Natural killer activity of the spleen cells of Ehrlich tumor-bearing mice treated with Copaifera multijuga extract / Atividade natural killer das células esplênicas de camundongos portadores do tumor de Ehrlich tratados com extrato de Copaifera multijuga

AIMS: Copaifera multijuga Hayne oleoresin is commonly used in traditional medicine owing to its anti-inflammatory, antiseptic, antitumor, and antibacterial properties. However, little is known about the effect of the compounds from the bark of this plant. In this study, the immunomodulatory effect of the ethanolic extract of C. multijuga bark via natural killer activity of non-adherent spleen cells of Ehrlich tumor-bearing mice was evaluated. METHODS: Male Swiss mice were inoculated subcutaneously with 1×106 Ehrlich tumor cells (Ehrlich and Ehrlich/C. multijuga group) or phosphate buffered saline solution (control group and C. multijuga group) and treated orally daily with C. multijuga extract (200 mg kg-1, 0.1 mL per mouse, for the Ehrlich/C. multijuga and C. multijuga groups) or phosphate buffered saline solution (control group and Ehrlich group). The four experimental groups consisted in eight mice each and were organized in two sets, one treated for seven days and another treated for 14 days, totalizing 64 mice throughout the experiment. Twenty-four hours after the last oral administration, the mice were euthanized and the spleen tissue was isolated to prepare a non-adherent spleen cell suspension and to evaluate natural killer activity. Data are presented as the cell lysis percentage of Yac.1 target cells by non-adherent spleen cells. RESULTS: Treatment for seven days increased natural killer activity in the Ehrlich/C. multijuga group (21.20±8.89, p<0.05) compared to the control group (3.14±2.71, p<0.05); however, this effect was not maintained in the groups treated for 14 days (Control: 6.02±6.98, Ehrlich: 4.82±7.72, C. multijuga: 2.07±2.10, Ehrlich/C. multijuga: 2.01±1.63, p>0.05). CONCLUSIONS: Treatment for seven days with an ethanolic extract of C. multijuga bark enhanced the natural killer activity of non-adherent spleen cells from Ehrlich tumor-bearing mice.

OBJETIVOS: O óleo-resina de Copaifera multijuga Hayne é popularmente utilizado na medicina tradicional por suas propriedades antiinflamatória, antisséptica, antitumoral e antibacteriana. Entretanto, há poucos estudos sobre o efeito dos compostos obtidos da casca da planta. Assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito imunomodulador do extrato etanólico da casca da C. multijuga na atividade natural killer das células esplênicas não aderentes de animais portadores do tumor de Ehrlich. MÉTODOS: Camundongos Swiss machos foram inoculados subcutaneamente com 1×106 células do tumor de Ehrlich (grupo Ehrlich e Ehrlich/C. multijuga) ou com solução salina tamponada (grupo controle e C. multijuga) e tratados diariamente (gavagem) com extrato de C. multijuga (200 mg kg-1, 0,1mL cada um, para os grupos Ehrlich/C. multijuga e C. multijuga) ou com solução salina tamponada (grupo controle e grupo Ehrlich). Os quatro grupos experimentais consistiram de oito animais cada e foram organizados em dois conjuntos, um tratado por sete dias e outro tratado por 14 dias, totalizando 64 animais durante todo o experimento. Após 24 horas do término do tratamento, os animais foram eutanasiados para obtenção da suspensão de células esplênicas não aderentes e avaliação da atividade natural killer. Os resultados são apresentados como porcentagem da lise celular das células alvo Yac.1 pelas células esplênicas não aderentes. RESULTADOS: A análise dos resultados demonstrou que aos sete dias de tratamento a C. multijuga aumentou a atividade natural killer no grupo Ehrlich/C. multijuga (21,20±8,89, p<0,05) em comparação ao grupo controle (3,14±2,71, p<0,05), entretanto tal efeito não foi mantido nos grupos tratados por 14 dias (Controle: 6,02±6,98; EHR: 4,82±7,72; C. multijuga: 2,07±2,10; EHR/C. multijuga: 2,01±1,63, p>0,05). CONCLUSÕES: Os resultados demonstraram que o tratamento com o extrato etanólico da casca de C. multijuga favoreceu a atividade natural killer das células esplênicas não aderentes dos animais portadores do tumor de Ehrlich apenas aos sete dias de tratamento.

