Efecto del nitrato de plata (AgNO3) en el crecimiento in vitro de brotes de Anthurium magnificum Linden

Anthurium magnificum Linden es una importante planta ornamental perteneciente a la familia Araceae. Esta especie es muy demandada como planta de maceta para la decoración de interiores y jardines, así como follaje de corte. Los métodos de propagación tradicionales en esta especie presentan ciertas desventajas por lo que no permiten satisfacer la creciente demanda. Estas limitantes convierten al cultivo de tejidos vegetales en el método más eficiente para propagar plantas de Anthurium magnificum a un ritmo más rápido que los métodos de propagación convencionales. En el cultivo de tejidos vegetales el nitrato de plata adicionado a los medios de cultivo actúa como un inhibidor de la acción del etileno y desempeña un papel crucial en la regulación de procesos fisiológicos esenciales de las plantas. El presente trabajo tuvo como objetivo determinar el efecto de diferentes concentraciones de nitrato de plata en el crecimiento in vitro de brotes de Anthurium magnificum. Para ello, se cultivaron brotes in vitro de Anthurium magnificum en medios de cultivo enriquecidos con diferentes concentraciones de nitrato de plata. Los resultados mostraron que los mayores valores en las variables altura de la planta, número de raíces y longitud de las raíces se obtuvieron en un medio de cultivo con 1,0 mg L-1 de nitrato de plata. En la variable área foliar de la planta los mayores valores se presentaron en los medios de cultivo que contenían nitrato de plata independientemente de la concentración empleada.

Anthurium magnificum Linden is an important ornamental plant belonging to the Araceae family. This species is in great demand as a pot plant for interior and garden decoration, as well as cut foliage. The traditional propagation methods in this species have certain disadvantages, which is why they cannot satisfy the growing demand. These limitations make plant tissue culture the most efficient method to propagate Anthurium magnificum plants at a faster rate than conventional propagation methods. In the culture of plant tissues, silver nitrate added to the culture media acts as an inhibitor of the action of ethylene and plays a crucial role in the regulation of essential physiological processes in plants. The objective of this work was to determine the effect of different concentrations of silver nitrate on the in vitro growth of Anthurium magnificum shoots. For this, in vitro shoots of Anthurium magnificum were cultivated in culture media enriched with different concentrations of silver nitrate. The results showed that the highest values in the variables plant height, number of roots and length of the roots were obtained in a culture medium with 1.0 mg L-1 of silver nitrate. In the variable leaf area of the plant, the highest values were presented in the culture media that contained silver nitrate, regardless of the concentration used.

Micropropagación de Prosopis pallida (Humb &Bonpl. Ex Willd.) Kunth a partir de yemas apicales / Micropropagation of Prosopis pallida (Humb &Bonpl. Ex Willd.) Kunth from shoot tips

RESUMEN Prosopis pallida, conocido como algarrobo, es una especie emblemática de los bosques secos del norte del Perú. Es de gran importancia económica por su uso en la producción de leña y carbón, así como en la producción de algarrobina proveniente de sus frutos. Actualmente las actividades humanas han deforestado grandes poblaciones de algarrobo en el bosque seco, por lo que es muy importante una propagación masiva para planes de reforestación a gran escala en esos ecosistemas, con la finalidad de conservar la especie y también las características genéticas de individuos élite. El objetivo de la investigación fue establecer un protocolo para la propagación in vitro de algarrobo. Previo a la siembra in vitro, se evaluaron tres tratamientos pregerminativos para poder acelerar la germinación de las semillas con la finalidad de obtener mayor material de propagación. Luego se evaluó el efecto del medio de plantas leñosas con la adición de cuatro concentraciones (0; 0,5; 1,0 y 1,5 mg/L) de citoquininas (BAP y ZEA) sobre la propagación in vitro de Prosopis pallida, habiendo realizado tres ensayos debido a la poca efectividad de brotación de las yemas apicales, resultando mejor la ausencia de citoquininas en yemas apicales con sus dos cotiledones, usando tapas de algodón en los tubos de ensayo. En esta etapa se evaluó el número de nudos, altura de plántula y número de brotes. Para el enraizamiento se ensayó con tres concentraciones (0; 0,5 y 1,0 mg/L) de auxinas (NAA, IBA y IAA), y se evaluó el porcentaje de enraizamiento, longitud de la raíz y número de raíces; obteniéndose mejores resultados con 0,5 mg/L IBA. En la fase de aclimatación se evaluó el porcentaje de aclimatación en dos tipos de sustratos, obteniéndose mejores resultados con sustrato comercial de turba y vermiculita.

ABSTRACT Prosopis pallida, known as algarrobo, is an emblematic species of the dry forests of northern Peru. It is of great economic importance for its use in the production of firewood and coal, as well as in the production of carob from its fruits. Currently human activities have deforested large populations of algarrobo in the dry forest, so it is very important a massive propagation for large-scale reforestation plans in these ecosystems, in order to conserve the species and also the genetic characteristics of elite individuals. The objective of the research was to establish a protocol for the in vitro propagation of algarrobo. Before in vitro propagation, It was evaluated the effect of three seeds treatments to accelerate seeds germination in order to get more propagation material. Then, the effect of woody plants medium with the addition four concentrations (0, 0.5, 1.0 and 1.5 mg /L) of cytokinins (BAP and ZEA) on the in vitro propagation of Prosopis was evaluated and it has performed three trials for the ineffective budding of apical buds, resulting in a better absence of cytokinins in apical buds with their two cotyledons, and using cotton lids in the test tubes. In this stage the number of nodes, seedling height and number of shoots was evaluated. For rooting, it was tested with three concentrations (0, 0.5 and 1.0 mg /L) of auxins (NAA, IBA and IAA), and the percentage of rooting, root length and amount of roots was evaluated, obtaining better results with 0.5 mg / L IBA. In the acclimation phase, the acclimation percentage was evaluated using two substrates, and the best results were commercial substrate of peat and vermiculite.

