ABSTRACT
ABSTRACT: The objective of this study was to determine the ideal moisture degree for the cryopreservation of Cattleya labiata Lindl. and Miltonia regnellii Rchb.f. orchid seeds. Orchid seeds were standardized in relation to the desired moisture degrees (4, 6, 8, 10, 12, and 15%) and were subjected to rapid freezing in liquid nitrogen (-196 °C) for 24 h; then, the seeds were defrosted and analyzed. For both orchid species, the seeds that were immersed in liquid nitrogen with 4% moisture content had the highest viability percentage, averaging 95% and 68% of viable seeds for C. labiata and M. regnellii, respectively. The seeds with 12% and 15% moisture content had no viable seeds. For the fresh mass of seedlings, there was no significant difference between moisture content treatments for either species.
RESUMO: O objetivo deste trabalho foi determinar o grau de umidade ideal para criopreservação das sementes das orquídeas Cattleya labiata Lindl. e Miltonia regnelli Rchb.f.. As sementes das orquídeas foram padronizadas em relação aos graus de umidade desejados (4, 6, 8, 10, 12 e 15%) e submetidas ao congelamento rápido em nitrogênio líquido (-196 ºC) durante 24 horas; em seguida, descongeladas e analisadas. O maior percentual de viabilidade, tanto para as sementes de C. labiata quanto para M. regnelli, ocorreu quando as sementes foram imersas em nitrogênio líquido com 4% de umidade, atingindo 95 e 68% de sementes viáveis, respectivamente, sendo que, as sementes com 12 e 15% de umidade não apresentaram sementes viáveis. Em relação à massa fresca de plântula, não houve diferença entre os tratamentos (grau de umidade)para as espécies avaliadas.
ABSTRACT
Micropropagation is an alternative to produce orchid plants in large scale. However, this process presents losses during acclimatization. Exogenous proline use in vitro plant tissue culture can reduce the stress of the plant acclimatization phase. We aimed to verify the growth of orchids in different micropropagation systems with the addition of proline in the culture medium. Cattleya walkeriana plants were obtained from the germination of seeds in culture medium. Seeds were germinated in MS medium, added 20 g. L-1 of sucrose, solidified with 6 g. L-1 of agar and pH adjusted for 5,8. The cultures were incubated in a growth room with temperature of 24 ± 2 0C, under photoperiod of 16 h. After 5 months, 1-cm long seedlings were placed in a culture vessel according to the treatments, which were composed of two micropropagation systems (conventional and natural ventilation) and three proline concentrations (0, 1, and 2 g·L-1). The experiment was carried out in an entirely randomized design consisting of a 2 × 3 factorial, for a total of 6 treatments, each with 5 replicates. The natural ventilation system with the use of proline (1 g·L-1) promoted higher dry mass accumulation and better control of water loss by plants.
A micropropagação é uma alternativa para a produção de plantas de orquídeas em larga escala. Entretanto, este processo apresenta perdas durante a fase de aclimatização. O emprego de prolina exógena na cultura de tecidos vegetais é uma alternativa para reduzir o estresse das plantas na fase de aclimatização. O objetivo da presente pesquisa foi verificar o crescimento de orquídeas em diferentes sistemas de micropropagação com prolina adicionada no meio de cultura. Plantas de Cattleya walkeriana foram obtidas a partir da germinação de sementes em meio de cultura. Sementes foram germinadas em meio MS, adicionado de 20 g. L-1 de sacarose, solidificado com 6 g. L-1 de ágar e pH ajustado para 5,8. Após 5 meses, plântulas com 1 cm de comprimento foram inoculadas nos frascos de cultivo de acordo com os tratamentos, os quais foram compostos por dois sistemas de micropropagação (convencional e ventilação natural) em combinação com prolina (0, 1 e 2 g L-1). O experimento foi conduzido em esquema inteiramente casualizado, constando de um fatorial 2x3, totalizando 6 tratamentos com 5 repetições. O sistema de ventilação natural com o uso de prolina (1 g L-1) promoveu o maior acúmulo de massa seca e melhor controle da perda de água das plantas.
