Micropropagation of two species of foliage anthurium by direct organogenesis / Micropropagação por organogênese direta de duas espécies de antúrio para folhagem

ABSTRACT: The objective of the present research was to develop a protocol for micropropagation of Anthurium bonplandii and Anthurium maricense by direct organogenesis. Nodal segments, with two or three nodes, were used as explants. The cultures were kept in a growth chamber at a temperature of 25±2ºC, under a photoperiod of 16 hours and a luminosity of 30μmol m-2 s-1. At 60 days, the number of regenerated buds per explant (NBE) was counted. The experiment was carried out in an entirely randomised design consisting of six treatments for six different concentrations of 6-benzylaminopurine (6-BA) added to the P2 (Pierik) medium (0.0, 1.11, 2.22, 3.33, 4.44, and 5.55µM). All the treatments were performed in four repetitions with 10 culture tubes containing one explant each. The regression analyses were adjusted to a quadratic model, with R2 = 88.7% and 62.4% for A. maricense and A. bonplandii, respectively. The regressions indicate that the addition of 6-BA to the P2 medium resulted in larger values of NBE in both the species. The ideal 6-BA concentration for micropropagation varied depending on the species, with 2.5 and 1.7 NBE determined at 6-BA concentrations of 4.70 and 3.37µM for A. maricense and A. bonplandii, respectively.

RESUMO: O objetivo do trabalho foi desenvolver um protocolo para micropropagação de Anthurium bonplandii e A. maricense por meio da organogênese direta. Foram utilizados como explantes, segmentos nodais contendo de dois a três nós. As culturas foram mantidas em sala de crescimento com temperatura de 25±2ºC, fotoperíodo de 16 horas e intensidade luminosa de 30μmol m-2 s-1. Aos 60 dias, avaliou-se o número de brotações regeneradas por explante (NBE). O experimento foi em um delineamento inteiramente casualizado composto por seis tratamentos referentes ao meio P2 (Pierik) adicionado de seis concentrações de 6-benzilaminopurina (6-BA): 0,0; 1,11; 2,22; 3,33; 4,44 e 5,55µM, com quatro repetições de dez tubos de ensaio, contendo um explante cada. As análises de regressão se ajustaram ao modelo quadrático com R2=88,7% e 62,4% para A. maricense e A. bonplandii, respectivamente. As regressões indicaram que adições de 6-BA ao meio P2, promoveram maior número de NBE em ambas as espécies. A concentração de 6-BA estimada como ideal para a micropropagação varia de acordo com a espécie, sendo estimado 2,5 e 1,7 NBE, quando a concentração de 6-BA for igual a 4,70 e 3,37µM para as espécies de A. maricense e A. bonplandii, respectivamente.

Deep tissue culture and hemoculture in dogs with wounds and sepsis / Cultura de tecido profundo e hemocultura em cães com feridas e sepse

Contaminated and infected wounds occur very frequently in veterinary medicine and can cause systemic inflammatory response syndrome, sepsis, and death. This study aimed to test the feasibility of collecting wound material by deep-tissue or punch biopsy for microbial culture, determine the frequency of bacteria in the wound(s) and blood cultures and the susceptibility of these microbes to antimicrobials, and evaluate clinical parameters that could be related to prognosis. Thirty dogs with wounds and signs of SIRS/sepsis were included in this study. Bacteria were isolated from all wounds and 41 bacterial isolates could be identified based on culture of the materials collected by punch biopsy; 53.66% of the isolates were gram-negative, mainly involving Pseudomonas aeruginosa, Klebsiella pneumoniae, and Enterococcus spp., and 46.34% were gram-positive bacteria such as Streptococcus spp., Enterococcus spp., and Staphylococcus spp. The survival rate was 66.67%. Based on blood culture analysis, we identified bacteremia in seven patients, predominantly of gram-negative bacteria, which negatively affected patient survival, as six dogs died. Hypoglycemia (≤60mg/dL) and severe hyperglycemia (≥180mg/dL) also negatively affected survival as 23.33% of the hypo/hyperglycemic dogs died. Factors such as blood lactate level at admission and hematocrit levels, and mean arterial pressure were not significantly correlated with death or survival of the dogs.(AU)

