Quantificação de citocinas no soro e homogenato da pata na intoxicação experimental com veneno de Bothropoides jararaca em ratos Wistar tratados com soroterapia e Mikania glomerata / Quantification of cytokines in serum and paw homogenate of experimental intoxication for venom of the Bothropoides jararaca in Wistar rats treated with antivenom and Mikania glomerata

O presente estudo teve como objetivo quantificar os níveis de citocinas pró-inflamatórias, entre as quais TNF-α, interleucina-1β (IL-1β), IL-6, e anti-inflamatórias, como IL-10, interferon-γ (INF-γ), bem como comparar o efeito do tratamento convencional com o efeito do tratamento complementado pelo extrato da planta Mikania glomerata, na intoxicação experimental por Bothropoides jararaca. Foram usados ratos Wistar,divididos em três grupos: C - controle, VB - veneno botrópico + soro antiofídico e VBM - veneno botrópico + soro antiofídico + Mikania glomerata. As citocinas foram quantificadas, no soro e no homogenato desses animais, pelo teste ELISA, em três momentos (M1 - 30 minutos, M2 - seis horas e M3 - 24 horas após a inoculação do veneno). Os resultados obtidos evidenciaram que a intoxicação por veneno botrópico estimula principalmente a produção de IL-6 no soro e TNF-α, IL-1β, IL-6 no homogenato da pata de animais experimentalmente intoxicados. O tratamento complementar, com o extrato da planta Mikania glomerata, teve influência principalmente na produção de IL-6, IL-10 e IFN-γ no soro e IL-6, IL-1β e IFN-γ no homogenato. Porém, são necessários novos estudos com o extrato de Mikania glomerata para que se possa entender a ação dessa planta sobre a intoxicação botrópica, bem como verificar qual a melhor via para administrá-lo...

This experiment aimed to quantify the pro-inflammatory cytokine levels, including TNF-α, interleukin-1β (IL-1β) and IL-6 as well as the anti-inflammatory ones such as IL-10 and INF-γ. It was also proposed to compare the effect of the conventional treatment to a treatment in which was added the Mikania glomerata plant in the experimental intoxication using Bothropoides jararaca venom. It was used Wistar rats that were randomly divided into 3 groups: C - control; VB - Bothrops venom + antivenom serum; and VBM - Bothrops venom + antivenom serum + Mikania glomerata. Cytokines were quantified in the serum and paw homogenate using ELISA test in three different moments (M1- 30 minutes, M2- 6 hours and M3- 24 hours after venom injection). The intoxication by Bothropoides jararaca venoms mainly stimulated the production of IL-6 in the serum and TNF-α, IL-1β, IL-6 in paw homogenate of animals experimentally intoxicated. Adjunctive treatment with the extract of the Mikania glomerata plant mainly influenced the production of IL-6, IL-10 and IFN-γ in the serum and IL-6, IL1β and IFN-γ in paw homogenate. Further research is necessary with the extract of Mikania glomerata in order to understand the action of this plant on the Bothropoides poisoning and also to verify the best way to manage it...

Aspectos clinicopatológicos e laboratoriais do envenenamento experimental por Bothrops moojeni e Bothropoides neuwiedi em ovinos / Clinicopathological and laboratory aspects of experimental poisoning by Bothrops moojeni and Bothropoides neuwiedi snake venoms in sheep