Subject(s)
In Vitro Techniques , Germination , Orchidaceae/growth & developmentABSTRACT
Objetivou-se testar diferentes concentrações de sais do meio de cultura Knudson C e ácido giberélico no crescimento in vitro de plântulas de orquídeas Hadrolaelia lobatta x Hadrolaelia purpurata Aço e Cattleya loddigesii. Plântulas, oriundas de sementes germinadas in vitro, com aproximadamente 1,0cm de comprimento, foram inoculadas em frascos com capacidade para 250cm³, contendo 60mL de meio de cultura Knudson C nas concentrações de 0; 50; 100 e 200 por cento de sais minerais, acrescidos de GA3 (0; 2,5; 5; 7,5; 10mg L-1). As culturas foram mantidas em sala de crescimento com irradiância em torno de 35µmolm-2s-1, temperatura de 25±1°C e fotoperíodo de 16 horas. Ao final de 90 dias, observa-se que, para Cattleya loddigesii, o meio Knudson C a 200 por cento, promove maior crescimento in vitro, sendo que a adição de 2,5mg L-1 de GA3 é eficiente no incremento do número de folhas. Maior multiplicação é registrada em meio Knudson C na concentração original de seus sais (100 por cento). Para Hadrolaelia lobatta x Hadrolaelia purpurata Aço, a concentração do meio Knudson C influencia o número de folhas (200 por cento de sais) e brotos (50 por cento de sais), mas não tem efeito no crescimento e biomassa. Não se verifica efeito do GA3 no número de brotos, comprimento de parte aérea e matéria fresca para os dois genótipos.
The aim of this research was to test different concentrations of culture medium Knudson C and gibberellic acid in the in vitro growth of Hadrolaelia lobatta x Hadrolaelia purpurata Aço and Cattleya loddigesii plantlets. Seedlings deriving from in vitro germinated seeds with approximately 1,0cm length, were inoculated in bottles of 250cm³ containing 60mL of Knudson C culture medium at salts concentrations of 0; 50; 100 e 200 percent, and supplemented with 0; 2.5; 5; 7.5; 10mg L-1 of GA3. The cultures were maintained in growth room with a 35µmolm-2s-1 irradiance, 16 hours photoperiod and 25±1°C of temperature. After 90 days, it is observed that the culture medium Knudson C 200 percent for Cattleya loddigesii promote better in vitro growth. The addition of GA3 (2.5mg L-1) is efficient in the number of leaves increment. Better in vitro multiplication is registered in Knudson C medium in the original concentration (100 percent). For Hadrolaelia lobatta x Hadrolaelia purpurata Aço, the concentration of Knudson C culture medium influences the number of leaves (salts 200 percent) and sprouts (salts 50 percent), but does not have effect in the growth and biomass. No effect of the GA3 in number of sprouts, length of aerial part and fresh mass for the two genotypes was verified.
ABSTRACT
This work aimed to evaluate the effect of different concentrations of calcium and ammonium nitrate on the in vitro development of orchids. Cattleya loddigesii Tipo orchid plantlets, 1.0 cm in size produced by self pollinization and also by in vitro germinated seeds, were inoculated in flasks containing 60 mL of WPM culture medium, modified with different concentrations of calcium nitrate (0, 278, 556, 834, and 1112 mg L-1) and ammonium nitrate (0, 200, 400, 600 and 800 mg L-1). The culture medium was supplemented with 20 g L-1 of sucrose, 150 g L-1 of Nanica banana pulp, activated charcoal 2 g L-1, solidified with agar 6 g L-1, and pH adjusted to 5.7 ± 0.1 before being autoclaved at 121ºC, 1.5 atm pressure during 20 minutes. After inoculations, the flasks were transferred to a growth room with controlled temperature around 25±2ºC, 16 h photoperiod regime, with a light intensity of 35 µmol m-2 s-1. After 90 days, it was observed that the best results in terms of number of leaves was achieved with 400 mg L-1 of ammonium nitrate, and the highest number of sprouts was obtained with 450 mg L-1 of ammonium nitrate, but the major number of roots was verified in the treatment with 600 mg L-1 of ammonium nitrate and 278 mg L-1 of calcium nitrate. In resume, it is recommended to use the WPM medium in its original composition, without calcium nitrate to micropropagate Cattleya loddige