Inducción de organogénesis in vitro con 6-bencilaminopurina en Cattleya trianae Linden & Rchb.f / Induction of organogenesis in vitro with 6-benzylaminopurine in Cattleya trianae Linden & Rchb.f

RESUMEN La orquídea Cattleya trianae Linden & Rchb.f. es reconocida como flor nacional de Colombia y se encuentra en peligro crítico, al presentar una reducción estimada mayor al 80% en los últimos 100 años, debido a la disminución en la calidad del hábitat y niveles altos de explotación o recolección. La familia Orchidaceae es una de las que mayor número de especies posee en el reino Plantae, con aproximadamente 900 géneros, de los cuales, el 38% es endémico de Colombia, concentrado en la región Andina, con 87,2%. Esta investigación buscó profundizar en el tema de la propagación como mecanismo de conservación, para lo cual, se determinó el efecto de la 6-Bencilaminopurina (6-BAP), sobre el desarrollo in vitro, en Fusagasugá (Cundinamarca), en un diseño de bloques completamente al azar, con 3 repeticiones. Cuerpos protocórmicos provenientes de semillas recolectadas en Pacho (Cundinamarca) fueron sembrados en medio básico Murashige & Skoog, enriquecido con 4 concentraciones de 6-BAP. Los resultados mostraron respuestas diferenciales a la adición de la citoquinina, ya que, con la concentración más alta, se obtuvo el mayor porcentaje de callos, con la de 0,05mg.L-1, el mayor porcentaje de brotes y sin la aplicación del regulador de crecimiento, el mayor porcentaje de raíz.

ABSTRACT The orchid Cattleya trianae Linden & Rchb.f. is recognized as the national flower of Colombia, the species is in a critical danger, presenting an estimated reduction of more than 80% in the last 100 years due to the decrease in habitat quality and high levels of exploitation or harvesting. The Orchidaceae family is one of the largest number of species in the Plant Kingdom, with approximately 900 genera, of which 38% are endemic in Colombia, concentrated in the Andean region with 87.2%. This research sought to deepen in the topic of the propagation as mechanism of protection for their conservation, for which the effect of cytokinin 6-benzylaminopurine (6-BAP) on development was determined in vitro in Fusagasugá (Cundinamarca), in a completely randomized block design with 3 replicates. The protocorm-like bodies from seeds collected in Pacho (Cundinamarca) were sown in a basic medium Murashige and Skoog enriched with 4 concentrations of 6-BAP. The results showed differential responses to the addition of cytokinin, as the highest concentration was obtained the highest percentage of callus, with the 0.05mg. L-1, the highest percentage of shoots and without the application of the growth regulator, the highest root percentage.

Multiplicación in vitro y embriogénesis somática de Perezia pinnatifida (Asteraceae) planta medicinal andina

Se presentan los procedimientos para la propagación in vitro de Perezia pinnatifida (Humb. & Bonpl.) Wedd., conocida como "valeriana". Se utilizaron las metodologías de multiplicación de brotes y embriogénesis somática indirecta. El medio de cultivo basal para todas las etapas fue Murashige y Skoog a mitad de sales, suplementado con sacarosa 2.0%, phytagel 0.3% y pH 5.67; y fue usado con o sin fitohormonas en los diferentes tratamientos. Los suplementos hormonales fueron: para la multiplicación de brotes BAP 1.0 mg.L-1 + ANA 0.01 mg.L-1 ó BAP 1.0 mg.L-1; para la inducción de callos embriogénicos ANA ó 2,4-D (1.0 mg.L-1 y 2.0 mg.L-1); y para la germinación de embriones BAP (0.5 y 1.0 mg.L-1) o BAP 0.5 mg.L-1 + ANA 0.05 mg.L-1. El mayor número de brotes se obtuvo en el medio suplementado con BAP 1.0 mg.L-1. En la embriogénesis somática, ANA a 1.0 mg.L-1 indujo mayor área de callos embriogénicos, y BAP a 0.5 mg.L-1 permitió mayor germinación de los embriones somáticos

This work inform on in vitro propagation of the "valeriana" Perezia pinnatifida (Humb. & Bonpl.) Wedd. Shoot multiplication and indirect somatic embryogenesis methodologies were performed. The basal culture medium for all stages was Murashige and Skoog, middle of salts supplemented with 2.0% sucrose, 0.3% phytagel and pH 5.67; the treatments were prepared with or without phytohormones. The hormonal supplements for the shoot multiplication were: BAP 1.0 mg.L-1 + ANA 0.01 mg.L-1, and BAP 1.0 mg.L-1; for embryogenic callus induction were: ANA or 2,4-D (1.0 mg.L-1 and 2.0 mg.L-1); and for the embryo germination were: BAP (0.5 and 1.0 mg.L-1) or BAP 0.5 mg.L-1 + ANA 0.05 mg.L-1. BAP 1.0 mg.L-1 produced the higher number buds. For somatic embryogenesis, ANA 1.0 mg.L-1 induced a greater area of embryogenic callus, and BAP 0.5 mg.L-1 allowed major germination of the somatic embryos

Aloinjertos análogos de mucosa bucal en ratas no consanguíneas / Oral mucosa analog allografts in non-consanguineous rats