O envenenamento ofídico espontâneo, ou acidente ofídico, é descrito como causa de morte em animais domésticos. No entanto, dados concretos relativos ao gênero e espécie de serpente envolvida, à evolução do quadro clínico, e às alterações clinicopatológicas desenvolvidas, são escassos. Assim sendo, este trabalho teve como objetivo determinar as alterações clinicopatológicas e laboratoriais provocadas pelo veneno de Bothrops moojeni e Bothropoides neuwiedi em ovinos no intuito de fornecer informações adicionais referentes a acidentes ofídicos em animais de produção, auxiliando o estabelecimento do diagnóstico dessa condição. Os venenos liofilizados foram diluídos em 1 ml de solução fisiológica e administrados a quatro ovinos por via subcutânea na face direita, nas doses de 0,41mg/kg e 0,82mg/kg do veneno de B. moojeni em dois ovinos, e de 1,0mg/kg do veneno de B. neuwiedi em dois ovinos. Apenas o ovino que recebeu a menor dose (0,41mg/kg) sobreviveu, apesar de ter desenvolvido quadro clínico muito severo e semelhante aos demais. Os sinais clínicos iniciaram nos primeiros 10 minutos após a inoculação em todos os ovinos. O período de evolução variou de dois a quatro dias. O quadro clínico dos quatro ovinos caracterizou-se por apatia, acentuado aumento de volume da face, da porção ventral do pescoço e do peito, leve aumento de volume da porção proximal dos membros anteriores, tempo de sangramento aumentado, taquicardia, mucosas pálidas e grande quantidade de sangue não digerido nas fezes. Ao exame laboratorial observou-se principalmente redução das proteínas plasmáticas e aumento de creatinaquinase em todos os ovinos. À necropsia, foram observados extensos hematomas nas áreas correspondentes ao aumento de volume subcutâneo. Observaram-se petéquias, equimoses e sufusões leves a moderadas na serosa de diversos órgãos e acúmulo de sangue em meio às fezes na porção final do reto. Além de hemorragias, a principal alteração histopatológica observada foi necrose das fibras musculares esqueléticas e da parede de vasos, nas áreas próximas à inoculação do veneno. Nos ovinos deste estudo o aumento de volume, observado na face, pescoço, peito e membros, era constituído por sangue.

Spontaneous envenoming by snake bite is described as a cause of death in domestic animals. However, there are just few information about the species of snake involved, course, and clinicopathological and laboratory findings. Thus, this research aimed to determine the clinicopathological and laboratory changes induced by Bothrops moojeni and Bothropoides neuwiedi snake venoms in sheep, in order to provide additional information regarding snakebites in farm animals and to help establish the diagnosis of this condition. The lyophilized snake venoms were dissolved in 1mL saline solution and administered subcutaneously into the right face of four sheep, at doses of 0.41mg/kg and 0.82mg/kg of B. moojeni venom for two sheep, and 1.0mg/kg of B. neuwiedi venom for two other sheep. Only the sheep which had received the lowest dose (0.41mg/kg) survived, but developed severe clinical signs, similar to the others. First clinical signs were observed about 10 minutes after inoculation in all sheep. The course varied from 2 to 4 days. The clinical findings in all sheep were characterized by apathy, marked swelling of the face, the ventral neck and esternal region, and mild swelling of the proximal portion of the forelimbs, as well as increased bleeding time, tachycardia, pale mucous membranes, and large quantity of undigested blood in the intestinal lumen. Laboratory exams showed mainly a reduction in serum protein and increased creatine kinase in all sheep. At necropsy, extensive hematomas were observed in the subcutaneous tissue of the swollen areas. Also petechiae, bruises and mild to moderate hemorrhagic suffusions on the serosa of various organs, and blood within the intestinal contents of the distal rectum were observed. In addition to hemorrhages, the main histopathological changes were necrosis of skeletal muscle fibers and blood vessel walls next to the inoculation site. The swollen areas on face, neck, sternum and limbs of the sheep were due the hematomas.

Prevalência de Cryptosporidium serpentis em serpentes de cativeiro / Prevalence of Cryptosporidium serpentis in captive snakes

Cryptosporidium é um protozoário encontrado em uma grande variedade de espécies animais como responsável por casos de gastrite e enterite, porém com epidemiologia pouco conhecida em animais silvestres. A presente investigação teve como objetivo avaliar a prevalência de Cryptosporidium serpentis em lavado gástrico de serpentes mantidas em cativeiro no serpentário do Instituto Butantan (São Paulo, Brasil). A coleta foi realizada uma semana após alimentação, evitando, assim, a regurgitação devido à manipulação. Foram realizados esfregaços do sedimento do lavado gástrico, obtido por centrifugação, corados pela técnica de coloração de Kinyoun. Parte do sedimento foi submetido à técnica de RFLP-PCR para identificação da espécie de Cryptosporidium. O serpentário é dividido em três seções, por espécie - a primeira com oito jibóias (Boa constrictor amarali), a segunda com dez jararacas (Bothropoides jararaca) e a última com sete cascavéis (Caudisona durissa). A prevalência de C. serpentis encontrada neste estudo para as serpentes C. durissa, B. jararaca e Boa c. amarali, foi de 57,14 por cento (04/07), 40 por cento (04/10) e 37,5 por cento (03/08), respectivamente, revelando importante ocorrência desse protozoário em serpentes de cativeiro. Apesar da alta prevalência encontrada, apenas as jiboias apresentaram sintomas como perda de peso e regurgitação, refletindo uma sensibilidade diferente da espécie para C. serpentis.

