Humoral immunity is not altered in overweight pregnant Crioulo mares / Imunidade humoral não é alterada em éguas Crioulas gestantes com sobrepeso

Both pregnancy and obesity can influence significant changes in the immune system. On this basis, the present study proposes to evaluate the humoral immune response of overweight pregnant mares in response to a commercial vaccine. Thirty pregnant Crioulo mares were separated according to body condition score (BCS) into overweight (BCS≥7/9) or lean-control (BCS= 5-6/9). In each group, the animals were subdivided into vaccinated and controls. The mares were vaccinated against EHV-1 in two doses spaced 21 days apart and had their blood collected monthly, for five months, for antibody evaluation. Both vaccinated groups had an increase in specific neutralizing antibodies after the vaccine. However, after the second dose, there was no increase in antibodies in any of the groups. Vaccinated overweight and lean-control mares did not differ at any time point. Therefore, this study demonstrated that obesity does not influence the humoral immune response in pregnant Crioulo mares.(AU)

Tanto a gestação quanto a obesidade podem influenciar o desenvolvimento de alterações significativas no sistema imune, portanto, o presente estudo teve como objetivo avaliar a resposta imune humoral de éguas gestantes com sobrepeso em resposta a uma vacina comercial. Trinta éguas Crioulas gestantes foram separadas de acordo com o escore de condição corporal (ECC) em éguas com sobrepeso (ECC≥7/9) e éguas controles (ECC=5-6/9) e, ainda, em cada grupo, os animais também foram separados em vacinados e controles. As éguas foram vacinadas contra o EHV-1 em duas doses com intervalo de 21 dias, sendo realizadas coletas de sangue mensalmente durante cinco meses para avaliação de anticorpos neutralizantes. Ambos os grupos vacinados tiveram aumento de anticorpos neutralizantes específicos após a vacina, porém, após a segunda dose, não foi observado aumento de anticorpos em nenhum dos grupos. Nenhuma diferença foi observada entre éguas vacinadas com sobrepeso e as éguas controles em nenhum momento. Assim, este estudo demonstrou que a obesidade não é um fator que influencia a resposta imune humoral de éguas Crioulas gestantes.(AU)

Ganciclovir attenuates the respiratory disease induced by Equid alphaherpesvirus 1 in rabbits / O ganciclovir atenua a doença respiratória produzida pelo alfaherpesvírus equino 1 em coelhos

Equid alphaherpesvirus 1 (EHV-1) is an important pathogen of horses, associated with respiratory, neurological disease and abortions. As vaccination is not always effective, anti-herpetic therapy may represent an alternative to prevent the losses caused by the infection. We herein investigated the activity of ganciclovir (GCV), an anti-herpetic human drug, in rabbits experimentally infected with EHV-1. Thirty-days-old New Zealand rabbits were allocated in three groups (6 animals each) and submitted to different treatments: G1 (non-infected controls), G2 (inoculated with EHV-1) - 107 TCID50 intranasally - IN) and G3 (inoculated IN with EHV-1 and treated with GCV - 5mg/kg/day for 7 days) and monitored thereafter. All animals of G2 developed systemic signs (moderate to severe apathy, anorexia), ocular discharge and respiratory signs (serous to mucopurulent nasal discharge), including mild to severe respiratory distress. Viremia was detected in all rabbits of G2 for up to 11 days (mean duration = 6.5 days). One animal died after severe respiratory distress and neurological signs (bruxism, opistotonus). In addition, these animals gained less weight than the control (G1) and GCV-treated rabbits (G3) from days 4 to 14pi (p<0.05). The clinical score of rabbits of G2 was statistically higher than the other groups from days 3 to 6pi (p<0.05), demonstrating a more severe disease. In contrast, G3 rabbits did not present systemic signs, presented only a mild and transient nasal secretion and gained more weight than G2 animals (p<0.05). In addition, viremia was detected in only 3 rabbits and was transient (average of 2.3 days). Thus, administration of GCV to rabbits inoculated IN with EHV-1 resulted in an important attenuation of the clinical disease as demonstrated by full prevention of systemic signs, maintenance of weight gain and by drastic reduction in viremia and in the magnitude of respiratory signs. These results are promising towards further testing of GCV as a potential drug for anti-herpetic therapy in horses.(AU)