Resumen Introducción: A pesar de que existen opciones terapéuticas para el tratamiento de defectos de la mucosa bucal, persiste la necesidad de encontrar sustitutos funcionales, anatómicos y estéticamente similares al tejido que se va a reemplazar, así como soluciones que reduzcan la morbilidad de los injertos autólogos. Objetivo: Determinar la compatibilidad clínica e histológica de aloinjertos equivalentes de mucosa bucal elaborados mediante ingeniería tisular en ratas no consanguíneas. Materiales y métodos: Se utilizó una muestra de mucosa bucal de ratas Sprague Dawley para la obtención de un cultivo de fibroblastos y otro de queratinocitos y fibroblastos. En ambos casos, se usó una membrana de colágeno comercial como soporte. Después de diez semanas de cultivo, las membranas resultantes se injertaron en cuatro ratas Wistar. La primera fase del estudio consistió en la elaboración de los tejidos análogos de mucosa bucal mediante ingeniería tisular, los cuales se implantaron en ratas Wistar inmunocompetentes; posteriormente, se evaluaron las características clínicas e histológicas del aloinjerto. Resultados: La evaluación in vivo de los tejidos análogos demostró que se habían integrado correctamente en los huéspedes inmunocompetentes, y se había logrado el aumento del biotipo periodontal y la creación de una zona con mayor queratinización. Desde el punto de vista histológico, el tejido adquirió características similares a las de la muestra de mucosa bucal de control, sin ningún tipo de reacción inflamatoria ni signos clínicos o histológicos de rechazo. Conclusión: Hubo compatibilidad clínica e histológica de los aloinjertos equivalentes de mucosa bucal obtenidos mediante ingeniería tisular.

Abstract Introduction: Although there are therapeutic options for the treatment of oral mucosa defects, the need for functional, anatomical and aesthetically similar substitutes persists, as well as for solutions to reduce autologous grafts morbidity. Objective: To determine clinical and histological compatibility of equivalent oral mucosa allografts generated through tissue engineering in non-consanguineous rats. Materials and methods: We used a sample of oral mucosa from Sprague Dawley rats to obtain a fibroblast culture and a keratinocytes and fibroblasts co-culture. In both cases, we used a commercial collagen membrane as "scaffold". After ten weeks of culture, we grafted the resulting membranes into four Wistar rats. The first phase of the study was the development of the oral mucosa equivalents generated by tissue engineering. Then, we implanted them in immunocompetent Wistar rats, and finally we evaluated the clinical and histological features of the allografts. Results: In vivo evaluation of mucosal substitutes showed a correct integration of artificial oral mucosa in immunocompetent hosts, with an increase in periodontal biotype and the creation of a zone with increased keratinization. Histologically, the tissue was similar to the control oral mucosa sample with no inflammatory reaction nor clinical or histological rejection signs. Conclusion: The equivalent oral mucosa allografts generated by tissue engineering showed clinical and histological compatibility.

Infección de callo embriogénico friable de yuca con Xanthomonas axonopodis pv. manihotis (Xam) / Cassava friable embryogenic calli infection with Xanthomonas axonopodis pv. manihotis (Xam)

Las nuevas tecnologías para la edición de genomas, como los TALEN y el sistema CRISPR/Cas9, representan una gran oportunidad para mejorar características deseables en diferentes organismos. Los TALEN son el resultado del acoplamiento de nucleasas a los TALE (Transcription Activator-Like Effectors), los cuales son efectores naturales de gran importancia en la patogénesis de las especies de Xanthomonas. Xanthomonas axonopodis pv. manihotis (Xam) es el agente causal del añublo bacteriano de la yuca, quien durante el proceso patogénico es capaz de translocar sus efectores a la célula vegetal mediante el sistema de secreción tipo tres (SSTT). Actualmente no hay protocolos estándar para la edición de genomas en yuca. En este estudio se exploró la posibilidad de translocar efectores sobre callo embriogénico friable (CEF) a través de la inoculación con Xam, con el fin de determinar el potencial de este patógeno como sistema de entrega de TALEN. El CEF de dos variedades de yuca susceptibles (COL2215 y cv. 60444) se cocultivaron con la cepa Xam668 a diferentes tiempos. Posteriormente, se evaluó la expresión de marcadores correspondientes a los genes blanco conocidos para los TALE presentes en esta cepa bacteriana. Aunque no se logró demostrar la translocación de los mismos en el tejido embriogénico, sí se lograron establecer condiciones adecuadas de cocultivo con Xam y el efecto que la infección bacteriana tiene sobre la regeneración de embriones a partir de este tejido.

New technologies for genome edition, such as TALENs and CRISPR/Cas9 system, are a great opportunity to improve desirable features in different organisms. TALENs are the result from coupling nucleases and TALEs (Transcription Activator-Like Effectors), which are natural effectors with an important role in pathogenicity for the Xanthomonas species. Xanthomonas axonopodis pv. manihotis (Xam) is the cassava bacterial blight causal agent, and this pathogen is able to translocate its effectors to the plant cell during pathogenesis by using the type-three secretion system (TTSS). Currently, there are no standard protocols for genome edition in cassava. In this study, we explored the possibility to translocate effectors to friable embryogenic calli (FEC) through Xam inoculation, in order to establish the potential of this pathogen as a TALEN delivery system. Friable embryogenic calli derived from two different susceptible varieties (COL2215 and cv. 60444) were co-cultured with the strain Xam668 using different culture times. Subsequently, we evaluated the expression of makers corresponding to reported target genes for TALEs present in this bacterial strain. Although we were not able to demonstrate effector translocation, we established the conditions for co-culturing cassava calli and Xam and determined the effects derived from bacterial infection on embryo regeneration from FECs.

Triterpenes and Beta-agarofurane sesquiterpenes from tissue culture ofMaytenus boaria / Triterpenos y Beta-agarofuranos sesquiterpenos desde cultivo de tejidos de Maytenus boaria

Leaf explants of Maytenus boaria were induced towards callus tissue culture with different mixture of cytokinins and auxins. MeOH extract of callus was partitioned with AcOEt and water, and through repeated chromatography procedures were isolated and identified, four triterpenes and three beta-agarofuran sesquiterpenes.