Effects of the oral treatment with Copaifera multijuga oil on reproductive performance of male Wistar rats

Copaiba oil, extracted from Copaifera multijuga Hayne, Fabaceae, is widely used for medicinal purposes, especially to treat inflammatory processes. However, there is no report regarding its effect on reproductive performance after used in repeated doses orally. The present study evaluated the effects of the oral administration of Copaiba oil (at doses of 200, 500 or 2500 mg/kg) or water (control) for eight weeks in male Wistar rats. Treated males mated untreated females, and parameters as fertility rates, absolute and relative mass of accessory sexual organs and histology and development of the offspring were evaluated. Chemical analysis revealed the presence of 22 components accounting for 99.11% of the Copaiba oil. The main compounds identified were sesquisterpenes. The reproductive toxicology results indicate that there was no difference between the treated groups compared with the control group in any of the parameters, suggesting that the oral treatment with C. multijuga oil for eight weeks does not affect reproductive performance of male Wistar rats.

Copaifera multijuga ethanolic extracts, oil-resin, and its derivatives display larvicidal activity against Anopheles darlingi and Aedes aegypti (Diptera: Culicidae)

Copaifera spp. is a common tree species found in the tropical region of Latin America, popularly known as copaiba or pau-d'alho. Oil-resin from different Copaifera species and its components present several biological activities such as antimicrobial, anti-inflammatory, antioxidant and insecticidal, including larvicidal activity against mosquitoes. Thus, bark and leaf ethanolic extracts, oil-resin, essential oil and alepterolic acid from Copaifera multijuga Hayne, Fabaceae, were tested as larvicides against the main malaria vector in the north of Brazil, Anopheles darlingi and also Aedes aegypti, the dengue vector. A. darlingi larval mortality was significantly higher than A. aegypti for most tested compounds. Bark and leaf extracts resulted in lower Lethal Concentrations (LC50) values for A. darlingi, 3 and 13 ppm, respectively, while the essential oil provided the lowest LC50 value for A. aegypti, 18 ppm. Despite of that, the lowest LC values were from the alepterolic acid for both species, i.e. 0.9 and 0.7 ppm for A. darlingi and A. aegypti, respectively.

Avaliação do efeito antifúngico do óleo resina e do óleo essencial de copaíba (Copaifera multijuga Hayne) / Evaluation of the antifungal effect of oleoresin and essential oil of copaiba (Copaifera multijuga Hayne)

Óleo de Copaifera multijuga Hayne, in natura e as frações foram avaliados quanto às suas atividades fungitóxicas, frente a cinco espécies de fungos filamentosos do gênero Aspergillus e três espécies de leveduras do gênero Candida. Concentrações de óleo resina e de óleo essencial na faixa de 0,08 mg mL-1a 1,6 mg mL-1 foram usadas para as análises qualitativa e quantitativas. As amostras foram dispostas sobre discos de papel de 5 mm de diâmetro e distribuídos sobre o meio Saboraud em placas de Petri, inoculadas com esporos dos microrganismos e incubadas a 28ºC durante 10 dias. Utilizou-se uma solução com 1,6 mg mL-1 de nitrato de miconazol como controle positivo. Os resultados qualitativos mostraram que o óleo resina apresentou boa atividade, porém uma das frações do óleo essencial se mostrou altamente efetivo contra C. parapsilosis IOC - 2882, A.flavus IOC-3874 e A. tamarii IOC-187 com halos de inibição de 16,0±1,4 mm, 19,5±2,1 mm e 12,5±3,5 mm, respectivamente. Já a avaliação quantitativa mostrou que 0,3 mg mL-1 do óleo resina inibiu o crescimento de A. flavus e C. parapsilosis, enquanto que 0,08 mg mL-1 da fração do óleo essencial atingiu esta mesma atividade.

Copaifera multijuga Hayne oil in natura and its fractions were evaluated as to their fungitoxic activities against five filamentous fungus species belonging to the genus Aspergillus and three yeast species of the genus Candida. Oleoresin and essential oil concentrations ranging from 0.08 mg mL-1 to 1.6 mg mL-1 were used for qualitative and quantitative analyses. The samples were placed onto 5mm-diameter paper discs distributed on Sabouraud's medium in Petri dishes inoculated with spores of the microorganisms and incubated at 28ºC for 10 days. A solution containing 1.6 mg mL-1 miconazole nitrate was used as positive control. Qualitative results showed that the oleoresin presented good activity, while a fraction of the essential oil was highly effective against Candida parapsilosis IOC-2882, Aspergillus flavus IOC-3874 and A tamarii IOC-187 with 16.0±1.4 mm, 19.5±2.1 mm and 12.5±3.5 mm inhibition halos, respectively. The quantitative evaluation showed that 0.3 mg mL-1 oleoresin inhibited the growth of Aspergillus flavus and Candida parapsilosis, while 0.08 mg mL-1 of the essential oil fraction reached this same activity.