O alfaherpesvírus equino 1 (EHV-1) é um importante patógeno de equinos, associado com doença respiratória, neurológica e abortos. Como a vacinação nem sempre é eficaz, a terapia anti-herpética pode representar uma alternativa para prevenir as perdas causadas pela infecção. Para tal, investigou-se a atividade do ganciclovir (GCV), uma droga anti-herpética de uso humano, em coelhos infectados experimentalmente com o EHV-1. Coelhos da raça Nova Zelândia com 30 dias de idade foram alocados em três grupos (6 animais cada) e submetidos a diferentes tratamentos: G1 (controles não infectados), G2 (inoculados com o EHV-1) - 107 TCID50 intranasal - IN) e G3 (inoculados IN com o EHV-1 e tratados com GCV - 5mg/kg/dia por 7 dias), e monitorados posteriormente. Todos os animais do G2 desenvolveram sinais sistêmicos (apatia moderada a grave, anorexia), secreção ocular e sinais respiratórios (secreção nasal serosa a mucopurulenta), incluindo dificuldade respiratória leve a grave. Viremia foi detectada em todos os coelhos do G2 por até 11 dias (duração média = 6,5 dias). Um animal morreu após dificuldade respiratória grave e sinais neurológicos (bruxismo, opistótono). Além disso, esses animais ganharam menos peso que os coelhos controle (G1) e tratados com GCV (G3) entre os dias 4 e 14pi (p<0,05). O escore clínico de coelhos do G2 foi estatisticamente maior que os demais grupos dos dias 3 a 6pi (p<0,05), demonstrando uma doença mais grave. Em contraste, os coelhos do G3 não apresentaram sinais sistêmicos, apresentaram apenas secreção nasal leve e transiente e ganharam mais peso que os animais do G2 (p<0,05). Além disso, a viremia foi detectada em apenas 3 coelhos e foi transitória (média de 2,3 dias). Assim, a administração de GCV a coelhos inoculados com EHV-1 resultou em uma importante atenuação da doença clínica, como demonstrado pela prevenção completa de sinais sistêmicos, manutenção do ganho de peso e pela redução drástica da viremia e da magnitude dos sinais respiratórios. Estes resultados são promissores para testes adicionais com o GCV para potencial terapêutico anti-herpética em equinos.(AU)

Detection of equine herpesvirus 1 and 4 and its association with latency-associated transcripts in naturally infected horses in Colombia / Detección de los herpesvirus equinos 1 y 4 y su relación con transcriptos asociados a la latencia en caballos infectados naturalmente en Colombia

ABSTRACT Objective. Determine the presence of antibodies and viral genomes of EHV-1 and EHV-4, as well as to detect the presence of latency associated transcripts (LATs) in a selected population of Colombian horses. Materials and methods. Serum samples, submandibular lymph nodes and trigeminal ganglion were obtained from 50 horses and analyzed. Sera were evaluated for the presence of antibodies against EHV-1 and EHV-4 while tissues were initially evaluated for the presence of viral genome by nPCR. Finally, samples were used for the detection of LATs through RT-PCR. Results. In general, 6/50 samples showed antibodies to EHV-1 and 44/50 were positive for EHV-4. As for viral genome detection, 10/50 samples were positive for EHV-1 and 30/50 were positive for EHV-4; in addition, 22/35 horses positive for EHV DNA were positive for LATs. The use of these tests led to eight possible combinations of results. Conclusions. The evidence used shows that horses can have simple viral infection, co-infections with both viruses, latency due to the presence of LATs and the simultaneous presence of LATs and viral genome replication at a given time. It contributes to the understanding of the behavior of the disease in Colombia and calls attention to the importance of implementing complementary diagnoses to the serology for the control of these viruses.