As feridas contaminadas e infectadas em cães ocorrem com grande frequência na medicina veterinária e podem causar síndrome da resposta inflamatória sistêmica, sepse e morte. Os objetivos do presente trabalho foram verificar a viabilidade da técnica de coleta de material da ferida por biópsia para realização de cultura microbiana, determinar a frequência das bactérias nas culturas das feridas e hemoculturas e a susceptibilidade destes agentes aos antimicrobianos, bem como avaliar parâmetros clínicos que pudessem ser relacionados ao prognóstico em 30 cães com feridas e sinais de SIRS/sepse. Foram isoladas bactérias de todas as feridas e a técnica de coleta de material para cultura por biópsia permitiu a obtenção de 41 agentes microbianos, sendo isoladas 53,66% bactérias Gram negativas e 46,34% Gram positivas, principalmente Pseudomonas aeruginosa, Klebsiella pneumoniae e Enterococcus spp. As bactérias gram positivas isoladas foram Streptococcus spp., Enterococcus spp. e Staphylococcus spp. A taxa de sobrevivência foi 66,67%. Na hemocultura constatou-se bacteremia em sete pacientes, com predominância de bactérias Gram negativas, o que influenciou negativamente na sobrevivência dos pacientes, pois seis cães vieram a óbito. A hipoglicemia (≤60mg/dL) ou hiperglicemia severa (≥180mg/dL), também influenciaram negativamente a sobrevivência, pois 23,33% dos pacientes hipo/hiperglicêmicos vieram a óbito. Já fatores como nível sérico de lactato na admissão do paciente, pressão arterial média (PAM) e hematócrito não apresentaram correlação estatística com o óbito ou sobrevivência destes pacientes.(AU)

In vitro morphogenesis of Syngonanthus mucugensis Giul: subsp. mucugensis / Morfogênese in vitro de Syngonanthus mucugensis Giul: subsp. mucugensis

Syngonanthus mucugensis Giul. subsp. mucugensis is an herbaceous plant with significant economic value in the ornamental dry flower business. The restricted occurrence of the municipality Mucugê-BA, Brazil, exclusively associated with extractive exploitation, has considered this species as endangered. The objective of this work was to evaluate the organogenic potential of three different types of S. mucugensis subsp. mucugensis explants to promote the development of an alternative method to the propagation of the genetic resources of this important plant. The morphogenetic capacities of the leaf, stem and root this species was tested using Murashige and Skoog culture medium at half salt concentration and different concentrations of growth of regulators benzylaminopurine - BAP (0.00; 2.22 and 4.44 µM), and naphthalene acetic acid - NAA (0.00; 1.34 and 2.68 µM). The morphoanatomic events that lead to formation of shoots were described. Stems proved to be the best source of explants, showing 58.75 percent regeneration of shoot by direct organogenesis in the absence of growth regulators, and 32.18 and 47.55 percent of shoot regeneration by indirect organogenesis in the presence of 2.22 and 4.44 µM BAP, respectively. As for leaves, there was callus formation, but without regenerating shoots. Morphogenesis was not observed when roots were used as explants. The histological analyses showed that shoot regeneration in S. mucugensis subsp. mucugensis occurred both indirectly, by unorganized tissue differentiation, and directly through returning to merismatic activity in differentiated mature cells and preexisting bud proliferation.

