Organoides: fundamentos, presente y futuro / Organoids: fundamentals, present and future

RESUMEN Los organoides son estructuras miniaturizadas, generadas principalmente a partir de células madre pluripotentes inducidas, que se cultivan en el laboratorio conservando sus características innatas o adquiridas. Tienen el potencial de reproducir procesos de desarrollo biológico, modelar procesos patológicos que permitirán el descubrimiento de nuevos fármacos y propicien la medicina regenerativa. Sin embargo, estas experiencias requieren perfeccionamiento constante porque pueden haberse realizado variaciones en la constitución de estos órganos. Por ello, el presente artículo tiene como objetivo revisar la información actualizada sobre organoides y sus procesos experimentales básicos y recientes, empezando por la gastrulación, para tratar de imitar, en lo posible, la formación de las tres capas: ectodermo, mesodermo y endodermo, incluyendo los factores que intervienen en la inducción, diferenciación y maduración en la generación de estos organoides. Asimismo, el diseño y preparación de medios de cultivo altamente especializados que permitan obtener el órgano seleccionado con la mayor precisión y seguridad. Se realizó una búsqueda de artículos originales y de revisión publicados en PubMed, Nature y Science. Los artículos se seleccionaron por sus resúmenes y por su texto completo. Las conclusiones de este articulo destacan las ventajas futuras en el uso y aplicaciones de los organoides.

ABSTRACT Organoids are tiny structures, mainly generated from induced pluripotent stem cells, which are cultured in the laboratory while retaining their innate or acquired characteristics. They have the potential to reproduce biological development processes, model pathological processes that will enable the discovery of new drugs and promote regenerative medicine. However, these processes require constant improvement because variations may have occurred in the constitution of the organs. Therefore, this article aims to review updated information on organoids and their basic and recent experimental processes, starting with gastrulation, in an attempt to mimic, as much as possible, the formation of the three layers: ectoderm, mesoderm and endoderm; as well as the information regarding the factors involved in the induction, differentiation and maturation during the generation of organoids. Likewise, the design and preparation of highly specialized culture media that allow obtaining the selected organ with the highest precision and safety. We searched for original and review articles published in PubMed, Nature and Science. Articles were selected for their abstracts and full text. The conclusions of this article highlight the future advantages in the use and applications of organoids.

Potential effect of hyaluronic acid and triamcinolone acetate, alone or combined, on chondrogenic differentiation of mesenchymal stem cells / Efecto potencial del ácido hialurónico y del acetato de triamcinolona solos o combinados sobre la diferenciación condrogénica de células-tronco mesenquimales / Efeito potencial do ácido hialurônico e triancinolona acetonida, isolados e combinados, na diferenciação condrogênica de células-tronco mensenquimais

Abstract Background: Osteoarthritis is a complex degenerative disease with several factors contributing to joint damage. Objective: To compare the potential effect of hyaluronic acid (HA) and triamcinolone acetonide (TA), alone or combined, on the in vitro chondrogenic differentiation process of mesenchymal stem cells (MSCs). Methods: MSCs were divided into four groups: Control, HA, TA, and HA/TA combined. Each treatment group was cultured for 14 days in chondrogenic differentiation medium. The chondrogenic differentiation potential was assessed by histology and immunohistochemistry. Results: The HA and HA/TA-treated MSCs presented histological characteristics similar to native chondrocytes. The extracellular matrix (ECM) of TA-treated MSCs was compact and organized. Glycosaminoglycan staining was intense in Control, moderate in TA, slight in HA/TA, and undetectable in HA. Type II collagen immunoreactivity was high in the TA-treated ECM and MSCs. Conclusions: Histological analysis shows that HA influences morphological development similar to chondrocytes of the MSCs, but with low expression of specific cartilage molecules. The TA promotes formation of a compact and organized ECM.

Resumen Antecedentes: La osteoartritis es una enfermedad degenerativa compleja en la cual varios factores contribuyen al daño articular. Objetivo: Comparar el efecto del ácido hialurónico (HA) y acetónido de triamcinolona (TA), solos o en combinación, en el proceso de diferenciación condrogénica in vitro de células madre mesenquimales (MSCs). Métodos: Las MSCs fueron divididas en cuatro grupos: Control, HA, TA y HA/TA, y cultivadas por 14 días en medio de diferenciación condrogénica para cada tratamiento. El potencial de diferenciación condrogénica fue analizado por medio de histología e inmunohistoquímica. Resultados: Las MSCs tratadas con HA y HA/TA, presentaron características histológicas similares a los condrocitos nativos, y la matriz extracelular (ECM) de MSCs tratadas con TA fue más compacta y organizada. La tinción de glicosaminoglicanos fue intensa en el Control, moderada en TA, ligera en HA/TA, y sin tinción en HA. La inmunoreactividad para colágeno tipo II fue más alta en las MSCs y ECM tratadas con TA. Conclusión: El análisis histológico muestra que el HA influencia un desarrollo morfológico similar a los condrocitos de las MSCs, pero con baja expresión de moléculas específicas de cartílago. La TA promueve la formación de una ECM compacta y organizada.

Resumo Antecedentes: A osteoartrite é uma doença degenerativa complexa, na qual vários fatores contribuem ao dano articular. Objetivo: Comparar o efeito do ácido hialurônico (HA) e Triancinolona acetonida (TA), só ou combinado no processo de diferenciação condrogênica in vitro de células tronco mesenquimais (MSCs). Métodos: MSCs foram divididas em 4 grupos: Controle, HA, TA y HA/TA e cultivadas por 14 dias com meio de diferenciação condrogênica e seus respectivos tratamentos. O potencial de diferenciação condrogênica foi acessado por meio de histologia e imunohistoquímica. Resultados: Histologicamente, MSCs tratadas com HA e HA/TA apresentaram características semelhantes de condrócitos nativos, e a matriz extracelular de MSCs tratadas com TA foi mais compacta e organizada. A coloração para glicosaminoglicanos foi intensa no Controle, moderada no TA, leve no HA/TA e sem coloração com HA. Para os grupos tratamento, a imunoreatividade para colágeno tipo II foi maior nas células e matriz extracelular tratadas com TA. Conclusão: Mediante análise histológica, o HA influenciou o desenvolvimento morfológico semelhante a condrócitos das MSCs, mas com baixa expressão de moléculas específicas de cartilagem. A TA promoveu a formação de uma matriz extracelular compacta e organizada.

