PCR em tempo real para detecção do vírus da doença de Aujeszky / Real time PCR for detection of Aujeszky's disease virus

O objetivo deste trabalho foi desenvolver uma PCR em tempo real (qPCR) para o diagnóstico rápido e sensível da doença de Aujeszky. Os iniciadores amplificaram um fragmento de 123 pares de base do gene codificante da glicoproteína D. A qPCR foi testada em 25 amostras de cérebro de suíno positivas e 85 amostras negativas para DA no isolamento viral e na soroneutralização. A sensibilidade analítica foi calculada com acréscimo de um isolado brasileiro do SuHV-1 titulado em amostras de cérebro de suíno negativas na soroneutralização e na PCR. A técnica apresentou sensibilidade analítica de 10-0,5 TCID50/50µL. A qPCR foi capaz de distinguir reações inespecíficas devido a dímero de oligonucleotídeos iniciadores ou amplificações, além do alvo designado (evitando, assim, os falso-positivos), e de obter resultados rápidos.

The aim of this study was to validate a low-cost real-time PCR for a quick and sensitive diagnosis of the disease. The fluorofore used was a DNA intercalating agent, one of the cheaper detection systems. Primers amplified a 123 base pairs fragment of the gene coding for glycoprotein D. PCR was tested on 25 samples of pig brain positive for AD and 85 samples negative in viral isolation and serum neutralization. The detection limit was calculated on samples of pig brain contaminated with a Brazilian isolate of SuHV-1. The technique had a detection limit of 10-0,5 TCID50/50µL. PCR was able to distinguish nonspecific reactions due to primer dimers (thus avoiding false positives) and get faster results.

Estratégia para erradicação de focos da Doença de Aujeszky em suínos no Estado de São Paulo / Strategy for eradication of outbreaks of Aujeszky's Disease in pigs in the São Paulo state

Este trabalho teve como objetivo a avaliação de duas estratégias para erradicação de focos da doença de Aujeszky (DA) em suínos criados comercialmente no estado de São Paulo. Foram identificados dois focos da enfermidade, no município de Cerqueira César, um apresentando somente animais sororreagentes (Foco 1) e outro, casos clínicos da doença (Foco 2). Foram avaliadas duas estratégias de erradicação, uma por eliminação dos sororreagentes e outra por despovoamento gradual, com acompanhamento durante 12 meses. A erradicação por eliminação dos sororreagentes foi aplicada no Foco 1 e compreendeu na identificação por exame sorológico, isolamento e abate dos positivos; vacinação dos negativos e reposição no plantel com animais provenientes de propriedade livre. No início dos trabalhos, 68% do plantel era positivo e ao final 51%. No Foco 2 utilizou-se o despovoamento gradual, onde todos os animais foram enviados ao abate sanitário, realizado vazio sanitário nas instalações, seguido pelo repovoamento com animais livres. Esta última estratégia, nas condições desse trabalho, mostrou-se a mais eficaz, pois erradicou a DA.

This study aimed to evaluate strategies for eradication of Aujeszky Disease (AD) virus infection after outbreaks in swine production systems in Sao Paulo state. Two outbreaks were identified in Cerqueira César county. The first outbreak coursed with seropositive pigs (outbreak 1), and the other with pigs presenting clinical signs (outbreak 2). In order to eradicate the infection, two sanitary strategies were tested: (1) eradication of animals with positive serology and (2) by gradual depopulation, with a follow up of 12 months. The serology eradication was used in outbreak 1, and included the identification, isolation and slaughter of positive animals; followed by vaccination of negative animals and replacement with pigs from farms free of the disease. At the beginning, 68% of pigs were positive, and at the end it declined to 51%. In outbreak 2, gradual depopulation was used, and all animals were sent to sanitary slaughter, until facilities were completely empty. Afterwards, animals free of the disease were used for repopulation. It was seen that the last strategy was more effective because eradicated the infection.

Development of a polymerase chain reaction assay for the detection of pseudorabies virus in clinical samples

Aujeszky's disease, also known as pseudorabies causes severe economic losses in swine industry and affects the pig husbandry all over the world. The conventional diagnostic procedure is time-consuming and false-negative results may occur in submissions from latently infected animals. The development, optimization and evaluation of a polymerase chain reaction (PCR) assay are presented for the diagnosis of pseudorabies infection. This assay was based on the amplification of a highly conserved viral gD gene fragment. PCR products of the expected size were obtained from PRV strains. Non-specific reactions were not observed when a related herpesvirus, other porcine DNA genome viruses and uninfected cells were used to assess PCR. The analytical sensitivity of the test was estimated to be 1.34 TCID50/50 uL. The analysis of tissue homogenate samples from naturally infected animals proved the potential usefulness of the method for a rapid disease diagnosis from field cases. A rapid, sensitive and specific PCR-based diagnostic assay to detect pseudorabies virus in clinical samples is provided.

A doença de Aujeszky, também conhecida como pseudo-raiva, causa perdas econômicas graves na indústria suína e afeta a criação de suínos em todo o mundo. O procedimento de diagnóstico convencional é demorado, podendo ocorrer resultados falso-negativos em animais infectados de forma latente. Este estudo apresenta o desenvolvimento, otimização e avaliação de um ensaio de Reação de Polimerase em Cadeia para o diagnóstico da pseudo-raiva. O ensaio baseou-se na amplificação do fragmento genético viral gD altamente conservado. Os produtos da PCR de tamanho esperado foram obtidos a partir de isolados de PRV. Não foram observadas reações inespecíficas quando foram testados herpes-vírus relacionados, outros vírus DNA de suínos e células não infectadas. A sensibilidade analítica estimada do teste foi 1,34 TCID50/50 uL. A análise de homogenatos feitos com tecidos de animais naturalmente infectados mostrou que o método é útil para o diagnóstico rápido da doença no campo, sendo um ensaio rápido, sensível e específico para detectar o vírus da pseudo-raiva em amostras clinicas.