Explantes de hojas de Maytenus boaria fueron inducidos a formar callos mediante diferentes mezclas de citoquininas y auxinas. Un extracto metanólico de los callos fue fraccionado con AcOEt y agua, y mediante repetidas cromatografías fueron aislados e identificados siete compuestos, cuatro triterpenos y 3 sesquiterpenos del tipo agarofurano.

Estudio preliminar del tratamiento de úlceras crónicas con equivalentes cutáneos obtenidos por ingeniería de tejidos / Preliminary Study of the Treatment of Chronic Skin Ulcers with Tissue-engineered Skin Equivalents

Las úlceras de las extremidades inferiores son afecciones de incidencia y prevalencia elevada, cuya cronicidad y persistencia en hacer recidivas son dos de las características evolutivas más relevantes. A pesar de un tratamiento etiológico correcto, a lo cual se suma una gran variedad de apósitos disponibles, el porcentaje de curación y la velocidad de cicatrización siguen siendo bajos. Por tanto se realizó un estudio con el objetivo de obtener un sustituto de piel para su aplicación en la clínica. Se aislaron y cultivaron queratinocitos, que fueron sembrados a una alta densidad, en un sustrato optimizado de fibrina con fibroblastos. De esta forma se desarrolló un nuevo equivalente cutáneo más práctico y de bajo costo, cuyo transplante es directo y de fácil aplicación. Antes de comenzar los estudios clínicos para evaluar sus ventajas y su alcance, se hizo una prueba preliminar con el fin de ver si los cambios efectuados en la técnica estándar no impedían su viabilidad y su acción. A tal fin fueron seleccionaron seis pacientes con ulceras crónicas, sin curación mediante todo tratamiento, a quienes se les aplicaron los nuevos equivalentes. Los pacientes tratados mostraron que los equivalentes eran viables, efectivos, de fácil manipulación y de rápida acción sobre los tejidos afectados. Todos los pacientes que completaron el procedimiento se recuperaron, fue excelente ejemplo un paciente con una lesión crónica de seis meses de evolución que había sido refractaria a los múltiples tratamientos convencionales empleados.

Ulcers of the lower extremities have high prevalence and incidence. Their chronicity and frequent recurrences are two of their most important characteristics. Despite proper etiologic treatment and the great variety of dressings available, the healing rate and recovery speed remain low. Therefore, we conducted a study to obtain skin substitutes for clinical application by isolating and cultivating keratinocytes, which were seeded on a fibroblast-containing fibrin gel at high density. Hence, a new practical and inexpensive skin equivalent of straightforward and easy-to-perform transplantation was developed. Before starting the clinical trials to evaluate its advantages and applicability, we conducted a preliminary test to determine if the changes to the standard technique affected its feasibility and action. For this purpose, we implanted the new equivalents into six patients with chronic ulcers unresponsive to treatment. Outcomes in these patients showed that skin equivalents were feasible, effective, easy to handle and had rapid action on target tissues. All patients who completed the procedure recovered. An excellent example was a patient with a chronic lesion refractory to multiple conventional treatments that had been present for six months.

Identificación, establecimiento in vitro y análisis fitoquímico preliminar de especies silvestres de ñame (Dioscorea spp.) empleadas con fines medicinales / Identification, in vitro establishment and preliminary phytochemical analysis of wild yam (Dioscorea spp.) used for medicinal purposes

Tubérculos del género Dioscorea comercializados con fines medicinales, fueron recolectados con el propósito de lograr su establecimiento a condiciones in vitro. Previamente se lograron identificar taxonómicamente las especies y por medio de análisis fitoquímicos demostrar su potencial farmacéutico. El material recolectado fue identificado como Dioscorea coriacea, D. lehmannii, D. meridensis, D. polygonoides y una especie comestible D. trifida. Tubérculos recolectados de centros de acopio y traídos de campo fueron lavados, desinfectados, asperjados con Ácido Giberélico (AG3) y sembrados en sustrato BM-2®, en invernadero a 18°C día y 10°C noche. Los tubérculos completos o por secciones fueron almacenados en bolsas herméticas a temperatura ambiente. Posteriormente se desinfectó material vegetal de las especies D. coriacea, D. lehmannii, D. meridensis y D polygonoides, seleccionando explantes de brotes sanos (D. coriacea / laboratorio) para su establecimiento. Se evaluaron tres medios de cultivo para establecimiento, el que presentó los mejores resultados fue Medio Murashige & Skoog (1962) suplementado con BAP 1 mL/L, AG3 1 mL/L y Putrescina 2 mL/L. Para la extracción y análisis de metabolitos secundarios se utilizaron tubérculos de D. coriacea, D. lehmannii y D. polygonoides, empleando como solvente de extracción metanol. Se encontró mayor concentración de extracto vegetal en D. coriacea (54%), y mediante cromatografía en capa delgada (CCD), se confirmó la presencia de saponinas, que resultó mayor en comparación con D. polygonoides especie reconocida por su alto contenido de saponinas. Estos resultados permitirán realizar análisis más avanzados de los compuestos presentes y plantear su propagación masiva en condiciones in vitro.

