Nuevas perspectivas de la citología en diagnóstico molecular del cáncer epitelial de ovario y endometrio / New perspectives of cytology in molecular diagnosis of ovarian and endometrial epithelial cancer

Resumen OBJETIVO: describir la bibliografía donde se identificaron biomarcadores moleculares en muestras de citología cervical en base líquida para detectar cáncer epitelial de endometrio y ovario. METODOLOGÍA: búsqueda electrónica en las principales bases de datos de artículos relacionados con la detección de cáncer de ovario y de endometrio con los siguientes términos: citología en base líquida, cáncer epitelial de ovario, cáncer epitelial de endometrio, biomarcadores moleculares. RESULTADOS: los cánceres epitelial de ovario y de endometrio son enfermedades que carecen de un método de tamizaje eficaz. La citología en base líquida ofrece una manera eficaz de detectar alteraciones celulares y moleculares. Mediante la asociación entre la citología en base líquida y los métodos moleculares en el aparato genital inferior es posible identificar biomarcadores específicos; esto abre la posibilidad de desarrollar métodos de tamizaje para cáncer epitelial de endometrio y ovario. CONCLUSIONES: mediante el uso de la citología en base líquida es posible detectar cáncer epitelial de endometrio y ovario.

Abstract OBJECTIVE: To describe the literature that has identified molecular biomarkers in liquid-based cervical cytology samples to detect endometrial and ovary epithelial cancer. METHODOLOGY: An electronic search was conducted in the main databases in articles related to the detection of ovarian and endometrial cancer with the following search terms: liquid-based cytology, ovarian epithelial cancer, endometrial epithelial cáncer, molecular biomarkers. RESULTS: Epithelial ovarian and endometrial cancer are diseases that lack an effective screening method. Liquid-based cytology provides an effective way to detect cellular and molecular alterations in the detection of these neoplasms. Through the association between liquid-based cytology and molecular methods it is possible to identify specific biomarkers in the lower genital tract, opening up the possibility of developing screening methods for endometrial and ovary epithelial cancer. CONCLUSIONS: It is possible the detection of endometrial cancer and, to a lesser extent of epithelial ovarian cancer by using liquid-based Pap test.

Citología en base líquida: parámetros de eficacia / Liquid based cytology: efficacy parameters

OBJETIVO: Comparar la eficacia de la citología con la utilización de medio líquido en relación con la convencional, en pacientes que acudieron al Servicio de Ginecología de la Maternidad “Concepción Palacios”. MÉTODOS: Se llevó a cabo un estudio prospectivo y comparativo, que incluyó a 177 pacientes a las cuales se les realizó ambas citologías (convencional y líquida). RESULTADOS: Se obtuvieron 114 muestras con células metaplásicas y de la unión escamo- cilíndrica con la citología convencional y 60 con citología en base líquida (P=0,001). Con la citología en base líquida se encontraron menos casos sin exudado inflamatorio, más con exudado moderado, y se diagnosticaron más casos de infección por virus de papiloma humano. Con la técnica convencional se observaron más casos de vaginosis bacteriana. Los resultados citológicos, en relación con las células epiteliales, fueron similares con ambas técnicas: 171 y 157 negativos, 2 y 8 atipias de células escamosas de significado incierto y 4 y 12 lesiones intraepiteliales de bajo grado, para citología convencional y en base líquida, respectivamente. Hubo 23 falsos negativos y 1 falso positivo con la citología convencional mientras que con la citología en base líquida hubo 18 falsos negativos y 10 falsos positivos. CONCLUSIONES: La sensibilidad, el valor de predicción positivo y el valor de predicción negativo, de la citología procesada según ambas técnicas, fueron similares, la especificidad de la citología convencional fue más alta.

OBJECTIVE: To compare the efficacy of cytology with the use of liquid medium in relation to the conventional, in patients who attended the gynecology service in Maternidad “Concepción Palacios”. METHODS: Carried out a comparative and prospective study that included 177 patients which underwent both PAP (conventional and liquid). RESULTS: 114 samples with metaplastic cells and from the union escamo-cylindrical were obtained with conventional cytology and 60 with liquid-based cytology (P = 0.001). With liquid-based cytology found fewer cases without inflammatory exudate, most with moderate exudate, and more cases of infection were diagnosed by human papillomavirus. With the conventional technique, there were more cases of bacterial vaginosis. The cytologic findings, in relation to the epithelial cells, were similar with both techniques: 171 and 157 negatives, 2 and 8 atypia of squamous cells of uncertain significance and 4 and 12 intraepithelial lesions of low grade, for conventional smear and liquid-based, respectively. There were 23 false negative and false positive 1 with conventional cytology while with liquid-based cytology had 18 false negative and false positive 10. CONCLUSIONS: The sensitivity, the positive predictive value and the negative predictive value of Cytology processed according to both techniques were similar, the specificity of conventional cytology was higher.

