Aplicación del método bioquímico-colorimétrico para identificar agentes trypanocidas / Application of the biochemical-colorimetric method to identify trypanocidal agents

La tripanosomiasis americana es una enfermedad infecciosa desatendida, causada por el parásito protozoo Trypanosoma cruzi, que no cuenta con tratamiento en la fase crónica de esta enfermedad mortal, uno de los desafíos es encontrar terapias efectivas para esta compleja enfermedad, dado que no presenta síntomas asociables a la parasitosis por lo que es desconocida entre los médicos tradicionales. Nuestra Facultad está evaluando la medicina tradicional tacana como fuente de agentes antiparasitarios potenciales. El objetivo de este trabajo fue identificar productos naturales trypanocidas utilizando el método colorimétrico XTT-PMS. Para ello, se realizaron curvas de crecimiento de epimastigotes de T. cruzi y determinamos el tiempo óptimo de realización de los ensayos. Se seleccionó la población inicial de trabajo (3x106 parásitos/mL), las condiciones de incubación (medio LIT, 27ºC, 72 horas) y revelado (XTT-PMS, 4 horas). Con el protocolo optimizado, se realizaron evaluaciones de actividad de drogas control, controles naturales y 20 extractos crudos de plantas medicinales de la amazonía. La actividad se basó en cálculos de concentración inhibitoria media y se consideraron activos las sustancias con CI50<50µg/mL. De los 20 extractos evaluados, el 40% fueron activos. Las plantas más interesantes fueron Sipu sipu (CI50=8.9±1.7µg/mL), Ejije bid'u (CI50=9.1±1.5µg/mL) e Id'ene eidhue (CI50=10.8±1.1µg/mL) con valores de CI50 cercanos a los controles, confirmando la utilidad y potencial del protocolo desarrollado

American trypanosomiasis is listed among the unattended infectious disease, is caused by the protozoan parasite Trypanosoma cruzi, and has no treatment in the chronic phase of this deadly disease. One of the challenges is finding effective therapies for this complex disease, given that it does not present any associated symptoms to the parasitism and is unknown among traditional doctors. Our Faculty is evaluating tacana traditional medicine as a source of potential antiparasitic agents. The objective of this work was to identify trypanocidal natural products using the XTTPMS colorimetric method. For this, growth curves of T. cruzi epimastigotes were made to determine the optimal time to carry out the tests. The initial work population (3x106 parasites/mL), the incubation conditions (medium LIT, 27ºC, 72 hours) and revealed process (XTT-PMS, 4 hours) were selected. With the optimized protocol, activity evaluations of control drugs, natural controls and 20 crude extracts of medicinal plants of the Amazon were carried out. The activity was based on calculations of mean inhibitory concentration and substances with IC50 <50µg/mL were considered active. Of the 20 extracts evaluated, 40% were active. The most interesting plants were Sipu sipu (IC50=8.9±1.7µg/mL), Ejije bid'u (IC50=9.1±1.5µg/mL) and Id'ene eidhue (IC50=10.8±1.1µg/mL) with values of IC50 close to the controls, confirming the usefulness and potential of the developed protocol.

Comparación y evaluación de métodos cuantitativos para determinar la susceptibilidad antimicrobiana de cepas del complejo Mycobacterium abscessus / Comparison and Evaluation of Quantitative Methods for Determining Antimicrobial Susceptibility of Complex Mycobacterium Abscessus Strains / Comparação e avaliação de métodos quantitativos para determinar a susceptibilidade antimicrobiana de cepas do complexo Mycobacterium abscessos

