Value of 16S rRNA gene amplification for identification of clinical rare pathogens / 中国感染控制杂志

Objective To evaluate the value of amplification and sequencing of 16S rRNA gene in the identification of clinical rare pathogenic bacteria,and guide the diagnosis and treatment for related clinical infection.Methods 12 bacterial isolates that were difficult,or unable to be identified with conventional laboratory methods,or with special phenotypes were collected. The 16S rRNA gene was amplified by polymerase chain reaction (PCR),then sequenced for identifying bacterial species through BLAST comparison,clinical characteristics of related infection were ana-lyzed.Results 12 clinical isolates were all positive for PCR amplification (about 1500 bp),species were all identi-fied (similarity≥99% ),the identified strains were Listeriamonocytogenes(n= 2),Brucellamelitensis(n= 2),Fu-sobacteriummortiferum(n= 1),Rothiaaeria(n= 1),Nocardiafarcinica(n= 1),Staphylococcussaccharolyticus (n= 1 ),Rhizobiumradiobacter(n= 1 ),Prevotellabivia(n= 1 ),Ralstoniamannitolilytica(n= 1 ),and Atopobium vaginae(n= 1 ). The sensitivity of 16S rRNA gene amplification was high,and the minimum detection limit of Escherichiacoli ATCC 25922 was 1.5×101 CFU/mL. Clinical data of 12 patients revealed that these strains can cause multi-sites and multi-types of infection,after patients received targeted antimicrobial therapy,11 improved, and 1 died.Conclusion Sequencing for 16S rRNA gene can rapidly and accurately identify rare,anaerobic,and difficult cultured bacteria,provide laboratory evidence for etiological diagnosis and treatment of different types of infection.

Validación del método de determinación de efecto anestésico local / Validation of the measuring method of local anesthetic effect

Introducción: la determinación del tiempo de anestesia local de un medicamento o principio activo en investigación se realiza empleando un ensayo biológico. Objetivo: validar el método de determinación del tiempo de anestesia local para disponer de un método de ensayo validado para la evaluación de medicamentos genéricos con esta actividad farmacológica. Métodos: se evaluaron los parámetros de exactitud, precisión, robustez, linealidad, paralelismo y especificidad siguiendo la metodología descrita en la Regulación 41-2007 del Centro para el Control Estatal de la Calidad de los Medicamentos (CECMED) para la Validación de métodos de análisis. Resultados: en el estudio de exactitud no se observaron diferencias significativas entre los resultados al ensayar la muestra y el material de referencia. En el estudio de la repetibilidad se alcanzaron coeficientes de variación menor del 50 . No se observaron diferencias significativas entre las precisiones alcanzadas por dos analistas diferentes, en días diferentes, a tres lotes diferentes. El estudio de especificidad mostró que los excipientes o sustancias auxiliares de la formulación no interfieren en la evaluación del producto. El método resultó ser lineal en el intervalo de concentraciones de 50 a 120 por ciento con exactitud y precisión aceptable para cada dilución y mostró paralelismo. El ensayo de robustez mostró que no existen diferencias en las respuestas obtenidas al variar diferentes parámetros. Conclusiones: el método biológico resultó ser exacto, preciso, específico, lineal y robusto

Introduction: a biological test is used to measure local anesthesia time of a drug or an active principle under research. Objective: to validate the measuring method of local anesthesia time for the evaluation of generic drug with this pharmacological action. Methods: accuracy, precision, robustness, linearity, parallelism and specificity were evaluated according to the methodology described in 41-2007 Regulation of the Center for the State Control of Drug Quality (CEDMED). Results: in the accuracy test, no significant differences were observed between the results of tested sample and the reference material at the 3 tested doses. Variation Coefficients was less than 50 percent in the repeatability test. There were no significant differences between the precision values of two different analysts at different times and in three different batches. The specificity test showed that excipients or auxiliary substances in the formulation did not interfere with the evaluation of the product. The method was linear in a 50-120 percent range of concentrations, with acceptable accuracy and precision, and parallelism. The robustness test yielded no differences in the results obtained after changing various parameters. Conclusions: biological method proved to be accurate, precise, specific, linear and robust

Unión de los antibióticos tilosina, tilmicosina y oxitetraciclina a proteínas presentes en abejas, larvas y productos de la colmena de Apis mellifera L / Binding of tylosin, tilmicosin and oxytetracycline to proteins from honeybees, larvae and beehive products

Las abejas melíferas son afectadas por gran cantidad de enfermedades infecciosas principalmente producidas por bacterias, hongos, virus y parásitos eucariotas. Dentro de las ocasionadas por procariotas, la loque americana es una enfermedad extremadamente grave que afecta a larvas y pupas de abejas; su agente causal es la bacteria esporulada Paenibacillus larvae. La administración de antibióticos es la principal alternativa para el control de esta enfermedad en colmenares con altos niveles de infección. El objetivo del presente trabajo fue determinar, mediante un método biológico, la unión de los antibióticos tilosina, tilmicosina y oxitetraciclina a las proteínas presentes en abejas adultas, larvas menores de 72 horas, larvas mayores de 72 horas, jalea de obreras, miel y polen, con la finalidad de diseñar un modelo de ruta cinética de los antibióticos. Los límites de sensibilidad de la técnica de valoración de estos antibióticos fueron 0,05 μg/ml para tilosina y tilmicosina, y 0,01 μg/ml para oxitetraciclina. Los coeficientes de correlación fueron superiores a 0,90 y los coeficientes de variación intra e inter-ensayo inferiores al 5%. Tanto tilosina como oxitetraciclina presentaron un porcentaje de unión a proteínas de un 15% en promedio en tejidos y subproductos de la colmena, lo cual resultó inferior a lo observado con tilmicosina (29% en promedio). En conclusión, por sus características químicas, su actividad antimicrobiana y su baja tasa de unión a las abejas, larvas y subproductos de la colmena, la tilosina presenta propiedades farmacocinéticas que podrían representar una ventaja terapéutica para el tratamiento de la loque americana en colmenas.

American Foulbrood (AFB) caused by the spore-forming bacterium Paenibacillus larvae is the most serious disease of bacterial origin affecting larvae and pupae of honeybees. Antibiotics are used in many countries for the control of AFB in high incidence areas, but their misuse may lead to antibiotic resistance of bacterial strains and honey contamination. The objective of the present work was to determine, through a biological method, the protein binding of tylosin, tilmicosin and oxytetracycline to worker jelly; honey; pollen; adult bees and larvae in order to propose their kinetic routes. The sensitivity limit of the technique used was 0.05 μg/ml for tylosin and tilmicosin and 0.01 μg/ml for oxytetracycline, respectively. The method had intra and inter-assay correlation coefficients over 0.90, respectively and a coefficient variation of intra-and inter-assay for all antibiotics and processed samples under 5%. Tylosin and oxytetracycline presented lower percentages of protein binding in tissues and hive products (average 15%) in relation to those observed for tilmicosin (29%). In conclusion, tylosin is useful for AFB control in honey bee colonies due to its chemical characteristics, antimicrobial activity and levels of protein binding in bees, larvae, and beehive products.