Adenocarcinoma indiferenciado como factor predictor de metástasis ganglionares en cáncer gástrico / Undifferentiated adenocarcinoma as a predictor of lymph nodemetastases in gastric cancer

Introducción. El grado de diferenciación celular en el estudio histopatológico del adenocarcinoma gástrico está descrito como un factor pronóstico determinante en el comportamiento clínico del tumor. El adenocarcinoma gástrico indiferenciado es considerado una variante agresiva de mal pronóstico, que se correlaciona con una alta tasa de metástasis ganglionares. Métodos. Estudio prospectivo descriptivo de una serie de casos en el cual se analizan los pacientes con adenocarcinoma gástrico indiferenciado, que fueron llevados a cirugía radical con gastrectomía y linfadenectomía DII y su correlación con la presencia de metástasis ganglionares en un período de dos años. Resultados. De enero de 2018 a enero de 2020 se recolectaron en la base de datos 113 pacientes con adenocarcinoma gástrico a quienes se les practicó gastrectomía total, disección ganglionar DII y reconstrucción esofagoyeyunal termino lateral con técnica de Orr más Y de Roux. Fueron clasificados histológicamente como adenocarcinoma gástrico indiferenciado 41 pacientes (36,3 %). La edad promedio de este grupo fue de 56 años con un rango entre 28-92 años. De ellos 30 fueron hombres (73 %) y 11 mujeres (27 %). El número promedio de ganglios linfáticos analizados por espécimen fue de 24. De los 41 pacientes con adenocarcinoma gástrico indiferenciado, 35 (85 %) tuvieron metástasis ganglionares, con 382 ganglios positivos en total, con un rango entre 1-38 y un promedio de 11 ganglios linfáticos positivos por espécimen. Discusión. En esta serie el adenocarcinoma gástrico indiferenciado se presentó en el 36,3 % de los casos y se correlacionó con un 85 % de presencia de metástasis ganglionares en estadios T3-T4

Introduction. The degree of cellular differentiation in the histopathological study of gastric adenocarcinoma is described as a determining prognostic factor in the clinical behavior of the tumor. Undifferentiated gastric adenocarcinoma is considered an aggressive variant with a poor prognosis, which is correlated with a high rate of lymph node metastasis.Methods. Descriptive prospective study of a series of cases in which patients with undifferentiated gastric adenocarcinoma who underwent radical surgery with DII gastrectomy and lymphadenectomy and their correlation with the presence of lymph node metastases in a period of two years. Results. From January 2018 to January 2020, 113 patients with gastric adenocarcinoma were collected in the database who underwent total gastrectomy, DII lymph node dissection and end-to-side esophagojejunal reconstruction with the Orr plus Roux-en-Y technique. Forty-one patients (36.3%) were histologically classified as undifferentiated gastric adenocarcinoma. The average age of this group was 56 years with a range between 28-92 years. Of these, 30 were men (73%) and 11 women (27%). The mean number of lymph nodes analyzed per specimen was 24. Of the 41 patients with undifferentiated gastric adenocarcinoma, 35 (85%) had lymph node metastases, with 382 positive nodes in total, with a range between 1-38 and a mean of 11 positive lymph nodes per specimen. Discussion. In this series, undifferentiated gastric adenocarcinoma occurred in 36.3% of cases and was correlated with 85% of the presence of lymph node metastases in T3-T4

Nuclear elongation correlates with neurite induced cellular elongation during differentiation of SH-SY5Y neural cells / El alargamiento del núcleo se correlaciona con el alargamiento celular inducido por neuritas durante la diferenciación de las células neuronales Sh-Sy5Y

SUMMARY: Cellular differentiation is a highly regulated process that has vast implications for the mechanics of the cell. The interplay between differentiation induced cytoskeletal mechanical changes and strain on the nucleus is a potential cause of gene level changes. This study explores mechanical changes in SH-SY5Y neural cells during differentiation mediated by Retinoic Acid (RA) across Days 0 through 9. Findings suggest that cellular elongation increases 1.92-fold over a 10-day differentiation period, from 48.97 ±16.85µm to 93.96 ± 31.20 µm over 3 repeated trials and across multiple cells analyzed on ImageJ. Nuclear elongation increases less substantially from 17.51 ± 2.71 µm to 23.26 ± 3.10 µm over 3 repeated trials and across multiple cells. Results are statistically significant at a significance level of α = 0.05. This study is one of the first studies to show that during the process of RA mediated neural differentiation in SH-SY5Y neural cells, nuclear elongation is initially not significantly correlated with cellular elongation, but it becomes correlated during the differentiation process with an overall correlation coefficient of 0.4498 at a significance level of α = 0.05. Given the time course of the mechanical changes and the known coupling between the cytoskeleton and nuclear lamina, this study suggests a causative and correlative relationship between neurite-driven cellular elongation and nuclear elongation during neural differentiation.

RESUMEN: La diferenciación celular es un proceso altamente regulado que tiene vastas implicaciones para la mecánica de la célula. La interacción entre los cambios mecánicos citoesqueléticos inducidos por la diferenciación y la tensión en el núcleo es una causa potencial de cambios a nivel genético. Este estudio explora los cambios mecánicos en las células neurales SH-SY5Y durante la diferenciación mediada por el ácido retinoico (RA) durante los días 0 a 9. Los resultados sugieren que el alargamiento celular aumenta 1,92 veces durante un período de diferenciación de 10 días, de 48,97 ± 16,85 µm a 93,96 ± 31,20 µm en 3 ensayos repetidos y en múltiples células analizadas en Image J. El alargamiento nuclear aumenta menos sustancialmente de 17,51 ± 2,71 µm a 23,26 ± 3,10 µm durante 3 ensayos repetidos y en múltiples células. Los resultados son estadísticamente significativos a un nivel de significancia de α = 0,05. Esta investigación es uno de los primeros estudios en demostrar que durante el proceso de diferenciación neural mediada por RA en las células neurales SH-SY5Y, el alargamiento nuclear inicialmente no se correlaciona significativamente con el alargamiento celular, pero se correlaciona durante el proceso de diferenciación con un coeficiente de correlación global de 0,4498 a un nivel de significancia de α = 0,05. Dado el curso temporal de los cambios mecánicos y el acoplamiento conocido entre el citoesqueleto y la lámina nuclear, este estudio sugiere una relación causal y correlativa entre el alargamiento celular impulsado por neuritas y el alargamiento nuclear durante la diferenciación neural.