Wild tubers of the genus Dioscorea sold for medicinal use were collected for the purpose of achieving its establishment under in vitro conditions. First we taxonomically identified the species and through phytochemical analysis demonstrated pharmaceutical potential. The material collected was identified as Dioscorea coriacea, D. lehmannii, D. meridensis, D. polygonoides and the edible species D. trifida. Tubers collected from wholesale distributors and from the field were washed, disinfected, sprayed with Gibberellic Acid (GA3) and planted in substrate BM-2®, in a greenhouse at 18 ° C during the day and 10 ° C overnight. Whole tubers or sections thereof were stored in sealed bags at room temperature. Subsequently plant material of the species D. coriacea, D. lehmannii, D. meridensis and D. polygonoides was disinfected and healthy buds (D. coriacea / laboratory) were selected for in vitro establishment. Three different culture media were evaluated for establishment; that which presented the best results was the Murashige & Skoog (1962) medium, supplemented with BAP 1 mL / L, GA3 1 mL / L and Putrescin 2 mL / L. For the collection and analysis of secondary metabolites, tubers of D. coriacea, D. lehmannii and D. polygonoides were used, using methanol as the extraction solvent. The highest concentration of plant extract, 54%, was found in D. coriacea, a higher value than that of D. polygonoides, which had been reported previously; the presence of saponins was confirmed by thin layer chromatography (TLC). These results will enable more advanced analysis of the present compounds and enhance their mass propagation under in vitro conditions.

Medios de cultivo líquidos: un avance para la micropropagación comercial de zábila (Aloe barbadensis Mill.) / Liquid medium culture: an approach for the commercial micropropagation of aloe (Aloe barbadensis Mill.)

La micropropagación es una alternativa para la producción comercial de plantas de zábila (Aloe barbadensis Mill.) limitada por los altos costos de producción. Con el objetivo de prescindir de los agentes gelificantes, reduciendo costos, se comparó el medio de cultivo líquido con el medio de cultivo gelificado en las diferentes etapas de micropropagación de la zábila. En la etapa de establecimiento se observó mayor porcentaje de explantes contaminados en el medio de cultivo líquido estático (25.55 %) que en el medio gelificado (11.11 %); y aunque el resto de los explantes se establecieron independientemente de la condición del medio de cultivo, en el medio líquido alcanzaron mayor altura (3.81 cm) que en el medio gelificado (3.03 cm). En la etapa de multiplicación, la altura de los explantes (entre 4.43 y 6.01 cm) fue superior en los recipientes de inmersión temporal automatizado (RITA®) en comparación con el medio gelificado (entre 3.24 y 3.42 cm); sin diferencias significativas entre el número de brotes/explante. Todos los brotes enraizaron a los 30 días independientemente del medio de cultivo empleado (líquido estático y gelificado), sin observar variaciones en la altura del brote y, número y longitud de las raíces. El empleo de los medios de cultivo líquidos y la implementación de los sistemas de inmersión temporal tipo RITA® permiten reducir los costos de producción al prescindir de los agentes gelificantes, lo que representa un avance para la micropropagación comercial de zábila.

Micropropagation is considered a successful alternative for aloe (Aloe barbadensis Mill.) plant production. However, it has limited use due to the high production cost. Liquid media were compared to agar-gelled medium during all micropropagation stages of aloe to reduce the cost for gelling agent used. In the establishment stage, there was a higher percentage of contaminated explants in static liquid medium (25.55%) than those cultured in agar-gelled medium (11.11%), although all the explants were established independently of the culture medium used, higher height (3.81 cm) was observed in liquid medium than those growing in agar-gelled medium (3.03 cm). In the multiplication stage, explant height was higher in the recipients used for automated temporary immersion system (RITA®) (4.43 - 6.01 cm) than those cultured in agar-gelled medium (3.24 - 3.42 cm), there was no significant difference for number of shoots/explant. All shoots had roots at 30 days independently of used culture media (static liquid or agar-gelled media). Shoot height, number and root length had similar values in both culture media. The implementation of liquid media and automated temporary Immersion system RITA® may allow to reduce production costs of gelling agent used, it represents an approach for the commercial micropropagation of aloe.

Efecto del AIB y el TDZ en el enraizamiento in vitro de plantas de Bambusa vulgaris var vulgaris Schrad. ex Wendl / Effect of IBA and TDZ on in vitro rooting of plants Bambusa vulgaris var. vulgaris Schrad. ex Wendl

Bambusa vulgaris var. vulgaris Schard. ex Wendl. sobresale dentro del género por sus propiedades fí­sico-mecánicas y por el tamaño de sus culmos. Desarrollar la propagación ví­a organogénesis sería una alternativa para propagar esta especie. Sin embargo, los bajos porcentajes de enraizamiento y de superviviencia ex vitro han sido elementos que han afectado la propagación de diferentes especies de bambúes. Con el objetivo de determinar el efecto de diferentes concentraciones de AIB y TDZ en la emisión de raí­ces in vitro , se evalué el número de plantas con raíces, la altura de las plantas (cm) desde la base hasta el punto de inserción de la primera hoja y el largo de la raí­z (cm). Los resultados demostraron que tanto el AIB como el TDZ influyeron en el enraizamiento in vitro de Bambusa vulgaris var vulgaris . Al adicionar al medio de cultivo TDZ (0,6 mg.L -1 ) se obtuvieron los mayores porcentajes de formación de raí­ces (88,2%) y estas fueron emitidas mostrando un geotropismo positivo.

Bambusa vulgaris var. vulgaris Schard. ex Wendl. stands out into the genus by its physic - mechanical properties and the culms size. Propagation via organogenesis would be an alternative to propagate this species. However, the low percentages of rooting and ex vitro survival have been elements that have affected the propagation of different bamboo species. The number of plants with roots, plant height (cm) (from the base to the insertion point of the first leaf) and root length (cm) were evaluated in order to determine the effect of different concentrations of IBA and TDZ in the emission of roots in vitro . Results demonstrated that both, AIB and TDZ, influenced the in vitro rooting of Bambusa vulgaris var vulgaris . Greater rooting percentages (88.2%) were obtained by adding TDZ to the culture medium (0.6 mg.L -1 ). Besides, they showed a positive geotropism.

