Quorum sensing in Enterococcus faecium, Enterococcus faecalis and Bacillus cereus strains isolated from ricotta processing / Quorum sensing em cepas de Enterococcus faecium, Enterococcus faecalis e Bacillus cereus isoladas do processamento de ricota

ABSTRACT: The quorum sensing phenomenon is a process of intra- and inter-species microbial communication involving the production and detection of extracellular signaling molecules. The autoinducer AI-2 has been proposed to serve as a 'universal signal' for interspecies communication. This study aimed to evaluate the capability of Enterococcus faecium, Enterococcus faecalis, and Bacillus cereus strains isolated from ricotta processing to produce quorum sensing signalling molecules (AI-2). The strains were evaluated for the presence of the luxS gene using the polymerase chain reaction. AI-2 quorum sensing signalling molecules were measured in relative light units (RLUs) using a luminometer. A total of 74% of E. faecium, 91% of E. faecalis, and 95% of B. cereus isolates were positive for luxS gene. In addition, the induced bioluminescence in Vibrio harveyi BB170 was observed in all strains, indicating the presence of the AI-2 autoinducer.

RESUMO: O fenômeno quorum sensing corresponde a um processo de comunicação intra e interespécies microbianas e é mediado por sinais químicos extracelulares, denominados moléculas sinalizadoras ou auto indutoras (AI). A molécula AI2 está envolvida na comunicação interespécies, denominada sistema "universal" de comunicação. Este estudo teve como objetivo avaliar a capacidade de Enterococcus faecium, Enterococcus faecalis e Bacillus cereus isolados do processamento de ricota em produzir moléculas sinalizadoras de Quorum sensing (AI-2). Os isolados foram avaliados quanto à presença do gene luxS utilizando a reação em cadeia da polimerase (PCR). As moléculas sinalizadoras (AI-2) foram medidas em unidades relativas de luz (RLU) através de um luminômetro. Um total de 74% dos isolados de E. faecium, 91% de E. faecalis e 95% de B. cereus foram positivos para o gene luxS. Além disso, todos os isolados apresentaram capacidade de induzir o fenômeno de bioluminescência em Vibrio harveyi BB170, indicando a presença de auto indutores AI-2.

Survey of Bioluminescent Coleoptera in the Atlantic Rain Forest of Serra da Paranapiacaba in São Paulo State (Brazil) / Levantamento de Coleópteros bioluminescentes na Mata Atlântica da Serra da Paranapiacaba

Brazil is the country with the largest number of bioluminescent beetle species in the world. However, estimates suggest that this number could much be higher, since many species remain to be discovered. In this work we made a survey of the species of bioluminescent beetles in Serra de Paranapiacaba - the largest remnant of Atlantic Forest in São Paulo State. The survey was done at Intervales State Park, Carlos Botelho State Park and municipality of Tapiraí and the following species were collected: Aspisoma lineatum, Aspisoma physonotum, Aspisoma fenestrata, Cratomorphus besckey, Cratomorphus distinctus, Photinus penai, Photinus sp1, Photinus sp9, Ethra aff. malledicta or axilaris, Ethra aff. adicta , Lucidotini incertae sedis, Cladodes flabellicornis, Cladodes demoulini, Amydetes lucernuta, Bicellonycha sp8, Bicellonycha ornaticollis, Pyrogaster lunifer, Pyrogaster moestus, Pyrogaster sp2, Pyrogaster sp5, Pyrogaster sp6, Photuris lugubris, Photuris sp1, Photuris sp7, Stenophrixotrix sp1, Brasilocerus sp1, Pseudophengodes sp1, Hapsodrilus pyrotis, Hypsiophtalmus sp1, Ptesimopsia luculenta, Pyroptesis cincticollis, Pyrearinus brevicolis, Pyrearinus candelarius, Pyrearinus micatus, Pyrophorus divergens. Our data show that Serra de Paranapiacaba is the second richest area in São Paulo state, especially in elaterids, with unique species typical of this area and species common to other investigated sites such as the Biological Station of Boracéia (in Salesópolis county) and the urbanized areas in the between Campinas - Sorocaba- São Paulo, originally covered to the Atlantic Rainforest.