Resumen Introducción: el complejo Mycobacterium abscessus incluye especies patógenas emergentes multirresistentes, lo cual limita las opciones terapéuticas para tratar las infecciones causadas por dichos microorganismos. En este estudio se compararon las concentraciones inhibitorias mínimas (CIM) obtenidas mediante dos métodos cuantitativos, se establecieron los puntos de corte empleados en el micrométodo colorimétrico (MMC) y se evaluó la susceptibilidad antimicrobiana. Materiales y métodos: la CIM de nueve antibióticos fue determinada mediante el MMC y la microdilución en caldo (MDC) para 19 cepas del complejo M. abscessus. El test F de Snedecor se utilizó para establecer la diferencia significativa de las CIM entre los dos métodos y se determinaron los puntos de corte mediante la técnica de distribución de la probabilidad para el MMC. Resultados: se encontró una correlación de los resultados de la CIM del 50% entre MMC y MDC para los antibióticos ensayados. Probablemente esta discrepancia en los resultados se deba a diferencias en algunos parámetros técnicos de cada procedimiento. Todas las cepas fueron sensibles a la amikacina y resistentes a meropenem y ampicilina-sulbactam. Independientemente de la especie del complejo M. abscessus, las fluoroquinolonas mostraron una baja actividad inhibitoria (0-25%) sobre los aislados clínicos, resultados que son similares a los reportados por otros autores. Conclusión: Los patrones de multirresistencia observados en las cepas analizadas sugieren la necesidad de utilizar las pruebas de susceptibilidad como herramientas que permitan orientar y optimizar las conductas terapéuticas en infecciones producidas por M. abscessus.

Abstract Introduction: The Mycobacterium abscessus complex includes multidrug resistant emerging pathogens, which limit therapeutic options for treating infections caused by these microorganisms. In this study, the minimum inhibitory concentrations (MICS) obtained by 2 quantitative methods were compared, the cut-off points used in the colorimetric micromethod (CMM) were established and the antimicrobial susceptibility was evaluated. Materials and Methods: The MIC for nine antibiotics was determined by CMM and broth microdilution (BMD) for 19 strains of M. abscessus complex. The Snedecor F test was used to establish the significant difference in the CIM between the methods, cutoff points were determined by the probability distribution method for the CMM. Discussion: A correlation of 50% between CMM and BMD for antibiotics tested was found. Probably, this discrepancy in the results is due to differences in some technical parameters of each procedure. All strains were susceptible to amikacin and were resistant to meropenem and ampicillin-sulbactam. Independently of the species of M. abscessus complex, fluoroquinolones showed a low inhibitory activity (0-25%) on clinical isolates, results that are similar to those reported by other authors. Conclussion: The Multidrug resistance patterns observed in the strains tested suggest the need for susceptibility testing as tools to guide and optimize the therapeutic behavior in infections caused by M. abscessus.

Resumo Introdução: o complexo Mycobacterium abscessus inclui espécies patógenas emergentes multirresistentes, o qual limita as opções terapêuticas para tratar as infeções causadas por estes microrganismos. Neste estudo compararam-se as concentrações inibitórias mínimas (CIMS) obtidas mediante 2 métodos quantitativos, se estabeleceram os pontos de corte empregados no micrométodo colorimétrico (MMC) e se avaliou a susceptibilidade antimicrobiana. Materiais e métodos: a CIM de 9 antibióticos foi determinada mediante o MMC e microdiluição em caldo (MDC) para 19 cepas do complexo M. abscessus. O teste F de Snedecor utilizou-se para estabelecer a diferença significativa das CIMS entre os dois métodos e determinaram-se os pontos de corte mediante a técnica de distribuição da probabilidade para o MMC. Resultados: se encontrou uma correlação dos resultados da CIM do 50% entre MMC e MDC para os antibióticos testados. Provavelmente, esta discrepância nos resultados se deve a diferenças em alguns parâmetros técnicos de cada procedimento. Todas as cepas foram sensíveis à amikacina e resistentes a meropenem e ampicilina-sulbactam. Independentemente da espécie do complexo M. abscessos, as fluoroquinolonas mostraram uma baixa atividade inibitória (0-25%) sobre os isolados clínicos, resultados que são similares aos reportados por outros autores. Conclussão: Os patrões de multirresistência observados nas cepas analisadas, sugerem a necessidade de utilizar as provas de susceptibilidade como ferramentas que permitam orientar e otimizar as condutas terapêuticas em infeções produzidas por M. abscessus.

