ABSTRACT
Resumen: Introducción: la cirugía micrográfica de Mohs es una técnica quirúrgica especializada para el tratamiento del cáncer de piel no melanoma. La histopatología cumple un rol fundamental, y la elección de la tinción es un punto de controversia. Objetivos: comparar el rendimiento de las tinciones de hematoxilina y eosina (HyE) versus azul de toluidina (AT) durante la cirugía. Método: estudio observacional, descriptivo y transversal a partir de noviembre de 2017 hasta mayo de 2018. Se incluyeron las láminas empleadas durante la cirugía en el período mencionado. Estas fueron analizadas por el cirujano de Mohs, tres residentes y una dermopatóloga. Se valoró el rendimiento de ambas tinciones, teniendo en cuenta las características celulares y los elementos del estroma. Resultados: se estudiaron 23 tumores (16 carcinomas basocelulares y 7 carcinomas espinocelulares). Al observarse al microscopio óptico tanto con la tinción de AT como con HyE no se encontraron diferencias significativas entre ambos grupos en lo global, sólo en algunas características, especialmente con la HyE. Conclusiones: es el primer trabajo en Uruguay que compara la eficacia de las dos tinciones durante la cirugía micrográfica de Mohs. Como conclusión tanto la tinción de HyE como el AT son muy buenas técnicas para el diagnóstico de carcinomas cutáneos.
Abstract: Introduction: Mohs micrographic surgery is a specialized surgical technique used to treat nonmelanoma carcinoma. Histopathology plays a vital role in the diagnosis of this condition, and the choice staining method is controversial. Objective: to compare results in the use of hematoxylin and eosin (H&E) versus Toluidine blue (TB) staining during surgery. Method: observational, descriptive and transversal study conducted from November, 2017 until May, 2018 of the slides used during surgeries in the selected period. Slides were analysed by the Mohs surgeon, 3 residents and a dermopathologist to evaluate the results of both staining methods, in consideration of cell features and stromal elements. Results: 23 tumors were analysed (16 Basal Cell carcinomas and 7 Squamous Cell Carcinoma). Microscopic observation of slides prepared with Toluidine blue and hematoxylin and eosin stains did not show significant global differences between both groups, except in terms of a few characteristics, in particular with hematoxylin and eosin stains. Conclusions: this was the first study in Uruguay to evaluate the effectiveness of both staining methods during Mohs micrographic surgery, and it concluded that both Toluidine blue and hematoxylin and eosin stains are very good techniques in evaluating skin-cancer.
Resumo: Introdução: a cirurgia micrográfica de Mohs é uma técnica cirúrgica especializada para o tratamento do câncer de pele não melanoma. A histopatologia desempenha um papel fundamental, onde a escolha da coloração é um ponto de controvérsia. Objetivos: comparar o desempenho das colorações de hematoxilina e eosina versus azul de toluidina durante a cirurgia. Método: estudo observacional, descritivo e transversal de novembro de 2017 a maio de 2018. Foram incluídas as lâminas utilizadas durante as cirurgias no referido período. Estas foram analisadas pelo cirurgião especializado na técnica de Mohs, 3 residentes e um dermatopatologista onde foi avaliado o desempenho de ambas as colorações, levando em consideração as características celulares e os elementos do estroma. Resultados: foram estudados 23 tumores (16 carcinomas basocelulares e 7 carcinomas espinocelulares). Quando observados ao microscópio de luz para coloração AT e H&E, não foram encontradas diferenças significativas entre os dois grupos em geral, apenas em algumas características, especialmente com o H&E. Conclusões: é o primeiro estudo no Uruguai que compara a eficácia dos 2 corantes durante a cirurgia micrográfica de Mohs. Em conclusão, tanto a coloração com hematoxilina e eosina quanto com azul de toluidina são técnicas muito boas para o diagnóstico de carcinomas de pele.
Subject(s)
Mohs SurgeryABSTRACT
This study was aimed at comparing the commonly used metachromatic stains viz., Papanicolaou stain, WrightGiemsa, Toluidine blue and Methylene blue in the assessment of cell types of the oestrous cycle in rats. Eight female Sprague-Dawley rats aged 8-9 weeks were used for this assessment. Cotton Swabs were gently inserted in the animals vagina to obtain cells from which they were then transferred to glass slides for staining and evaluation under microscopy. The different cell types were compared for their morphological features and clarity of cellular detail under all four stains. The application, advantages and limitations of all stains were then discussed. It was concluded that the selection of the most effective stain in the assessment of vaginal cytology depends on their application to clinical or research which was based on the cellular detail of interest, time, cost and availability of each staining procedure.