RESUMEN Objetivo. Determinar presencia de anticuerpos y genoma viral de EHV-1 y EHV-4, como también detectar la presencia de transcriptos asociados a latencia (LATs) en una población seleccionada de caballos colombianos. Materiales y métodos. Muestras de suero, nódulos linfáticos submandibulares y ganglio trigémino se obtuvieron de 50 caballos y fueron analizadas. Los sueros se evaluaron para la presencia de anticuerpos contra EHV-1 y EHV-4 mientras que los tejidos se evaluaron inicialmente para la presencia de genoma viral por nPCR. Finalmente, las muestras se emplearon para la detección de LATs a través de RT-PCR. Resultados. En general, 6/50 muestras mostraron anticuerpos para EHV-1 y 44/50 fueron positivos para EHV-4. En cuanto a la detección del genoma viral, 10/50 muestras fueron positivas para EHV-1 y 30/50 fueron positivas para EHV-4; además, 22/35 caballos positivos para DNA de EHV fueron positivos para LATs. El empleo de estas pruebas llevó a ocho posibles combinaciones de resultados. Conclusiones. Se confirma la presencia de estos virus en la población equina colombiana. Las pruebas empleadas demuestran que los caballos pueden tener infección viral simple, co-infecciones con ambos virus, estado de latencia debido a la presencia de los LATs y presencia simultánea de LATs y de replicación de genoma viral en un momento dado. Se aporta al entendimiento del comportamiento de la enfermedad en Colombia y se llama la atención sobre la importancia de implementar diagnósticos complementarios a la serología para el control de estos virus.

In vitro activity of six antiviral drugs against equid alphaherpesvirus type 1 indicates ganciclovir as promising drug for in vivo studies / A atividade in vitro de seis drogas antivirais contra o alfaherpesvírus equino tipo 1 indica que o ganciclovir é uma droga promissora para estudos in vivo

ABSTRACT: Equid alphaherpesvirus type 1 (EHV-1) is distributed worldwide and is a major agent of abortion, respiratory and neurological disease in horses. No specific treatment is available for EHV-1 infection, yet the potential of antiviral therapy has been explored. In this study we investigated the in vitro activity of Acyclovir, Ganciclovir, Foscarnet, Famciclovir, Vidarabina and Cidofovir against EHV-1. For this, the MTT test was performed, in which all the tested drugs showed no toxicity up to 200μg/mL. Subsequently, different drug concentrations were submitted to viral plaque reduction assays in cell culture. The selectivity index (SI) of the compounds was determined using the cytotoxic concentration for 50% of cells (CC50), obtained by MTT, and effective drug concentration to inhibit by 50% the number of viral plaques (EC50). Ganciclovir (SI: 490; EC50: 1.9 μg/mL) was the most efficient and safest drug against EHV-1, followed by Cidofovir (SI: 150, EC50: 5.7μg/mL), Acyclovir (SI: 37.4, EC50: 22.2μg/mL), Famciclovir (SI: 25.1, EC50: 24.5μg/mL), Vidarabine (SI: 12.2, EC50: 40.9μg/mL) and Foscarnet (SI: 6.9, EC50: 49.5 μg/mL), respectively. These results indicated that Ganciclovir (followed by Cidofovir), is a promising candidate for use in in vivo experiments.

RESUMO: O alfaherpesvírus equino tipo 1 (EHV-1) está amplamente distribuído nos rebanhos equinos de todo o mundo e é um dos principais agentes causadores de abortos, doença respiratória e neurológica em equinos. Ainda não há tratamento específico para a infecção pelo EHV-1 em equinos, mas o potencial da terapia antiviral tem sido investigado. Neste trabalho, foi investigada a atividade anti-herpética in vitro dos fármacos Aciclovir, Ganciclovir, Foscanet, Famciclovir, Vidarabina e Cidofovir frente ao EHV-1. Para isso, foi realizado o teste de MTT, em que todas as drogas não apresentaram citotoxicidade até a dose de 200μg/mL. A seguir, diferentes concentrações dos fármacos foram submetidas ao teste de redução de placas virais em cultivo celular. O índice de seletividade (IS) dos compostos foi determinado usando a concentração citotóxica para 50% dos cultivos celulares (CC50), obtida pelo MTT, e pela concentração dos fármacos efetiva para inibir em 50% o número de placas virais (EC50). O Ganciclovir (IS: 490; EC50: 1,9μg/mL) foi o mais eficiente e seguro frente ao EHV-1, seguido pelo Cidofovir (IS: 150; EC50: 5,7 μg/mL), Aciclovir (IS: 37,4; EC50: 22,2μg/mL), Famciclovir (IS: 25,1; EC50: 24,5μg/mL), Vidarabina (IS: 12,2; EC50: 40,9μg/mL) e Foscarnet (IS: 6,9; EC50: 49,5μg/mL). Estes resultados indicam que o Ganciclovir constitui-se em um candidato para uso em experimentos in vivo.