Development of a polymerase chain reaction assay for the detection of pseudorabies virus in clinical samples / Desenvolvimento de um ensaio de reação de polimerase em cadeia para detecção do vírus da pseudo-raiva em amostras clínicas

Aujeszky's disease, also known as pseudorabies causes severe economic losses in swine industry and affects the pig husbandry all over the world. The conventional diagnostic procedure is time-consuming and false-negative results may occur in submissions from latently infected animals. The development, optimization and evaluation of a polymerase chain reaction (PCR) assay are presented for the diagnosis of pseudorabies infection. This assay was based on the amplification of a highly conserved viral gD gene fragment. PCR products of the expected size were obtained from PRV strains. Non-specific reactions were not observed when a related herpesvirus, other porcine DNA genome viruses and uninfected cells were used to assess PCR. The analytical sensitivity of the test was estimated to be 1.34 TCID50/50 uL. The analysis of tissue homogenate samples from naturally infected animals proved the potential usefulness of the method for a rapid disease diagnosis from field cases. A rapid, sensitive and specific PCR-based diagnostic assay to detect pseudorabies virus in clinical samples is provided.

A doença de Aujeszky, também conhecida como pseudo-raiva, causa perdas econômicas graves na indústria suína e afeta a criação de suínos em todo o mundo. O procedimento de diagnóstico convencional é demorado, podendo ocorrer resultados falso-negativos em animais infectados de forma latente. Este estudo apresenta o desenvolvimento, otimização e avaliação de um ensaio de Reação de Polimerase em Cadeia para o diagnóstico da pseudo-raiva. O ensaio baseou-se na amplificação do fragmento genético viral gD altamente conservado. Os produtos da PCR de tamanho esperado foram obtidos a partir de isolados de PRV. Não foram observadas reações inespecíficas quando foram testados herpes-vírus relacionados, outros vírus DNA de suínos e células não infectadas. A sensibilidade analítica estimada do teste foi 1,34 TCID50/50 uL. A análise de homogenatos feitos com tecidos de animais naturalmente infectados mostrou que o método é útil para o diagnóstico rápido da doença no campo, sendo um ensaio rápido, sensível e específico para detectar o vírus da pseudo-raiva em amostras clinicas.

Vacinas com marcadores antigênicos contra o vírus da rinotraqueíte infecciosa bovina e o vírus da doença de Aujeszky{ review] / Vaccines with antigenic markers against bovine herpesvírus type-1 and pseudorabies vírus: [review]

Vacinas contra o herpes vírus bovino tipo-1 (IBRV, vírus da rinotraqueíte infecciosa) e o herpesvírus suíno (PRV, vírus da doença de Aujeszky) têm sido amplamente utilizadas em vários países para minimizar as perdas associadas à essas infecções. As vacinas tradicionais, no entanto, induzem uma resposta humoral indistinguível da resposta à infecção natural, o que não permite a distinção entre animais vacinados dos infectados naturalmente. Isto tem dificultado o estabelecimento de medidas de controle e erradicação dessas enfermidades. Nos últimos anos, a manipulação genética desses vírus tem permitido a obtenção de mutantes com marcadores antigênicos específicos. A estratégia consiste na deleção de uma ou mais glicoproteínas do envelope viral que não são essenciais para a replicação do vírus e o uso desses mutantes como vacinas. A utilização de um teste sorológico específico para a glicoproteína deletada permite a distinção entre animais vacinados dos infectados com o vírus de campo. A utilização de vacinas com marcadores antigênicos, também chamadas de vacinas diferenciais, tem sido a base de programas de controle e erradicação da doença de Aujeszky em vários países e começa a ser utilizada no controle da rinotraqueíte infecciosa bovina. Este artigo apresenta uma breve revisão sobre as bases moleculares e biológicas das vacinas diferenciais para o IBRV e PRV, assim como possíveis aplicações dessas vacinas no controle dessas enfermidades no Brasil em um futuro próximo.

Vaccination has been widely used to minimize the economic losses caused by bovine herpesvírus type-1 (IBRV) and pseudorabies virus (PR V) infections. The traditional vaccines, however, induce a humoral response that is indistinguishable from that induced by the natural infection. The impossibility of distinction between vaccinated and naturally infected animais has impaired the establishment of control and eradication programs for these diseases. In the last years, the genetic manipulation of infectious agents has allowed the development of mutants that are detective in expression of specific envelope glycoproteins. The strategy consists of deletion of one or more non-essential viral envelope glycoproteins and the use of these mutants as vaccines. By using a serologic test that is specific for the deleted glycoprotein, it is possible to differentiate the vaccinated animais from those that have been naturally infected. The use of these genetically engineered vaccines, also known as marker vaccines, has been the basis for control and eradication programs of Aujeszky's disease in several countries and has recently begun to be utilized for IBRV. This article presents a brief review on the molecular and biological basis of the differential vaccines against IBRV and PRV and the possible applications of such vaccines in the control of these infections in the near future in Brazil.