Validación de un ensayo inmunoenzimático tipo ELISA para cuantificar niveles de antitoxina diftérica en suero humano / Validation of an ELISA-type immune-enzymatic test to quantify levels of diphtheria antitoxin in human serum

Introducción: La difteria aún persiste en numerosos países. En Cuba, estudios realizados en diferentes grupos etarios han demostrado que existen niveles no protectores de antitoxina diftérica en la población, por lo que es necesario contar con métodos que permitan la estimación serológica de la inmunidad poblacional. La cuantificación de anticuerpos contra antígenos vacunales como la toxina diftérica es además un método útil, rápido y económico para evaluar la respuesta inmune. Objetivo: Validar un ensayo inmunoenzimático tipo ELISA para cuantificar los niveles de antitoxina diftérica en suero humano. Material y Método: Se realizó un estudio experimental de desarrollo tecnológico, en el cual se determinaron los valores óptimos de las variables que influyen en el resultado de un ensayo inmunoenzimático heterogéneo indirecto para la cuantificación de antitoxina diftérica, desarrollado en el laboratorio de Inmunología del Centro Nacional de Genética Médica de Cuba. La curva de calibración se evaluó contra el estándar de la OMS (Diphtheria Antitoxin Human Serum 00/496). Se realizó la validación analítica del método estandarizado. Resultados: Los coeficientes de variación intraensayo e interensayo fueron inferiores a 10 por ciento y 20 por ciento, respectivamente. En la exactitud y selectividad se encontraron valores de recobrado entre 90 y 110 por ciento. El paralelismo entre la curva estándar y las muestras estudiadas presentó un coeficiente de variación menor o igual a 10 por ciento. El límite de cuantificación fue 0,015 UI/mL y el de detección 0,0039 UI/mL. Conclusiones: El resultado obtenido en la precisión, exactitud y selectividad del ensayo inmunoenzimático tipo ELISA desarrollado demostró que puede ser utilizado en la práctica clínica para cuantificar los valores de antitoxina diftérica en suero humano(AU)

Introduction: Diphtheria still persists in many countries. In Cuba, studies conducted in different age groups have demonstrated that there are non-protective levels of diphtheria antitoxin in the population, so it is necessary to have methods that allow the serologic survey of population immunity. The quantification of antibodies against vaccine antigens such as diphtheria toxin is also a useful, rapid and economic method to evaluate the immune response. Objective: To validate an ELISA-type immune-enzymatic test to quantify the levels of diphtheria antitoxin in human serum. Material and Method: An experimental study of technological development was carried out in the Immunology Laboratory of the National Medical Genetics Center, Havana, Cuba. The optimal values ​​of the variables that influence on the result of the indirect heterogeneous immune-enzymatic test for the quantification of diphtheria antitoxin were determined. The calibration curve obtained was evaluated against the WHO standard (Diphtheria Antitoxin Human Serum 00/496). The analytical validation of the standardized method was performed. Results: The intra-assay and inter-assay coefficients of variation were less than 10 percent and 20 percent, respectively. Recovery values ​​between 90 and 110% were found in accuracy and selectivity. The parallelism between the standard curve and the samples studied showed a coefficient of variation lower or equal to 10 percent. The limit of quantification was 0,015 IU/mL and the one of detection was 0,0039 IU/mL. Conclusions: The result obtained in the precision, accuracy and selectivity of the ELISA-type immune-enzymatic test developed and validated in the National Medical Genetics Center demonstrated that it can be used in the clinical practice to quantify the values ​​of diphtheria antitoxin in human serum(AU)

Prevalencia y significado clínico de los anticuerpos anti-SS-A(RO) en pacientes con enfermedades reumáticas autoinmunes sistémicas / Prevalence and clinical significance of anti-SS-A(RO) antibodies in patients with systemic autoimmune rheumatic diseases