Comparação entre três métodos analíticos para determinação de soro em leite cru refrigerado / Comparison of three analytical methods to determine serum in refrigerated raw milk

O objetivo deste experimento foi comparar três métodos analíticos para determinação de soro em leite cru refrigerado: cromatografia líquida de alta eficiência, ninidrina ácida e colorimétrico adaptado. Foram coletadas 100 amostras de leite cru refrigerado de tanques de expansão. Estas, quando submetidas à análise pelo método da ninidrina ácida, apresentaram 10 (14,7%) amostras negativas e 58 (85,3%) positivas. O teor médio de ácido siálico encontrado na técnica da ninidrina foi de 5,58(g/mL, com valor mais frequente de 2,70(g/mL. Das 68 amostras negativas pela cromatografia líquida de alta eficiência, duas foram positivas (2,94%) e 66 (97,06%) negativas, quando analisadas pelo método colorimétrico. A frequência relativa de amostras positivas foi de 32%, com a CLAE apresentando a maior média de soro (14,37%), seguida do método colorimétrico (5,28%) e o da ninidrina ácida (3,12%). A técnica de cromatografia líquida de alta eficiência diferiu dos métodos de ninidrina ácida e colorimétrico, enquanto os métodos da ninidrina e colorimétrico não diferiram entre si, podendo ambos serem utilizados como metodologias de triagem. Entre as três técnicas, a cromatografia líquida de alta eficiência foi a metodologia mais sensível na detecção e quantificação do soro em leite cru refrigerado.(AU)

The objective of this study was to compare three analytical methods to determine serum in refrigerated raw milk. High-performance liquid chromatography (HPLC), acidic and colorimetric ninhydrin methods were applied. A collection of 100 samples of raw milk from cooled expansion tanks took place. The results showed that 10 samples (14.7%) were negative and 58 (85.3%) were positive for the acidic ninhydrin method. The mean sialic acid content found in the ninhydrin technique was 5.58µg/mL, with a more frequent value of 2.70µg/mL. From all 68 HPLC negative samples, two were positive (2.94%) and 66 (97.06%) negative to the colorimetric method. The relative frequency of positive samples was 32%, HPLC had the highest mean serum levels (14.37%), followed by the colorimetric method (5.28%) and acid ninhydrin (3.12%). The high-performance liquid chromatography method was different from the acid and colorimetric ninhydrin methods. The ninhydrin and colorimetric methods were not different from each other, both of which could be used as screening methodologies. Among the three techniques, HPLC was the most sensitive methodology for the detection and quantification of serum in refrigerated raw milk.(AU)

Effect of seasonality on the quality of bovine oocytes selected by the brilliant cresyl blue method / Efecto de la estacionalidad en la calidad de los ovocitos seleccionados por el método de azul cresil brillante / Efeito da sazonalidade na qualidade dos ovócitos bovinos selecionados pelo método azul cresil brilhante

Abstract Background: The brilliant cresyl blue (BCB) staining is a non-invasive test to select the best-suited oocytes for embryonic development. This makes it a useful tool to select best-quality oocytes at the times of the year when there is forage restriction. Objective: To evaluate the effect of seasonality on the nuclear maturation and quality of oocytes selected by the BCB test. Methods: The cumulus-oophorus complexes (COCs) were obtained in summer and winter of 2010 and 2011. Selected COCs were maintained for 90 min at 38.5 °C in a CO2 incubator, in TCM 199 medium containing 10% fetal bovine serum and antibiotics, and supplemented with 26 µM brilliant cresyl blue. Afterwards, they were divided according to the ooplasm staining (BCB+ -blue; BCB− -unstained). Subsequently, COCs were matured for 22 h. Nuclear maturation was evaluated at 22 h of culture. Results: The proportion of BCB− oocytes was higher in the winter of 2010, but there was no increase in this group in the winter of 2011. The percentage of oocytes that reached metaphase II was higher in control and BCB+ groups in relation to oocytes from BCB− group. Conclusion: The season of the year influences the percentage of oocytes best suited for embryonic production in situations in which oocyte donors receive pasture-based feeding, since the method was effective in determining the effect of seasonality on the competence of bovine oocytes to reach nuclear maturation.