Epidemiological and clinical aspects of equine Herpesvirus encephalitis infection in horses that died with neurological signs from Minas Gerais state, Brazil / Aspectos epidemiológicos e clínicos da infecção neurológica associada ao herpesvírus eqüino 1 (ehv-1) em cavalos que morreram com sinais nervosos no Estado de Minas Gerais, Brasil

During the period of October 2004 until February 2006, 75 samples of central nervous system (CNS) obtained from horses that died with neurological signs in the state of Minas Gerais were sent to the Laboratory of Compared Virology in ICB/UFMG for diagnosis of equine herpesviruses. All samples were previously diagnosticated negative for rabies virus by the Laboratório de Saúde Animal of the Instituto Mineiro de Agropecuária (IMA). Among the analyzed samples, 39 (52%) were positive for the equine herpesvirus 1(EHV-1) through the polymerase chain reaction assay (PCR). In most cases, the histopathological examination of the CNS revealed a mild vasculitis with perivascular mononuclear cuffing, congestion, arterial thrombosis and degeneration of nervous tissue. The positive CNS samples for EHV-1 were obtained from horses. sampled from 30 municipalities of Minas Gerais state. The cases occurred in an isolated form in different periods of the year, not presenting a seasonal character. The clinical course duration was acute, varying between one and four days. The most frequently observed neurological signs were ataxia, unsteadiness in the hind limb, paralysis of hind limbs and recumbency. According to information provided by IMA, the infections caused by EHV-1 were as frequent as the ones caused by rabies virus in horses of Minas Gerais state during the studied period. Hence, it became important to include EHV-1 encephalitis in the differential diagnosis from other diseases of the central nervous system in horses of Minas Gerais state.

Durante o período de Outubro de 2004 a Fevereiro de 2006, 75 amostras de sistema nervoso central (SNC) oriundas de eqüinos que morreram com sinais neurológicos no estado de Minas Gerais foram enviadas ao Laboratório de Virologia Comparada no ICB/UFMG para o diagnóstico de herpesvírus eqüino. Essas amostras foram previamente diagnosticadas negativas para o vírus da raiva através dos testes de imunofluorescência direta e inoculação em camundongos,no Laboratório de Saúde Animal (LSA) do Instituto Mineiro de Agropecuária (IMA). Dentre as amostras analisadas, 39 (52%) foram positivas para o herpesvírus eqüino 1 (EHV-1) através da técnica de reação em cadeia pela polimerase (PCR). Na maioria dos casos, o exame histopatológico do SNC revelou uma discreta vasculite com infiltrado perivascular de células mononucleares, congestão, trombose arterial e degeneração do tecido nervoso central. As amostras de SNC positivas para o EHV-1 foram coletadas de eqüinos oriundos de 30 municípios de Minas Gerais. Os casos de EHV-1 ocorreram de forma isolada não apresentando caráter sazonal. Na maioria dos casos(71,8%), a evolução dos sinais clínicos foi aguda, sendo que os sinais clínicos observados com mais freqüência foram ataxia, instabilidade dos membros posteriores, paralisia dos membros posteriores e decúbito. De acordo com informações relatadas pelo IMA, as infecções causadas pelo EHV-1 foram tão freqüentes como as infecções causadas pelo vírus da raiva em eqüinos no estado de Minas Gerais durante o período estudado. Portanto, torna-se importante a inclusão da encefalite pelo EHV-1 no diagnóstico diferencial de outras doenças do SNC de eqüinos no estado de Minas Gerais.