ABSTRACT
Abstract Background: In artificial insemination, chicken egg yolk is added to bovine semen to protect it during the cryopreservation process, although it contains substances that can affect the microbiological quality and metabolism of sperm. Objective: To evaluate post-thaw quality of bovine cryopreserved semen added with centrifuged and non-centrifuged egg yolk, low-density lipoproteins (LDL), and trehalose (T). Methods: Ten ejaculates from five bulls were cryopreserved under the treatments T1: pure egg yolk (PEY) at 20% v/v, T2: centrifuged egg yolk (CEY) at 20% v/v, T3: LDL at 8% v/v, T4: T at 100 mM, and T5: T at 100 mM plus LDL at 8% v/v (TLDL). Spermatic motility and kinetics, functional membrane integrity (FMI), structural membrane integrity (SMI), sperm vitality (SV) and abnormal morphology (AM) were assessed using the Sperm Class Analyzer (SCA®) system, hypoosmotic test (HOST), SYBR/PI probes, and eosin-nigrosin staining, respectively. A completely randomized design was used. Normal distribution of the variables was validated through the Kolmogórov- Smirnov test. A generalized linear model was used to determine sources of variation. Means were compared using the Tukey test. Results: Inclusion of CEY or LDL had a similar effect on sperm protection, and were superior for motility, kinetics and membrane integrity compared to the other treatments (p<0.05). CEY was superior for progressive motility (p<0.05). The cryoprotective action of LDL was similar to TLDL for motility and kinetics, SMI, SV, and AM (p<0.05). Inclusion of PEY and T resulted in the lowest semen quality (p<0.05). The use of T resulted in a reduction in FMI and SMI (p<0.05). No differences in AM between treatments were found (p>0.05). Conclusions: Egg yolk can be replaced by centrifuged egg yolk or low-density lipoproteins in the freezing extender used for bovine semen used in artificial insemination.
Resumen Antecedentes: la yema de huevo de gallina se agrega al semen bovino usado en inseminación artificial para protegerlo durante el proceso de criopreservación, aunque ésta tiene sustancias que pueden afectar el metabolismo espermatico y la calidad microbiológica del semen. Objetivo: evaluar la calidad post-descongelación del semen bovino criopreservado agregado con yema de huevo centrifugada y no centrifugada, lipoproteínas de baja densidad (LDL) y trehalosa (T). Métodos: diez eyaculados de cinco toros se criopreservaron bajo los tratamientos, T1: yema de huevo pura (PEY) al 20% v/v, T2: yema de huevo centrifugada (CEY) al 20% v/v, T3: LDL al 8% v/v, T4: T a 100 mM, y T5: T a 100 mM más LDL al 8% v/v (TLDL). La movilidad y la cinética espermática, la integridad funcional de la membrana (FMI), la integridad estructural de la membrana (SMI), la vitalidad espermática (SV) y la morfología anormal (AM), se determinaron mediante el sistema Sperm Class Analyzer (SCA®), la prueba hipoosmótica (HOST), las sondas SYBR/PI y la tinción con eosina-nigrosina, respectivamente. Se utilizó un diseño completamente al azar. La normalidad de las variables se validó mediante la prueba de Kolmogórov-Smirnov. Se utilizó un modelo lineal generalizado para determinar las fuentes de variación. Las medias de los tratamientos se compararon mediante la prueba de Tukey. Resultados: CEY y LDL tuvieron un efecto similar en la protección de los espermatozoides, siendo superiores a los demás tratamientos respecto a movilidad, cinética e integridad de la membrana (p<0,05). CEY fue superior para la movilidad progresiva (p<0,05). La acción crioprotectora de LDL fue similar a TLDL para movilidad y cinética, SMI, AM y SV (p<0,05). PEY y T resultaron en la más baja calidad seminal (p<0,05). El uso de T redujo la FMI y la SMI (p<0,05). No se encontraron diferencias en AM entre los tratamientos (p>0,05). Conclusiones: la yema de huevo puede reemplazarse por yema de huevo centrifugada o por lipoproteinas de baja densidad en el diluyente de congelación usado para semen bovino destinado a inseminacion artificial.