El presente estudio tuvo como objetivo comparar las tinciones metacromáticas comúnmente utilizadas, Wright's-Giemsa, azul de toluidina, azul de metileno y tinción de Papanicolaou, en la evaluación de los tipos de células del ciclo estral en ratas. El estudio se realizó en ocho ratas hembras SpragueDawley, con edades entre 8 y 9 semanas, y se usaron hisopos vaginales de algodón para preparar portaobjetos. Los diferentes tipos de células se compararon por sus características morfológicas y claridad en las cuatro tinciones. La aplicación, ventajas y limitaciones de todas las tinciones fueron discutidas. Se concluye que la selección de la tinción más efectiva en la evaluación de la citología vaginal depende de su uso, es decir, clínico o de investigación, el detalle celular de interés, tiempo, costo y disponibilidad.
Subject(s)
Animals , Female , Rats , Staining and Labeling/methods , Vagina/cytology , Cytological Techniques/methods , Estrous Cycle , Azure Stains , Tolonium Chloride , Coloring Agents , Papanicolaou Test , Methylene BlueABSTRACT
A babesiose é uma doença hemolítica transmitida por carrapatos e causada por protozoários intraeritrocitários do gênero Babesia. Esta é uma doença de incidência elevada na Região Sul do Brasil e responsável por perdas econômicas consideráveis. O diagnóstico clínico-patológico pode ser feito através da demonstração do parasito pelo exame de esfregaços sanguíneos ou de tecidos frescos. Entretanto, com frequência, somente órgãos fixados em formol são remetidos para laboratórios de patologia, o que impossibilita a realização do esfregaço. O principal objetivo deste estudo foi encontrar técnicas histoquímicas alternativas e capazes de aprimorar a evidenciação de Babesia bovis intraeritrocitária em tecidos fixados em formol. Para este estudo, foram analisadas retrospectivamente amostras de tecidos de 50 casos de necropsias de bovinos, as quais haviam sido fixadas em formol e processadas rotineiramente para histopatologia. Os casos foram divididos em um grupo controle, constituído por 12 casos de babesiose cerebral com substância cinzenta encefálica róseo-cereja característica (grupo A), e 38 casos sugestivos de tristeza parasitária bovina (grupo B), conforme os protocolos de necropsias. Foram testadas as técnicas histoquímicas de Azul Alciano, Azul de Metileno, Azul de Toluidina, Giemsa, Gram (método de McCallum-Goodpasture), Grocott, Ácido Periódico de Schiff e Ziehl-Neelsen. Dentre estas, observou-se que as técnicas de Azul de Metileno e Azul de Toluidina permitiram observar características morfológicas e tintoriais de maneira mais nítida, auxiliando na identificação de B. bovis. Adicionalmente, foram estabelecidos vários parâmetros clínico-epidemiológicos e anatomopatológicos da babesiose por B. bovis.(AU)
Babesiosis is a hemolytic tick-borne disease caused by intraerythrocytic protozoal parasites of the genus Babesia. This is a disease of high incidence in the southern Brazil and responsible for considerable economic losses. Clinical-pathological diagnosis can be made by demonstrating the parasite by examining blood smears or fresh tissues. However, frequently, only formalin-fixed organs are sent to pathology laboratories, which makes it impossible to perform the smears. The main objective of this study was to find alternative histochemical techniques capable to improve the identification of intraerythrocytic Babesia bovis in histological sections. For this study, tissue samples from 50 bovine necropsy cases were retrospectively analyzed, which had been fixed in formalin and routinely processed for histopathology. The cases were divided into a control group, consisting of 12 cases of cerebral babesiosis with characteristic pink-cherry gray matter (group A), and 38 cases suggestive of cattle tick fever (group B), according to necropsy protocols. Histochemical techniques of Alcian Blue, Methylene Blue, Toluidine Blue, Giemsa, Gram (McCallum-Goodpasture method), Grocott, Periodic Acid of Schiff and Ziehl-Neelsen were tested. Among these, it was observed that the techniques of Methylene Blue and Toluidine Blue allowed to observe morphological and dye characteristics in a clearer way, aiding in the identification of B. bovis. In addition, several clinical-epidemiological and anatomopathological parameters of babesiosis caused by B. bovis were established.(AU)
Subject(s)
Animals , Cattle , Babesiosis/classification , Babesiosis/diagnosis , Immunohistochemistry/veterinary , Babesia bovisABSTRACT