Citología convencional y en base líquida en muestra compartida de tomas cervicouterinas / Conventional and liquid-based cytology in shared cervical samples

Estandarizar la técnica de citología en base líquida mediante el uso del medio fijador (BDSUREPAth) y de citocentrífuga e identificar las posibles ventajas sobre citología convencional en muestra compartida de tomas cervicouterinas. Métodos: se incluyeron 92 muestras de mujeres que asistieron a las campañas del programa de proyección social de la Fundación Universitaria de Ciencias de la Salud, Bogotá DC, Colombia. Resultados: de las 92 muestras, 89 fueron negativas para citología convencional y 75 para base líquida, observándose un mayor número de casos con anormalidades en células escamosas en citología en base líquida. Conclusiones: las células escamosas mantienen su tonalidad citoplasmática siendo basófilas o acidófilas, conservando lo translúcido de los citoplasmas; las células glandulares preservan su patrón en panal de abejas o empalizada. Mediante citología en base liquida se obtienen fondos más limpios, las atipias de las células epiteliales fueron más fáciles de identificar al igual que los microorganismos patógenos...

Objective: to standardize the use of BD SurePath and centrifuged liquid-based cytology and identify possible advantages over the use of conventional cytology by comparing results on shared cervical samples analysis. Methods: we included 92 samples collected from women who attended the social projection campaign conducted by Fundación Universitaria de Ciencias de la Salud, Bogotá DC, Colombia. Results: out of the 92 samples, 89 were negative by conventional cytology and 75 by liquid-based cytology, evidencing a greater number of cases where squamous cell anomalies were detected using liquid-based cytology. Conclusions: squamous cells cytoplasma maintains its tone, being basophilic and acidophilic, conserving translucence; glandular cells preserve their honeycomb or palisade pattern. Liquid-based cytology gives a more clean background and improves identification of epithelial cell atypia as well as pathogenic microorganisms...

Tinción dual inmunocitoquímica de p16INKa/Ki-67 para la detección de lesiones del cuello uterino asociadas a infección por el virus del papiloma humano / p16INK4a/Ki-67 immunocytochemical dual staining for detection of cervical lesions associated to papillomavirus infection

Este estudio se llevó a cabo para examinar el patrón de inmunoexpresión simultánea de p16INK4a/Ki-67y establecer su posible utilidad clínica para la detección precoz del cáncer de cuello uterino. Las muestras celulares de cuello uterino fueron seleccionadas de la pesquisa de rutina de cáncer cervical. La detección inmunocitoquímica de p16INK4a/Ki-67se realizó con el kit de trabajo CINtec® Plus. Todos los casos tenían una prueba de virus papiloma humano (VPH). Ciento quince muestras citológicas fueron incluidas: 11(9,6%) fueron negativas para lesión intraepitelial o malignidad (NILM), 32(27,8%) presentaron células escamosas con atipias de significado indeterminado (ASC-US), 62(53,9%) mostraron lesión intraepitelial escamosa de bajo grado (LSIL) y 10(8,7%) lesión intraepitelial escamosa de alto grado (HSIL). La prevalencia general de infección por VPH fue de 81,7% (94/115). En 42 casos (45,0%) se identificaron los siguientes genotipos específicos de VPH: VPH16 (26,2%), VPH51 (21,4%), VPH52 (14,3%) y el genotipo VPH66 (7,1%). De 115 muestras celulares, 42(36,5%) fueron positivas para la tinción dual de p16INK4a/Ki-67, siendo ésta muy frecuente en las muestras citológicas con HSIL (70,0%), disminuyendo en las LSIL (44,0%) y existiendo inmunopositividad en una minoría de ASC-US (25,0%). Ningún caso NILM mostró inmunopositividad para p1(6INK4a)/Ki-67 (p<0,001). En 40/115 casos (34,8%) hubo positividad tanto para infección por VPH oncogénico como para la tinción dual p16INK4a/Ki-67, incluyendo 6/32 (18,8%) con ASC-US, 26/62 (42,0%) con LSIL and 8/10 (80,0%) con HSIL. Esta metodología podría ser utilizada para detectar lesiones en cuello uterino que aún no han sido diagnosticadas o han pasado inadvertidas.