Resumen Antecedentes: La tinción con azul cresil brillante (BCB) es un método no invasivo para seleccionar ovocitos aptos para el desarrollo embrionario. Por tanto, es una herramienta útil para selecionar los ovocitos de mejor calidad en temporadas de restricción de forraje. Objetivo: Evaluar el efecto de la estacionalidad sobre la maduración nuclear y calidad de los ovocitos seleccionados por el test BCB. Métodos: Los complejos cumulus-oophorus (CCOs) fueron obtenidos durante el verano y el invierno de 2010 y 2011. Los CCOs seleccionados se mantuvieron durante 90 min a 38,5 oC en una incubadora de CO2 en un medio TCM 199 con 10% de suero fetal bovino y antibióticos, suplementado con 26 µM de azul cresil brillante. Luego se separaron según el color del citoplasma (BCB+ -azul y BCB− -incoloro). Posteriormente, los CCOs se maduraron durante 22 h. La evaluación de la maduración nuclear se realizó a las 22 h de cultivo. Resultados: La proporción de ovocitos BCB− fue mayor en el invierno de 2010, pero no hubo un aumento de ese grupo en el invierno de 2011. El porcentaje de ovocitos que alcanzaron la etapa de metafase II fue mayor en el grupo control y BCB+ con respecto al grupo BCB−. Conclusión: La estación del año influye en el porcentaje de ovocitos más aptos para la producción de embriones en situaciones donde las donadoras de ovocitos reciben alimentación a base de pastos, ya que este método fue eficaz para determinar el efecto de la estacionalidad en la competencia de ovocitos bovinos en alcanzar la maduración nuclear.

Resumo Antecedentes: O método do azul cresil brilhante (BCB) não é invasivo e seleciona ovócitos mais aptos ao desenvolvimento embrionário. Portanto é ferramenta útil para selecionar ovócitos de melhor qualidade em épocas do ano que ocorre restrição de pastagem. Objetivo: Avaliar o efeito da sazonalidade sobre a maturação nuclear e a qualidade dos ovócitos selecionados pelo teste BCB. Métodos: Os complexos cumulus oophorus (CCOs) foram obtidos no verão e inverno de 2010 e 2011. Os CCOs selecionados foram mantidos por 90 min, a 38,5 °C, em incubadora de CO2, em meio TCM 199 contendo 10% de soro fetal bovino e antibióticos, e suplementado com 26 µM de azul cresil brilhante. Em seguida, estes foram divididos de acordo com a coloração do citoplasma (BCB+ -azuis e BCB− -incolores). Então os CCOs foram maturados durante 22 h. A avaliação da maturação nuclear foi realizada às 22 h de cultivo. Resultados: A proporção dos ovócitos BCB− foi maior no inverno de 2010, mas não houve aumento desse grupo no inverno de 2011. O percentual de ovócitos que atingiu o estágio de metáfase II foi maior no controle e no grupo BCB+ em relação ao grupo BCB−. Conclusão: A estação do ano influencia o percentual de ovócitos mais aptos a produção de embriões, em situações onde as doadoras de ovócitos recebem alimentação baseada em pastagens, já que o método se mostrou efetivo para determinação do efeito da sazonalidade sobre a competência de ovócitos bovinos em atingirem a maturação nuclear.