Megacariopoyesis humana in vitro: determinación de la concentración óptima de trombopoyetina / In vitro human megacaryocytopoiesis: determination of thrombopoietin optimal concentration / Megacariópoiesis humana in vitro: determinação da concentração ótima da trombopoietina

El estudio de la megacariopoyesis humana se ha visto obstaculizado por la relativa escasez de megacariocitos en la médula ósea (0,05-0,2 % de las células medulares), lo que ha llevado a la optimización de protocolos de expansión in vitro a partir de precursores de diversos orígenes (cordón umbilical, médula ósea y sangre periférica con o sin movilización previa). Los cultivos celulares a partir de precursores han permitido la producción y el estudio tanto de megacariocitos así como de proplaquetas y plaquetas Sin embargo, la producción in vitro óptima de megacariocitos que culminen todos los estadios de diferenciación es un reto aún no resuelto. En este trabajo reportamos los hallazgos concernientes a la determinación de las condiciones y concentraciones de trombopoyetina para lograr una óptima relación entre la cantidad de trombopoyetina empleada y el porcentaje y grado de diferenciación megacariocítica en muestras obtenidas de cinco donantes alogénicos aceptados para trasplante de médula ósea.

The study of human megakaryocytopoiesis has been hampered by the relative scarcity of megakaryocytes in bone marrow (0.05-0.2 % of medullary cells), which has led to the optimization of protocols of in vitro expansion of precursors from diverse sources (umbilical cord, bone marrow and peripheral blood with or without previous mobilization). Cell cultures from different precursors have allowed the production and study of megakaryocytes as well as proplatelets and platelets. However, the in vitro production of megakaryocytes that culminate all stages of differentiation is a challenge that has not yet been resolved. In this work we report the findings related to the determination of thrombopoietin treatment conditions and concentrations to achieve an optimal relationship between the amount of thrombopoietin and the percentage and degree of megakaryocytic differentiation in five allogeneic donors that were accepted for bone marrow transplantation.

O estudo da megacariopoiese humana tem sido dificultado pela relativa escassez de megacariócitos na medula óssea (0,05-0,2 % das células medulares), o que levou à otimização dos protocolos de expansão in vitro a partir de precursores de diversas origens (cordão umbilical, medula óssea e sangue periférico com ou sem mobilização prévia). Culturas de células a partir de precursores permitiram a produção e o estudo tanto de megacariócitos e de proplaquetas e plaquetas. No entanto, a produção ótima in vitro de megacariócitos que culminam em todas as fases de diferenciação é um desafio ainda não resolvido. Neste trabalho, relatamos as descobertas relativas à determinação das condições e concentrações de trombopoietina para obter uma relação ótima entre a quantidade de trombopoietina usada e a taxa e o grau de diferenciação megacariocítica em amostras obtidas de cinco doadores alogênicos aceitos para transplante de medula óssea.

Proliferation and differentiation of mouse spermatogonial stem cells on a three-dimensional surface composed of PCL/gel nanofibers / Proliferación y diferenciación de células madre espermatogónicas de ratón en una superficie tridimensional compuesta de nanofibras PCL / gel

Spermatogonial stem cells (SSCs) have self-renewal and differentiation capacity essential for sperm production throughout the male reproductive life. The electrospun polycaprolactone/gelatin (PCL/Gel) nanofibrous scaffold mimics important features of the extracellular matrix (ECM), which can provide a promising technique for the proliferation and differentiation of SSCs in vitro. The goal of the present study was to investigate the effects of PCL/Gel nanofibrous scaffold on the propagation and differentiation of neonate mouse SSCs (mSSCs). mSSCs were enzymatically isolated, and the cells were purified by differential plating method and seeded on scaffold. After 2 weeks, viability, colony number and diameter, and expression of specific spermatogonial cell genes were investigated. After mSSCs propagation, the cells were cultivated in a differentiation medium on the scaffold for another 2 weeks, and differentiating cells were analyzed by real-time PCR. The number of mSSC colony (P<0.01) and expression levels of specific spermatogonial genes Plzf and Inga6 (P<0.01) and also differentiation genes c-Kit, Tp1 and Ptm1 (P<0.05) were higher in scaffold group compared with control during the culture period. We conclude that mSSCs can be expanded and can differentiate toward spermatid cells on PCL/Gel nanofibrous scaffold with improved developmental parameters.

Las células madre espermatogónicas (CME) tienen capacidad de auto renovación y diferenciación esenciales para la producción de esperma a lo largo de la vida reproductiva masculina. El «scaffold¼ nanofibroso de policaprolactona / gelatina (PCL / Gel) electrohilado imita características importantes de la matriz extracelular (MEC), que puede proporcionar una técnica prometedora para la proliferación y diferenciación de CME in vitro. El objetivo del presente estudio fue investigar los efectos del «scaffold¼ nanofibroso PCL / Gel en la propagación y diferenciación de CME de ratones neonatos (mSSC). Los mSSC se aislaron enzimáticamente y las células se purificaron mediante un método de siembra diferencial y se sembraron en un «scaffold¼. Después de 2 semanas, se investigaron la viabilidad, el número y el diámetro de las colonias y la expresión de genes específicos de células espermatogónicas. Después de la propagación de mSSC, las células se cultivaron en un medio de diferenciación en el «scaffold¼ durante otras 2 semanas, y las células se analizaron mediante PCR en tiempo real. El número de colonias mSSC (P <0,01) y los niveles de expresión de los genes espermatogónicos específicos Plzf e Inga6 (P <0,01) y también los genes de diferenciación c-Kit, Tp1 y Ptm1 (P <0,05) fueron mayores en el grupo de «scaffold¼ en comparación con el control durante el período de cultivo. Concluimos que los mSSC pueden expandirse y diferenciarse en células espermátidas en un «scaffold¼ de nanofibras PCL / Gel con parámetros de desarrollo mejorados.

Desarrollo neuroembriológico: el camino desde la proliferación hasta la perfección / Neuronal Embryonic Development: A Pathway from Proliferation to Perfection

El desarrollo neurológico humano requiere una serie de pasos que permitan orientar, regular y diferenciar los diversos componentes cerebrales, para así garantizar, de una manera bastante precisa, la correcta organización y funcionamiento de las estructuras neuronales. La neurogénesis está clásicamente dividida en cuatro etapas consecutivas: proliferación, migración, diferenciación y maduración. En los humanos, estas ocurren desde la tercera semana de gestación hasta la vida adulta y precisan de un complejo grupo de paquetes genéticos, así como de algunos factores asociados, que se han ido descubriendo gracias a los avances en la biología molecular. El artículo es una revisión acerca del desarrollo neuroembriológico humano y los componentes genéticos más relevantes encontrados en la literatura.

