Efecto de la adrenomedulina cerebelosa frente al estrés agudo / Effect of cerebellar adrenomedullin during acute stress

La adrenomedulina (AM) es un péptido involucrado en la regulación cardiovascular. En el cerebelo, la densidad de los receptores de la AM se encuentra alterada durante la hipertensión, sugiriendo un posible papel del sistema adrenomedulinérgico cerebelar en la regulación de la presión arterial (PA). El objetivo del presente estudio fue evaluar el efecto funcional in vivo de la AM durante el estrés agudo, mediante la administración in situ de AM en el vermis cerebelar de la rata. Se emplearon ratas adultas normotensas Wistar Kyoto (WKY) y Sprague Dawley (SD) y ratas espontáneamente hipertensas (SHR) las cuales fueron anestesiadas y posteriormente canuladas en el vermis cerebelar. El estrés se indujo mediante el uso del estímulo eléctrico plantar (EEP). Los animales fueron divididos en grupos que recibieron AM (0,2 o 200 pmol/5μL) o vehículo (solución fisiológica, 5μL). La PA se determinó antes del experimento y después de la administración del tratamiento respectivo, seguida de la aplicación del EEP (100 V, 5 Hz, 10 mseg, durante 4 minutos). La PA se determinó mediante pletismografía digital no invasiva. Los resultados demuestran que la microinyección de AM (0,2 y 200 pmol) in situ en el vermis cerebeloso en ratas SD, WKY y SHR disminuye significativamente la respuesta presora frente al estrés inducido por el EEP, lo que sugiere que la acción hipotensora está mediada a través de la regulación del eflujo simpático. Estos hallazgos demuestran la participación de la AM cerebelosa en la regulación de la respuesta cardiovascu lar frente al estrés.

Adrenomedullin (AM) is a peptide involved in cardiovascular regulation. In the cerebellum, the density of AM receptors is altered during hypertension, suggesting a pos sible role of cerebellar adrenomedulinergic system in the regulation of blood pressure (BP). The aim of this study was to evaluate the functional role of AM during acute stress, by in situ administration of AM into the cerebellar vermis in rats. Adult normotensive Wistar Kyoto (WKY) and Sprague Dawley (SD) rats and spontaneously hypertensive rats (SHR), were anes thetized and their cerebellar vermis cannulated. Footshock was used as stressor. Animals were divided into groups that received either AM (0.2 and 200 pmol/5μL) or vehicle (physiological saline, 5μL). The BP was determined, using noninvasive digital plethysmography, before and after treatment, followed by footshock (100V, 5 Hz, 10 msec, for 4 minutes). The results show that microinjection of AM (0.2 and 200 pmol) in situ into the cerebellar vermis in SD, WKY and SHR rats, significantly decreased the pressor response induced by footshock stress, sugges ting that the hypotensive action is mediated through regulation of sympathetic outflow. Taken together, our results demonstrate a role of cerebellar AM in the regulation of cardiovascular response to stress.

Electrical stimulation in the bone repair of defects created in rabbit skulls / Estimulación eléctrica en la reparación ósea de defectos creados en cráneos de conejos

Electrical stimulation has been used in different conditions for tissue regeneration. The aim of this study was to analyze the tissue response of defects created in rabbit skulls to electrical stimulation. Two groups were formed, each with 9 New Zealand rabbits; two 5 mm defects were made, one in each parietal, with one being randomly filled with autogenous bone extracted as particles and the other maintained only with blood clotting. The rabbits were euthanized at 8 weeks and 15 weeks to then study the samples collected histologically. In the 8-week analysis bone formation was observed in the defects in the test and control filled with bone graft, whereas the defects with clotting presented a very early stage of bone formation with abundant connective tissue. At 15 weeks an advanced stage of bone regeneration was identified in the defects with bone graft, whereas no significant differences were found in the electrically stimulated defects. In conclusion, electrical stimulus does not alter the sequence of bone formation; new studies could help establish patterns and influences of the stimulus on bone regeneration.

La estimulación eléctrica ha sido empleada en diferentes condiciones para la regeneración de tejidos. El objetivo de esta investigación es analizar la respuesta tisular de defectos creados en cráneo de conejos a la estimulación eléctrica. Se formaron 2 grupos con 9 conejos de raza New Zealand cada uno; en ellos se realizaron dos defectos de 5 mm, uno en cada parietal, siendo aleatoriamente uno rellenado con el propio hueso autógeno extraído en forma de partículas y el otro mantenido solo con coagulo sanguíneo; se realizó la eutanasia a las 8 semanas y a las 15 semanas para luego estudiar histológicamente las muestras recolectadas. En el análisis de 8 semanas se observó formación ósea en los defectos test y control rellenados con injerto óseo mientras que los defectos con coagulo presentaron un estado muy precoz de formación ósea, observándose abundante tejido conectivo. A las 15 semanas se identificó un estado avanzado de regeneración ósea en los defectos con injerto óseo, donde no se apreció diferencias importantes en los defectos estimulados eléctricamente. Se concluye que el estimulo eléctrico no altera la secuencia de formación ósea; nuevos estudios podrían contribuir a establecer patrones e influencias del estimulo eléctrico en la regeneración ósea.

