultados sugerem que os dados audiométricos, associados ao diagnóstico molecular para a surdez, permitiram delinear uma correlação genótipo-fenótipo em dez pacientes com a mutação 35delG. Mas é necessário estudo multicêntrico para se verificar a real expressão fenotípica na população brasileira relacionada à mutação 35delG.

Mutations in the connexin 26 gene seem to be extremely common in non-syndromic hereditary deafness genesis, especially the 35delG, but there are still only a few studies that describe the audiometric characteristics of patients with these mutations. AIM: to analyze the audiometric characteristics of patients with mutations in the connexin 26 gene in order to outline genotype-phenotype correlation. MATERIALS AND METHODS: Tonal audiometries of 33 index cases of non-syndromic sensorineural hearing loss were evaluated and eight affected relatives. Specific molecular tests were carried out to analyze mutations in the connexin 26 gene. EXPERIMENT DESING: Retrospective, cross-sectional study. RESULTS: A 27.3 percent prevalence of mutation 35delG was found in the index cases and 12.5 percent among the relatives affected. In relation to hearing loss degree, 41.5 percent of the patients were found with profound hearing loss, 39 percent with severe HL and 19.5 percent with moderate HL with homozygote and heterozygote patients for the 35delG predominating in the severe-moderate hearing losses. CONCLUSION: Our results suggest that the audiometric data associated with the molecular diagnose of hearing loss helped us to outline a genotype-phenotype correlation in ten patients with 35delG mutation. However, it is still necessary to run multicentric studies to verify the real phenotypic expression in the Brazilian population, as far as the 35delG mutation is concerned.

Análise morfológica, imunofenotípica e molecular na identificação da leucemia megacariocítica aguda (LMA-M7): [revisão] / Morphologic, cytogenetic and molecular analyses in the identification of acute megakaryocytic leukemia (AML-M7): [review]

A leucemia megacariocítica aguda (LMA-M7) é um subtipo raro de leucemia mielóide aguda (LMA) que foi recentemente incorporada na classificação Franco-Americana-Britânica (FAB). Ela representa 3 por cento a 5 por cento dos casos de LMA, sendo freqüentemente associada a mielofibrose e retrata um subtipo de mau prognóstico. O diagnóstico da LMA-M7 baseia-se, inicialmente, nas características morfológicas das células leucêmicas. O aspirado de medula óssea, ou biópsia, mostra uma população de células pleomórficas e basofílicas, podendo apresentar projeções citoplasmáticas (blebs). A utilização apenas de critérios morfológicos e citoquímicos não é suficiente para um diagnóstico correto, por isso faz-se necessária uma diferenciação de leucemia megacariocítica aguda com os outros subtipos de leucemia mielóide aguda, principalmente nos casos em que as células blásticas se apresentam indiferenciadas, como é o caso da leucemia mielóide aguda, minimamente diferenciada (LMA-M0), da leucemia mielóide aguda sem maturação (LMA-M1) e da leucemia linfóide aguda, subtipo L1 e L2. Sendo assim, a utilização de técnicas de imunofenotipagem é essencial para o diagnóstico diferencial, pois mostra uma população de células leucêmicas com ausência da maioria dos marcadores linfóides e mielóides de superfície, mas com expressão para os antígenos da linhagem megacariocítica: CD41a (complexo glicoproteíco IIb/IIIa), CD42b (glicoproteína Ib) e/ou CD61 (glicoproteína IIIa), permitindo uma classificação correta em 98 por cento dos casos. Acrescenta-se também o estudo das anormalidades cromossômicas identificadas por técnicas de citogenética e análise molecular que passa a ser importante para a determinação do prognóstico e definição do regime terapêutico.

Acute megakaryocytic leukemia (AML-M7) is a rare subtype of acute myeloid leukemia (AML), which has recently been incorporated in the FAB (French-American-British) classification. It represents from 3 to 5 percent of AML cases, is frequently associated to myelofibrosis and is a subtype with poor prognosis. The diagnosis of AML-M7 is initially based on the morphologic characteristics of leukemic cells. Bone marrow aspirates or biopsy shows a population of pleomorphic and basophilic cells which may present cytoplasmatic blebs. Morphologic and cytochemical criteria are not enough for a correct diagnosis. It is necessary to differentiate acute megakaryocytic leukemia with other subtypes of acute myeloid leukemia mainly in cases in which blast cells are undifferentiated, as are the cases of AML-M0, AML-M1 and of acute lymphoid leukemia, subtypes L1 and L2. The use of immunopherotypic techniques is essential for a differential diagnosis showing a population of leukemia cells with the absence of most surface lymphoid and myeloid markers, yet relevant for the antigen of the megakaryocytic expression: CD41a (complex glycoproteic IIb/IIIa), CD42b (glycoprotein Ib) and/or CD61 (glycoprotein IIIa), there by providing the for correct classification in 98 percent of the cases. Chromosomal abnormalities identified by cytogenetic techniques and molecular analysis are important for determining the prognosis and definition of the therapheutic regime.