The human neuronal development requires a number of concrete steps which lead to orientation, regulation and differentiation of several brain components. They must be done to guarantee, in a very precise way, the correct organization and functioning of the neuronal structures. Neurogenesis is commonly divided into four consecutive stages: proliferation, migration, differentiation and maturation. In humans, those stages take place since the third week of prenatal Iife until the adult Iife. They also require a complex group of genetic packs and associated molecular factors, most of which have been recen tly discovered by the molecular biology technology. A review was made about the human neuronal and embryological development and the most relevant genetic components described by the literature so far.

Células madre mesenquimales para la regeneración de tejidos: ¿Por qué siguen siendo una promesa sin cumplir? / Mesenchymal stem cells for tissue regeneration: ¿Why are they still an unfulfilled promise?

Desde su descripción inicial, hace ya más de 40 años, las células madre mesenquimales (MSC) fueron reconocidas como una importante alternativa para el manejo de enfermedades caracterizadas por la pérdida aguda o crónica de tejido, gracias a su capacidad de proliferación y diferenciación, lo cual les permitiría sustituir las células perdidas y de esta forma recuperar la estructura y función. Cada vez es más abundante la evidencia que sugiere el potencial de estas células para el manejo de un amplio grupo de enfermedades, al menos en modelos experimentales preclínicos. No obstante, esta capacidad no ha podido refrendarse contundente y consistentemente en ensayos clínicos. Con la presente revisión, se pretende presentar una visión del estado actual del desarrollo conceptual en torno a las capacidades terapéuticas de las MSC y un análisis crítico de algunos de los factores, que han impedido que estas sean una opción terapéutica usable en la práctica clínica diaria

Since they were initially identified more than 40 years ago, mesenchymal stem cells (MSCs) were recognized as an important therapeutic alternative for diseases characterized by acute or chronic loss of tissue, thanks to their proliferation and differentiation ability, which would allow the replacement of lost cells and their structural and functional recuperation. Evidence suggesting the therapeutic potential of these cells for a vast group of diseases increases day by day, at least in preclinical experimental models. However, clinical trials have been unable to obtain consistent and categorical results to demonstrate this capacity. This review aims to provide, an overview on the current status of the conceptual development on the therapeutic properties of MSCs, and a critical analysis of some factors which have hindered the application of this therapeutic option in daily clinical practice.

Metodologías utilizadas en la diferenciación de células madre mesenquimales a linaje neuronal / Methodologies used in the differentiation of mesenchymal stem cells to neuronal lineage

RESUMEN INTRODUCCIÓN: Las células madre mesenquimales son células con la capacidad de autorrenovarse y diferenciarse a linajes mesenquimales e inclusive a células de origen no mesenquimal, como las del tejido nervioso. Teniendo en cuenta la idoneidad de estas células para diferenciarse en neuronas, han sido utilizadas con propósitos terapéuticos debido a que son capaces de restaurar neuronas que se deterioran en diversas enfermedades neurodegenerativas. OBJETIVO: Informar y comparar los métodos más utilizados para inducir a las células madre mesenquimales a diferenciarse en neuronas, además de mencionar las ventajas y desventajas de cada una de estas. METODOLOGÍA: La primera metodología para inducir a la diferenciación neural fue utilizada en 1999 y a partir de ese momento, se han empleado compuestos químicos, factores de crecimiento, compuestos sintéticos, entre otros métodos para diferenciar este tipo de células a linaje neuronal. El problema radica en que algunas de estas metodologías son tóxicas para las células, costosos o presentan otro tipo de efecto colateral. CONCLUSIÓN: La elección de uno de estos métodos depende de los intereses y las condiciones con las que cuente cada investigador. Además, es indispensable conocer las falencias que tenemos en este campo de la investigación con el propósito de continuar con la búsqueda de alternativas que no tengan desventajas, si no por el contario, reúna todas las ventajas de los métodos aquí mencionados.

SUMMARY INTRODUCTION: Mesenchymal stem cells are cells with the ability to self-renew and differentiate into mesen-chymal lineages and even cells of non-mesenchymal origin, such as those of nerve tissue. Taking into account the suitability of these cells to differentiate into neurons, they have been used for therapeutic purposes since they are able to restore neurons that deteriorate in various neurodegenerative diseases. OBJECTIVE: To inform and to compare the methods most used to induce mesenchymal stem cells to differentiate into neurons and to mention the advantages and disadvantages of each of these. DEVELOPMENT: The first methodology to induce neural differentiation was used in 1999 and since then, chemical compounds, growth factors, synthetic compounds have been used, among other methods to differentiate this type of cells into neuronal lineage. The problem is that some of these methodologies are toxic to cells, expensive or have other side effects. CONCLUSION: The choice of one of these methods depends on the interests and the conditions that each researcher has. In addition, it is indispensable to know the shortcomings that we have in this field of research with the purpose of continuing with the search for alternatives that do not have disadvantages, if not by the contrary, gather all the advantages of the methods mentioned here.

Poros Nucleares y Función Celular en Epitelio Mamario / Nuclear Pores and Cellular Function

El presente artículo tiene como objetivo central evidenciar la interesante relación que se establece entre la función celular y el número de poros nucleares, relación que modula el activo intercambio nucleo-citoplasmatico en distintas etapas del ciclo celular de la estirpe HC11.

The main objective of this article is related to the study of different existing relationships between cellular function and the number of nuclear pores in order to explain the amount of nuclear-cytoplasmatic exchange through HC11 cell cycle stages.

Effects of nandrolone decanoate on the viability of muscle satellite cells during the differentiation process / Influencia del anabolizante decanoato de nandrolona en la viabilidad de las células satélites musculares en el proceso de diferenciación / Influência do anabolizante decanoato de nandrolona sobre a viabilidade de células satélites musculares em processo de diferenciação

Studies indicate that the anabolic nandrolone decanoate (Deca-Durabolin(r)) can modulate cell cycle regulation, but little is known about its effects on muscle cells. Anabolic steroids are used, especially by athletes, to improve muscle mass and performance in the practice of exercises. The aim of this study was to evaluate the effect of the anabolic Deca-Durabolin(r) on the proliferation of skeletal muscle precursor cells C2C12. Cells were grown in Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM), being supplemented with 10% Fetal Bovine Serum (FBS) and subjected to differentiation by the addition of 2% horse serum. They were incubated with anabolic at concentrations of 5, 10, 25 and 50 µM. The groups that received no anabolic or vehicle served as controls. The viability (proliferation) was evaluated by the MTT method (3-[4,5-Dimethylthiazol-2yl]-2,5-diphenyltetrazolium bromide; Thiazolyl blue) after one, three and five days of incubation. Three independent experiments were performed in each of the mentioned conditions, and the results were submitted to statistical analysis with significance level of p≤0.05 (ANOVA/Dunnett). Results showed no difference in viability between muscle cells treated with anabolic and the control cultures in all parameters. In conclusion, nandrolone, at the used concentrations, was not able to alter the viability of muscle C2C12 satellite cells...