ABSTRACT: In this study the correlation between the clinical score, mast cell count and interleukin 31 (IL-31) immunostaining in the skin of dogs with atopic dermatitis was determined. A total of 31 dogs of different breeds, from one to eight years of age, were chosen for the study. The 20 females and 11 males were categorized based on the CADESI-4 system, as having discrete, moderate or marked atopic dermatitis. Skin samples were collected from the axillary and interdigital regions and stained with hematoxylin and eosin for cytohistomorphological analyses and toluidine blue to evaluate the mast cell counts, and immunohistochemistry for the IL-31 immunostaining. Animals revealing higher atopic dermatitis scores had greater numbers of mast cells and IL-31 immunolabeled cells. More numbers of cells immunolabeled for IL-31 were evident in the axillary skin compared with the interdigital skin in dogs having this condition. A correlation was identified between the clinical scores and mast cell numbers in the interdigital region, as well as between the clinical scores and number of cells immunolabeled for IL-31 in the axillary area. A correlation was also reported between the mast cell numbers and IL-31 immunolabeled cells only in the axillary skin, and none in the interdigital regions. It was thus concluded that the mast cells and IL-31 are involved in the pathogenesis of the canine atopic dermatitis (CAD), as well as lymphocytes and plasma cells. It was also observed that the higher the degree of clinical severity of the disease, the more the numbers of mast cells and IL-31 in the skin of those animals suffering from CAD, which implies the influence of these immunological constituents on the genesis of pruritus and disease progression.
RESUMO: Este estudo avaliou a correlação entre o escore clínico, a contagem de mastócitos e a imunomarcação de interleucina 31 (IL-31) na pele de cães com dermatite atópica. Foram selecionados 31 cães de diferentes raças, com idade entre um e oito anos, sendo 20 fêmeas e 11 machos, divididos em discretamente, moderadamente e acentuadamente acometidos por dermatite atópica segundo o sistema CADESI-4. Amostras da pele das regiões axilar e interdigital foram colhidas e submetidas às colorações de hematoxilina e eosina para a avaliação cito-histomorfológica e azul de toluidina para a contagem de mastócitos, bem como a técnica de imunoistoquímica para a imunomarcação de IL-31. Os animais com maior escore de dermatite atópica apresentaram maior número de mastócitos e de células imunomarcadas para IL-31. Houve maior número de células imunomarcadas para IL-31 na pele da axila em relação à interdigital nos cães com a doença. Foi constatada correlação entre o escore clínico e a quantidade de mastócitos no interdígito, bem como entre o escore clínico e a quantidade de células imunomarcadas para IL-31 na axila. Também foi verificada correlação entre a quantidade de mastócitos e células imunomarcadas para IL-31 na pele da região axilar, mas não da interdigital. Conclui-se que mastócitos e a IL-31 estão envolvidos na patogenia da DAC, assim como linfócitos e plasmócitos. Também, quanto maior o grau de severidade clínica da doença, maior a quantidade de mastócitos e IL-31 na pele dos animais com DAC, o que remete à influência desses componentes imunológicos na gênese do prurido e progressão da doença.
ABSTRACT
O câncer de mucosa oral é um problema de saúde pública, com maior incidência em homens acima de 50 anos. Uma das manifestações clínicas mais precoces do câncer da mucosa oral são as lesões leucoqueratósica. O aspecto clínico não homogêneo e o tamanho maior de 200mm2, em mucosa não queratinizada como a do assoalho da boca e ventre da língua, são aspectos que implicam na possibilidade de evolução da lesão. A dificuldade do diagnóstico das lesões precoces está na seleção do local a ser biopsiado principalmente frente a lesões extensas e heterogêneas. O objetivo desta pesquisa é avaliar se a utilização do exame clínico juntamente com os métodos auxiliares de diagnóstico das lesões leucoqueratósica da mucosa oral (VELscope®, Azul de toluidina e Solução de lugol) contribui para uma maior precisão do diagnóstico de displasias nestas lesões quando comparado ao histopatológico. E, identificar os padrões morfológicos destas lesões quando avaliadas por meio da microscopia confocal reflectante. Foram selecionados 30 pacientes, maiores de 18 anos, portadores de lesão clínica compatível com leucoplasia oral triados no ambulatório da disciplina de Estomatologia Clínica da Faculdade de Odontologia da Universidade de São Paulo e que precisavam ser submetidos à biópsia para o estabelecimento do diagnóstico final. Foram realizados os testes de Azul de Toluidina, Solução de Lugol, VELscope®, microscopia confocal reflectante e posteriormente, a biópsia incisional para obtenção do diagnóstico final. Os pacientes incluídos possuíam média de idade 60,66 anos, sendo 70% (21/30) do gênero feminino e 30% (9/30) do gênero masculino. O tabagismo foi relatado por 16,7% (5/30) dos pacientes, sendo 60% (3/5) homens. A associação do tabagismo e etilismo foi relatada em 10% (3/30) dos pacientes, o tabagismo isoladamente por 6,6% (2/30) e o de etilismo por 3,3%(1/30)...