Cryptosporidium is a protozoan found in a wide variety of animal species which is responsible for gastritis and enteritis, but its epidemiology is poorly known in wild animals. The present investigation aimed to evaluate the prevalence of Cryptosporidium serpentis in gastric aspirate of captive snakes from the public serpentarium of the Butantan Institute (São Paulo, Brazil). Sampling was performed preferably one week after feeding, thereby preventing regurgitation due to manipulation. Smears were done from the gastric aspirate sediment obtained by centrifugation and stained by Kinyoun technique. Part of the pellet was submitted to RFLP-PCR technique for amplification of Cryptosporidium segment (833bp, CSP01) of SSU rRNA gene. The serpentarium was divided in three sections by species - the first housing eight Amaral´s Boa (Boa constrictor amarali), the second with ten jararacas (Bothropoides jararaca) and the last one with seven south american rattlesnakes (Caudisona durissa). The prevalence of C. serpentis found in this study for the snakes C. durissa, B. jararaca and B. constrictor was 57.14 percent (04/07), 40 percent (04/10) and 37.5 percent (03/08), respectively, thus revealing the high occurrence of this protozoan among captive snakes. Despite the high prevalence found, only B. constrictor amarali presented symptoms as regurgitation and weight loss, probably due to a different sensibility of this species to C. serpentis.

Accidents caused by Bothrops and Bothropoides in the State of Paraiba: epidemiological and clinical aspects / Acidentes causados por serpentes dos gêneros Bothrops e Bothropoides no Estado da Paraíba: aspectos clínicos e epidemiológicos

INTRODUCTION: Bothrops and Bothropoides snakes cause 70 percent of the ophidic accidents in Brazil. The species that cause ophidic accidents in State of Paraíba are Bothropoides erythromelas, Bothrops leucurus and Bothropoides neuwiedi. METHODS: This is a prospective and transverse study, following a quantitative approach of accidents involving Bothrops and Bothropoides admitted to the Toxicological Assistance and Information Centers of Campina Grande and João Pessoa (Ceatox-CG and Ceatox-JP), aimed at identifying the epidemiological and clinical profile of such accidents. All of the patients admitted had medical diagnoses and were monitored at Ceatox-CG or Ceatox-JP. RESULTS: The genera Bothrops and Bothropoides caused 91.7 percent of the ophidic accidents reported. Snake bites were frequent in men (75.1 percent), rural workers (65.1 percent), literate individuals (69 percent) between 11 and 20 years-old (21.7 percent), and toes the most common area attacked (52.7 percent). Most (86.6 percent) patients were admitted within 6 hours after the accident/bite, with a predominance of mild cases (64.6 percent). The annual occurrence in Paraíba was 5.5 accidents/100,000 inhabitants and lethality was 0.2 percent. CONCLUSIONS: Positive changes in the profiles of these accidents were verified, such as the non-application of inadequate solutions, including the use of tourniquet, coffee grounds, garlic, suction and/or cutting the bitten area. Moreover, the Itinerant Laboratory project, linked to Paraíba State University in partnership with Ceatox-CG, has contributed positively, providing several cities of the state with information regarding the prevention of accidents involving venomous animals. The local press has also contributed, reporting the educational work developed by the centers.

