Estudo fitoquímico e atividades leishmanicida, anticolinestarásica e antioxidante de extratos de Annona glabra L. (araticum panã) / Phytochemical study and leishmanicidal, anticholinesterase and antioxidant activities of Annona glabra L. (araticum panã) extracts

O objetivo deste estudo foi investigar as principais classes de compostos químicos presentes em Annona grabra L. (Araticum panã), e avaliar o seu potencial biológico analisando suas atividades antioxidante, antiacetilcolinesterase e leishmanicida. Para tanto, a entrecasca e sementes foram submetidas à extração em aparelho de soxhlet com os solventes orgânicos hexano, clorofórmio, acetato de etila e metanol, obtendo-se os respectivos extratos. Com os extratos foram realizados testes de prospecção fitoquímica, determinação da atividade antioxidante pelo método de inibição do radical livre DPPH e inibição da acetilcolinesterase em ensaio de cromatografia em camada delgada. Os testes de atividade leishmanicida in vitro em formas promastigotas de Leishmania infantum chagasi foram realizados em placa de 96 poços em aparelho ELISA. Os extratos foram testados a 100 ?g/ mL. Os testes fitoquímicos revelaram a presença de esteroides, triterpenos, alcaloides, compostos fenólicos e saponinas. Todos os extratos apresentaram inibição da acetilcolinesterase e os extratos hexânicos de ambas partes mostraram maior percentual de inibição de L. infantum chagasi. Nestes extratos, compostos apolares como esteroides e triterpenos podem contribuir para a atividade leishmanicida. Os extratos de melhor atividade antioxidante foram o acetato de etila e metanólico da entrecasca e metanólico das sementes que correspondem aos que contem compostos fenólicos. Conclui-se que A. glabra constitui uma fonte potencial de agentes leishmanicida com possível mecanismo de ação pela inibição da enzima acetilcolinesterase das membranas da L. infantum chagasi, causador da leishmaniose visceral.(AU)

The aim of this study was to investigate the main types of chemical constituents present in Annona grabra L. (araticum panã) and evaluate its biological potential by analyzing the antioxidant, antiacetylcholinesterase and antiLeishmanial activities. For this, the sapwood and seeds were subjected to extraction in soxhlet apparatus using the following organic solvents: hexane, chloroform, ethyl acetate and methanol for obtaining the respective extracts. These extracts were submitted to phytochemical prospection, antioxidant tests by scavenging the free radical DPPH, acetylcholinesterase inhibition assay on TLC plates. The in vitro antiLeishmanial assay in Leishmania infantum chagasi promastigotes were performed in a 96 well plate in an ELISA instrument. The extracts were tested at 100 ?g/ mL. Phytochemical investigation revealed the presence of sterols, triterpenes, alkaloids, phenolic compounds and saponins. All extracts showed inhibition of acetylcholinesterase, and hexane extracts of both parts presented more action in L. infantum chagasi. The extracts with better antioxidant action were ethyl acetate and methanol extracts of the sapwood and methanol extract of seeds, which correspond to those, which contains phenolic compounds. In conclusion, A. glabra constitutes a potential source of antiLeishmanial agents with possible mechanism of action by inhibiting the acetylcholinesterase in the membranes of L. infantum chagasi responsible for visceral Leishmaniasis.(AU)

Preparation and Evaluation of Annona glabra L. Leaf Extract Contained Alginate Film for Burn Healing.