Cancer of the oral mucosa is a public health problem, with higher incidence in men above 50 years. One of the earliest manifestations of cancer of the oral mucosa lesions are leukokeratosis. The inhomogeneous clinical aspect and the larger size of 200mm2 in non-keratinized mucosa as the floor of the mouth and constipation of the tongue, are aspects that imply the possibility of evolution of the lesion. The difficulty of diagnosis of early lesions is in the selection of the site to be biopsied primarily against large and heterogeneous lesions. The objective of this research is to evaluate the use of clinical examination along with diagnostic aids leucoqueratósica of oral lesions (VELscope ®, Toluidine blue and Lugol solution) methods contributes to greater accuracy of diagnosis of dysplasia in these lesions when compared the histopathological. And identify the morphological patterns of these lesions when evaluated by reflectance confocal microscopy. 30 patients older than 18 years, with clinical lesion compatible with oral leukoplakia screened in the outpatient discipline of Clinical Dentistry, Faculty of Dentistry, University of São Paulo and that needed to be biopsied to establish the final diagnosis were selected. Tests toluidine blue, Lugol's solution, VELscope ®, reflectance confocal microscopy (RCM) and subsequently, incisional biopsy to obtain the final diagnosis were performed. Patients enrolled had a mean age 60.66 years, 70% (21/30) were female and 30% (9/30) were male. Smoking was reported by 16.7% (5/30) of patients, 60% (3/5) homens.A association of smoking and alcohol use was reported in 10% (3/30) of patients, smoking alone by 6.6% (2/30) and of alcoholism by 3.3% (1/30)...
Subject(s)
Humans , Male , Adult , Middle Aged , Carcinoma, Squamous Cell/complications , Carcinoma, Squamous Cell/diagnosis , Diagnosis, Oral/methods , Epithelium , Leukoplakia, Oral/classification , Leukoplakia, Oral/complications , Leukoplakia, Oral/diagnosis , Odontodysplasia/complications , Odontodysplasia/diagnosisABSTRACT
O câncer é considerado a segunda maior causa de morte em países ocidentais. Nos Estados Unidos da América (EUA) as mortes por câncer anualmente superam a soma das mortes provocadas em guerras como Vietnã, Coreia e as Grandes Guerras Mundiais. Apresentando-se como a mais agressiva das neoplasias dermatológicas, o melanoma cutâneo está associado à cerca de 75% das causas de morte por câncer de pele. Um dos tratamentos estudados para aplicação em pacientes com esta e outras patologias é a Terapia Fotodinâmica (TFD), que é baseada no uso de corantes de baixa toxicidade, que tem seletividade por alguns tecidos ou células e quando ativados por baixas doses de luz visível induzam alterações celulares como a produção ERO. Os fenotiazínicos são moléculas catiônicas com, absorção de luz na região entre 620-660nm, espectro que permite maior penetração nos tecidos, promovendo maior ação do composto em tecidos mais profundos. A irradiação foi feita com luz lazer com λ= 660nm, com potência de 100 mW, densidade de energia de 150 J/cm2 por 1 min. As quantificações de viabilidade celular foram feitas por método colorimétrico, e realizada a leitura em leitor de microplaca a 655 nm. A determinação das IC50 do Azul de Metileno e Azul de Toluidina O foi 2,5 μM e 8,4 μM, respectivamente. Utilizando a TFD observamos que os efeitos citotóxicos dos compostos fenotiazínicos apresentam significância estatística (p<0,05) tanto em AM quanto em ATO. Em microscopia óptica com coloração por May-Grunwald-Giemsa observamos que existe uma aparente diminuição do conteúdo citoplasmático e preservação nuclear nas células tratadas com TFD, além da diminuição da quantidade de células por campo. A avaliação ultraestrutural por Microscopia de varredura mostra células com visível extração citoplasmática após a TFD, apontando uma lesão membranar. Novas avaliações precisam ser feitas como estabelecer um melhor protocolo para aumentar os efeitos da TFD.