Atividade antimicrobiana do óleo-resina produzido pela copaiba - Copaifera multijuga Hayne (Leguminosae) / Antimicrobial activity of the oil-resin produced by copaiba Copaifera multijuga Hayne (Leguminosae)

A pesquisa de plantas com fins medicinais tem grande importância para a comunidade médica, uma destas é o óleo-resina extraído da copaíba, Copaifera multijuga Hayne, o qual é natural da região Amazônica onde é encontrado uma grande diversidade dessa espécies. Seu uso medicinal, tão difundido o torna o fitofármaco mais usado e conhecido pelas populações mais pobres da região Norte do Brasil, sendo utilizado como diurético, laxativo, antitetânico, antiblenorrágico, anti-reumático, anti-séptico do aparelho urinário, antiinflamatório, antitussígeno, cicatrizante e remédio para o combate ao câncer. O presente trabalho apresenta os resultados da avaliação da atividade antimicrobiana deste óleo, onde foi avaliado pela a técnica de difusão em ágar em meio Muller-Hinton. As cepas avaliadas foram: Escherichia coli ATCC 25922, Staphylococcus aureus ATCC 25923 e Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027. As placas forma incubadas em estufas por 24 h em temperatura de 35 ºC. Como padrões foram utilizados os antibióticos amoxicilina (AMO-10 mg/disco), cloranfenicol (CLO-30 mg/disco) e tetraciclina (TET-30 mg/disco). Os resultados mostraram que o óleo de copaíba possui capacidade de inibir o crescimento das três bactérias avaliadas, apresentando com isso uma concentração inibitória mínima de 1,56, 3,12 e 12,5 por cento para E. coli, S. aureus e P. aeruginosa, respectivamente.

The research of plants with medicinal purposes has great importance for the medical community, one of these is the oil-resin extracted of copaíba, Copaifera multijuga Hayne, which is natural of the Amazon region where a great diversity of this species is found. Its medicinal use, the way it is widely spread out, becomes it the phytopharmacs most used and known by the poor populations at the North region of Brazil, being used as diuretic, laxative, antitetanic, antiblenorragic, anti-rheumatic, anti-septic for urinary system, anti-inflammatory, anti-cough, cicatrizing and medicine for the combat to the cancer. The present work shows the evaluation results of this oil antimicrobial activity by the technique of diffusion in agar in Muller-Hinton ambience. The evaluated strains were: Escherichia coli ATCC 25922, 25923 Staphylococcus aureus ATCC and Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027. The plates were incubated in hot houses for 24 h under temperature of 35 ºC. Amoxicillin antibiotics (AMO-10 mg/disco), cloranfenicol (CLO-30 mg/disco) and tetracycline used (TET-30 mg/disco) as being standard. The results showed that the oil has the capacity to inhibit the growth of three evaluated bacteria, presenting a minimum inhibitory concentration of 1,56, 3,12 and 12.5 percent for E. coli, S. aureus and P. aeruginosa, respectively.

Detection of adulterated copaiba (Copaifera multijuga Hayne) oil-resins by refractive index and thin layer chromatography / Detecção de óleo-resinas de copaíba adulterados através do índice de refração e da cromatografia de camada delgada

The refractive indices (RI) of the eight samples of copaiba oils, collected for this study at RDS Tupé ranged from 1.50284 to 1.50786. The thin layer chromatography (TLC) plates of these oils revealed with anisaldehyde-sulphuric acid reagent showed dark lilac stains with several small stains at low Rf and a large rounded stain at high Rf. On the other hand, the twelve copaiba oils purchased at local markets presented RI between 1.48176 and 1.50886, and the TLC plates, showed as general profile blue stains, with smaller superimposed stains at low Rf, bigger superimposed stains like elongated stain at high Rf and a colorless rounded stain at middle Rf. Among 12 purchased oils at local markets, a) three oil-resins presented similar RI and TLC profile to those observed for collected copaiba oils; b) six oils showed same RI and TLC profiles to those observed for soybean oil; c) three samples presented RI near to those showed by copaiba oil-resin, however the TLC profile was near to profile observed for a prepared mixture soybean oil: copaiba oil, two samples with 3:1 proportion and one sample with 1:3 proportion. Therefore, the RI determination and the TLC profiles could be considered rapid and efficient procedures for detection of vegetal oil in the copaiba oil-resins.