Evaluación de la acción antiproliferativa del extracto acuoso de Physalis peruviana L. (Aguaymanto) en cultivos celulares de linfocitos humanos y leucemia mieloide crónica (K562) / Evaluation of the antiproliferative action of the aqueous extract of Physalis peruviana L. (Aguaymanto) in cell cultures of human lymphocytes and chronic myeloid leukemia (K562)

Physalis peruviana L. "Aguaymanto" es una especie peruana usada tradicionalmente en el tratamiento del cáncer y otras enfermedades por sus presuntas propiedades quimioprofilácticas, quimioterapéuticas, antibióticas, antipiréticas, antivirales y antimicóticas. Es así que se postula como una valiosa fuente natural para la obtención de nuevos agentes farmacológicos. En el presente estudio se evaluó el efecto antiproliferativo del extracto acuoso de Physalis peruviana L. en linfocitos humanos y en la línea celular K562 (leucemia mieloide crónica), para lo cual se colectaron frutos frescos de la provincia de Carhuaz (Ancash) que fueron procesados para obtener un extracto sólido puro para adicionarlo a un cultivo celular in vitro linfocitario aislado de 10 individuos sanos y de la línea celular K562. Los cultivos fueron mantenidos en condiciones adecuadas y se les añadió cuatro dosis del extracto acuoso (50, 100, 200 y 400 µg/ml), de cisplatino (0.3, 0.6, 1.25 y 2.5 µg/ml) y como control negativo el medio de cultivo. Se determinó la viabilidad celular mediante el conteo celular con el colorante azul de tripano en la cámara de Neubauer y con el ensayo colorimétrico MTT en el lector de ELISA. Los resultados mostraron que las concentraciones de aguaymanto con mayor efecto antiproliferativo fueron 200 y 400 µg/ml, que alcanzaron porcentajes de inhibición mayores de 50 % tanto para los linfocitos y la línea celular K562. Paralelamente, el cisplatino mostró claramente mayor efecto antiproliferativo en los linfocitos en comparación con el aguaymanto, mientras que el aguaymanto mostró mayor efecto antiproliferativo en la línea K562, lo que podría sugerir que el fruto es menos dañino en linfocitos que el cisplatino. El análisis estadístico se realizó con el software STATA a un nivel del 5% (Kruskall-Wallis, p<0.05), encontrándose diferencias significativas en la viabilidad celular de los linfocitos y de K562 con extracto acuoso de aguaymanto y cisplatino. Con el aguaymanto, la viabilidad celular fue mayor en linfocitos que en K562; y con el cisplatino, la viabilidad celular fue mayor en K562 que en linfocitos. La concentración inhibitoria media del aguaymanto fue de ßγ5.7γ µg/ml para linfocitos y para la línea celular K56ß fue de 146.ß5 µg/ml, lo que dio un índice de selectividad mayor a 1 (Microsoft Excel 2010). Esto indica que el aguaymanto tiene mayor efecto antiproliferativo sobre las células cancerígenas de leucemia que sobre las células no malignas (linfocitos). Los resultados son satisfactorios y sugieren continuar estudios sobre las diversas bondades medicinales del aguaymanto como fuente potencial de compuestos bioactivos con aplicación terapéutica.

Biological characterization of implant surfaces - in vitro study / Caracterização biológica de superfície de titânio - estudo in vitro