Cancer is considered the second leading cause of death in Western countries. In the United States of America (USA) cancer deaths annually exceed the total of deaths in wars like Vietnam, Korea and the Great World Wars. Presenting as the most aggressive of the skin neoplasms, cutaneous melanoma is associated with circa 75% of the deaths from skin cancer. One of the therapies used in patients with melanoma and other pathologies is Photodynamic Therapy (PDT), which is based upon the use of dyes of low toxicity, which has selectivity for certain tissues or cells and low doses when activated by visible light induce cellular changes such as ROS production. The phenothiazic dyes are cationic molecules, absorption of light in the region between 620-660 nm, allowing greater spectrum tissue penetration, promoting higher activity of the compound in deeper tissues. The irradiation was performed with laser light with λ = 660 nm with 100 mW, energy density of 150 J/cm2 for 1 min. Quantification of cell viability was performed by the colorimetric method, and performed a reading in a microplate reader at 655nm. Determination of IC50 of Methylene Blue and Toluidine Blue O was 2.5 μM and 8.4 μM respectively. Using the protocol of PDT observed that there is one of the cytotoxic effects of phenothiazine compounds with statistical significance (p <0.05) in both MB and in TBO. Through optical microscopy by staining with fast Panotic was observed that there is an apparent decrease in the cytoplasm in cells treated with MB and TBO as well as reduced number of cells per field. The Scanning Electron Microscopy, shows cells with cytoplasm extraction, after PDT, indicated possibility, membrane damage. New assessments need to be made to establish a better protocol to potentiate the effects of PDT.
Subject(s)
Humans , Methylene Blue/therapeutic use , Photochemotherapy/methods , Photochemotherapy , Melanoma/diagnosis , Melanoma/epidemiology , Melanoma/immunology , Melanoma/mortality , Melanoma/pathology , Melanoma/prevention & control , Melanoma/therapyABSTRACT
O presente estudo avaliou a quantidade de mastócitos após irradiação do laser não cirúrgico λ685 nm. Dezoito ratos machos, linhagem Wistar (250 a 300 gramas), nos quais foram realizadas feridas cirúrgicas padronizadas, foram distribuídos em seis grupos, três experimentais (com quatro ratos) e três controles (com dois ratos). Os grupos experimentais foram irradiados em quatro pontos perilesionais equidistantes (0,5 J/cm², 35 mW, 35 Hz e 17 segundos). Os grupos-controles não foram irradiados. Os animais foram mortos 6, 12 e 24 horas após a irradiação, sendo obtidas peças que seguiram para processamento laboratorial de rotina. O estudo das lâminas foi realizado por meio da contagem absoluta dos mastócitos pelo método esteriológico. Os resultados obtidos demonstraram que, nas primeiras 6 e 12 horas, após a irradiação laser, existe uma diminuição no número total de mastócitos, estatisticamente significante, quando comparados aos grupos controles, porém, após 24 horas, não existem diferenças no número de mastócitos entre os grupos experimental e controle. Baseados nos resultados obtidos com o protocolo de aplicação da luz laser utilizado, para esse modelo animal, pôde-se concluir que a luz laser é capaz de diminuir o número total de mastócitos após uma única irradiação.
This study measured the variation in the total number of mast cells after low level laser therapy (λ= 685 nm) using a stereological method. Eighteen male Wistar rats (250 to 300 grams) with standardized surgical wounds were randomly distributed into 6 groups - 3 study groups with 4 rats each, and 3 control groups with 2 rats each. In the study groups, four equidistant spots around the standardized wound were irradiated (0.5 J/cm², 35 mW, 35 Hz, 17 seconds). The control groups were not irradiated. The animals were killed at 6, 12 and 24 hours after laser therapy. Biological specimens were harvested and routinely processed; slides were prepared and stained with toluidine blue. The total number of mast cells was counted using the stereological method. A statistically significant decrease in the total number of mast cells was observed at 6 and 12 hours after irradiation. However, there was nodifference in the number of mast cells between study and control groups at 24 hours. Our results showed that one single irradiation with laser light reduced the total number of mast cells in the animal model used in this study.