Por la importancia diagnóstica que tiene la detección de los distintas especificidades de anticuerpos que permite distinguir síndromes reumáticos que se sobreponen en el plano clínico, se exploró su frecuencia en un grupo de 4 693 pacientes con enfermedades reumáticas autoinmunes sistémicas (SARDs) en el periodo entre el 10 de junio del 2010 al 10 de junio del 2016. Fueron estudiados con ANA screen, ANA combi e IMMUNOBLOTTING. Solo fueron positivos 277 (5,9 %), 250 del sexo femenino y 27 del sexo masculino. Existió una importante prevalencia de reactividad contra los anticuerpos anti-SS-A con 140 pacientes (50 %), seguido de los antinucleosoma con 97 (35 %) y los DNA ds con 72 (25 %), en el resto de los anticuerpos no existieron hallazgos importantes. Este estudio sugiere que para los pacientes con manifestaciones clínicas de enfermedades reumáticas autoinmunes sistémicas es necesario y útil la utilización de estas pruebas que, junto con la información clínica y en algunos casos histológica, puede ayudar a realizar un diagnóstico más preciso.

Due to the diagnostic importance of the detection of different antibody specificities that allows us to distinguish rheumatic syndromes that clinically overlap; we studied its prevalence in a group of 4 693 patients with systemic autoimmune rheumatic diseases In the period between June 10, 2010 and June 10, 2016. For that purpose we used ANA Screen and ANA Combi. 277 (5 %) were female and 250 male. There was a significant prevalence of anti-SS-A antibodies140 (50 %) followed by antinucleosome 97 (35 %) and DNAs of 72 (25 %), no significant results were obtained with the rest of the other antibodies. Our results suggest the usefulness of these tests in patients with clinical manifestations of systemic autoimmune rheumatic diseases together with the clinical and histological information that could help to make an accurate diagnosis.

Inmunoserología y métodos moleculares para el diagnóstico de Chagas: revisión sistemática rápida / Immunoserology and molecular techniques for diagnosis of Chagas´ disease: rapid systematic review / Imunoserologia e métodos moleculares para o diagnóstico de Chagas: revisão sistemática rápida

Con el objetivo de incrementar la precisión diagnóstica, la Organización Mundial de la Salud recomienda la realización de dos o más pruebas inmunoserológicas para el diagnóstico de la enfermedad de Chagas en etapa crónica. El objetivo de este trabajo fue realizar una revisión sistemática rápida acerca del desempeño de las técnicas inmunoserológicas y métodos moleculares en la población general. Se identificaron 178 estudios de los cuales fueron incluidos nueve. Las técnicas de ELISA mostraron la mayor sensibilidad (82-98%) y especificidad (96-100%). Los métodos rápidos mostraron valores de sensibilidad entre 88-93% y especificidad 97- 100%, mientras que los métodos moleculares (PCR) presentaron niveles muy variables de sensibilidad (22-92%) y especificidad (70-100%). Estos resultados muestran que las técnicas de ELISA cuentan con una sensibilidad y especificidad adecuadas. La PCR, al igual que los métodos rápidos, mostró una gran variabilidad en los resultados, debido principalmente a la heterogeneidad de la técnicas y profusión de métodos elaborados de manera in house.

In order to increase diagnostic accuracy, the World Health Organization recommends performing two or more immunoserological tests for the diagnosis of Chagas disease in chronic stage. The aim of this work was to make a rapid systematic review of the performance of immunoserological techniques and molecular methods in the general population. A total of 178 studies were identified, nine ofwhich were included. ELISA techniques showed the highest sensitivity (82-98%) and specificity (96-100%). Rapid methods presented values of sensitivity between 88-93% and 97-100% of specificity, while the molecular methods (PCR) showed highly variable levels of sensitivity (22-92%) and specificity (70-100%). These results indicate that ELISA techniques have adequate sensitivity and specificity. PCR, as well as rapid methods, showed great variability in the results, mainly due to the heterogeneity of the techniques and abundance of "in-house" methods.