Objective: Evaluate the biological performance of titanium alloys grade IV under different surface treatments: sandblasting and double etching (Experimental surface 1; Exp1, NEODENT); surface with wettability increase (Experimental surface 2; Exp2, NEODENT) on response of preliminary differentiation and cell maturation. Material and method: Immortalized osteoblast cells were plated on Exp1 and Exp2 titanium discs. The polystyrene plate surface without disc was used as control group (C). Cell viability was assessed by measuring mitochondrial activity (MTT) at 4 and 24 h (n = 5), cell attachment was performed using trypan blue exclusion within 4 hours (n = 5), serum total protein and alkaline phosphatase normalization was performed at 4, 7 and 14 days (n = 5). Data were analyzed using one-way ANOVA and Tukey test. Result: The values of cell viability were: 4h: C - 0.32±0.01A; Exp1 - 0.34±0.08A; Exp2 - 0.29±0.03A. 24h: C - 0.43±0.02A; Exp1 - ; 0.39±0.01A; Exp2 - 0.37±0.03A. The cell adhesion counting was: C -85±10A; Exp1- 35±5B; Exp2& - 20±2B. The amounts of serum total protein were 4d: C - 40±2B; Exp1 - 120±10A; Exp2 -130±20A. 7d: C 38±2B; Exp1 - 75±4A; Exp2 -70±6A. 14 d: C - 100±3A; Exp1 - 130±5A; Exp2 - 137±9A. The values of alkaline phosphatase normalization were: 4d: C - 2.0±0.1C; Exp1 - 5.1±0.8B; Exp2 - 9.8±2.0A<. 7d: C -1.0±0.01C; Exp1 - 5.3±0.5A; Exp2 - 3.0±0.3B. 14 d: C - 4.1±0.3A; Exp1 - 4.4±0.8A; Exp2 - 2.2±0.2B. ...

Objetivo: Avaliar o desempenho biológico de ligas de titânio grau IV submetidos a diferentes tratamentos de superfície - jateamento e duplo ataque ácido (Superfície experimental 1; Exp1, NEODENT) e superfície com aumento na molhabilidade (Superfície experimental 2; Exp2, NEODENT) em resposta preliminar de diferenciação e maturação celular. Material e método: Foram plaqueados osteoblastos imortalizados sobre discos de titânio de Exp1 e Exp2 e como controle o poço da placa de cultura sem disco (C). Empregou-se ensaios de viabilidade celular (MTT) em 4 e 24 horas (n = 5), adesão celular em 4 horas (n = 5), dosagem de proteínas totais e fosfatase alcalina normalizada em 4, 7 e 14 dias (n = 5). Os dados foram analisados por ANOVA em fator único seguido de teste de Tukey. Resultado: Os valores de viabilidade celular foram: 4h: C - 0,32±0,01A; Exp1 - 0,34±0,08A; Exp2 - 0,29±0,03A. 24h: C - 0,43±0,02A; Exp1 - 0,39±0,01A; Exp2 - 0,37±0,03A. A contagem de adesão celular foi: C - 85±10A; Exp1 - 35±5B; Exp2 - 20±2B. Os valores de proteínas totais foram: 4d: C - 40±2B; Exp1 - 120±10A; Exp2 - 130±20A. 7d: C - 38±2B; Exp1 - 75±4A; Exp2 - 70±6A. 14 d: C - 100±3A; Exp1 - 130±5A; Exp2 - 137±9A. Os valores de fosfatase alcalina normalizada foram: 4d: C - 2,0±0,1C; Exp1 - 5,1±0,8B; Exp2 - 9,8±2,0A, 7d: C - 1,0±0,01C; Exp1 - 5,3±0,5A; Exp2 - 3,0±0,3B, 14 d: C - 4,1±0,3A; Exp1 - 4,4±0,8A; Exp2 - 2,2±0,2B. Letras diferentes representam ...

Pigmentação de gemas de ovos de codornas japonesas alimentadas com rações contendo colorífico / Egg yolk colour of japanese quail fed on diets with spice