ABSTRACT
Squamous cell carcinomas are the most commonly diagnosed oral malignancy, accounting for about 90% of all malignant oral lesions. Detection of the condition at early stages is rare; as a result, the clinical and histological characteristics and prognosis of this tumor have not been extensively investigated. The objective of this study was to evaluate clinical and microscopic features of squamous cell carcinomas using immunohistochemical analysis and assessing biological markers of angiogenesis and tumor vascular activity (anti-CD31, anti-CD34, Factor VIII), cell proliferation (Ki-67), and loss of cell suppression (p53). Tolonium chloride 1% was used to determine the optimal biopsy site. Six patients seen at the Stomatology Service of a university hospital in Canoas, southern Brazil, with a suspected diagnosis of squamous cell carcinoma were analyzed. All patients were male, with a mean age of 56.6 years, and four had a white skin color. Lesions were detected in the tongue4 and tonsillar pillar2. All diagnoses were confirmed by microscopy (hematoxylin-eosin staining). Immunohistochemical analysis revealed p53 expression in 5 of the cases, Ki-67 in 6, and anti-CD34 in 1; anti-CD31 and Factor VIII were not detected in any patient. Our findings suggest an important contribution of tumor markers in the diagnosis and prognosis of these malignancies, as well as in treatment planning.
O carcinoma epidermoide é a neoplasia maligna bucal mais frequentemente diagnosticada, correspondendo a aproximadamente 90% de todas lesões malignas bucais. Sua detecção nos estágios iniciais da doença é rara; como resultado, tem sido difícil avaliar o comportamento clínico e histológico e o prognóstico deste tumor. O objetivo deste estudo foi avaliar clínica e microscopicamente o carcinoma epidermoide através de análise imuno-histoquímica, avaliando imunomarcadores tumorais angiogênicos e de atividade vascular tumoral (anticorpos anti-CD31, anti-CD34, Fator VIII), de proliferação celular (Ki-67) e de perda de supressão celular (p53). Azul de toluidina a 1% foi utilizado para determinar o local ideal da biópsia incisional. Foram analisados seis pacientes oriundos do Serviço de Estomatologia do hospital universitário localizado em Canoas, sul do Brasil, com hipótese diagnóstica de carcinoma epidermoide. Todos os pacientes eram do sexo masculino, com idade média de 56,6 anos, e quatro tinham pele branca. As lesões foram detectadas na língua4 e no pilar amigdaliano2. Todos os diagnósticos foram confirmados por microscopia (hematoxilina-eosina). A análise imuno-histoquímica revelou expressão de p53 em 5 dos casos, Ki-67 em 6 e anti-CD34 em 1; anti-CD31 e Fator VIII não apresentaram expressividade. Nossos resultados sugerem uma contribuição importante dos marcadores tumorais no diagnóstico e prognóstico dessas neoplasias, bem como no planejamento terapêutico.
Subject(s)
Humans , Male , Middle Aged , Carcinoma, Squamous Cell/diagnosis , Carcinoma, Squamous Cell/immunology , Carcinoma, Squamous Cell/chemistry , Tolonium Chloride , Biomarkers, Tumor , Mouth NeoplasmsABSTRACT
A avaliação clínica nem sempre é suficiente para garaA avaliação clínica nem sempre é suficiente para garantir o diagnóstico das lesões orais. O objetivo deste artigo é avaliar a validade do teste com o azul de toluidina como método auxiliar no diagnóstico de lesões orais. A amostra constituiu-se de 110 pacientes com lesões orais. Seguindo o protocolo estabelecido para este trabalho, todas as lesões foram submetidas ao teste do azul de toluidina. Um total de 105 lesões foram biopsiadas e a histopatologia considerada padrão-ouro diagnóstico. O teste do azul de toluidina foi positivo em 31 das 110 lesões, com 20 marcações focais e 11 difusas. Concluiu-se que, o teste do azul de toluidina é um recurso útil como método auxiliar no diagnóstico de lesões orais.