We aimed to explore the expression pattern of p16INK4a/Ki-67 immunocytochemical dual-staining and to establish the potential clinical utility for early detection of cervical lesions. Liquid-based cytologies of cervical specimens of cervical cancer screening were processed for p16INK4a/Ki-67 immunocytochemical dual-staining using the CINtec® Plus Kit. HPV testing was performed with the INNO-LiPA HPV genotyping Extra Reverse Hybridization Line Probe Assay kit. One hundred and fifteen cervical cytologies were analyzed with the following results: 11(9.6%) were negative for intraepithelial lesions or malignancy (NILM); 32(27.8%) presented atypical squamous cells of undetermined significance (ASC-US); 62(53.9%) exhibited low grade squamous intraepithelial lesions (LSIL) and 10(8.7%) showed high grade squamous intraepithelial lesions (HSIL). No cases of cervical cancer were detected. The overall prevalence of DNA HPV detection was 81.7% (94/115). The following specific HPV genotypes were identified in 42 (45.0%) cases: HPV16 (26.2%), HPV51 (21.4%), HPV52 (14.3%) and HPV66 (7.1%). Viral sequences of an unknown single HPV were detected in 23.8%of the cases. A total of 42/115 (36.5%) were p16INK4a/Ki-67 dual-staining-positive, being more frequent in HSIL (70.0%), decreasing in LSIL (44.0%), detected in a minority of ASC-US (25.0%) and negative in NILM cases (p<0.001). 40/115 cases (34.8%) were positive for both oncogenic HPV and p16INK4a/Ki-67 dual-staining, including 6/32 (18.8%) ASC-US, 26/62 (42.0%) LSIL and 8/10 (80.0%) HSIL, which represent a strong association between positivity for HPV, p16INK4a/Ki-67 staining and severe cytological abnormalities (p<0.001). This methodology could be used to detect unnoticed cervical lesions.

Cáncer cervical: Citología en base líquida, convencional y otras pruebas de tamizaje / Cervical cancer: Liquid-based, conventional cytology and other screening tests

La citología cervicovaginal como herramienta diagnóstica se inició en el siglo XIX con el médico griego George Papanicolaou y se implementó en los programas de tamizaje de cáncer a mediados de 1960, logrando una reducción de la mortalidad (80%) a nivel mundial. Como limitación está la baja sensibilidad que oscila entre 30 y 87%, con promedio de 53%. La mortalidad por cáncer cervical mundial es de 86% y 88% en países en vía de desarrollo. En Colombia la tasa de mortalidad ajustada por edad es de 18,2 por 100.000. Esto se debe al control de calidad inadecuado y la pobre actualización permanente de los citohistotecnólogos, sumada al alto número de lecturas realizadas en la jornada laboral, llevando a un sobrediagnóstico de atipia de células escamosas de significado indeterminado (ASCUS). Además influyen factores como la no toma de la citología por el bajo nivel socioeconómico y la falta de afiliación al régimen de seguridad social. La citología en base líquida (CBL) resuelve cinco problemas: 1) falta de captura de la totalidad de la muestra, 2) fijación deficiente, 3) distribución aleatoria de células anómalas, 4) existencia de elementos perturbadores y 5) mala calidad del frotis. Esta técnica incrementa la sensibilidad de lesiones intraepiteliales de alto grado y carcinomas, sin variación en la especificidad. Otras pruebas de tamización son la detección y tipificación del virus del papiloma humano (VPH) incluida en el plan obligatorio de salud (POS) 2012, la prueba de reacción en cadena de la polimerasa (PCR), oncogenes RNA E6 Y E7 y la inspección visual con ácido acético y lugol (vía vili) cuya filosofía es ver y tratar.