Se utilizan los anabolizantes, en particular por atletas con el objetivo de aumentar la masa muscular y mejoría del desempeño. Este estudio tuvo como objetivo evaluar el efecto del anabolizante Deca- Durabolin(r) sobre la viabilidad (proliferación) de las células satélites musculares C2C12 inducidas a la diferenciación, imitando el proceso de reparación tras una lesión. Las células fueron cultivadas en medio Eagle modificado por Dulbecco (DMEM) suplementado con 10% de suero fetal bovino (SFB) y sometidas a diferenciación mediante la adición de 2% de suero de caballo y, simultáneamente, incubadas con el anabolizante en las concentraciones de 5 , 10 , 25 y 50 µM. En los grupos que no recibieron el anabolizante, ni el vehículo sirvió como controle . La viabilidad (proliferación) se evaluó después de uno, tres y cinco días, utilizando el método de MTT (3 - [4,5 - dimetiltriazol - 2 - il ] -2,5 difeniltetrazolio) . Se realizaron tres experimentos independientes, en cada condición citada, y los resultados sometidos al análisis estadístico con nivel de significación de p≤0,05% (ANOVA/Dunnett). Los resultados permitieron verificar que no hubo diferencia en la viabilidad entre células musculares tratadas con anabolizante e inducidas a diferenciación y culturas de controles que sólo fueron inducidas a diferenciación en todos los parámetros evaluados. En conclusión, el anabolizante decanoato de nandrolona, en las concentraciones evaluadas, no fue capaz de alterar la viabilidad de células musculares C2C12 durante el proceso de diferenciación...

Os anabolizantes são utilizados, especialmente por atletas, com o intuito de aumento da massa muscular e melhora do desempenho. Este estudo objetivou avaliar o efeito do anabolizante Deca-Durabolin(r) sobre a viabilidade (proliferação) de células satélites musculares C2C12 induzidas à diferenciação, mimetizando o processo de reparo após lesão. As células foram cultivadas em Meio Eagle Modificado por Dulbecco (DMEM) suplementado com 10% de Soro Fetal Bovino (SFB) e submetidas à diferenciação pela adição de 2% de soro de cavalo e concomitantemente incubadas com o anabolizante nas concentrações de 5, 10, 25 e 50 µM. Os grupos que não receberam o anabolizante nem o veículo serviram como controle. A viabilidade (proliferação) foi avaliada após um, três e cinco dias, utilizando o método de MTT (3-[4,5-dimetiltriazol-2-il]-2,5 difeniltetrazólio). Foram realizados três experimentos independentes, em cada condição citada, e os resultados submetidos à análise estatística com nível de significância de p≤0,05% (ANOVA/Dunnet). Os resultados permitiram verificar que não houve diferença na viabilidade entre células musculares tratadas com o anabolizante e induzidas à diferenciação e as culturas controles que somente foram induzidas à diferenciação, em todos os parâmetros avaliados. Em conclusão, o anabolizante decanoato de nandrolona, nas concentrações avaliadas, não foi capaz de alterar a viabilidade de células musculares C2C12 durante o processo de diferenciação...

Evaluación de la actividad antiproliferativa y proapoptótica de compuestos kauranos sobre líneas celulares de leucemia humana / Evaluation of the antiproliferative and proapoptotic activity of kauran compounds on human leukemia cell lines

En Venezuela y el mundo, el cáncer es la segunda causa de morbi-mortalidad, y la leucemia es uno de los tipos de cáncer que afecta a nuestra población. La principal características de las celulas linfoides y mieloides presentes en la leucemia es que son pocos funcionales y además no responden a las señales proapoptóticas. Por lo tanto, en la búsqueda de compuestos de mejor perfil terapéutico, se evaluó el efecto de compuestos de tipo seco ent-kauranos aislados de plantas terrestres en las lineas celulares jurka E6.1 y HL60 sobre el crecimiento celular a través del método colorimétrico del MTT, la inducción de apoptosis a través del uso de la microscopia confocal, la citometría de flujo y los micro arreglos de proteínas; y sobre el ciclo celular, la actividad de la vía del NFkB y la diferenciación celular también a través de la citometría de flujo. Se determino que el ácido de casacasina, y la caracasina, disminuyeron la proliferación cecular, indujeron el arresto del ciclo celular, provocaron la externalización de la fosfatidilserina y la activación de las capasas 3, 7, 8 y 9, a la vez que promovieron la disminución del potencial mitocondrial, incrementaron la expresión de las proteínas proapoptóticas en ambas líneas celulares, disminuyeron la activación de la vía de señalización del NFkB en la línea celular Jurkat E6.1, y ademas indujeron la expresión de la proteína CD40 e incrementaron la producción de especies reactivas de oxigeno en la línea celular HL60, por lo que estos compuestos ent-kauranos poseen un alto potencial anticancerígeno para la leucemia linfocítica aguda de células T y para la leucemia promielocítica

Ontogenia y fisoonomía del paisaje epigenético:un modelo general para explicarr sistemas en desarroloo / Ontogeny and Physiognomy of the Epigenetic Landscape: A General Model to Explain Developmental Systems

El paisaje epigenético es una metáfora gráfica propuesta por Conrad H. Waddington para explicar el desarrollo de los organismos mediante la imagen de un paisaje compuesto por una superficie ondulante con cimas y valles, que representan las vías por las cuales se desplazan las células del organismo en su proceso de diferenciación. C.H. Waddington, considerado como el padre de la epigenética, es notable por sus aportes teóricos, que incluyen las nociones de asimilación genética, la canalización del desarrollo y el epigenotipo. Estas ideas surgieron a partir de estudios experimentales en biología del desarrollo, los cuales resultaron en el descubrimiento del "organizador" en embriones de aves y, posteriormente, de fenocopias inducidas por factores ambientales en Drosophila. En el presente artículo se presenta una interpretación del paisaje epigenético y conceptos relacionados, que ponen en evidencia el poder heurístico de este modelo y su importancia para la biología contemporánea. Este trabajo es un homenaje a la vida de C. H. Waddington, cuya obra continúa siendo de gran actualidad.