Os índices de refração (IR) de oito amostras de óleo resina de copaíba coletadas para este estudo na RDS Tupé variaram de 1,50284 a 1,50786. As placas de cromatografia de camada delgada (CCD) dos óleo-resinas, reveladas com o reagente anisaldeído-ácido sulfúrico, apresentaram um perfil cromatográfico característico, com manchas em lilás escura com várias manchas menores na parte do Rf baixo e uma grande mancha arredondada, no Rf alto. Por outro lado, as doze amostras de óleo de copaíba adquiridas no mercado local apresentaram IR entre 1,48176 a 1,50886, e, as placas de CCD apresentaram como perfil característico geral manchas de cor azul, com manchas superpostas menores no Rf baixo, manchas superpostas maiores com aparência alongada no Rf alto e uma mancha arredondada incolor no Rf intermediário. Dentre os doze óleos adquiridos do mercado, a) três óleo-resinas apresentaram IR e perfil CCD semelhantes aos de amostras de óleo de copaíbas coletadas; b) seis óleos apresentaram o mesmo IR e perfil em CCD do óleo de soja; e, c) três amostras apresentaram IR semelhantes aos da amostra do Tupé, porém com o perfil cromatográfico semelhante à uma mistura de óleo de soja: óleo de copaíba, sendo duas na proporção de 3:1 e uma na proporção de 1:3. Portanto, a determinação do IR e a análise do perfil em CCD podem ser considerados ensaios rápidos e eficientes para a detecção de óleos vegetais em óleo-resina de copaíba.

Avaliação in vitro da atividade antibacteriana de um cimento odontológico à base de óleo-resina de Copaifera multijuga Hayne / In vitro assessment of antibacterial activity of a dental cement constituted of a Copaifera multijuga Hayne oil-resin

Um dos materiais utilizados para a adequação do meio bucal no serviço público é o cimento produzido a partir de óxido de zinco e eugenol. Entretanto, o eugenol é uma substância citotóxica que pode desencadear alguns efeitos adversos. Por essa razão, procura-se substituir o eugenol por uma substância que apresente baixa toxicidade, mantendo ou mesmo melhorando as propriedades do cimento. O óleo-resina de copaíba é um produto natural, utilizado pelas populações amazônicas e reconhecido por suas propriedades medicinais. Baseando-se nas propriedades desse óleo-resina, na ação antimicrobiana comprovada do hidróxido de cálcio e na ação anti-séptica do óxido de zinco, propôs-se formular um cimento odontológico obtido da associação do ZnO, Ca(OH)2 e óleo-resina de Copaifera multijuga Hayne e avaliar sua atividade antibacteriana através do teste de diluição em meio líquido frente às cepas padrão de Streptococcus mutans (ATCC 25175) e S. sanguinis (ATCC 15300). Nesse ensaio, utilizaram-se os seguintes grupos experimentais: o cimento contendo ZnO, Ca(OH)2 e óleo-resina de copaíba (G1) e cada um dos constituintes isoladamente, ZnO (G2), Ca(OH)2 (G3) e óleo-resina de copaíba (G4). Todos os grupos analisados demonstraram atividade antibacteriana, o G4 apresentou os melhores resultados e o G1 mostrou-se um cimento promissor a ser utilizado em odontologia.

One of the materials utilized for suitability of the oral means in the public service is the cement produced from zinc oxide and eugenol. However, eugenol is a cytotoxic substance that can trigger some adverse effects. For this reason, it is desired to replace eugenol for another substance that presents low toxicity, keeping or even improving the cement properties. The copaiba oil-resin is a natural product, utilized by the Amazonian population and recognized for its medicinal properties. Based on the properties of this oil-resin, on the proven antimicrobial activity of calcium hydroxide and on the anti-septic action of zinc oxide, it was proposed to formulate a dental cement obtained through the association of ZnO, Ca(OH)2 and Copaifera multijuga Hayne oil-resin and assess its antibacterial activity through the test of dilution in aqueous medium against the standard of Streptococcus mutans (ATCC 25175) and S. sanguinis (ATCC 15300). In this assay, the following experimental groups were utilized: the cement containing ZnO, Ca(OH)2 and copaiba oil-resin (G1) and each one of the constituents individually, ZnO (G2), Ca(OH)2 (G3) and copaiba oil-resin (G4). All the analyzed groups showed antibacterial activity, G4 showed the best results and G1 showed itself to be a promising cement for application in dentristy.