Syngonanthus mucugensis Giul. subsp. mucugensis é uma herbácea com grande potencial de utilização no comércio de flores secas ornamentais. A ocorrência restrita ao município de Mucugê-BA, Brasil, associado à exploração extrativista tem levado essa espécie ao risco de extinção. Neste estudo, objetivou-se avaliar o potencial organogênico de três diferentes tipos de explantes de S. mucugensis subsp. mucugensis visando ao desenvolvimento de um método alternativo para a sua propagação. A capacidade morfogênica de caule, folha e raiz foi testada utilizando o meio de cultura Murashige e Skoog com metade da concentração salina e diferentes concentrações dos reguladores de crescimento benzilaminopurina - BAP (0,00; 2,22 e 4,44 µM) e ácido naftaleno acético - ANA (0,00; 1,34 e 2,68 µM). Os eventos morfoanatômicos que levaram a formação dos brotos foram descritos. O caule demonstrou ser a melhor fonte de explante, apresentando 58,75 por cento de regeneração de brotos via organogênese direta, em meio livre de regulador de crescimento; e 32,18 e 47,55 por cento de regeneração de brotos por organogênese indireta na presença de 2,22 e 4,44 µM de BAP, respectivamente. Para folha, foi obtida a formação de calos sem regeneração de brotos, não sendo observada morfogênese, quando se utilizou raiz como explante. As análises histológicas mostraram que a regeneração de brotos em S. mucugensis subsp. mucugensis ocorreu tanto por via indireta, pela diferenciação do tecido calogênico desorganizado, quanto por via direta pela retomada da atividade meristemática em células maduras diferenciadas e proliferação de gemas pré existentes.

Early selection of elite clones of an ornamental bromeliad in vitro / Seleção precoce in vitro de clones elite de uma bromélia ornamental

Orthophytum grossiorum is a typical bromeliad from Atlantic forestry threatened of extinction. The objectives of this research were to select O. grossiorum clones with ornamental values easy to propagate in vitro, and establish in vitro propagation protocols for these clones. The project was developed in three steps: germination and in vitro selection of seedlings responsive to BAP (6-benzylaminopurine), selection of clones with ornamental values, and establishment of protocol for in vitro propagation of the selected clones. In the first step only 18.33 percent of plantlets germinated in vitro were responsive to BAP. These plantlets were selected and replicated in vitro several times, each replicated plantlet constituting a clone. In the second step these clones were established ex vitro and surveyed for ornamental attributes. Five out of 11 clones were selected in this step. These clones presented distinct phenotypic traits and were considered of high ornamental quality. In the third step a protocol for in vitro propagation was developed for each selected clone.

Orthophytum grossiorum é uma bromélia ameaçada de extinção típica de Mata Atlântica. Os objetivos deste trabalho foram selecionar clones de O. grossiorum com potencial ornamental e de fácil propagação in vitro e estabelecer protocolo de propagação in vitro para esses clones. O trabalho foi desenvolvido em três etapas: germinação e em seleção in vitro de plântulas responsivas a BAP (6-benzylaminopurine), seleção de clones com valores ornamentais e estabelecimento de protocolo para propagação in vitro dos clones selecionados. Na primeira etapa, foi observado que apenas 18.33 por cento das plântulas germinadas in vitro eram responsivas a BAP. Essas plântulas foram selecionadas e reproduzidas em in vitro, e cada plântula selecionada e reproduzida constituiu um clone. Na segunda etapa, esses clones foram estabelecidos ex vitro e selecionados em relação aos atributos ornamentais. Nessa etapa, foram selecionados cinco entre 11 clones. Esses apresentaram características fenotípicas distintas, sendo considerados de alta qualidade ornamental. Na terceira etapa, o protocolo para em propagação in vitro foi desenvolvido para cada clone selecionado.

Modelos experimentais em pesquisa

The purpose of this study is to collect the main classifications of experimental research models and their possible applications in experimental research. Literature search was done using the most important data bank available on the internet (PUBMED, MEDLINE, SCIELO, LILACS, COCHRANE). A compilation of the experimental studies developed at the Plastic Surgery Post Graduate Program of the Federal University of São Paulo/ Paulista School of Medicine was also done. Animals models were classified regarding sanitary and genotipical status. The understanding of the main classifications of the research experimental models is essential to improve and confirm procedures and techniques already described as well as the development of new ones.