Cervico-vaginal cytology has been used as a diagnostic tool since the early 19th century started by the Greek physician George Papanicolaou and was implemented for cancer screening programs since the mid 1960s achieving an 80% reduction in mortality rate worldwide. A low sensibility between 30 and 87%, average 53%, is a drawback. Global mortality rate due to cervical cancer is 86% and 88% in developing countries. The age-related mortality rate in Colombia is 18.2 per 100.000 patients. The latter is due to inadequate quality control and lack of update training for cytohispathology technicians, in addition to the high number of readings performed during their work day leading to overdiagnosis of Atypical Squamous Cells of Undetermined Significance (ASCUS). Other factors such as not performing a cervical smear due to low socioeconomic status and lack of affiliation to the social security system are also important. The use of liquid-based cytology (LBC) resolves five problems: 1) failure to capture the complete sample, 2) poor fixation, 3) random distribution of anomalous cells, 4) existence of perturbing elements, and 5) poor quality of the smear. This technique increases the sensibility of high-grade intraepithelial lesions and cancer lesions with no specificity variation. Other screening tests are: human papillomavirus (HPV) detection and typing tests included in the 2012 Health Obligatory Plan (POS) and the polymerase chain reaction tests (PCR), RNA oncogenes E6 and E7 and visual inspection with acetic acid and lugol´s iodine (VIA/VILI) in a “see and treat” cervical prevention strategy.

Comparación entre las técnicas de citohistología compartida: convencional vs. base líquida / Shared conventional vs liquid- based cytology techniques

Describir las técnicas de citología cervicovaginal por el método convencional vs. base líquida, teniendo en cuenta la calidad de la muestra y los hallazgos morfológicos, en mujeres en edad reproductiva con vida sexual activa, tomadas en campañas de proyección social. Métodos: estudio descriptivo de corte transversal en 29 mujeres a quienes se tomaron 29 citologías, la mitad convencionales (extendidos sobre porta-objeto) y la otra mitad en base líquida. Se utilizó el método de muestra compartida (guardando la espátula y el citocepillo en el líquido fijador LucBase). Se excluyeron las embarazadas, las que estuvieron menstruando o que hubieran recibido radio o quimioterapia. Resultados: La variable sobre calidad de la muestra mostró que de las 29 convencionales 16 tenían material endocervical o de la zona de transformación, mientras en base líquida solo una tuvo endocérvix. En cuanto al registro de lectura, de 29 convencionales, tres fueron ASCUS; de catorce en base líquida, doce fueron inadecuadas y dos rechazadas. En lo referente al tiempo de realización de las técnicas, se halló una diferencia de siete minutos para la base líquida en relación con la convencional. Conclusiones: al comparar la muestra compartida para las dos técnicas, se encontró mayor celularidad y presencia de endo-cérvix en la convencional. Las preparaciones en base líquida mostraron fondo sucio constituido por células inflamatorias, moco y detritus celulares, no cumpliendo con una de las características de mejoramiento de la técnica. La muestra compartida haciendo primero el frotis convencional, reduce o acaba con el material que se preserva para la base líquida. Los nuevos estudios los enfocamos hacia el uso de nuevas tecnologías para base líquida como ThinPrep y SurePath.

To describe cervix cytology techniques, that is, the conventional method vs liquid- based preparations, taken during social projection campaigns, in terms of sample quality and morphologic findings, in sexually active women of reproductive age. Methods: a cross-sectional descriptive study in 29 women in which cytology was performed, half of them by the conventional method (smear on a slide) and the other half by a liquid-based preparation. The shared sample method was used (keeping the spatula and cytology brush in LucBase solution). Women who were pregnant, menstruating or had received chemotherapy or radiotherapy were excluded. Results: The variable on quality of the sample showed that of the 29 conventional samples, 16 had endocervical or transformation zone material, while only one on liquid- based preparation had endocervix. As to the reading records, out of 29 conventional samples, 3 were interpreted as ASCUS; out of 14 liquid-based, 12 were inadequate and two were rejected. A 7 minute difference in performing the liquid-based technique was found compared to the conventional technique. Conclusions: an increased cellularity and endocervix pre-sence was found in the conventional technique when comparing the shared sample for the two techniques. Liquid-based preparations showed a dirty background consisting of inflammation, mucus and cellular detritus, not complying with one of the features of technique improvement. When performing the conventional smear first, the material preserved for the liquid- based technique is reduced or fade in the shared sample. Our new studies are focused on the use of new technologies for liquid- based preparations such as ThinPrep and SurePath.