O Brasil é o país que possui o maior número de espécies de coleópteros bioluminescentes no mundo. Entretanto, estimativas sugerem que este número possa ser bem maior, dado que muitas espécies ainda não foram descritas. Neste trabalho foi realizado um levantamento das espécies de coleópteros bioluminescentes em três localidades na Serra da Paranapiacaba - a maior área remanescente contígua de Mata Atlântica no país, com associação ao respectivo habitat. No Parque Estadual Intervales, Parque Estadual Carlos Botelho e Tapiraí foram coletadas as seguintes espécies: (Lampyidae) Aspisoma lineatum, Aspisoma physonotum, Aspisoma fenestrata, Cratomorphus besckey, Cratomorphus distinctus, Photinus penai, Photinus sp1, Photinus sp9, Ethra aff. malledicta ou axilaris, Ethra aff. adicta, Lucidotini incertae sedis, Cladodes flabellicornis, Cladodes demoulini, Amydetes sp1, Bicellonycha sp8, Bicellonycha ornaticollis, Pyrogaster lunifer, Pyrogaster moestus, Pyrogaster sp2, Pyrogaster sp5, Pyrogaster sp6, Photuris lugubris, Photuris sp1, Photuris sp7; (Phengodidae) Stenophrixotrix sp1, Brasilocerus sp2, Pseudophengodes sp1; (Elateridae) Hapsodrilus pyrotis, Hypsiophtalmus sp1, Ptesimopsia luculenta, Pyroptesis cincticollis, Pyrearinus brevicolis, Pyrearinus candelarius, Pyrearinus micatus, Pyrophorus divergens. Estes dados mostram que esta constitui a segunda área mais rica em espécies luminescentes do Estado de São Paulo, depois da Est. Biológica de Boracéia, especialmente em elaterídeos, com espécies únicas características destas localidades e espécies comuns è outras áreas investigadas, como as da Estação Biológica de Boracéia (Salesópolis, SP) e áreas urbanizadas no triângulo Campinas - Sorocaba - São Paulo, originalmente cobertas por Mata Atlântica.

Avaliação das boas práticas em uma unidade de alimentação e nutrição escolar de Minas Gerais / Evaluation of good practices in a power unit and school nutrition of Minas Gerais

A mudança no estilo de vida faz com que o consumidor busque cada vez mais alimentar-se fora de casa. Esta mudança exigiu que as Unidades de Alimentação e Nutrição se adequassem às novas legislações para atender à segurança dos alimentos e às exigências dos consumidores. O objetivo desta pesquisa foi investigar e avaliar as condições higienicossanitárias de todo processo de manipulação de alimentos em uma Unidade de Alimentação e Nutrição escolar de Minas Gerais, por meio da aplicação de checklist e técnica de sedimentação em placas e ATP-Bioluminescência. Para avaliar as BPF, foi utilizado o guia de verificação baseado na RDC 216 (2004) e RDC 275 (2002) com 107 itens divididos em blocos, também foi aplicado um questionário para caracterização do perfil dos funcionários da UAN. Para as análises de sedimentação em placa e ATP-Bioluminescência os pontos de amostragem foram escolhidos conhecendo-se o fluxo de produção da UAN, sendo selecionados 9 pontos e 7 funcionários. Observou-se que 46% tinham idade superior a 20 anos e a renda mensal de 77% dos funcionários é de 1 a 2 salários mínimos. Os resultados globais da aplicação da lista de verificação mostraram que a UAN analisada apresentou valores médios de 50% de atendimento nos quesitos avaliados sendo classificada no grupo 3. Para análise de ATP-biolumescência realizadas na área de preparo (PRE), mesa 1 de preparo (ME 1) e mesa 2 de preparo (ME 2), 100% das amostras obtiveram valores considerados inaceitáveis, quando comparados com a recomendação da American Public Health Association (APHA). Pode-se concluir que a UAN avaliada apresentou elevado grau de não conformidades, não atendendo 47 dos 107 itens avaliados necessários ao atendimento das condições higienicossanitárias satisfatórias, estando, portanto, em desacordo com o programa de Boas Práticas de Fabricação.