The epigenetic landscape is a graphic metaphor proposed by Conrad H. Waddington to explain the development of organisms and their parts. It is depicted as a wavy surface with summits and descending valleys, representing the paths followed by cells along their differentiation process, as part of organismal development. Conrad H. Waddington, regarded as the father of epigenetics, stands out for his theoretical contributions, that include the notions of genetic assimilation, canalization of development and epigenotype. These ideas were inspired by experimental works in developmental biology, that lead to the discovery of the organizer in bird embryos, as well as environmentallyinduced phenocopies in Drosophila. In the current essay, I present an interpretation of the epigenetic landscape and related concepts that highlight the heuristic power of this model and its importance for contemporary biology. This work is a tribute to the life of C. H. Waddington, whose work is still of great significance.

La relación núcleo-citoplasmática en la diferenciación y transformación celular del epitelio mamario / The nucleo-cytoplasmic relationship in the differentiation and cellular transformation of the mammary epithelium

ANTECEDENTES: Las células pertenecientes a la línea HC11 son estimuladas tanto a proliferar mediante el Factor de Crecimiento Epidérmico, como a diferenciar estimuladas con dexametasona, insulina y prolactina, dando origen a los tipos celulares HC11 GM y HC11 IM, respectivamente. De igual manera cuando ellas son transfectadas con el oncogén ras generan Q6 GM y Q6 IM, células transformadas. Producto de ambos mecanismos estas células asumen distintas propiedades modificando tanto sus componentes como sus funciones, los cuales pueden ser cuantificados mediante técnicas morfométricas. OBJETIVO: Evidenciar en términos cuantitativos y morfológicos las variaciones experimentadas tanto por los núcleos como los citoplasmas y su correspondiente relación núcleo-citoplasmática (N/C) pertenecientes a células mamarias de la línea HC11 con el decorrer de los mecanismos de diferenciación y de transformación celular. MÉTODO: Se estudió a nivel de microscopia electrónica de transmisión los tipos celulares en proceso de diferenciación y transformación, cuantificando variaciones de la relación núcleo-citoplasmática y su respectiva funcionalidad. RESULTADOS: Se evidencian diferencias estadísticamente significativas referentes a las áreas nucleares y citoplasmáticas pertenecientes a estos tipos celulares. CONCLUSIÓN: Las células del epitelio mamario en proceso de diferenciación como de transformación, presentan diferentes valores en su relación N/C hecho que responde a funcionalidades específicas en cada tipo celular.

BACKGROUND: Cells of the HC11 line are stimulated to proliferate using the Epidermic Growth Factor, and to differentiate with dexamethasone, insulin and prolactin, giving rise to cell types HC11 GM and HC11 IM, respectively. Likewise when they are transfected with the ras oncogen they generate Q6 GM and Q6 IM transformed cells. As a result of these two mechanisms, these cells assume different properties, in which both their components and their functions are modified. The modifications can be quantified by morphometric techniques. OBJECTIVE: To show in quantitative and morphological terms the variations effected in both the nuclei and the cytoplasms, and the corresponding nuclear-cytoplasmic ratio of mammary cells of the HC11 line, under the effects of cellular differentiation and transformation mechanisms. METHOD: The cell types undergoing differentiation and transformation processes were studied by transmission electron microscope, permitting quantification of variations in the nuclear-cytoplasmic ratio and its relation with the respective functions. RESULTS: Statistically significant differences were found in the nuclear and cytoplasmic areas of these cell types. CONCLUSION: cells of the mammary epithelium undergoing differentiation and transformation processes present different values for their nuclear-cytoplasmic ratio, and this responds specific functions in each cell-type.

El factor de crecimiento epidérmico y la diferenciación celular del epitelio mamario / Epidermal growth factor and mammary epithelial differentiation

El objetivo de este artículo es presentar una revisión relativa a evidenciar las características generales, estructura y funcionalidad de los factores de crecimiento con especial énfasis en precisar el rol que ejerce el factor de crecimiento epidérmico (EGF) como agente generador del proceso de diferenciación celular en el epitelio mamario.

The objective of this article is to present a review referred to general characteristics, such as structure and functionality of the growth factors, particularly those related to the Epidermal Growth Factor (EGF), as a responsible generator agent of cell differentiation at the mammary epithelial level.

Aislamiento y caracterización de células "stem" mesenquimales de médula ósea humana según criterios de la Sociedad Internacional de Terapia Celular / Isolation and characterization of mesenchymal stem cells from human bone marrow according to the criteria of the International Society for Cellular Therapy / Isolamento e caracterização de células-tronco mesenquimais de medula óssea humana de acordo com critérios da Sociedade Internacional de Terapia Celular

La médula ósea (MO) es una fuente importante para el aislamiento de células "stem" mesenquimales (CSM) útiles en terapias de regeneración tisular e inmunomodulación. Objetivo. Aislar y caracterizar células "stem" mesenquimales obtenidas de MO según los criterios exigidos por la Sociedad Internacional de Terapia Celular. Materiales y métodos. Se recolectaron muestras de MO de donantes voluntarios que asistían al Servicio de Ortopedia del Hospital Universitario San Ignacio, Bogotá (Colombia). Se evaluaron las características morfológicas por microscopia invertida y se determinó el inmunofenotipo por citometría de flujo. Se establecieron protocolos de inducción adipogénica, osteogénica y condrogénica mediante el uso de medios de cultivo de específicos y se evaluó la diferenciación utilizando tinciones de aceite rojo 'O', fosfatasa alcalina y safranina, respectivamente. Resultados. Se recolectaron 24 muestras de MO de pacientes sometidos a reemplazo total de cadera (volumen de muestra de MO: 5 - 45 ml). Se aislaron células con morfología fibroblastoide a partir de 21 muestras de MO (eficiencia de aislamiento: 87,5 %). En la determinación inmunofenotípica (CSM de MO) no existe diferencia estadísticamente significativa entre los antígenos hematopoyéticos (CD34 y CD45, p>0,05). Entre el antígeno hematopoyético CD45 y los antígenos mesenquimales (CD13, CD44, CD73, CD90, CD105, HLA-I y HLA-DR) existe diferencia estadísticamente significativa (p=0.006). La tinción de aceite rojo 'O' reveló la presencia de adipocitos multiloculares, en la inducción osteogénica se observaron centros de mineralización y la condrogénesis fue positiva para la coloración con safranina. Conclusión. A partir de MO se aislaron satisfactoriamente y caracterizaron CSM según los criterios internacionales exigidos.