Resumo Antecedentes: a gema de ovo de galinha tem sido utilizada com a finalidade de proteger o sêmen bovino durante o processo de criopreservação, embora tenha substâncias que possam afetar o metabolismo dos espermatozóides e a qualidade microbiológica do sêmen utilizado para a inseminação artificial. Objetivo: avaliar a qualidade pós-descongelamento do sêmen bovino criopreservado com gema de ovo centrifugada e não centrifugada, lipoproteínas de baixa densidade (LDL) e trealose (T). Métodos: dez ejaculados de cinco touros foram criopreservados sob os tratamentos, T1: gema de ovo pura (PEY) 20% v/v, T2: gema de ovo centrifugada (CEY) 20% v/v, T3: LDL 8% v/v, T4: T 100 mM e T5: T 100 mM mais LDL 8% v/v (TLDL). Mobilidade e cinética espermática, integridade funcional da membrana (FMI), integridade estrutural da membrana (SMI), vitalidade espermática (SV) e morfologia anormal (AM) foram determinadas por o sistema Sperm Class Analyzer (SCA®), teste hiposmótico (HOST), coloração com SYBR/PI e eosina-nigrosina, respectivamente. Um design completamente aleatoriedade foi usado. A normalidade das variáveis foi validada pelo teste de Kolmogorov-Smirnov. Um modelo linear generalizado foi utilizado para determinar as fontes de variação. As médias dos tratamentos foram comparadas pelo teste de Tukey. Resultados: T2 (CEY) e T3 (LDL) tiveram efeito similar na proteção espermática, sendo superior aos demais tratamentos para mobilidade, cinética e integridade da membrana (p<0,05). T2 (CEY) foi superior para mobilidade progressiva (p<0,05). A ação crioprotetora de T3 (LDL) foi semelhante à T5 (TLDL) para motilidade e cinética, SMI, SV e AM (p<0,05). T1 (PEY) e T4 (T) tiveram a menor qualidade seminal (p<0,05). O uso de T4 (T) produziu uma redução na SMI e FMI (p<0,05). Não foram encontradas diferenças na AM entre os tratamentos (p>0,05). Conclusões: a gema de ovo pode ser substituída por gema de ovo centrifugada ou lipoproteínas de baixa densidade no diluente de congelamento de sêmen bovino.
ABSTRACT
Se evaluó la eficacia de la técnica de estimulación vibratoria del pene (EVP) para obtener semen en quince especímenes de S. leucopus bajo condiciones de cautiverio, en cuatro diferentes sitios en Colombia. Adicionalmente, se estandarizó la técnica EVP y se determinaron algunas características seminales (color, viscosidad, volumen, pH, motilidad, morfología, viabilidad, concentración y morfometría espermática). Se empleó clorhidrato de ketamina a dosis entre 5 y 10 mg/kg I.M. para la sedación previa al muestreo a fin de disminuir el estrés de la captura y del procedimiento, ya que los especímenes no estaban acostumbrados o entrenados para procesos de obtención de muestras biológicas. En el uso de la técnica se logró un 52,6% de éxito en la combinación de 90 Hz de vibración y 1 mm de amplitud; el tiempo de eyaculación promedio fue de 12:35±6:42 minutos; el pH, 7,5±0,26; el volumen, 24±18,82 µl; la motilidad masal fue de 3,7/5,0±0,5; la motilidad individual progresiva, 97,1±45,4%; la concentración espermática fue de 87.617±21.327 x 10(4) spz/µl; la normalidad fue del 69,3±11,06% y la viabilidad del 93,7±4,9%. Las características seminales fueron similares a las reportadas en otras especies de callitríchidos y obtenidas por la misma técnica. Se empleó satisfactoriamente el diluyente Talp-Hepes y el cual no afectó las características antes descritas. La EVP es un método innovador, replicable, viable y seguro para la obtención de semen en S. leucopus y a otros callitríchidos bajo sedación con ketamina en condiciones de cautiverio.
The efficacy of the penile vibratory stimulation (PVS) for semen collection was evaluated in fifteen (15) specimens of white-footed tamarin (S. leucopus), held in captivity, at four different locations. Additionally the technique was standardized for semen collection in this species and seminal characteristics, color, viscosity, volume, pH, motility, morphology, viability, sperm concentration and morphometry were also evaluated. Ketamine hydrochloride was used at a dose between 5 to 10 mg/Kg for sedation and semen sampling. The technique was successful in 52.6% of the animals using the combination of 90 Hertz of vibration and 1 mm of amplitude; time of ejaculation was 12:3 ±6:42 minutes. Seminal characteristics were: pH of 7.5±0.26; volume of 24±18.82 µl; masal motility of 3.7/5.0±0.5; progressive motility of 97.1±45.4%; sperm concentration of 87,617±21,327 x 10(4)spz/µl; normal morphology 69.3±11.06% and viability of 93.7±4.9%. Talp-Hepes extender was satisfactorily used and it did not appear to affect seminal characteristics. The PVS is an innovating, replicable, viable and safe method for obtain semen in S. leucopus and perhaps in other callitrichids under ketamine sedation and in captivity.