Aims: To prepare and evaluate herbal wound dressing comprising of Annona glabra L. leaf extract and calcium alginate on experimental animal models. Study design: Qualitative analysis for phytochemicals was carried out. Wound dressing material was formulated and characterized before the efficacy of formula was evaluated. Place and Duration of Study: School of Biotechnology, International University, Vietnam National University, Ho Chi Minh City, between August, 2012 and May, 2013. Methodology: Phytochemicals from ethanol leaf extract were screened by standard methods. Extract-loaded calcium alginate films were first dried cast from the gel formulations of 1.0%, 2.0%, 3.0%, 4.0%, and 0% (w/v) extract. The dried film morphologies and in vivo wound healing profiles were then investigated. Third-degree burn wounds were induced in Swiss albino mice divided into seven groups of 5 mice each. Groups I-V were given formula containing 1.0%, 2.0%, 3.0%, 4.0%, and 0% (w/v) extract, respectively. Group VI (negative control) received no treatment at all while group VII (positive control) was applied the standard dressing, Urgo Algoplaque (Laboratories Urgo). Results: Phytoconstituents that were detected including flavonoids, glycosides, saponins tannins, steroids, acidic compounds, and anthraquinones. There was a negligible difference in the physicochemical appearance of the prepared dressings. The topical application of these extract-loaded films with a dose of up to 4% extract accelerated significantly (P<0.001) wound healing process compared to the standard dressing Urgo Algoplaque. Groups I-IV were healed in a mean time of 16.8, 14.6, 11.6, and 11 days respectively, which were even faster than that of the standard dressing (18.4 days). The most prominent formula facilitated wound contraction without dermal irritation was the film impregnated 3.0% extract. Conclusion: Administration of the A. glara contained dressing promotes burn healing as evidenced by decreased healing time and faster wound contraction. It could be stated that A. glabra leaves possess wound healing property.

Potencial antiinflamatório de Annona glabra, Annonaceae / Anti-inflammatory potential of Annona glabra, Annonaceae

Annona glabra Linneau, Annonaceae, é uma árvore de pequeno porte encontrada em todo território brasileiro, principalmente nas áreas costeiras e conhecida popularmente como araticum-do-brejo e araticum-bravo. Este trabalho teve como objetivos investigar os efeitos do extrato de A. glabra e do ácido caurenóico dele purificado sobre a migração de granulócitos humanos e seu potencial imunomodulatório. Os resultados demonstraram que o extrato de A. glabra inibe a migração natural de granulócitos, de acordo com a dose, sugerindo potencial antiinflamatório, enquanto o ácido caurenóico demonstrou estimulá-la de forma significativa. Em contraste, nenhum efeito foi observado com relação a imunomodulação. Os efeitos apresentados ainda não foram descritos e, dessa forma, contribuem para ampliar a lista de atividades biológicas descritas não só do extrato de A. glabra, como também para o ácido caurenóico.

Annona glabra Linneau, Annonaceae, is a small tree that grows over the Brazilian territory particularly in its coast, and is known as "araticum-do-brejo" and "araticum-bravo". The aim of this study was to evaluate the effects of the extract of A. glabra and its purified kaurenoic acid on the locomotion of human granulocytes and their immunomodulatory potential. The results herein presented showed a dose-dependent inhibition of the granulocyte migration for the extract, suggesting an anti-inflammatory activity, in contrast with a striking stimulation observed for the kaurenoic acid. When focusing immunomodulation properties, no activity could be drawn. The effects presented in this work are reported for the first time and extend the list of biological activities already described for the A. glabra extract as well as for the kaurenoic acid.

Estímulo do comportamento fotoautotrófico durante o enraizamento in vitro de Annona glabra L., II. Aspectos da anatomia da folha antes da aclimatização / Stimulus of the photoautotrophic behavior during the in vitro rooting of Annona glabra L., II. Aspects of leaf anatomy before acclimatization

A baixa sobrevivência durante a aclimatização de plantas regeneradas através da micropropagação tem sido atribuída, entre vários fatores, à baixa capacidade fotossintética. O desenvolvimento de protocolos que utilizem sistemas de cultivo in vitro fotoautotróficos surgem como possibilidades potenciais para aumentar a eficiência da micropropagação. Objetivou-se, neste trabalho comparar as medições dos tecidos foliares de plantas de Annona glabra L. cultivadas in vitro, sob condições de estímulo ao fotoautotrofismo e heterotróficas, durante a fase de enraizamento, com plantas ex vitro (mantidas sob radiação fotossintética ativa de 130-170µmol.m-2.s-1, sem controle de temperatura). As brotações foram enraizadas em condições de estímulo ao fotoautotrofismo (meio sem sacarose e com aeração) e em condições heterotróficas (meio com sacarose e sem aeração). O meio de cultivo utilizado foi o WPM adicionado de 164,4mM de carvão ativado e 4,9µM AIB. Após 30 dias de cultivo realizaram-se medições das espessuras das epidermes abaxial, adaxial, parênquima esponjoso, paliçadico e do limbo. Verificaram-se variações na anatomia das folhas, que foram caracterizadas por um aumento na espessura foliar de acordo com a aeração estabelecida. O enraizamento de plantas de A. glabra em condições de estímulo ao fotoautotrofismo permitiu desenvolvimento anátomo-fisiológico semelhante àquele observado em condições ex vitro, o que pode minimizar as perdas no processo de micropropagação.