Bone marrow (BM) is an important source for isolating mesenchymal stem cells (MSC) useful in immunomodulation and tissue regeneration therapies. Objective. To isolate and characterize mesenchymal stem cells obtained from BM meeting the requirements of the International Society for Cellular Therapy. Materials and methods. BM samples were collected from volunteer donors attending the Orthopedics Service of the San Ignacio University Hospital (Bogotá, Colombia). Morphological characteristics were evaluated by inverted microscopy and the immunophenotype was determined by flow cytometry. Protocols were developed for adipogenic, osteogenic and chondrogenic differentiation using the Oil Red O, alkaline phosphatase and safranin stains, respectively. Results. We collected 24 samples of BM from patients with total hip replacement (volume of BM sample: 5-45 ml). Cells with a fibroblastoid morphology were isolated from 21 BM samples (isolation efficiency: 87.5%). No statistical significant differences were found between the hematopoyetic antigens (CD34 and CD45, p>0.05) in the immunophenotypic evaluation (of MSC from BM); on the contrary, there were differences (p=0.006) between the hematopoyetic antigen CD45 and the mesenchymal antigens (CD13, CD44, CD73, CD90, CD105, HLA-I, and HLA-DR). Oil Red O stain revealed the presence of multilocular adipocytes, in the osteogenic induction we observed localized mineralization nodules, and chondrogenesis was positive as revealed by the safranin stain. Conclusion. MSC were satisfactorily isolated from BM and characterized according to the international standards.

A medula óssea (MO) é uma importante fonte para o isolamento de células-tronco mesenquimais (CTM) úteis na terapia de regeneração dos tecidos e imunomodulação. Objetivo. Isolar e caracterizar células-tronco mesenquimais obtidas de MO de acordo com os critérios exigidos pela Sociedade Internacional de Terapia Celular. Materiais e métodos. Foram coletadas amostras de MO de doadores voluntários que assistiram ao Serviço de Ortopedia do Hospital Universitário de São Ignacio, Bogotá (Colômbia). As características morfológicas foram avaliadas por microscopia invertida, e o imunofenótipo foi determinado por citometria de fluxo. Foram estabelecidos protocolos de indução adipogênica, osteogênica e condrogênica usando meios de cultura específicos e a diferenciação foi avaliada por meio da coloração com o "Oil Red O", fosfatase alcalina e safranina, respectivamente. Resultados. Foram coletadas 24 amostras de MO em pacientes submetidos â artroplastia total do quadril (volume de amostra de OM: 5 - 45 ml). Foram isoladas células com morfologia fibroblastóide a partir de 21 amostras de MO (eficiência de isolamento: 87,5%). Na determinação immunofenotípica (CTM de MO), não existe diferença estatisticamente significativa entre os antigénios hematopoiéticos (CD34 e CD45, p>0,05). Entre o antigénio hematopoiético CD45 e os antigénios mesenquimais (CD13, CD44, CD73, CD90, CD105, HLA-I e HLA-DR), existe diferença estatisticamente significativa (p =0,006). A coloração com o "Oil Red O" revelou a presença de adipócitos multiloculares, na indução osteogénica observaram-se centros de mineralização e a condrogênese foi positiva para a coloração com safranina. Conclusão. A partir de MO foram isoladas satisfatoriamente e caracterizaram CTM segundo os critérios internacionais exigidos.

Morfometría del nucleolo en la diferenciación celular del epitelio mamario / Nucleolus morphometry in the cellular differentiation of mammary epithelium

Antecedentes: El proceso biológico de diferenciación celular es la traducción de múltiples procesos nucleares y citoplasmáticos que determinan cambios complejos y fundamentales en la ultraestructura, bioquímica y fsiología celular, los cuales pueden ser cuantifcados mediante técnicas morfométricas. Objetivo: Evidenciar en términos cuantitativos y morfológicos las variaciones experimentadas por los nucleolos pertenecientes a células mamarias de la línea HC11 tanto normales como en mecanismo de diferenciación. Método: Se estudió a nivel de la microscopía electrónica de transmisión los tipos celulares en etapa de proliferación (HC11 GM) en comparación con células en estadio de diferenciación (HC11 IM), cuantifcando las variaciones de los nucleolos y su relación con estructuras involucradas en síntesis proteica. Resultados: Se evidencian diferencias estadísticamente signifcativas referentes al área, volumen y longitud entre los nucleolos pertenecientes al tipo celular normal-proliferante y el que se encuentra en proceso de diferenciación. Conclusión: Las células mamarias en proceso de diferenciación presentan una notable disminución de sus nucleolos, y sus ribonucleoproteínas constitutivas generarán básicamente ribosomas adheridos al retículo endoplasmático rugoso, sintetizando proteínas de exportación.

Background: The biological process of cell differentiation is the traslation of multiple nuclear and cytoplas-mic processes that determine complex and fundamental changes in ultrastructure, biochemistry and cell physiology, which can be quantifed using morphometric techniques. Objective: To show in quantitative and morphological terms changes experienced by the nucleolus belonging to HC11 line mammary cells both, in proliferating and differentiation process. Methods: A study at the level of transmission electron microscopy of cell types in stage of cell proliferation in comparison with stage of differentiation was designed to quantify variations of nucleolus and their relation to structures involved in protein synthesis. Results: Marked differences in the area, volume and length of the nucleolus were found between normal-proliferating cell types and those in mechanism of differentiation. Conclusion: The mammary cells in differentiation process show a dramatic decline in its nucleoli and their ribonucleoproteins generate basically ribosomes attached at endo-plasmic reticulum, synthesizing export proteins.

Synthesis of pyruvate: ferredoxin oxidoreductase and alcohol dehydrogenase E enzymes during Giardia intestinalis excystation / Síntesis de las enzimas de piruvato, oxidorreductasa de ferredoxina y deshidrogenasa E de alcohol durante el desenquistamiento (excystacion) de Giardia intestinalis

Introduction. Giardia intestinalis is a unicellular parasite of worldwide distribution. It causes an intestinal illness known as giardiasis, and it is probably the earliest diverging eukaryotic microorganism. Previously, changes have been reported in the expression of mRNAs at several stages of the life cycle; however specific enzymatic activity changes have not been explored. Objective. The expression of pyruvate ferredoxin oxidoreductase (PFOR) and alcohol dehydrogenase E (ADHE) enzymes was measured in cyst and trophozoite stages, and during the excystation process.Materials and methods. Recombinant proteins were generated for PFOR and ADHE to be used as antigens in the production of polyclonal antibodies for the detection of native proteins by Western Blot. The enzymatic activity of ADHE and glutamate dehydrogenase (GDH) was evaluated by spectrophotometric assays. Results. PFOR (139 kDa) and ADHE (97 kDa) proteins were detected in trophozoites, but not in cysts. During excystation, ADHE protein was detected after the first phase of induction, but the PFOR protein appeared only after the second phase. This indicated that both proteins were synthesized during excystation, although at different times. ADHE enzymatic activity was present only in trophozoites and not in cysts whereas GDH activity was detected in both stages. Conclusion. These results conclusively showed that PFOR and ADHE enzymes were translated during the excystation process and is strong evidence that active protein synthesis was occurring during excystation.

