Anaplasmataceae em gatos (Felis catus) no município de Campos dos Goytacazes, Rio de Janeiro / Anaplasmataceae in cats (Felis catus) in the city of Campos dos Goytacazes, Rio de Janeiro

No Brasil, até o ano 2000, os agentes riquetsiais em felinos domésticos eram poucos conhecidos, existindo somente relatos esporádicos de Ehrlichia sp. As recentes pesquisas envolvendo biologia molecular e agentes riquetsiais confirmam a ideia de que estes agentes estão presentes nesses animais e, por este motivo, demonstram a necessidade de estudos mais detalhados no Brasil. O objetivo do presente trabalho foi a caracterização dos agentes da família Anaplasmataceae que acometem os felinos domésticos e esclarecer a importância dos felinos na cadeia epidemiológica das doenças riquetsiais por métodos moleculares e sorológicos associando a presença das doenças aos parâmetros clínicos e laboratoriais. Foram obtidas amostras sanguíneas de 60 felinos domésticos, independentes de sanidade, provenientes de atendimentos clínicos. Destas amostras foram realizados hemograma e bioquímica sérica, e os dados foram utilizados para preenchimento da ficha laboratorial. As amostras foram processadas para obtenção de concentração de células e soro, para realização da reação em cadeia pela polimerase (PCR) e reação por imunofluorescência indireta (RIFI), respectivamente, para identificação de agentes da família Anaplasmataceae. Os dados foram utilizados para análise descritiva para formação de frequências epidemiológicas e para realização de testes não-paramétricos pelo Qui-quadrado de Pearson (p≤5%) associando as alterações laboratoriais às infecções por Ehrlichia canis, Anaplasma platys e Anaplasma phagocytophilum. Os resultados obtidos revelaram a presença de 33,33% de agentes Anaplamastaceae na amostra populacional, sendo 8,33% para E. canis, 20% para A. platys e 10% para A. phagocytophilum. Foram realizadas as sorologias das amostras, pela imunofluorescência indireta, para verificação de amostras reagentes para A. phagocytophilum, sendo 8,33% amostras reagentes na amostra populacional. As alterações clínicas e laboratoriais mais frequentes em pacientes positivos por agentes Anaplasmataceae foram letargia, linfadenomegalia, mucosas pálidas, desidratação, trombocitopenia, hiperglobulinemia e hipoalbuminemia. Destes dados foram realizadas as correlações não paramétricas e não foram verificadas dependências das alterações laboratoriais com a presença de animais positivos para agentes Anaplasmataceae. A identificação dos agentes E. canis e A. platys visa esclarecer a doença na região, sendo instrumento de orientação da doença pelo médico veterinário ao proprietário para que tenha medidas adequadas de tratamento e prevenção. A presença de agentes A. phagocytophilum é considerada, sem dúvidas, uma notificação importante devido ao potencial zoonótico.(AU)

In Brazil, by the year 2000, rickettsioses in domestic cats were little known and there were only sporadic reports of Ehrlichia sp. Recent research involving molecular biology and rickettsioses confirm the notion of the presence of theses agents in cats and show the need for more studies in Brazil. The objective of this paper was to characterize agents belonging to the Anaplasmataceae family that affect domestic cats and to clarify the importance of cats in the epidemiology of rickettsioses by molecular and serological methods associating the presence of disease with clinical and laboratory parameters. Blood samples were obtained from 60 healthy domestic cats. Blood count and serum biochemical tests were performed, and the data were registered. The samples were processed to obtain cell concentration and serum to perform the polymerase chain reaction (PCR) and the indirect immunofluorescence assay (IFA) respectively, in order to identify agents of the Anaplasmataceae family. The data were used for descriptive analysis to obtain frequencies and to perform non-parametric tests with the chi-square test (p≤5%), besides the laboratory findings of infection by Ehrlichia canis, Anaplasma phagocytophilum and Anaplasma platys. The results revealed that 33.33% of the agents belonged to the Anaplasmataceae family, 8.33% for E. canis, 20% for A. platys, and 10% for A. phagocytophilum. Serology samples were examined by indirect immunofluorescence to check samples reacting to A. phagocytophilum, with positive reaction of 8.33%. The most frequent clinical and laboratory findings in patients positive for Anaplasmataceae agents were lethargy, enlargement of lymph nodes, pale mucous membranes, dehydration, thrombocytopenia, hyperglobulinemia and hypoalbuminemia. These data had non-parametric correlation and the laboratory changes and presence of positive cats was not interdependent. Identification of E. canis and A. platys revealed the disease in the region of Campos dos Goytacazes/RJ. The presence of A. phagocytophilum is considered an important finding due to its zoonotic potential.(AU)