INTRODUÇÃO: As serpentes Bothrops e Bothropoides são responsáveis por 70 por cento dos acidentes ofídicos ocorridos no Brasil. As espécies causadoras de acidentes na Paraíba são Bothropoides erythromelas, Bothrops leucurus e Bothropoides neuwiedi. MÉTODOS: Tratou-se de um estudo prospectivo e transversal, com abordagem quantitativa dos acidentes botrópicos e botropóidicos atendidos e registrados pelos Centros de Assistência e Informação Toxicológica de Campina Grande e João Pessoa (Ceatox-CG e Ceatox-JP), com o objetivo de conhecer o perfil epidemiológico e clínico deste agravo. Todos os pacientes atendidos tiveram diagnóstico médico e acompanhamento pelos Ceatox CG e JP. RESULTADOS: Os gêneros Bothrops e Bothropoides foram responsáveis por 91,7 por cento dos acidentes ofídicos notificados. Atingindo frequentemente o sexo masculino (75,1 por cento), trabalhadores rurais (65,1 por cento), alfabetizados (69 por cento) e na faixa etária entre 11 a 20 anos (21,7 por cento), os dedos dos pés foram as regiões anatômicas mais acometidas (52,7 por cento). A maioria (86,6 por cento) dos pacientes foi atendida em até 6 horas após o acidente/picada com predominância de casos leves (64,6 por cento). A incidência anual no estado foi 5,5 acidentes/100.000 habitantes e a letalidade 0,2 por cento. CONCLUSÕES: Verificaram-se mudanças positivas no perfil desses acidentes, como a não utilização de medidas consideradas inadequadas (uso de torniquetes, borra de café, alho, incisão com sucção e outras). Além disso, o projeto Laboratório Itinerante, ligado a Universidade Estadual da Paraíba em parceria com o Ceatox-CG, tem contribuído positivamente, levando a várias cidades do estado informações sobre prevenção e tratamento dos acidentes causados por animais peçonhentos. A imprensa local também tem contribuído, divulgando esse trabalho educativo.

Comparison of Bothropoides jararaca bites with and without envenoming treated at the Vital Brazil Hospital of the Butantan Institute, State of São Paulo, Brazil / Comparação dos acidentes causados por Bothropoides jararaca com e sem envenenamento atendidos no Hospital Vital Brazil do Instituto Butantan, Estado de São Paulo

INTRODUCTION: This study analyses the cases of all bites (including dry bites) caused by Bothropoides jararaca attended at the Vital Brazil Hospital of the Butantan Institute, State of São Paulo, Brazil. METHODS: A retrospective study was conducted of patients bitten by Bothropoides jararaca (n=792) from January 1990 to December 2004. The characteristics of the snake specimen, data related to the accident and clinical manifestations on admission were obtained from patient medical records. RESULTS: The majority of the cases in this study were caused by female and juvenile snakes. No stomach contents were found in 93.4 percent of the snake specimens after dissection. No statistical difference was observed between the occurrence of dry bites and the maturity or sex of the snake. The median SVL of snakes in mild and moderate cases was 40.5cm and in severe cases, SVL increased to 99cm. Necrosis was more common in the digits of the feet and hands (4.8 percent) compared to the other body regions (1.8 percent). A significant difference was verified between severity and a time interval greater than six hours from the bite to hospital admission. A significant association was verified between gingival bleeding and abnormal blood coagulability. In accidents caused by adult snakes, necrosis was more frequent (7.2 percent) compared to accidents caused by juvenile snakes (1 percent). CONCLUSIONS: In this work, the association between certain epidemiological data and the evolution of biological parameters in the clinical course of Bothrops sensu latu accidents were highlighted, contributing to the improvement of snake bite assistance.

INTRODUÇÃO: Neste estudo, analisou-se todos os casos de picadas (incluindo picadas secas) causadas por Bothropoides jararaca atendidos no Hospital Vital Brazil do Instituto Butantan, São Paulo, Brasil. MÉTODOS: Estudo retrospectivo em que foram incluídos pacientes atendidos no Hospital Vital Brazil do Instituto Butantan, picados por serpentes da espécie Bothropoides jararaca (nº=792) entre 1990 a 2004. Os dados foram obtidos através de prontuários médicos. RESULTADOS: No presente estudo, a maioria dos acidentes foi causada por serpentes fêmeas e filhotes. Não havia presença de conteúdo estomacal em 93,4 por cento das serpentes dissecadas. Não houve diferença estatística entre a ocorrência de picada seca e o sexo da serpente. O comprimento rostro cloacal das serpentes nos casos leves e moderados foram 40,5cm e nos casos severos 99cm. Necrose foi mais comum nos dedos dos pés e das mãos (4,8 por cento) em comparação com outras regiões do corpo (1,8 por cento). Houve diferença estatística entre a gravidade e o intervalo de tempo entre a picada e a admissão hospitalar superior a seis horas. Encontramos uma associação significativa entre gengivorragia e incoagulabilidade sanguínea. Nos acidentes causados por serpentes adultas, a necrose foi mais frequente (7,2 por cento) quando comparado aos acidentes causados por serpentes filhotes (1 por cento). CONCLUSÕES: Neste estudo, destaca-se a associação entre os dados epidemiológicos e biológicos em relação à evolução do quadro clínico nos acidentes botrópicos, contribuindo para a melhoria da assistência nos acidentes ofídicos.