Objetivou-se avaliar diferentes concentrações de nitrato de cálcio e nitrato de amônio no crescimento in vitro de orquídea. Plântulas de Cattleya loddigesii oriundas de sementes germinadas in vitro, com 1,0 cm de comprimento, foram inoculadas em frascos contendo 60 mL de meio de cultura WPM modificado em suas concentrações de nitrato de cálcio (0, 278, 556, 834 e 1112 mg L-1) e nitrato de amônio (0, 200, 400, 600 e 800 mg L-1). O meio foi acrescido de 20 g L-1 de sacarose, 150 g L-1 de polpa de banana nanica madura e 2 g L-1 de carvão ativado, pH ajustado para 5,7 ± 0,1 e solidificado com 6 g L-1 de ágar, antes da autoclavagem a 121ºC e 1,5 atm, por 20 min. Após a inoculação, os frascos foram transferidos para sala de crescimento a 25 ± 2ºC, fotoperíodo de 16h e 35 µmol m-2 s-1 de intensidade luminosa. Decorridos 90 dias, observaram-se melhores resultados para número de folhas e de brotos com 400 e 450 mg L-1 de nitrato de amônio, respectivamente, enquanto que o maior número de raízes foi obtido com 600 mg L-1 de nitrato de amônio e 278 mg L-1 de nitrato de cálcio. Recomenda-se a utilização do meio WPM em sua composição original, sem nitrato de cálcio na micropropagação desta espécie.
ABSTRACT
This study aimed at applying the generalized linear models (GLM) for the analysis of a germination experiment of Cattleya bicolor in which the response variable was binary. The purpose of this experiment was to assess the effects of the storage temperatures and culture mediums on the seed viability. The analyses of variance was also carried out either with or without the data transformation. All the statistical approaches indicated the importance of the storage temperature on the seed viability. But, the culture media and interaction effects were significant only by the GLM. Based on the GLM, the seeds stored at 10°C increased viability, in which the coconut medium achieved the best performance. The results emphasized the importance of adopting the GLM to improve the reliability in many situations where the response variable followed a non-normal distribution.
A técnica de propagação in vitro é considerada efetiva para fins comerciais e de conservação de orquídeas. A metodologia de modelos lineares generalizados (MLG) foi usada para analisar um experimento de germinação de Cattleya bicolor. O propósito do experimento foi avaliar os efeitos da temperatura de armazenamento e dos meios de cultivo sobre a germinação, cuja resposta foi considerada binária. Análise convencional com ou sem transformação de dados foram também realizados. Todas as abordagens estatísticas indicaram a importância da temperatura sobre a viabilidade das sementes. Entretanto, os efeitos de meios de cultivo e interação foram significativos apenas para MLG. As sementes armazenadas a 10°C incrementaram sua viabilidade, onde o meio a base de coco atingiu o melhor desempenho. Os resultados enfatizam a importância de adotar MLG, para melhorar a confiabilidade em situações onde a variável resposta segue uma distribuição distinta à normal.
ABSTRACT
A Cattleya é considerada a mais bela e procurada de todas as orquídeas. Esta demanda cria a necessidade do desenvolvimento de técnicas mais eficazes de propagação que ofereçam maior número de indivíduos em período de tempo e espaço físico reduzido, além de manterem a uniformidade e a identidade genotípica para atender às exigências do mercado. Objetivou-se neste trabalho avaliar a regeneração de meristemas provenientes de gemas cultivadas in vitro do híbrido Blc Owen Holmes Ponkan x Brassavola digbiana nº 2, em diferentes concentrações de BAP (6-benzilaminopurina). Gemas com 37 dias de cultivo foram inoculadas em meio de cultura líquido com reguladores vegetais, nos respectivos tratamentos: T1 - MS líquido + água de coco; T2 - MS + água de coco + 0,1 mg L-1 ANA (ácido naftaleno acético) + 0,2 mg L-1 BAP; T3 - MS + água de coco + 0,1 mg L-1 ANA + 0,5 mg L-1 BAP; T4 - MS + água de coco + 0,1 mg L-1 ANA + 1,0 mg L-1 BAP. Os subcultivos se realizaram aos 18, 32, 62, 93, 123, 153 e 184 dias e as avaliações foram feitas observando-se a porcentagem de sobrevivência, contaminação, oxidação e regeneração dos explantes. Observou-se que 86,7 por cento dos explantes sobreviveram e aos 93 dias ocorreu o primeiro sinal de regeneração. BAP (1,0 mg L-1) promoveu resultados satisfatórios com a formação de 132 perfilhos aos 184 dias de cultivo, potencializando a técnica para produção em escala comercial dessa espécie.