Introducción. Giardia intestinalis es un parásito unicelular diseminado mundialmente. Causa una enfermedad intestinal conocida como giardiosis y, probablemente, es el microorganismo eucarionte más tempranamente divergente.Objetivo. En el presente estudio se determinó la expresión de las enzimas de piruvato oxidorreductasa ferredoxina (PFOR) y deshidrogenasa E de alcohol (ADHE) en los estadios de quiste y trofozoíto, y durante el proceso de desenquistamiento (excystacion). Previamente se habían demostrado cambios en sus ARNm.Materiales y métodos. Se generaron proteínas recombinantes de PFOR y ADHE que fueron usadas como antígenos para la producción de anticuerpos policlonales. Éstos se emplearon para la detección de las proteínas nativas por Western blot. Evaluamos la actividad enzimática de ADHE y de la glutamato deshidrogenasa (glutamate dehydrogenase, GDH) por ensayos espectrofotométricos. Resultados. Las proteínas PFOR (139 kDa) y ADHE (97 kDa) se detectaron en trofozoítos, pero no en quistes. Durante el desenquistamiento (excystacion), la proteína ADHE se detectó sólo después de la primera fase de inducción y la proteína PFOR sólo después de la segunda fase. Esto indica que ambas proteínas son sintetizadas durante el desenquistamiento (excystacion), aunque en un momento diferente. La actividad enzimática de ADHE está presente sólo en los trofozoítos y no en los quistes, mientras que la actividad de la enzima GDH se detectó en trofozoítos y quistes. Conclusiones. Nuestros resultados muestran de forma concluyente que las enzimas PFOR y ADHE son traducidas en el proceso de desenquistamiento (excystacion) y esto demuestra que existe un proceso activo de síntesis de proteínas durante él.

Organogénesis del sistema digestivo del pez Pterophylum scalare (Perciformes: Cichlidae)

Organogenesis of the digestive system of the fish Pterophylum scalare (Perciformes: Cichlidae). There is little knowledge on the development of the angelfish Pterophyllum scalare (Liechtenstein 1823), a species of economical and biological value for inland water ecosystems. We recorded net development time of each organogenetic stage, cumulative time and characteristic structure differentiation for each stage. We found eight organogenetic stages for the digestive system, between the gastrula and the total re-adsorption of the vitelin sack. The total time for the organogenetic development of the digestive system was 119 hours and 44 minutes. Rev. Biol. Trop. 56 (4): 1857-1870. Epub 2008 December 12.

Debido a la poca información sobre el desarrollo de sistemas orgánicos en el pez Pterophylum scalare (Liechtenstein 1823) estudiamos yiempo neto de desarrollo de cada estadio de la organogénesis, tiempo acumulado y diferenciación de estructuras características de cada estadio. Se obtuvo un total de 8 estadios en la organogénesis del sistema digestivo, comprendidos entre la gástrula y la reabsorción total del saco vitelino. La duración de la organogénesis del sistema digestivo fue de 119 horas 44 minutos.

ISOLATION OF HUMAN BONE MARROW MESENCHYMAL STEM CELLS AND EVALUATION OF THEIR OSTEOGENIC POTENTIAL

Human bone marrow mesenchymal stem cells (hBMSCs) comprise a cell population capable of self-renewal and multilineage differentiation commonly isolated from bone marrow aspirates of large bones. Their osteogenic potential has been extensively exploited for the biological evaluation of scaffolds or biomaterials with applications in bone tissue engineering. This work aimed to isolate hBMSCs from femoral heads of patients undergoing total hip arthroplasty and to evaluate their osteogenic potential. Briefly, the trabecular bone was extracted and mechanically disaggregated; the released cells were cultured and non-adherent cells were removed after 4 days. The osteogenic potential was evaluated at the fifth passage after 14 and 20 days of induction, comparing cultures with and without osteogenic supplements, via Alizarin red staining and the quantification of the gene expression levels of the osteogenic markers collagen type I, osteonectin and bone sialoprotein through real-time RT-PCR. The obtained hBMSCs presented a stable undifferentiated phenotype after prolonged cell culture, matrix mineralization capabilities and expression of osteoblast phenotype upon osteogenic induction. The three markers were up-regulated in cultures under osteogenic conditions and 2 fold differences in their expression levels were found to be significant for the onset of the differentiation process. The obtained hBMSCs may have applications on the in vitro evaluation of the osteoinductivity of different biomaterials, bioactive molecules or tissue engineering scaffolds.

Las células madre mesenquimatosas de médula ósea humana (abreviadas hBMSCs) constituyen una fuente de células auto-renovables con alto potencial de diferenciación, comúnmente aisladas a partir de los aspirados medulares en huesos largos. Su diferenciación hacia el linaje osteogénico, por ejemplo, ha sido ampliamente utilizada para la evaluación biológica de biomateriales o matrices con aplicaciones en la ingeniería de tejidos óseos. El objetivo de este trabajo consistió en aislar hBMSCs a partir de la cabeza femoral de pacientes sometidos a artroplastia total de cadera, así como evaluar su potencial osteogénico. Brevemente, se extrajo el hueso esponjoso y se disgregó mecánicamente; las células desprendidas se cultivaron y las células no adherentes se eliminaron luego de 4 días. El potencial osteogénico se evaluó en la quinta generación de cultivo, mediante ensayos de diferenciación a 14 y 20 días donde se compararon cultivos con y sin suplementos osteogénicos. La evaluación se realizó mediante tinción con Alizarina Roja y la cuantificación de los niveles de expresión génica de los marcadores osteogénicos colágeno tipo I, osteonectinca y sialoprotiena ósea mediante RT-PCR en tiempo real. Las hBMSCs obtenidas presentaron un fenotipo no-diferenciado estable, así como la capacidad de mineralizar la matriz extracelular y expresar un fenotipo similar al osteoblasto durante la inducción osteogénica. Los tres marcadores evaluados se sobre-expresaron en los cultivos en condiciones osteogénicas, y se encontró que cambios hasta de 2X en sus niveles de expresión son relevantes para el desarrollo del proceso de diferenciación. El modelo de hBMSCS presentado podría ser utilizado para la evaluación in vitro de la osteoinductividad de diferentes biomateriales, moléculas bioactivas o matrices para ingeniería de tejidos.