A method for seedling recovery in Jatropha curcas after cryogenic exposure of the seeds

Actually, the germplasm of Jatropha spp. is conserved as whole plants in field collections. Under this storage method, the genetic resources are exposed to disease, pest and natural hazards such as human error, drought and weather damage. Besides, field genebanks are costly to maintain and with important requirements of trained personnel. Thus, the development of efficient techniques to ensure its safe conservation and regeneration is therefore of paramount importance. In this work we describe a method for Jatropha curcas seeds cryoexposure and seedling recovery after thawed. In a first experiment, an efficient protocol for in vitro plant recovery was carried out using zygotic embryo or seeds with or without coat. In a second experiment, desiccated seeds with or without coat were exposed to liquid nitrogen and evaluated after cryoexposure. Germination percentages were variable among treatments, and seeds demonstrated tolerance to liquid nitrogen exposure under certain conditions. Seeds of J. curcas presented up to 99.6% germination after seed coat removal. Seeds with coat cultured in vitro did not germinate, and were 60% contaminated. The germination of the zygotic embryos was significantly higher in the ½ MS medium (93.1%) than in WPM medium (76.2%), but from zygotic embryo, abnormal seedlings reached up to 99%. Seeds with coat exposed to liquid nitrogen showed 60% germination in culture after coat removal with good plant growth, and seeds cryopreserved without coat presented 82% germination, but seedlings showed a reduced vigor and a significant increase in abnormal plants. Seeds cultured in vitro with coat did not germinate, independently of cryoexposure or not. This study reports the first successful in vitro seedling recovery methodology for Jatropha curcas seeds, after a cryopreservation treatment, and is recommended as an efficient procedure for in vitro plant recovery, when seeds are conserved in germplasm banks by low or cryotemperatures.

Actualmente, el germoplasma de las especies de Jatropha ssp. se conserva como plantas enteras en las colecciones de campo. Bajo este método de almacenamiento, los recursos genéticos están expuestos a enfermedades, plagas y desastres naturales tales como el error humano, la sequía y las inclemencias del tiempo. Además, los bancos de germoplasma de campo son costosos de mantener y requieren bastante personal capacitado. Por lo tanto, el desarrollo de técnicas eficientes para asegurar su conservación segura así como su regeneración, es de suma importancia. En este trabajo se describe un método de recuperación para semillas y plántulas crioexpuestas de Jatropha curcas después de descongeladas. En un primer experimento, se llevó a cabo un protocolo eficiente para la recuperación de plantas in vitro mediante el uso de embriones cigóticos o semillas con o sin testa. En un segundo experimento, las semillas disecadas, con o sin testa fueron expuestas a nitrógeno líquido y se evaluaron después de la crioexposición. Los porcentajes de germinación fueron variables entre los tratamientos, y las semillas demostraron tolerancia a la exposición del nitrógeno líquido bajo ciertas condiciones. Las semillas de J. curcas presentaron hasta un 99.6% de germinación después de la eliminación de la testa. Las semillas con la testa cultivadas in vitro no germinaron, y el 60% se contaminaron. La germinación de los embriones cigóticos fue significativamente alta en el medio ½ MS (93.1%) en comparación con el medio WPM (76.2%), pero desde los embriones zigóticos, las plántulas anormales alcanzaron más del 99%. Semillas con la testa inmersa en nitrógeno líquido mostraron un 60% de germinacion en cultivos despúes de la remoción de la testa con un buen crecimiento de la planta, y las semillas criopreservadas sin testa presentaron un 82% de germinación, pero las plántulas mostraron un reducido vigor y un incremento significativo de plantas anormales. Semillas con testa cultivadas in vitro no germinaron, independientemente de la criopreservación o no. Este estudio reporta el primer éxito in vitro de una metodología de recuperación de plántulas para semillas de Jatropha curcas, después de un tratamiento de criopreservación, que se recomienda como un procedimiento eficaz para la recuperación de plantas in vitro, cuando las semillas se conservan en bancos de germoplasma a bajas o crio-temperaturas.

Regeneración vía embriogénesis somática de una variedad colombiana élite de Theobroma cacao L / Regeneration through somatic embryogenesis of an elite colombian Theobroma cacao L variety

El objetivo de esta investigación fue evaluar dos protocolos de propagación vía embriogénesis somática a partir de explantes florales en dos clones élite BIOB e ICS95 de Theobroma cacao L. Se obtuvo un 50 y 32% de callo embriogénico en ICS95 y BIOB respectivamente con el protocolo de Fontanel et al. (2002), modificado después de un periodo de cultivo de tres meses. Los embriones pasaron por fases que se correspondieron con medios de cultivo diferenciales: Inducción, Formación, Maduración y Mantenimiento. Para la embriogénesis somática secundaria se obtuvo un 23% de embriones a partir de embriones somáticos primarios en un medio, conteniendo 1mg/L de 2,4,5 T (2,4,5 Triclorofenoxiacético). Se logró, además, desarrollar enraizamiento adventicio aplicando pulsos de IBA (Ácido Indol Butírico) a 0.5mg/L y 0.5g/L durante un minuto. Las plantas enraizadas se llevaron a una mezcla de tierra: arena (1:1) para su adaptación ex vitro, obteniéndose un 66% de plantas aclimatadas. Los estudios histológicos mostraron diferentes características típicas del desarrollo embriogénico. Este es el primer reporte en el que se logra de manera exitosa la conversión hasta plántula (68%) y la adaptación ex vitro de una variedad colombiana de cacao vía embriogénesis somática primaria y secundaria.