ATP-Bioluminescence as a method to evaluated microbiological quality of UHT milk / ATP-Bioluminescência como método para avaliação da qualidade microbiológica de leite UAT

New approaches are needed to quickly indicate possible contamination of UHT milk, among them the technique of ATP-Bioluminescence. Therefore, the aim of this study was to compare the results of culture methods with the results of ATP-Bioluminescence technique of 102 UHT whole milk samples incubated at 48, 72, and 168 hours. UHT milk samples were analyzed for the presence of mesophilic and psychrotrophic aerobic microorganisms using Plate Count Agar (PCA), Brain-Heart Infusion (BHI) media and PetrifilmTM Aerobic Count (AC) plates. The ATP-Bioluminescence technique was applied through the Microbial Luminescent Screening (MLS) system. Significant correlations were found between counts of aerobic mesophilic microorganisms on PCA, PetrifilmTM AC, BHI and results of ATP bioluminescence technique (P≤0.05). The ATP-Bioluminescence technique had higher correlation with counting method in PCA than BHI media. At lower pass/fail limits of Relative Light Units (60, 50, 45 and 40 RLU), the number of samples identified as positive increased and statistically agreed with aerobic mesophilic microorganism counts (P>0.05). For the dairy industry, the ATP-Bioluminescence technique may become an important tool that assists the official methods to quickly monitor the microbiological quality of UHT milk though this will likely require a threshold below 150 RLU...

Novos métodos são necessários para detectar de forma rápida a contaminação do leite UAT, entre eles, a técnica de ATP-Bioluminescência. Portanto, objetivou-se comparar os resultados de métodos de cultura tradicionais com os resultados de ATP-Bioluminescência de 102 amostras de leite UAT integral incubadas por 48, 72 e 168 horas. Os leites UAT foram analisados quanto à presença de micro-organismos aeróbicos mesófilos e psicrotróficos usando os ágares PCA, BHI e placas PetrifilmTM AC. A técnica de ATP-Bioluminescência foi aplicada por meio do sistema Microbial Luminescent Screening (MLS). Significantes correlações foram obtidas entre as contagens de micro-organismos mesófilos aeróbios em PCA, PetrifilmTM AC, BHI e os resultados da técnica de ATP-Bioluminescência (p<0,05). A técnica de ATP-Bioluminescência tem maior correlação com o método de contagem em meio PCA que BHI. Quando valores limites de Unidades Relativas de Luz (60, 50, 45 e 40 RLU) foram menores, o número de amostras identificadas como positivas aumentou e concordou estatisticamente com a contagem de micro-organismos mesófilos aeróbios (P>0,05). Para as indústrias de laticínios, a técnica de ATP-Bioluminescência pode se tornar uma ferramenta auxiliar aos métodos oficiais para o monitoramento rápido da qualidade microbiológica do leite UAT, desde que sejam utilizados limites abaixo de 150 RLU...

Avaliação da qualidade microbiológica de bebida láctea e creme de leite UAT por ATP-Bioluminescência / Evaluation of microbiological quality of UHT milk drink and UHT milk cream by ATP-Bioluminescence

Embora métodos tradicionais sejam utilizados na avaliação microbiológica de produtos UAT, metodologias rápidas, baseadas em ATP-Bioluminescência, têm sido desenvolvidas. Os resultados da aplicação dessa técnica em 54 amostras de bebida láctea UAT achocolatada e 12 de creme de leite UAT foram comparados com os resultados de métodos microbiológicos, utilizando-se diferentes meios de cultura e tempos de incubação das referidas amostras. A técnica de ATP-Bioluminescência foi aplicada por meio do sistema MLS, e os resultados foram expressos em unidades relativas de luz (RLU). Em todos os tempos de incubação - 48, 72 e 168 horas - , as amostras apresentaram contagens baixas de microrganismos mesófilos e psicrotróficos aeróbios quando analisadas em meio PCA, BHI, PetrifilmTM AC e por ATP-Bioluminescência (<150 RLU), demonstrando alta especificidade da técnica. Apenas uma amostra de creme de leite UAT apresentou contagem de mesófilos aeróbios acima do padrão estabelecido pela legislação brasileira (<100 UFC/mL) quando analisada em meio PCA (260 UFC/mL) e PetrifilmTM AC (108 UFC/mL), no tempo de 168 horas. Essa alta contagem de microrganismos mesófilos aeróbios também foi detectada pela técnica de ATP-Bioluminescência (416 RLU). Os resultados da técnica de ATP-Bioluminescência foram iguais aos resultados em meio PCA, BHI e PetrifilmTM AC.