Anaplasma phagocytophilum direct detection and exposure evidence in equines from two breeding farms from Minas Gerais State, Brazil / Detecção direta e evidência da exposição a Anaplasma phagocytophilum em equinos de dois haras em Minas Gerais, Brasil

Equine granulocytic anaplasmosis is caused by Anaplasma phagocytophilum, a gram negative, obligatory intracellular bacterium, member of Anaplasmataceae family, included in the Rickettsiales order. Little is known about the disease, transmission dynamics, genetic diversity and prevalence in Minas Gerais state, Brazil. This work aimed to do a serosurvey using indirect immunofluorescent assay (IFA) test and evaluation of buffy coat smears, and nested polymerase chain reaction (PCR) as diagnostic methods, to determine the disease situation in horses from two manga-larga marchador breeding farms located in the municipalities of Ataléia e São Vicente de Minas, in Minas Gerais state. It was found that 76% (131/172) of the animals were considered reactive for IFA test, and the total of 12.8% was positive at buffy coat smears analysis. At PCR analysis, it was found 1.94% of the samples positive to the infection. Those samples were sequenced and showed 96% of similarity to A. phagocytophilum from a Ixodes ricinus tick. There is a high frequency of animals with the evidence of contact to A. phagocytophilum on the two evaluated properties in this study, which was proved by positiveness in PCR analysis. New researches must be carried out to better understand the epidemiologic and clinical dynamic of the disease in the state of Minas Gerais.(AU)

A anaplasmose granulocítica equina é causada por uma bactéria gram-negativa, intracelular obrigatória, membro da família Anaplasmataceae, incluída na ordem Rickettsiales e denominada de Anaplasma phagocytophilum. Pouco se sabe sobre a doença, sua dinâmica de transmissão, diversidade genética e prevalência em Minas Gerais, Brasil. Este trabalho teve por objetivo realizar o levantamento sorológico utilizando a reação de imunofluorescência indireta, avaliação direta de capa leucocitária e nested reação em cadeia da polimerase (PCR) como métodos diagnósticos, a fim de avaliar a situação da doença em dois haras de criação de cavalos manga-larga marchador localizados nas cidades de Ataléia e São Vicente de Minas, no estado de Minas Gerais. Foi encontrada prevalência de 76% (131/172) de animais reativos para a reação de imunofluorescência indireta, quando todos os animais das duas propriedades e das duas coletas foram agrupados, e 12,8% dos animais foram positivos na avaliação da capa leucocitária. A reação de imunofluorescência indireta detectou 1,94% das amostras como positivas para o agente. Essas amostras foram submetidas ao sequenciamento de nucleotídeos, e foi observada similaridade de 96% com A. phagocytophilum proveniente de carrapatos Ixodes ricinus. Existe alta prevalência de animais positivos para a infecção por A. phagocytophilum, o que foi provado pela positividade dos animais à PCR. Novas pesquisas devem ser conduzidas a fim de entender a dinâmica epidemiológica e clínica da doença no estado de Minas Gerais.(AU)

Molecular detection of Ehrlichia canis and Anaplasma platys in dogs in southern Brazil / Detecção molecular de Ehrlichia canis e Anaplasma platys em cães do sul do Brasil