In this research we evaluate two protocols of propagation via somatic embryogenesis from floral explants using two elite clones BIOB and ICS95 of Theobroma cacao L. We obtained 50 and 32% of embryogenic callus on ICS95 and BIOB respectively with Fontanel et al., (2002) protocol modified after three months of culture. The embryos went through four phases; Induction, Formation, Maduration and Mantenimiento which corresponded each one with different media culture. For secondary somatic embryogenesis we obtained 23% of embryos from primary somatic embryos in a medium with 1mg/L of 2,4,5 T (2,4,5 Triclorofenoxiacetic). Also we obtained plants that developed new roots applying pulses with IBA (Indol Butiric Acid) 0.5mg/L and 0.5g/L for a minute. The developed plants were moved to a mix of potting soil and sand (1:1) for their ex vitro adaptation, getting 66% of acclimatized plants. The histological analysis showed the typical characteristics of the embryogenic development. This is the first report where it is achieved the successful conversion to plantlets (68%) and ex vitro adaptation of a colombian cocoa variety via primary and secondary embryogenesis.

Actividad biológica de Plumbago scandens L. sobre cepas multidrogoresistente de Mycobacterium tuberculosis / Biological activity of Plumbago scandens L. against multidrug-resistance strains of Mycobacterium tuberculosis

Tuberculosis control is a high priority for the Ministry of Health from Peru. In the present work the inhibitory effect of both metanolic (MeOH) and ethyl acetate (AcOEt) crude extracts and the minimum inhibitory concentration (MIC) of both wild plants and in vitro plantlets of Plumbago scandens L. -Plumbaginaceae- against multidrug-resistance (MDR) strains of Mycobacterium tuberculosis were determined. The plant material was constituted by roots and seeds, collected in the Motupe (Lambayeque) area. The in vitro plantlets were obtained from seedlings and micropropagated by shoot tips and nodal segments in Murashige and Skoog (MS) culture medium. The microbiological material consisting of one control strain and two strains of Mycobacterium tuberculosis resistant to isoniazid (INH) and rifampicin (RIF) was cultivated using the Lowenstein–Jensen culture medium. The MIC values varied from 0,65 to 1,3 mg/mL. Bacterial strains showed more sensitivite to the AcOEt crude extract. The GC analysis of the plant material showed the presence of the naphtoquinone plumbagin and other aromatic compounds. In conclusion, the MeOH y AcOEt crude extracts from roots of the wild plants and MeOH crude extract of in vitro plantlets of P. scandens showed a strong inhibitory activity against MDR strains of M. tuberculosis.

El control de la tuberculosis es un objetivo de alta prioridad para el Ministerio de Salud del Perú. En el presente trabajo se determinó el efecto inhibitorio de los extractos crudos metanólico (MeOH) y de acetato de etilo (AcOEt), expresados como concentración mínima inhibitoria (CMI) de plantas silvestres y plántulas in vitro de Plumbago scandens L. (Plumbaginaceae) sobre cepas multidrogoresistente (MDR) de Mycobacterium tuberculosis. El material vegetal estuvo constituido por raíces de plantas silvestres, en tanto que las plántulas in vitro fueron obtenidas de semillas y micropropagadas en medio de cultivo Murashige y Skoog (MS). El material microbiológico, constituido por una cepa control y dos cepas resistentes a isoniacida (INH) y rifampicina (RIF), fue cultivado en medio de cultivo Lowenstein-Jensen. Los valores CMI variaron entre 0,65 y 1,3 mg/mL, mostrándose más sensibles las cepas bacterianas frente al extracto crudo de AcOEt de plantas silvestres. El análisis cromatografía de gases (GC) determinó la presencia de la naftoquinona plumbagina y otros compuestos aromáticos. En conclusión, los extractos crudos de MeOH y AcOEt de raíces de plantas silvestres y extracto crudo de MeOH de plántulas in vitro de P. scandens ejercieron una fuerte acción inhibitoria sobre cepas MDR de M. tuberculosis.

PRODUCCIÓN in vitro DE ANTOCIANINAS - REVISIÓN / In Vitro Production of Anthocyanins - A Literature Review

La producción de metabolitos secundarios en cultivos celulares de plantas puede ser de interés para obtener compuestos difíciles de sintetizar o aislar de otras fuentes, lo cual generalmente se relaciona con un alto valor económico, aunque también puede ser útil para ayudar a dilucidar las vías metabólicas involucradas en la síntesis de estos compuestos. En este trabajo se presenta una descripción general de las antocianinas, un grupo de pigmentos de gran importancia para la industria, complementada con la referencia de los trabajos científicos recientes que se han publicado sobre la producción in vitro de las mismas. Con relación a esto último, se hace una descripción del efecto de cambios en las condiciones de cultivo, de la adición de precursores, del uso de reguladores de crecimiento, así como de la utilización de inductores y factores de estrés sobre la producción de estos compuestos. Finalmente, se hace mención al uso de raíces en cabellera, en inglés hairy roots, obtenidas mediante el uso de Agrobacterium rhizogenes, para la producción de estos compuestos.

The production of secondary metabolites in plant cell cultures may be of interest for obtaining compounds that are difficult to synthesize or isolate from other sources, which is usually associated with high economic value of the substances, but may also be useful to help elucidating the metabolic pathways involved in the synthesis of such compounds. This paper presents a general description of anthocyanins, a group of pigments of great importance to the industry, complemented by referring the scientific papers that have been recently published on their in vitro production. Regarding the latter, a description of the effect of changes in growing conditions, of the addition of precursors, of the use of growth regulators, and of the utilization of elicitors and stressors on the production of these compounds, is done. Finally, this review mentions the use of hairy roots obtained by the use of Agrobacterium rhizogenes for the production of these compounds.