Although traditional methods are used for the microbiological evaluation of UHT products, rapid methodologies based on ATP-Bioluminescence have been developed. The results of applying this technique in 54 samples of chocolate UHT milk drink and 12 of UHT milk cream were compared with the results of microbiological methods, using different culture media and incubation times for the referred samples. The ATP-Bioluminescence technique was applied through the MLS system and the results were expressed as relative light units (RLU). In all incubation times - 48, 72, and 168 hours - , the samples showed lower counts of mesophilic and psychrotrophic aerobic microorganisms when analyzed using PCA, BHI, PetrifilmTM AC and ATP-Bioluminescence (<150RLU), demonstrating the technique's high specificity. Only one sample of UHT milk cream showed a mesophilic aerobic count above the standard established by Brazilian legislation (<100CFU/mL) when analyzed in PCA (260 CFU/mL) and PetrifilmTM AC (108CFU/mL) at 168 hours. This high count of aerobic mesophilic microorganisms was also detected by the ATP-Bioluminescence (416 RLU) technique. The results of the ATP-Bioluminescence technique were equal to the results in PCA, BHI and PetrifilmTM AC.

Avaliação do treinamento de manipuladores de alimentos de restaurantes comerciais pelo ensaio ATP-bioluminescência / Evaluation of food handlers training in commercial restaurants by using ATP bioluminescence methodology

Os programas de treinamentos para manipuladores de alimentos são meios eficazes para transmitir conhecimentos e promover melhorias nas condições higiênico-sanitárias em estabelecimentos alimentícios.Neste trabalho foi avaliado o efeito do treinamento em boas práticas de manipulação de alimentos,ministrado aos funcionários de restaurantes comerciais da região de Ouro Preto – MG, por meio do teste de ATP-bioluminescência. O teste foi utilizado para quantificar a carga orgânica, medida como valor de“Unidades Relativas de Luz – URL”, nas amostras coletadas das mãos de manipuladores, de bancadas de trabalho e de superfícies de utensílios, selecionadas aleatoriamente em cada restaurante. Após o treinamento,houve melhoria no padrão higiênico, evidenciado pela redução da carga orgânica nas superfícies avaliada sem todos os restaurantes. Apesar da redução dos valores de URL, algumas superfícies não alcançaram o valor recomendado para superfície em condições higiênicas satisfatórias. A aplicação do teste ATPbioluminescência para avaliação do treinamento de manipuladores mostrou ser eficaz e pode ser empregado em associação com os tradicionais métodos de contagem de micro-organismos em treinamentos realizado sem Unidades de Alimentação e Nutrição. Apesar da redução dos valores de URL indicar a melhoria nas condições higiênicas, o trabalho de treinamento e monitoramento deve ser continuado.

Training programs designed for food handlers are an effective way to spread the knowledge and topromote improvements on the hygienic conditions of food establishments. This study aimed at evaluatingthe effect of a training course on good handling practices for food handlers of selected restaurants in theregion of Ouro Preto, MG, Brazil, by using ATP-bioluminescence assay. This test was used to quantifythe organic load, measured by “Relative Light Units – RLU”, in samples collected from workers hands,surfaces of work benches and utensils, which were randomly selected in each restaurant. After training,a significant improvement in the hygienic conditions was observed, as evidenced by the decrease in theRLU values in samples from all restaurants. Despite the decreased RLU values, some surfaces did notreach the recommended value for surfaces samples in the satisfactory hygienic conditions. The ATPbioluminescencetest showed to be effective for evaluating the training success, and could be a powerfultool when applied in training programs at food services, and in association with the conventionalmicrobiological methodologies. In spite of the reduction in RLU values, indicating.