O objetivo deste estudo é compilar as principais classificações dos modelos experimentais utilizados em pesquisas e suas possíveis aplicações em pesquisa experimental. Realizou-se a revisão da literatura a partir dos principais bancos de dados disponíveis na Internet (Pubmed, Medline, Scielo, Lilacs, Cochrane), assim como em um levantamento dos estudos experimentais realizados no Programa de Pós-Graduação em Cirurgia Plástica da Universidade Federal de São Paulo - Escola Paulista de Medicina. Destacou-se uma distribuição dos modelos animais em status sanitário, genotípico e como modelo experimental. A compreensão das principais classificações dos modelos experimentais em pesquisa é fundamental para o aperfeiçoamento e comprovação de técnicas e procedimentos já existentes, assim como para o desenvolvimento de outros.

Calogênese do híbrido Theobroma grandiflorum x T. obovatum (Sterculiaceae) / Calogenesis of Theobroma grandiflorum x. T. obovatum hibrid (Sterculiaceae)

O declínio da cacauicultura na amazônia tem sido causado pela doença vassoura-de-bruxa (Crinipellis perniciosa). Um híbrido interespecífico do mesmo gênero (Theobroma grandiflorum x T. obovatum) tem demonstrando resistência a esta doença. Avaliou-se a calogênese deste híbrido com a finalidade de sua propagação massiva. Os explantes usados (tegumento, cotilédone e embrião) foram postos para desenvolver em condições estéreis em meio de cultura LPm mais água de coco (50 ml/l), glucose (20 g/l), 2,4 - D (2 mg/l), Thidiazuron - TDZ nas concentrações de 0, 5 e 10 æg/l, carvão ativado (2 g/l) em gelrite (2 g/l) a um pH de 5,8. Cada concentração de TDZ x tipo de tecido foi considerado um tratamento. As culturas foram mantidas no escuro, à temperatura de 22 ± 2 °C. Os tecidos não mostraram diferenças significativas quanto a proporção do explante recoberto por calos (p= 0,14) embora notou-se que nos cotilédones tenha sido maior. A dosagem de TDZ nitidamente não influenciou no recobrimento de calos (p= 0,94). Quanto a freqüência, os tecidos mostraram diferentes capacidades de desenvolver calos (p= 0,02) sem mostrar-se influenciados pela dosagem de TDZ (p = 0,66). Os explantes de cotilédones foram os que formaram calos em maior freqüência. Houve uma leve tendência de que quanto menor a dosagem de TDZ maior a freqüência de calos obtidos. Não foi constatada interação entre tipo de calo/frasco x dosagem de TDZ (p = 0,32).

Decline of cocoa plantations in Amazonia has been attributed to Witches-broom-disease (Crinipellis perniciosa). An interspecific hybrid (Theobroma grandiflorum x T. obovatum) has demonstrated resistance to this disease. Calogenesis of this hybrid was evaluated, in preparation for its mass propagation. The explants used (tegument, cotyledons and embryos) were developed in sterile conditions in LPm media plus coconut milk (50 ml/l), glucose (20 g/l), 2,4 - D (2 mg/l), Thidiazuron - TDZ at concentrations of 0, 5 e 10 æg/l, and activated charcoal (2 g/l) in gelrite (2 g/l) at pH 5.8. Each concentration of TDZ x kind of explant was considered a treatment and were kept in the dark at a temperature of 22 ± 2 °C. Explants did not show significant differences in the proportion of callus recovery (p= 0,14) although cotyledons did have the highest value. TDZ level did not influence callus recovery (p= 0,94). Different explants resulted in different frequencies of callus development (p= 0,023) but were not been influenced by the doses of TDZ (p = 0,66). Cotyledon explants displayed the highest values for frequency of callus development. There was also a slight trend that lower levels of TDZ resulted in higher frequencies of callus development. There was no interaction between kind of callus/flasks x doses of TDZ (p = 0,32).