ABSTRACT
Objective: this study aimed to evaluate the LINE-1 transposon inserted in c-myc gene as a specific genetic alteration in cells of spontaneous canine Transmissible Venereal Tumor (TVT) with either lymphocytoid or plasmacytoid phenotypes. Methods: tumoral biopsies from 35 dogs were collected by puncture or exfoliation. Polymerase Chain Reaction (PCR) was carried out with primers myc.s and LINE. A, specific to the LINE-1 segment to detect the presence of LINE-1/c-myc molecular marker. Results: sequence alignment of DNA samples from lymphocytoid and plasmacytoid TVT cells did not show polymorphisms, and the comparison with sequences from the GenBank identified them as a LINE-1/c-myc rearrangement. Conclusions: considering the aggressive nature of the plasmacytoid phenotype, there is no apparent relation between LINE-1/c-myc and the malignancy of TVT. Further studies are needed to establish molecular differences associated with the aggressiveness of the various phenotypes of canine TVT.
Objetivo: evaluar la expresión del trasposón LINE-1 insertado en el oncogén c-myc como una alteración genética específica en células de Tumor Venéreo Transmisible canino espontáneo con fenotipos linfocitoideos o plasmocitoideos. Métodos: se tomaron muestras citológicas de 35 caninos naturalmente afectados por Tumor Venéreo Transmisible (TVT), separándolas en dos grupos de acuerdo al fenotipo predominante. La identificación del marcador molecular LINE-1/c-myc fue posible mediante la técnica de Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) usando los primers myc.s y LINE. A, específicos para el segmento LINE-1. Resultados: el resultado del alineamiento de las secuencias obtenidas a partir del DNA de cada uno de los fenotipos de TVT no presentó variación entre ellos y al compararlas con el alineamiento de otras secuencias depositadas en el GenBank, pudo observarse que se trata de un reordenamiento LINE- 1/c-myc. Conclusiones: teniendo en cuenta la naturaleza agresiva del fenotipo plasmocitoide, se estableció que no hay polimorfismo genético entre los grupos analizados, siendo necesario realizar nuevos estudios tendientes a establecer diferencias moleculares asociadas con la agresividad de los diferentes fenotipos del TVT canino.
Objetivo: foi avaliado o elemento de transposição LINE-1 inserido no gene c-myc como alteração genética específica nas células do TVT espontâneo canino nos grupos fenotípicos previamente classificados como linfocitóide e plasmocitóide. Métodos: amostras da lesão de 35 cães foram colhidas por punção ou esfoliação. Para identificar o marcador molecular LINE-1/c-myc nas amostras foi utilizada a técnica de Reação em Cadeia da Polimerase empregando-se os primers myc.s e LINE. A, específicos para o segmento LINE-1. Resultados: o resultado do alinhamento das sequências obtidas das amostras de DNA das células de TVT linfocitóide e plasmocitóide não apresentou polimorfismos e, por meio do alinhamento com outras sequências depositadas no GeneBank, identificou-se que trata-se do rearranjo LINE-1/c-myc. Conclusões: parece não haver relação entre este aspecto molecular analisado com a agressividade do tumor.
ABSTRACT
Hasta la fecha, no existen mecanismos eficientes de control de la malaria, una de las enfermedades infecciosas más importantes del mundo. En las últimas décadas, la transformación genética de los mosquitos transmisores de la malaria ha sido propuesta como una alternativa para su control. Para ello, además del desarrollo de técnicas para la introducción de DNA foráneo en células germinales de mosquitos y la identificación de genes capaces de bloquear o reducir la transmisión de los parásitos a humanos, es necesario el desarrollo de métodos eficientes para la introducción y fijación de los genes refractarios a la malaria en las poblaciones naturales de mosquitos. Se ha sugerido para tales fines, el uso de elementos de transposición debido a las características biológicas de invasión y propagación en genomas eucariotas que presentan. En esta tesis se propuso analizar los elementos de transposición presentes en el genoma del mosquito Anopheles gambiae, uno de los principales vectores de la malaria en el mundo. Los resultados presentados se encuentran divididos en tres partes, primeramente la descripción de AnoTExcel, una base de datos con información detallada de los elementos de transposición presentes en el genoma de Anopheles gambiae. Por otra parte, a partir de esta base se identificaron y caracterizaron elementos nuevos, no detectados previamente en ningún genoma. Por último, se analizaron elementos representativos de las diferentes clases de elementos de transposición desde una perspectiva evolutiva. También se propuso el análisis de redes (Network analysis) para inferir las interrelaciones entre elementos de transposición pertenecientes a la misma familia.
Até hoje não existem mecanismos eficientes de controle da malaria, uma das doenças infecciosas mais importantes do mundo. Nas últimas décadas, a transformação genética dos mosquitos transmissores tem sido proposta como uma alternativa para o controle de esta doença. Para isso, além do desenvolvimento de técnicas para a introdução de DNA em células germinaisdos mosquitos e da identificação de genes capazes de bloquear ou reduzir atransmissão de parasitas aos humanos, é necessário o desenvolvimento demétodos eficientes para a introdução e fixação de genes refratários à malarianas populações naturais de mosquitos. O uso de elementos de transposição temsido sugerido para tais fins pelas características biológicas de invasão epropagação em genomas eucariotas que presentão estes elementos. Na presente tese, analisaram-se os elementos de transposição presentes no genoma do mosquito Anopheles gambiae, um dos principais vetores da malaria no mundo. Os resultados apresentados se encontram divididos em três partes,primeiramente a descrição de AnoTExcel, uma base de dados com informação detalhada dos elementos de transposição presentes neste genoma. Por outra, a partir desta base, foram identificados e caracterizados elementos novos, não detectados previamente em nenhum genoma. Por último, foram analisados elementos representativos pertencentes às diferentes classes de elementos detransposição desde uma perspectiva evolutiva e foi proposta uma análise deredes (Network analysis) para inferir as inter-relações entre elementos detransposição pertencentes à mesma família.
Up today, there are no efficient mechanisms for the control of Malaria, one of the most important diseases in the world. In the last decades, the genetic transformation of the malaria vectors have been proposed as an alternative. For achieving so, besides the development of techniques for the introduction of foreign DNA into the mosquitoes germinal cells and the identification of genes able to block or reduced the parasites transmission to human, the development of efficient methods for the introduction and fixation of the refractory genes intothe mosquitoes natural populations is needed. In this regard, the use oftransposable elements has been suggested as a driver system due to their biological characteristics of eukaryotic genomes invasion and propagations. In this thesis the analysis of the transposable elements in the genome of Anopheles gambiae, one of the most important vectors of malaria, has been proposed. The results are divided in three parts, first of all a description of AnoTExcel, a database with detailed information of the transposable elements present in themosquito genome. The characterization of Novel elements that have not beendescribed before is also described. Last, an evolutionary analysis of representative elements from different classes and families of elements has been performed. Finally, we have also proposed a network analysis for inferring the relationships between elements within the same family.