Bioluminescent Coleoptera of Biological Station of Boracéia (Salesópolis, SP, Brazil): diversity, bioluminescence and habitat distribution / Coleópteros Bioluminescentes da Estação Biológica de Boracéia (Salesópolis, SP, Brasil): diversidade, bioluminescência e distribuição por habitat

Brazil hosts the richest biodiversity of bioluminescent beetles in the world. Several species are found in the Atlantic rain forest, one of the richest and most threatened tropical forests in the world. We have catalogued the biodiversity of bioluminescent species mainly of Elateroidea superfamily occurring in one of the last largest and most preserved remnants of Atlantic rain forest, located at the Biological Station of Boracéia of São Paulo University (Salesopolis, SP, Brazil). This site accounted with the largest diversity ever found for a single place in São Paulo State, with 39 species: Lampyridae (30), Phengodidae (5), Elateridae (3) and Staphylinidae (1). This fauna has unique species that were not found in any other places of Atlantic forest in São Paulo state, especially fireflies from the Lampyrinae tribes (Cratomorphini, Lamprocerini, Lucidotini), the subfamilies Amydetinae and Photurinae, and the phengodids Pseudophengodes and Brasilocerus sp.2. Most species are found in dense Ombrophyl forest or at their border, and a few ones are found dwelling in the few open fields around the forest. There is a predominance of glowing patterns in the green region among forest inhabiting species when compared with open field fireflies.

O Brasil tem a maior biodiversidade de coleópteros bioluminescentes do mundo. Muitas destas espécies são encontradas na Mata Atlantica, um dos mais ricos e ameaçados ecossitemas. Catalogamos a biodiversidade de espécies bioluminescentes da superfamília Elateroidea em um dos maiores e mais preservados remanescentes de Mata Atlântica da Serra do Mar, localizado na Estação Biológica de Boraceia (E.B.B.) em Salesopolis, SP, reserva administrada pelo Museu de Zoologia da Universidade de São Paulo. Este local contou com a maior biodiversidade de espécies bioluminescentes já encontrada num único local dentro do estado, com 39 espécies: Lampyridae (30), Phengodidae (5), Elateridae (3) e Staphylinidae (1). Esta fauna tem espécies únicas não encontradas em nenhum outro lugar investigado de Mata Atlântica no estado de São Paulo, especialmente das tribos de Lampyrinae (Cratomorphini, Lamprocerini, Lucidotini), as subfamílias Amydetinae e Photurinae, e os fengodídeos Pseudophengodes e Brasilocerus sp.2. A maioria das espécies ocorre em floresta ombrófila densa, e poucas ocorrem em campos abertos. Existe uma predominância de espécies com padrões de brilho contínuo na região do verde no interior da mata quando comparadas a espécies de vagalumes de campo aberto.

Estudo comparativo dos métodos tradicional e rápido de avaliação de procedimento de higienização, usando clorexidina como sanitizante, em indústrias de laticínios / Comparative study of traditional methods and rapid evaluation procedure for cleaning, using chlorhexidine as a sanitizer in the dairying

O presente trabalho teve o objetivo de estudar comparativamente os métodos tradicional e rápido utilizados na avaliação da eficiência de procedimentos de higienização usando clorexidina como sanitizante em uma superfície característica de uma indústria de laticínios. Para isso, utilizou-se uma máquina produtora de sorvete, na qual a superfície avaliada é constituída de aço-inoxidável ANSI 316. Após a utilização do equipamento, foi realizado o procedimento de limpeza seguido de sanitização com solução de digluconato de clorexidina a 100mg.L-1. A avaliação do procedimento foi realizada pelo método tradicional de contagem padrão em placas para enumeração de mesófilos aeróbios.(...) Os resultados encontrados indicaram não haver concordância entre os métodos quanto à classificação das condições das superfícies avaliadas, no entanto, os mesmos apresentaram correlação positiva e razoavelmente alta (0,73), indicando que o método rápido, ATP-bioluminescência, é uma ferramenta útil na avaliação de procedimentos de limpeza e sanitização.

Fauna de besouros bioluminescentes (Coleoptera: Elateroidea: Lampyridae; Phengodidae, Elateridae) nos municípios de Campinas, Sorocaba-Votorantim e Rio Claro-Limeira (SP, Brasil): biodiversidade e influência da urbanização / Bioluminescent beetles (Coleoptera: Elateroidea: Lampyridae, Phengodidae, Elateridae) in the municipalities of Campinas, Sorocaba-Votorantim and Rio Claro-Limeira (SP, Brazil): biodiversity and influence of urban sprawl