Cattleya is considered the most beautiful and searched among all orchids. This fact creates the need of developing more effective propagation techniques to become available a greater number of individuals in reduced periods of time and physical space, besides maintenance of uniformity and genotipic identity to meet the needs of the market. The objective of this work was to evaluate the regeneration of the cultivated shoot meristematic in vitro of the hybrid Blc Owen Holmes Ponkan x Brassavola digbiana nº 2 in the different BAP (6-benzylaminopurine) concentrations. The explants were inoculated in the liquid medium with or without growth regulators in the following combinations: T1: MS liquid + coconut water; T2: MS + coconut water + 0.1 mg L-1 NAA + 0.2 mg L-1 BAP; T3: MS + coconut water + 0.1 mg L-1 NAA + 0.5 mg L-1 BAP and T4: MS + coconut water + 0.1 mg L-1 NAA + 1.0 mg L-1 BAP. Subcultivatings and evaluations (percentage of survival, contamination, medium color, oxidation and regeneration) were made at 18, 32, 62, 93, 123, 153, and 184 days. At 93 days the first signs of regeneration were observed. BAP (1.0 mg L-1) enhanced good results with the formation of 132 sprouts in the 184 days, concluded that the utilization of BAP improved morphogenic response with a higher number of shoots.
ABSTRACT
Cattleya trianae is an endemic species from the tropical rainforest in the Colombian Andes. Its survival is currently threatened due to habitat loss and commercial overexploitation. This study evaluates ten substrates, some organic (pine bark, coconut fiber and wood shavings), some inert icopor (polystyrene foam), vegetable coal and their combinations, and the effects these have on morphometric and phenotypic traits in the hardening phase of 250 plants of C. trianae cultivated in vitro. Recorded data include percent survival, length of longest leaf, biomass (wet weight) and number of roots and leaves at the beginning and at the end of the experiment. After the hardening phase, the plants were taken to a greenhouse and later to the natural environment. Coconut fiber alone or mixed in equal parts with pine bark and coal was the most efficient substrate when percent survival (80±SE=0.3742), biomass, and leaf length were evaluated. Hardened plants displayed qualitative characteristics such as vigor, hardness and waxy texture, strength of green coloration in the leaves, and velamen formation. Under greenhouse conditions, plants grew better with filtered light, relative humidity bordering on 80 %, permanent aeration, misting with water, and an average temperature of 25±2 °C. Invigorated plants were firmly anchored on their host trees. Rev. Biol. Trop. 55 (2): 681-691. Epub 2007 June, 29.
Cattleya trianae es una especie endémica de los bosques tropicales de los Andes colombianos. Actualmente se encuentra amenazada por la disminución de su hábitat natural y la sobreexplotación con fines comerciales. En este estudio se evaluó el efecto de diez tratamientos con sustratos biológicos (corteza de pino, fibra de coco y viruta) e inertes (esferitas de "icopor" y carbón vegetal) en diferentes combinaciones, sobre aspectos morfométricos y fenotípicos en la etapa de endurecimiento de 250 vitroplantas de C. trianae. Se registró porcentaje de supervivencia, longitud de la hoja, biomasa en peso fresco, número de raíces y hojas al inicio y al final del experimento. Al finalizar la fase de endurecimiento, las vitroplantas fueron llevadas a invernadero y posteriormente a ambiente natural. La fibra de coco sola ó mezclada en partes iguales con pino y carbón vegetal, fue el sustrato más eficiente cuando se evaluó el porcentaje de supervivencia (80 % ±SE=0.3742), biomasa en peso fresco y longitud de hoja. Las plantas endurecidas mostraron características cualitativas como vigorosidad, textura coriácea y cerosa, verdor intenso en sus hojas y velamen. En condiciones de invernadero las plantas se desarrollan mejor con luz filtrada, humedad relativa alrededor del 80 %, aireación continua, nebulización y temperatura promedio de 25±2 °C. Las plantas vigorizadas mostraron buen anclaje y adaptación en árboles.