Visando a aumentar a precisão do diagnóstico, a Organização Mundial da Saúde recomenda executar dois ou mais testes imunoserológicos para o diagnóstico na fase crônica da doença de Chagas. O objetivo deste trabalho foi fazer uma revisão sistemática rápida sobre o desempenho de técnicas imunoserológicas e métodos moleculares na população em geral. Foram identificados 178 estudos dos quais se incluíram nove. Técnicas de ELISA mostraram a maior sensibilidade (82-98%) e especificidade (96-100%). Métodos rápidos apresentaram valores de sensibilidade e especificidade de 88-93% e 97-100%, respectivamente enquanto que os métodos moleculares (PCR) tinham níveis extremamente variáveis de sensibilidade (22-92%) e especificidade (70-100%). Estes resultados mostram que as técnicas de ELISA possuem sensibilidade e especificidade adequadas. A PCR, bem como os métodos rápidos, mostrou grande variabilidade nos resultados, principalmente devido à heterogeneidade das técnicas e profusão de métodos desenvolvidos de modo in house.

Estandarización y validación de un ELISA para la cuantificación de antitoxina tetánica en suero humano / Standardization and validation of an ELISA for quantifying titanic antitoxin in human serum

Introducción: la cuantificación de antitoxina tetánica es útil para la evaluación de la respuesta inmune humoral frente a antígenos vacunales. Objetivo: desarrollar la estandarización y validación técnica de un ensayo de inmunoabsorción ligado a enzima (ELISA) de tipo indirecto para cuantificar antitoxina tetánica en suero humano. Material y Método: el estándar preparado para la curva del ensayo se calibró frente al preparado en el Instituto Finlay. Se normalizaron los indicadores óptimos para el desarrollo de cada paso de la técnica. Resultados y Discusión: durante la validación se alcanzó una buena precisión intraensayo e interensayo en todos los casos. Al evaluar el paralelismo el coeficiente de variación fue menor de 10%. El ensayo mostró una excelente exactitud, con valores de recuperación entre 90% y 110%. El límite de detección fue 0,002 UI/mL. La sensibilidad analítica alcanzada fue de 0,01 UI/mL. Conclusiones: el ensayo puede ser utilizado para la cuantificación de antitoxina tetánica en suero humano.

Introduction: the Titanic antitoxin quantification is useful to assess the immune response against vaccinal antigens. Objective: to develop a standardization and validation technique of the indirect ELISA to quantify titanic antitoxin in human serum. Materials and Methods: the standard preparing to the assay curve was calibrated front the preparing Finlay Institute. The optimal indicators were normalized to each technique step developed. Results: a good intra-assay precision was reach during validation in all cases. The coefficient of variation to parallelism was less than 10% and 110%. Detection limit was 0.002 UI/ ml. Analytic sensitivity reached was 0.01 UI/ ml. Conclusions: the assay may be used to quantify Titanic antitoxin in human serum.

Neosporosis y toxoplasmosis en la liebre europea (Lepus europaeus) en la provincia de La Pampa (Argentina) / Infectious diseases and reproductive status in european hare (Lepus europaeus) in La Pampa province (Argentina)

El objetivo de este trabajo fue determinar la prevalencia a Neospora caninum (Nc) y Toxoplasma gondii (Tg) y conocer el periodo reproductivo de la liebre europea (Lepus europaeus) en la provincia de La Pampa (Argentina). Para ello se muestrearon 106 liebres procedentes de acopiadores de la provincia de La Pampa. Los sueros fueron analizados por un ensayo inmunoenzimático de competición para determinar anticuerpos a Nc y para Tg se realizó una prueba de hemaglutinación indirecta. Se encontraron 66 hembras, de las cuales 13 estaban preñadas, y 40 machos (p=0,01). Sobre un total de 44 sueros analizados para Nc, 5 (11,4%) dieron positivo. De los 106 sueros estudiados para Tg ninguno fue positivo.

The objective of this study was to determine the prevalence of these diseases and to know the reproductive season of the European hare (Lepus europaeus) in the Province of La Pampa (Argentina). To that aim, 106 hares coming from different places from La Pampa province were sampled. .Nc antibody diagnosis was performed by means of a competitive enzimoimmunoassay (ELISA-c), and an hemo-agglutination indirect assay (HAI) for Tg were carried out to know the disease status. From the total of hares sampled, 40 were male, 66 female (p=0.01) and 13 (19.7%) of them were detected as pregnant. Nc sero-prevalence was 11.4% over a total of 44. From 106 sera analyzed by HAI no one was positive for Tg.