Subject(s)
Humans , Male , Female , Child , Adolescent , Young Adult , Adult , Middle Aged , Aged , Aged, 80 and over , Diagnosis, Oral/methods , False Negative Reactions , False Positive Reactions , Tolonium ChlorideABSTRACT
The aim of this study was to determine the percentage of sperm with damaged chromatic measure with toluidine blue stain and it´s relationship with motility and viability in criopreserverd semen from Brahman bulls. Three ejaculates from six Brahman bulls were used. Immediately after thawing, sperms were stained with toluidine blue to establish chromatin integrity (sperms with normal chromatin were light blue or green while sperms with damaged chromatin were dark blue or violet). Sperms were also stained with eosin-nigrosin to determine viability (live sperms were unstained while dead sperms were pink). Motility was measured under light microscope. Effects of bull, ejaculate, and the interaction between variables were assessed. The percentage of live sperms was 50.02 ( ± 14.13%). The mean motility was 33.88 (± 12.43%), while the percentage of sperms with damaged chromatin was 4.17 ( ± 2.96%). Viability was positively correlated with motility (r=0.77217, p=0.0002), and negatively correlated with damaged chromatin sperms (r= -0.43104, p=0.0087). Motility percentage was negatively correlated with the percentage of sperms with damaged chromatin (r=-0.48337, p=0.0421). In conclusion, cryopreserved semen of Brahman bulls presented a low level of chromatin damage, and this trait was negatively correlated with sperm motility and viability.
El objetivo del presente trabajo fue determinar el porcentaje de espermatozoides con cromatina dañada medida con la tinción de azul de toluidina, y su relación con la motilidad y la vitalidad del semen criopreservado de toros Brahma. Para ello, se utilizó semen de tres eyaculados de seis toros Brahman, el cual una vez descongelado se procedió a teñir con azul de toluidina para determinar la integridad de la cromatina (espermatozoides con cromatina normal teñidos de azul o verde claro; espermatozoides con cromatina anormal teñidos de azul oscuro o violeta), también se tiñeron con eosinanigrosina para determinar la viabilidad (espermatozoides vivos permanecen blancos; espermatozoides muertos se tiñen de rosado) y se estimó la motilidad espermática mediante microscopía óptica. Se evidenciaron las diferencias en todos los parámetros evaluados debidas al efecto toro y al eyaculado, así como a la interacción entre estas dos variables. El porcentaje de espermatozoides vivos fue de 50.02 ± 14.13% y la motilidad espermática promedió un 33.88 ± 12.43%, mientras que el porcentaje de espermatozoides con cromatina dañada fue de 4.17 ± 2.96%. El porcentaje de espermatozoides vivos se correlacionó positivamente con la motilidad (r=0.77217, p=0.0002), y negativamente con el porcentaje de espermatozoides con cromatina dañada (r= -0.43104, p=0.0087), mientras que el porcentaje de motilidad se correlacionó negativamente con el porcentaje de espermatozoides con cromatina anormal (r= -0.48337, p=0.0421). En conclusión, el semen criopreservado de toros Brahman presenta un bajo nivel de espermatozoides con daño en la cromatina, lo cual se correlaciona negativamente con la motilidad y la vitalidad espermática.
O objectivo deste estudo foi determinar a percentagem de espermatozóides com cromatina danificada, determinada pela coloração com azul de toluidina e sua relação com a viabilidade e a mobilidade do esperma cripreservado de touros Brahman. Para isso, foram utilizados três ejaculados de sêmen de seis touros Brahman, que uma vez descongelado foram coradas com azul de toluidina para determinar a integridade da cromatina (espermatozóides com cromatina normal coloream de azul ou verde; cromatina de espermatozóides con cromatina danificada, coloream de azul escuro ou violeta). Também foram corados com eosina nigrosina para determinar a viabilidade (espermatozóides vivos permanecem brancos e os mortos de cor rosa) e a motilidade espermática foi estimada por microscopia de luz. Foram encontradas diferenças significativas em todos os parâmetros, devido ao efeito de touro e o ejaculado, bem como a interacção entre essas duas variáveis. A percentagem de espermatozóides vivos foi de 50.02 ± 14.13% e motilidade espermática média de 33.88 ± 12.43%, enquanto a percentagem de espermatozóides com cromatina danificada foi de 4.17 ± 2.96%. A percentagem de espermatozóides vivos foi positivamente correlacionada com a motilidade (r=0.77217, p=0.0002) e negativamente com a porcentagem de espermatozóides com cromatina danificada (r = -0.43104, p= 0.0087), enquanto que a percentagem de motilidade correlacionou negativamente com a percentagem de espermatozóides com cromatina danificada (r = -0.48337, p=0.0421). Em conclusão, o sêmen de touros Brahman criopreservados tem um baixo nível de dano da cromatina, que está correlacionada negativamente com a motilidade e a vitalidade do esperma.