Avaliaçäo da celularidade citológica em preparados de base líquida / Cellularity evaluation in liquid-based cytology preparations

O método de citologia em base líquida parece apresentar uma série de vantagens em relação ao convencional: melhor disposição celular, facilitando a interpretação; redução do número de hemácias,exsudato inflamatório e muco, preparação de lâminas adicionais do mesmo caso sem ter que se convocara paciente; utilização de material residual para testes moleculares para identificação de HPV e outros microrganismos .O método de base líquida, pelas vantagens mencionadas, detecta maior número delesões, além de menor índice de amostras inadequadas ou limitadas por alguma razão. O presente trabalhoteve como objetivo avaliar os achados citológicos obtidos com duas metodologias diferentes de preparo de citologia em base líquida, o novo sistema DNA - CITOLIQ (DIGENE-Brasil) e o sistema Autocyte(TRIPATH, USA), e correlacioná-los com os achados de citologia convencional obtidos da rotina do Setor de Citologia Oncótica do Instituto Adolfo Lutz. Foram estudadas 509 amostras consecutivas pelosistema DNA - CITOLIQ e 398 amostras pelo sistema Autocyte, de mulheres atendidas no HospitalLeonor Mendes de Barros no ano de 2002, participantes voluntárias do projeto INCODEV ICA4-CT-2001-(10013). Das 509 citologias preparadas pelo método DNA - CITOLIQ (DIGENE-Brasil), 0,6% foraminsatisfatórios; 89,3% negativos; 2,0% lesões de baixo grau; 0,8% lesões de alto grau; 0,2% carcinoma e7,1% ASCUS / AGUS. Apresentou ainda 89% de amostras satisfatórias, 10,0% satisfatórias mas limitada spor ausência de JEC e 0,4% limitadas por outras causas. Pelo método Autocyte, em 398 casos, 0,5% foraminsatisfatórios; 88,2% negativos; 3,0% ASCUS / AGUS; 6,8% lesões de baixo grau e 1,5% lesões de alto grau. Apresentou 84% de amostras satisfatórias, 15,25% satisfatórias mas limitados por ausência de JECe 0,25% satisfatórias mas limitados por outras causas. Foram examinadas 33.313 citologias colhidas pelo método convencional em 2001, onde 5,0% foram insatisfatórios; 92,6% negativos; 1,3% lesões de baixo grau; 0,3% lesões de alto grau e 0,05% de carcinoma invasivo; 0,7 ASCUS / AGUS. Em relação à qualidade da amostra, apenas 22,7% dos casos apresentaram células da JEC. Conclui-se que ambos métodos decitologia em base líquida apresentaram performances semelhantes quanto à qualidade das amostras, comenos casos insatisfatórios que o convencional. Observamos ainda, para ambos métodos, aumento significativo na sensibilidade para detecção de lesões intraepiteliais, sobretudo as de baixo grau, quando comparadas ao método convencional. (AU)

Liquid-based cytology (LBC) presents several advantages when compared to theconventional smears, such as clean background, residual material for additional cytological preparationsor even for molecular tests to infectious agents identification, mainly HPV. Besides these advantages,LBC detects more lesions than the conventional smears, and also reduce the number of unsatisfactorysamples and false negative cases. The goal of this work was to evaluate the cytologic findings of twodifferent LBC methodologies, DNACITOLIQ ® (DIGENE-Brasil) and Autocyte system (Tripath, USA)concerning the adequacy of the samples and diagnosis performance, and compare these results to thosereported by conventional smears daily routine analyzed at Adolfo Lutz Institute. A total of 509 samples ofDNA- CITOLIQ ® and 398 Autocyte consecutive cases from women examined at Leonor Mendes deBarros Hospital in 2002 (INCODEV ICA-CT-2001-10013 project) were analyzed. From DNACITOLIQ®cases 0.6% were unsatisfactory, 89.3% were negative, 7,1% ASCUS/ AGUS, 2.0% LSIL, 0.8% HSIL and0.2% squamous carcinoma. Regarding adequacy parameters 89% were satisfactory, 10.0% were limited byabsence of glandular cells and 0.4 limited by other reasons. Autocyte system diagnosis were: 0.5%unsatisfactory, 88.2% negative, 3.0% ASCUS/AGUS, 6.8% LSIL and 1.5% HSIL. Conventional smearscomprised 33,313 samples where 5.0% were unsatisfactory, 92.6% were negative, 0.7% ASCUS/ AGUS,1.3% LSIL, 0.3% HSIL and 0.05% squamous carcinoma. Satisfactory samples with glandular cellsrepresentation account 22.7%. Both methods of liquid-based cytology have presented similar performancesregarning the adequacy of the samples, presenting lesser inadequate cases than the conventional. Wehave also observed that both methods have showed better sensitivity than the conventional to identifyintraepithelial lesions, mainly the low grade. (AU)