Establecimiento in vitro y cultivo de células de la uña de gato (Uncaria tomentosa) (Willd) D C / In vitro establishment and cell culture of the cat's claw (Uncaria tomentosa) (Willd.) D. C

La Uncaria tomentosa (Willd.) D.C., (uñade gato) es una liana del bosque tropical,que se distribuye en forma natural en lazona Atlántica de Costa Rica, a alturasmenores de 600 msnm. La infusión dela corteza de la raíz forma parte delacervo de la medicina tradicional deCosta Rica para aliviar diversas dolencias,como son: la gastritis, la artritis; además,funciona como fortificante del sistemainmunológico y, recientemente, para tratarel cáncer y el VIH.El cultivo in vitro sedesarrolló como una herramienta para lamicropropagación de plantas en la zonade Guápiles (Pococí), como estrategiade conservación para la explotacióncomercial sostenible de la especie. En esteartículo se describen los protocolos para elestablecimiento y la micropropagación apartir de microestacas, en un medio M & S(1962) con 2 mg/L de BA, 3% de sacarosay 7 g/L de agar; así como la germinaciónin vitro en el mismo medio M & S (1962)semi sólido (1,8 g/L de Phyta-Gel).Se probó el cultivo en medio líquido, en jarrasfermentadoras y en sistemas de inmersióntemporal automatizado (RITA®), y fueefectivo el método de inmersión cada treshoras, durante tres minutos. Se describe elproceso de aclimatación, el crecimiento ydesarrollo de las vitroplantas.

Uso de distintos tratamientos de desinfección en el cultivo in vitro de Dioscorea alata L clon caraqueño / Use of distinct disinfection treatments in the in vitro culture of Dioscorea alata L clone caraqueño

El cultivo in vitro, como técnica, consiste en cultivar asépticamente una porción aislada de la planta bajo condiciones de ambiente controlado, para que las células expresen su potencial intrínseco e inducido. El presente trabajo tuvo como objetivo determinar el efecto de diferentes concentraciones y tiempos de inmersión en hipoclorito de sodio en el establecimiento in vitro de explantes primarios de ñame (Dioscorea alata L) clon caraqueño. Las variantes de desinfección consistieron en la utilización de diferentes concentraciones de hipoclorito de sodio (1,5; 2 y 2,5%) durante distintos tiempos de inmersión (10; 20 y 30 min). A los 7 días se evaluó el porcentaje de contaminación de bacterias y hongos respectivamente, y a los 40 días el número de nudos de novo, la longitud del vástago, el número de hojas, y el porcentaje de explantes establecidos y necrosados. Se aplicó un diseño experimental completamente aleatorizado con análisis de varianza bifactorial y clasificación simple. Se realizó la prueba de comparación de medias de Tukey para un nivel de significación del 5%. Los resultados obtenidos arrojaron que el tratamiento de desinfección de segmentos uninodales de ñame con hipoclorito de sodio al 1,5% durante un tiempo de inmersión 30 min es el de mayor efectividad para el establecimiento in vitro de explantes primarios del ñame (D alata L. clon caraqueño con altos porcentajes de supervivencia en condiciones ex vitro.

The in vitro culture technique consists of aseptically culturing an isolated plant portion in controlled environmental conditions for the cells to express their intrinsic and induced potential. This work was aimed at determining the effect of different sodium hypochlorite concentrations and immersion times on in vitro establishment of yam (Dioscorea alata L) “caraqueño” clone primary explants. Disinfection varied by using different sodium hypochlorite concentrations (1.5%, 2% and 2.5%) during different immersion times (10, 20 and 30 min). Bacterial and fungal contamination percentages were evaluated after 7 days and de novo bud number, shoot length, leaf number, explant establishment and necrosis percentages were determined after 40 days. A totally randomised experimental design was applied, having one- and two-factor variance analysis; the Tukey test was used for comparing means at 5% significance level. The results showed that the most appropriate disinfection treatment for uninodal yam (D alata L) segments used 1.5% sodium hypochlorite during 30 min immersion; this was most effective for the in vitro establishment of yam (D alata L) clone “caraqueño” primary explants, having high survival percentage in ex vitro conditions.

Cultivo primario de queratinocitos humanos sembrados en submucosa intestinal porcina / Primary culture of human keratinocytes planted on pig's intestine Submucosa

En el campo de la regeneración de piel, la ingeniería de tejidos busca superar las limitaciones asociadas con el uso de autoinjertos inmediatos, dado que la elección de una región donante en el paciente, constituye un riesgo para el mismo, además de ser insuficiente cuando la lesión es extensa. Se ha comprobado que el empleo de la submucosa del intestino delgado de cerdo (SIS) (por la sigla en inglés small intestinal submucosa), por su especial composición, como biomaterial de relleno para tratar lesiones, disminuye el dolor y la inflamación desde su primera aplicación y favorece la movilidad temprana de la región lesionada. Con el fin de determinar la utilidad de SIS, como sustituto epidérmico, en el presente estudio se desarrolló un protocolo para el cultivo primario de queratinocitos humanos, provenientes de prepucios infantiles, sobre una matriz de SIS como soporte. Se evaluó el potencial de adherencia y la capacidad de proliferación de queratinocitos sobre este sustrato.

Tissue engineering, in the fields of skin regeneration, seeks to overcome the limitations associated with the use of immediate auto-grafts, since choosing the donor region of the patient constitutes a risk for the patient himself and is insufficient if the injury that has to be repaired is very large. The use of the pig’s small intestine submucosa (SIS) has being proved as a filling biomaterial to treat injuries, because of its special composition, it lowers pain and inflammation since its first application and it favours early mobility to the wounded area. The present study developed a protocol for the primary culture of human keratinocytes from infant foreskins, and used small intestinal submucosa (SIS) like culture substrate. Cellular adherence potential and proliferation capability of the keratinocytes over this substrate was evaluated.