Objetivou-se neste trabalho avaliar, semanalmente, o grau de pigmentação de gemas de ovos de codornas japonesas alimentadas com rações contendo diferentes níveis de colorífico (163,8 mg bixina/100 g), no decorrer de quatro semanas. Utilizaram-se 240 codornas japonesas (Coturnix japonica) fêmeas, em delineamento experimental em blocos inteiramente casualizados, com oito tratamentos, cinco repetições e seis codornas por unidade experimental. Os tratamentos, constituídos por oito rações experimentais resultantes da combinação de quatro níveis de colorífico na ração (0; 1,5; 3,0 e 4,5 por cento) e duas fontes energéticas (milho e quirera de arroz), foram distribuídos nas parcelas, enquanto que os quatro dias experimentais (7º, 14º, 21º e 28º) constituíram as subparcelas. A equação de regressão estimada com o uso do modelo logarítmico explicou 96 por cento da variação dos dados de escore colorimétrico das gemas. No 7º e 14º dia do experimento, os níveis de colorífico estimados que promoveram escores colorimétricos de gemas com padrão caipira (8,5 a 9,0 pontos) foram de 1,5 por cento, em rações à base de milho, e 3,0 por cento, em rações à base de quirera de arroz. No 21º e 28º dia experimental, os valores estimados foram de 0,75 por cento (rações com milho) e 2,25 por cento (rações com quirera). Em rações com 46,0 por cento de milho ou quirera de arroz, o uso de níveis superiores a 3,0 por cento de colorífico promoveu aumento das perdas de pigmento, pelas excretas, e conseqüente redução da capacidade de deposição de pigmentos nas gemas.

One aimed in this work to evaluate , weekly, the egg yolk colour grade of japanese quails fed on diets with different levels of spice (163.8 mg bixin/100 g), in course of four weeks. Two hundred and forty japanese female quails (Coturnix japonica) were used in a completely randomized block outline, with eight treatments, five replicates and six quails per experimental unit. The treatments, consisted of eight experimental diets resultant from the combination of four spice levels in the diets (0, 1.5, 3.0 e 4.5 percent) and two energetic sources (corn and broken rice grains), were allotted to the plots, while the four experimental days (7th, 14th, 21st e 28th) consisted the splitplots. The estimated regression equation with the use of logarithmic model explained 96 percent of the variation of yolk colour scores data. At the 7th and 14th experimental days, the estimated spice levels that promoted yolk colour scores with free-range pattern (8.5 to 9.0 points) were 1.5 percent, for corn based rations, and 3.0 percent, for broken rice grains based rations. At the 21st and 28th experimental day, the estimated values were 0.75 percent (diets with corn) and 2.25 percent (diets with broken rice grains). In diets with 46 percent of corn or broken rice grains, the use of upper levels to 3.0 percent of spice increased the pigment losses by excreta and consequent capacity decrease of store yolk pigments.

Evaluación de un micrométodo colorimétrico para determinar la concentración inhibitoria mínima de drogas antituberculosas frente a Mycobacterium tuberculosis / Evaluation of a colorimetric micromethod for determining the minimal inhibitory concentration of antibiotics against Mycobacterium tuberculosis

La tuberculosis multidrogorresistente (MDR), originada por aislamientos de cepas simultáneamente resistentes a isoniacida y rifampicina, es reconocida en la actualidad como un problema sanitario mundial. Nuevas técnicas que permitan detectar en forma temprana cepas MDR son necesarias para evitar su dispersión en la comunidad. En este trabajo hemos evaluado el empleo de un micrométodo colorimétrico para determinar las concentraciones inhibitorias mínimas (CIM) de las drogas de primera línea frente a dichas cepas, usando el indicador: bromuro de 3-(4,5 dimetiltiazol-2-yl)-2,5 difeniltetrazolio (M-MTT). Junto a la cepa de referencia H37Rv se procesaron 603 aislamientos clínicos, 507 provenientes de casos pulmonares (84,1%) y 96 de extrapulmonares (15,9%). Como estándar de referencia se utilizó el método de proporciones en medio de Löwenstein-Jensen (MP), con isoniacida (INH), 0,20 µg/ml; estreptomicina (SM), 4,00 µg/ml; etambutol (EMB), 2,00 µg/ml y rifampicina (RMP), 40,00 µg/ml. Los intervalos de concentraciones de las drogas empleadas en el M-MTT fueron: INH, 1,00-0,03 µg/ml; SM, 8,00-0,25 µg/ml; EMB, 32,00-1,00 µg/ml y RMP: 2,00-0,06 µg/ml. El resultado de la CIM por el M-MTT fue obtenido en un tiempo promedio de 8 días (rango total: 7 a 12 días). Los puntos de corte para cada una de las drogas, calculados mediante el análisis de la curva ROC, fueron: INH, 0,25 µg/ml; RMP, 0,50 µg/ml; SM, 4,00 µg/ml y EMB, 4,00 µg/ml. Los valores de sensibilidad y especificidad fueron 100% en el caso de RMP; y 97,8% y 99,5%, respectivamente, para INH. El análisis estadístico de los resultados permitió concluir que el M-MTT es un método seguro para la rápida detección de MDR. Por su sencillez y bajo costo, podría ser aplicado en los países en vías de desarrollo.