ABSTRACT
Reprodutores com espermograma normal podem se comportar como subférteis ou passarem por períodos de subfertilidade. As alterações na cromatina dos espermatozóides são possíveis explicações encontradas para tais comportamentos. Conduziu-se este trabalho, com o objetivo de testar a eficiência de azul de toluidina (AT) e do alaranjado de acridina (AA) na identificação de alterações na compactação de cromatina em espermatozóides de ovinos e caprinos, além de avaliar a correlação entre essas alterações e as de morfologia espermática. Para tal, foram avaliadas amostras de sêmen de 15 ovinos e de 15 caprinos, com dez repetições para cada método por animal. Calcularam-se a média, o desvio padrão (DP) e o coeficiente de variação (CV) para cada técnica e animal. Utilizou-se o teste t-Student para avaliar diferença entre as médias obtidas nos dois métodos. Também foram calculados a correlação de Pearson e os coeficientes kappa ponderado e não ponderado para avaliar a concordância entre os métodos com AT e AA. Foi verificado que nem sempre as anomalias morfológicas de cabeça são acompanhadas por alterações na cromatina identificáveis pelos métodos utilizados neste trabalho. O método AT é mais estável e possui maior sensibilidade do que AA para ambas as espécies, sendo o mais indicado para caprinos. Contudo, em razão de apresentar repetibilidade muito baixa, ambos os métodos não são indicados para avaliação espermática em ovinos.
Males with normal spermogram can behave as subfertile or pass for periods of subfertility. Chromatin alterations of spermatozoa can account for such behavior. The objective of the present work was to test the efficacy of toluidine blue (TB) and acridine orange (AO) in the identification of alterations in chromatin compaction in spermatozoa from rams and goats, in addition to evaluate the correlation between those alterations and the ones of spermatic morphology. In order to do that, samples of semen from 15 rams and 15 goats were evaluated with 10 replications for each method. Mean, standard deviation and coefficient of variation were calculated for each animal and technique. Student's t-test was used to evaluate differences between the averages of two methods. Pearson correlation coefficient, weighted and non weighted kappa coefficient were also calculated to evaluate the agreement between methods with TB and AO. It was verified that morphological alterations of head not always are accompanied by alterations in chromatin identified by the methods used in this work. The TB method is more stable and sensitive than AO method for both species and this is most appropriate for goats. However, due to the very low repeatability, both methods are not indicated for evaluating ram spermatozoa.
ABSTRACT
Testaram-se variantes metodológicas utilizando azul de toluidina (AT), até se estabelecer um protocolo confiável para a avaliação computacional da compactação da cromatina em espermatozoides de galo. Para tal, foram utilizados sêmen de 10 galos com 35 semanas de idade e sêmen de 10 galos com 60 semanas de idade. O melhor método foi o de hidrólise com ácido clorídrico 1N por 10 minutos, coloração em cubeta com AT 0,025 por cento, pH 4,0, por 20 minutos, desidratação em álcool, diafanização em xilol e montagem com bálsamo do Canadá. Todas as amostras de sêmen foram submetidas a este protocolo e posteriormente avaliadas por análise de imagem computacional, em que foram feitas mensurações da área, comprimento, largura, perímetro, homogeneidade da compactação da cromatina dentro de cada cabeça e intensidade de compactação da cromatina. Os espermatozoides de galos velhos apresentaram mais alterações na cromatina que os de galos jovens. Os galos jovens apresentaram cabeça dos espermatozoides maior que os galos mais velhos. A análise computacional da compactação da cromatina mostrou-se um método menos subjetivo e mais preciso que a avaliação visual das cabeças dos espermatozoides.
The methodological variants using toluidina blue (AT) to establish a trustworthy protocol for the computational analysis of chromatin condensation of rooster spermatozoa were studied. Twenty semen samples were used: ten from 35-week-old roosters and ten from 60-week-old roosters. Different methods of denaturation and staining were tested. The best method was hydrolysis with 1N HCl for 10 minutes, staining in bucket with 0.025 percent AT, pH 4.0, for 20 minutes, dehydration in alcohol, clearing in xylol, and mounted with Canada balsam. All the semen samples were submitted to this protocol and later evaluated by computational image analysis. Area, length, width, perimeter, and chromatin compaction homogeneity of head spermatozoa were measured. The sperm of older roosters presented more chromatin changes than the ones of younger ones. The spermatozoa of younger roosters presented bigger heads than the ones of older roosters. The computational analysis of chromatin compaction showed to be less subjective and more precise than the visual evaluation for identification of chromatin alterations of rooster spermatozoa.