The low survival during the acclimatization of plants regenerated through the micropropagation has been attributed, among several factors, to low the photosynthetic capacity. The development of photoautotrophic in vitro culture systems appears as potential possibilities of increasing the efficiency of the micropropagation. The aim of this work was to compare the leaf anatomy of plants of Annona glabra L. cultivated in vitro, under photoautotrophic and heterotrophic conditions, during the phase of rooting, with ex vitro (maintained in greenhouse under photosynthetic acitve radiation of 130-170µmol.m-2.s-1, without control of room temperature). Shoots were rooted in photoautotrophic conditions (sucrose-free medium with aeration) heterotrophic conditions (medium with sucrose without ventilation). The medium of culture was the WPM supplied of 164.4mM of activated charcoal and 4.9µM AIB. After 30 days of culture measurements of the foliar thickness of the epidermises abaxial, adaxial, parenchyma spongy, palisade and limb one. Verified variations in the anatomy of the leaves, that had been characterized by an increase in the leaf thickness in accordance with the established aeration. In vitro photoautotrophic rooting of plants Annona glabra L stimulated an anatomical and physiological development similar to the one observed in an ex vitro condition, which may minimize the losses at the acclimatization process.

Estímulo do comportamento fotoautotrófico durante o enraizamento in vitro de Annona glabra L., I. desenvolvimento do sistema radicular e da parte aérea / Stimulus of the photoautotrophic behavior during the in vitro rooting of Annona glabra L., I. development of root system and shoot

Conduziu-se este trabalho, com o objetivo de induzir a estímulo do comportamento fotoautotrófico durante o enraizamento in vitro em brotações de Annona glabra L. Brotações oriundas de cultivo em tubos fechados com tampa e película de PVC (cultivo sem aeração), com tampa sem a película de PVC e tampão de algodão (cultivo com aeração) foram inoculadas em meio WPM suplementado com 4,9 µ M de AIB e 164,4mM de carvão ativado na presença (58,42mM) ou ausência de sacarose. Durante o enraizamento, foram mantidas as mesmas condições de vedação dos tubos de ensaio em que as brotações foram induzidas. Após a inoculação, os tubos contendo os explantes foram mantidos em sala de crescimento sob radiação fotossintética ativa de 45-56 µ mol.m-2.s-1 a 25±3ºC. Os resultados mostraram que o enraizamento das brotações de A. glabra não dependeu do suprimento de sacarose no meio de cultura, em tubos fechados com o tampão de algodão ou tampa plástica sem PVC. A aeração dos tubos de ensaio trouxe incrementos de significativos (até 250 por cento) na matéria seca radicular. A indução de raízes secundárias (laterais) em A. glabra só ocorreu em culturas com aeração, independentemente da presença ou ausência de sacarose no meio de cultura. Com os resultado desse experimento, conclui-se que o estímulo do comportamento fotoautotrófico em A.glabra pode ser obtido com sucesso durante a fase de enraizamento in vitro.

The objective of the present work was to evaluate whether Annona glabra L. shoots are able to acquire the photoautotrophic behavior during the in vitro rooting. In vitro A. glabra shoots originated from cultures in vessels sealed with cap and PVC film (culture without aeration), cap without PVC film or cotton tampon (cultures with aeration), were inoculated in WPM medium supplemented with 4.9 µ M IBA and 164,4mM activated charcoal in the presence (58.42mM) or absence of sucrose. During rooting, the same conditions in which shoots were induced were maintained. After inoculation, the tubes with explants were maintained in growth room under photosynthetic active radiation of 45-56 µ mol.m-2.s-1 and of temperature 25±3ºC. The results showed that the rooting of A. glabra shoots do not depend on the supply of sucrose into culture medium, in vessel with aeration. Aeration of cultures brought expressive increments of dry weight of roots (up to 250 percent). The induction of secondary (side) roots was found only in cultures with aeration, independently of sucrose presence. One concluded that the acquisition of the photoautotrophic behavior in A. glabra may be obtained with success during the in vitro rooting phase.