Envenenamento experimental por bothropoides jararaca e bothrops jararacussu em ovinos: aspectos clínico-patológicos e laboratoriais / Experimental poisoning by bothropoides jararaca and bothrops jararacussu in sheep: clinic-pathological and laboratory aspects

Esse estudo teve como objetivo determinar as alterações clínico-patológicas e laboratoriais em ovinos inoculados com a peçonha de Bothropoides jararaca e Bothrops jararacussu, no intuito de fornecer subsídios que possam facilitar o estabelecimento do diagnóstico e do diagnóstico diferencial dessa condição. Os venenos liofilizados foram diluídos em 1 ml de solução fisiológica e administrados a quatro ovinos por via subcutânea. Três ovinos foram a óbito e um que recebeu a dose de 0,5mg/kg (B. jararaca), recuperou-se. Os sinais clínicos tiveram início entre 7 minutos e 1 hora. O período de evolução variou de 7 horas 9 minutos a 21 horas 59 minutos. O quadro clínico, independentemente das doses, caracterizou-se por aumento de volume no local da inoculação, tempo de sangramento e de preenchimento capilar aumentados, taquicardia, dispnéia, mucosas hipocoradas e apatia. Os exames laboratoriais revelaram acentuada anemia normocítica normocrômica, trombocitopenia, acentuada redução de fibrinogênio e proteínas plasmáticas totais, hematócrito diminuído em dois animais, além de acentuado aumento de creatinaquinase e desidrogenase lática em todos os animais. À necropsia, os principais achados no local da inoculação e tecidos adjacentes eram extensas hemorragias no animal que recebeu o veneno de B. jararaca e edema e acentuado edema pulmonar agudo para os dois animais envenenados por B. jararacussu. Além de hemorragia e edema a principal alteração histopatológica verificada foi necrose das fibras musculares e de vasos, no local de inoculação e adjacências. A necrose tubular renal foi atribuída ao quadro de choque. Nos ovinos deste estudo, o aumento de volume observado no local de inoculação e adjacências era constituído predominantemente por sangue (B. jararaca) e por edema (B. jararacussu).

The purpose of this study was to establish the clinic-pathological and laboratory changes in sheep inoculated with Bothropoides jararaca and Bothrops jararacussu venom to provide subsidies for the differential diagnosis of snake bites. The liofilized venoms were diluted in 1 ml saline and administrated subcutaneously to four sheep. Three of the animals died, and the one that received 0.5mg/kg (B. jararaca venom) recovered. First symptoms were observed from 7 minutes to 1 hour after inoculation, and the clinical course varied from 7 hours and 9 minutes to 21 hours and 59 minutes. The symptoms, independent of the dosage, were swelling of the inoculation site, increased bleeding time and capillary filling, tachycardia, dyspnea, pale mucous membranes and diminished reaction to external stimuli. Laboratory tests revealed pronounced normocytic and normochromic anemia, trombocytopenia, slight reduction of fibrogen and total plasmatic protein, in two animals diminished hematocrit, besides pronounced increase of creatinaquinase and lactic dehydrogenase. At necropsy, the main findings at the inoculation site and adjacent tissues were extensive hemorrhages in the sheep inoculated with jararaca venom, and predominantly edema in the two animals inoculated with jararacussu venom. In two sheep which received jararacussu venom, acute pulmonary edema was observed. Hemorrhage and edema as the main histopathological changes, besides necrosis of muscle fibers and vessels at the inoculation site and adjacent tissue was observed. The renal tubular necrosis was attributed to shock. The volume increase at the inoculation site and surroundings was mainly due to hemorrhage (B. jararaca) or edema (B. jararacussu).