The aims of this study were to determine the occurrence of Anaplasma platys and Ehrlichia canis infection in dogs in Porto Alegre, Southern Brazil; and to investigate their association with hematological abnormalities. Serum samples from 196 dogs were first tested using dot-ELISA for antibodies against Anaplasma spp. and Ehrlichia canis. Peripheral blood samples from 199 dogs were subjected to 16S rRNA nested PCR (nPCR) for A. platys and E. canis, followed by DNA sequencing to ensure pathogen identity. A total of 19/196 samples (9.69%) were positive for Anaplasma spp. using ELISA and 28/199 (14.07%) samples were positive for A. platys by nested PCR. All the dog samples were negative for E. canis, both in anti-E. canis antibody tests and in nested PCR. There were no significant differences in hematological parameters between A. platys-PCR positive and negative dogs and Anaplasma spp. serologically positive dogs, except for basophil counts, which were higher in nPCR-positive dogs. This is the first report showing A. platys presence in dogs in Southern Brazil. In conclusion, hematological parameters may not be sufficient to diagnose A. platys infection in dogs in Southern Brazil, probably due either to low pathogenicity or to chronic infection. On the other hand, E. canis may either have very low occurrence or be absent in dogs in Porto Alegre.

O objetivo deste estudo foi determinar a ocorrência de Anaplasma platys e Ehrlichia canis em cães de Porto Alegre, sul do Brasil, sua detecção molecular e associação com anormalidades hematológicas. Amostras séricas de 196 cães foram inicialmente triadas por dot-ELISA para a presença de anticorpos contra Anaplasma spp. e Ehrlichia canis. Amostras de sangue periférico de 199 cães foram submetidas à nested PCR (16S rRNA) para A. platys e E. canis, seguido de sequenciamento do DNA para confirmar a identidade do agente. Do total, 19/196 (9,69%) amostras foram positivas para Anaplasma spp. por dot-ELISA e 28/199 (14,07%) por nPCR. Todas as amostras dos cães foram negativas para E. canis no teste sorológico anti-E. canis e também na nPCR. Não houve diferença significativa nos parâmetros hematológicos, exceto a contagem de basófilos, que apresentou valores mais altos em cães positivos na nPCR para A. platys. Este é o primeiro relato da presença de A. platys no Rio Grande do Sul, e a primeira detecção molecular do agente no sul do Brasil. Em conclusão, parâmetros hematológicos não são suficientes para diagnosticar a infecção por A. platys em cães, provavelmente devido sua baixa patogenicidade ou infecção crônica. Por outro lado, E. canis parece ter ocorrência baixa ou mesmo nula em cães de Porto Alegre.

Molecular detection of Ehrlichia canis in dogs from the Pantanal of Mato Grosso State, Brazil / Detecção molecular de Ehrlichia canis em cães do Pantanal do Mato Grosso, Brasil

The present study evaluated the presence of Ehrlichia DNA in the blood samples of 320 dogs from the urban and rural areas of the municipality of Poconé, Pantanal region, Mato Grosso state, by Polymerase Chain Reaction (PCR), targeting the ehrlichial dsbgene. Risk factors for infection in dogs were also evaluated. Forty-eight (15%, 95% CI: 11.4-19.5%) dogs were positive: 25 (15.6%, 95% CI: 10.4-22.2%) from the urban area and 23 (14.4%, 95% CI: 9.3-20.8%) from the rural area (P > 0.05). Partial DNA sequence obtained from PCR products of 18 samples from the urban area and 16 samples from the rural area were 100% identical to E. canis from Brazil and the USA. This study reports the first E. canis molecular detection in dogs from the northern Pantanal region.

O presente estudo avaliou a presença de DNA de Ehrlichia spp. em 320 cães das áreas urbana e rural do município de Poconé, região do Pantanal de Mato Grosso, pela PCR visando o gene dsb. Os fatores de risco para a infecção em cães também foram avaliados. Quarenta e oito (15%, IC 95%: 11,4-19,5%) cães foram positivos, 25 (15,6%, IC 95%: 10,4-22,2%) da área urbana e 23 (14,37%, 95% CI: 9,3-20,8%) da área rural (P > 0,05). Sequências parciais de DNAs obtidos a partir de produtos da PCR de 18 amostras da área urbana e 16 da área rural foram 100% idênticas a E. canis do Brasil e EUA. Este estudo relata a primeira detecção molecular de E. canis em cães da região norte do Pantanal.