O Brasil abriga a maior biodiversidade de besouros bioluminescentes do mundo. Apesar disto, levantamentos faunísticos regionais e estudos sobre o efeito da urbanização na biodiversidade de vaga-lumes são inexistentes. Este tipo de estudo pode ser especialmente importante para selecionar novos bioindicadores de ambientes noturnos. A biodiversidade de espécies bioluminescentes de Elateroidea em três grandes áreas urbanas no Estado de São Paulo: os municípios de Campinas, Sorocaba-Votorantim e Rio Claro-Limeira foi catalogada. Em Campinas, a ocorrência de espécies tem sido monitorada durante os últimos 20 anos. Foi registrada a ocorrência de 26 espécies em Campinas, 21 em Sorocaba e 19 em Rio Claro, sendo estas encontradas principalmente em áreas de Mata Atlântica, crescimentos secundários, brejos e campos. Apesar de vaga-lumes lampirídeos serem encontrados em todos os habitats, elaterídeos e fengodídeos ocorreram encontrados preferencialmente em áreas florestadas. A expansão urbana, em especial a iluminação artificial tem impacto evidente na biodiversidade deste grupo de insetos. Os lampirídeos Aspisoma lineatum Gyllendal, 1817 (Lampyrinae: Cratomorphini) e Bicellonychia lividipennis Motschulsky, 1854 (Photurinae) são as espécies mais frequentes em areas urbanizadas, ao passo que várias outras espécies de lampirídeos, elaterídeos e fengodídeos são as mais incomuns nestas áreas. Estes estudos oferecem subsídios para o uso deste grupo de vaga-lumes como potenciais bioindicadores noturnos.

Brazil hosts the richest biodiversity of bioluminescent beetles in the world. However, no surveys on the regional biodiversity have been made. Furthermore, studies on the effect of urbanization on bioluminescent beetle's biodiversity are still missing. Such kind of studies could be especially helpful to select new night environment bioindicators. Bioluminescent species of the Elateroidea superfamily occurring in three large and expanding urban areas in São Paulo State: Campinas, Sorocaba-Votorantim and Rio Claro-Limeira municipalities, were catalogued. In Campinas, the occurrence of bioluminescent beetles in different sites has been monitored during the past 20 years. There were 26 species in Campinas, 21 in Sorocaba-Votorantim and 19 in Rio Claro-Limeira, occurring mainly in conserved remnants of Atlantic Rain-forest, secondary growths, marshes and open fields. Whereas fireflies (Lampyridae) are found in almost all habitats, click beetles (Elateridae) and railroadworms (Phengodidae) occur predominantly in woody environments. Urban sprawl has an evident impact on the biodiversity of this selected group of beetles, and special attention should be given to the effect of artificial night lighting in the occurrence of these beetles. The lampyrids Aspisoma lineatum Gyllenhal, 1817 (Lampyrinae: Cratomorphini) and Bicellonychia lividipennis Motschulsky 1854 (Photurinae) are the most common species in urbanized areas, whereas many other species of lampyrids, elaterids and phengodids are rarely found in such environments. These studies offer insights on the potential use of a selected group of luminescent beetles found in this region as nocturnal environment bioindicators.

Description of Coctilelater minimus sp. nov. (Coleoptera, Elateridae, Agrypninae) / Descrição de Coctilelater minimus sp. nov. (Coleoptera, Elateridae, Agrypninae)

Coctilelater minimus from Brazil (Pará) is described and illustrated. This new species is mainly characterized by small size and coloration pattern.

Coctilelater minimus sp. nov., coletado no Brasil (Pará) é descrita e ilustrada. Essa espécie é caracterizada principalmente pelo pequeno tamanho e pela coloração geral do corpo.

Metapyrophorus pharolim a new genus and species of Pyrophorini (Coleoptera, Elateridae, Agrypninae) / Metapyrophorus pharolim, gênero e espécie novos de Pyrophorini (Coleoptera, Elateridae, Agrypninae)

Metapyrophorus, a new monotypic genus, is erected based on M. pharolim, new species from Trinidad and Tobago and Venezuela. The genus is characterized mainly by its pair of convex pronotal bioluminescent organs, equidistant between the median line and the lateral margin.

O gênero monotípico Metapyrophorus é erigido com base na nova espécie M. pharolim, de Trinidad e Tobago e Venezuela. O gênero é caracterizado principalmente por um par de órgãos bioluminescentes convexos, localizados próximos da margem posterior do pronoto, eqüidistantes à linha mediana e à margem lateral.