Multidrug-resistant tuberculosis (MDR) caused by strains resistant to both isoniazid and rifampin is now considered a serious sanitary problem worldwide. New technical tools for the early detection of these strains are urgently needed to avoid their spread within the community. We have evaluated a microplate colorimetric-based method to determine the minimal inhibitory concentration (MIC) of first-line antituberculosis drugs by using 3-(4, 5 dimethylthiazolyl 1-2 yl)-2,5 diphenyl tetrazolium bromide as a bacterial growth indicator (MTT) (M-MTT). A total of 603 clinical isolates, 507 from respiratory cases (84.1%) and 96 from non-respiratory cases (15.9%) were processed. The proportion method on a Löwenstein-Jensen medium (PM) with isoniazid (INH), 0.20 µg/ml; streptomycin (SM), 4.00 µg/ml; ethambutol (EMB), 2.00 µg/ml and rifampin (RMP), 40.00 µg/ml, was used as the gold standard. The drugs and the concentration range tested were: INH, 1.00-0.03 µg/ml; SM, 8.00-0.25 µg/ml; EMB, 32.00-1.00 µg/ml and RMP, 2.00-0.06 µg/ml. MIC results were obtained on an average of 8 days (range: 7-12). The cut-off values for each drug, calculated by the ROC curve method, were: INH, 0.25 µg/ml, RMP, 0.50µg/ml, SM, 4.00 µg/ml and EMB, 4.00 µg/ml. Sensitivity and specificity for RMP were 100 %, while for INH, they were 97.8% and 99.5% respectively. The results obtained suggested that M-MTT is a low cost and easy to set up method that could be applied to MDR clinical diagnosis in developing countries.

Evaluación de un nuevo método colorimétrico de detección de CO2 espirado

Se propone evaluar, por primera vez en nuestro medio, el dispositivo colorimétrico desechable Colibri para detección de CO2 espirado, que se basa en la utilización de una membrana pH sensible que cambia de color cuando el CO2 exhalado reacciona con el agua para formar ácido carbónico. Los objetivos del trabajo fueron: confirmar la intubación orotraqueal mediante dicho dispositivo, verificar la correlación entre la escala de colores con los valores de CO2 espirado obtenidos por capnometría convencional y comparar la latencia de medida de ambos métodos. Se estudió una población de 39 pacientes a los que se realizó anestesia general con intubación orotraqueal (IOT) para procedimientos quirúrgicos de coordinación, ASA 1 y 2, con edades comprendidas entre 17 y 85 años. Se midió simultáneamente el CO2 espirado mediante Colibri TechnologyMR y capnometría convencional, al momento de la intubación y a los 20 minutos. Se confirmó en 38 pacientes la IOT virando el dispositivo del azul al amarillo, lo que se correspondió con valores de PetCO2 entre 23 y 39 mmHg. Se detectó intubación esofágica en un paciente. Se realizó la correlación de valores de ambos métodos mediante 74 mediciones simultáneas de PetCO2. De este trabajo surge que tanto la sensibilidad como especificidad diagnóstica para detectar la posición del tubo orotraqueal mediante el Colibri fueron de 100%. Se confirmó en todos los casos la correlación existente entre la escala de colores provista por el fabricante con los valores capnográficos y se comprobó que para el Colibri no hubo latencia para la detección de CO2 espirado, verificándose cambio de color a la primera ventilación.