Fosfatasa alcalnna (alp) y runx2 en cultivos ceulares de osteoblastos estimulaados con campo eléctrcoo / Alkaline hosphattase (alp) and runx2 in cell cultures stiulated osteoblaasts electric field / Fosfatase alcainna (alp) e runx2 em cultivos celulares de osteoblastos estimulados com campo elétrcoo

El objeto de este estudio fue identificar el estímulo eléctrico que debe aplicarse en cultivos celulares de osteoblastos (Ob) para aumentar la expresión del gen de Fosfatasa Alcalina (ALP) y el factor de transcripción Runx2. Se cultivaron Ob de la American Type Culture Collection (ATCC) Ref. CRL 11372. Los cultivos se estimularon del día cinco, cuando las células presentaron confluencia, hasta el día ocho. El estímulo aplicado a cada grupo experimental fue de 100mV, 200mV, 300mV, 400mV y 500mV respectivamente, se cultivó un grupo control no estimulado con cada grupo experimental. El campo eléctrico se generó con corriente alterna (AC) y se aplicó mediante dos placas de aluminio ubicadas de forma lateral y paralela a los frascos de cultivo de 25cm2. Los niveles de expresión de mRNA se midieron con la técnica quantitative reverse transcription polymerase chain reaction (qRT-PCR). Con la aplicación de campo generado con AC aumentó la expresión del factor de transcripción RunX2 en proporción directa al aumento del voltaje aplicado. La expresión del gen de ALP fue inversamente proporcional a la aplicación del estímulo y se identificó una diferencia significativa entre la presencia y ausencia del estímulo, siendo mayor en ausencia del estímulo. El campo eléctrico generó una señal que puede aumentar o disminuir la expresión de los genes que median la formación de tejido óseo. En el caso de Runx2, favoreció la diferenciación de células mesenquimales a Ob con la consecuente actividad de remodelación y formación del tejido óseo.

The purpose of this study was to identify the electrical fields to be applied in osteoblast (Ob) cell cultures, in order to increase the expression of Alkaline Phosphatase (ALP) gene and the transcription factor Runx2. Ob cultured where from the American Type Culture Collection (ATCC) Ref CRL 11372. Cell Cultures received stimulation at day five, when they showed a confluent monolayer organization until day eight. The stimulus applied to each experimental group was 100mV, 200mV, 300mV, 400mV and 500mV respectively, a control group was cultured without stimulation. The electric field is generated with altern current (AC) and applied with two aluminum plates located parallel to 25cm2 culture flasks. The mRNA expression levels were measured by reverse transcription quantitative technique polymerase chain reaction (qRT-PCR). Aplication of AC increased expression of transcription factor RunX2 in direct proportion to the applied voltage. The ALP gene expression was inversely proportional to the stimulus. Electric field can increase or decrease the expression of genes that mediate the formation of bone tissue. Favoring differentiation of mesenchymal cells to Ob.

O objeto deste estudo foi identificar o estímulo elétrico que deve ser aplicado em cultivos celulares de osteoblastos (Ob) para aumentar a expressão do gene da Fosfatase Alcalina (ALP) e o fator de transcrição Runx2. Foram cultivados Ob da American Type Culture Collection (ATCC) Ref. CRL 11372. Os cultivos foram estimulados a partir do quinto dia, quando as células apresentaram confluência, até o oitavo dia. O estímulo aplicado a cada grupo experimental foi de 100mV, 200mV, 300mV, 400mV e 500mV respectivamente, cultivou-se um grupo de controle não estimulado com cada grupo experimental. O campo elétrico foi gerado com corrente alternada (CA) e aplicou-se mediante duas placas de alumínio localizadas de forma lateral e paralela aos frascos de cultivo de 25cm2. Os níveis de expressão de mRNA foram medidos com a técnica quantitative reverse transcription polymerase chain reaction (qRT-PCR). Com a aplicação do campo gerado com AC aumentou a expressão do fator de transcrição RunX2 em proporção direta ao aumento da voltagem aplicada. A expressão do gene de ALP foi inversamente proporcional à aplicação do estímulo e identificou-se uma diferença significativa entre a presença e ausência do estímulo, sendo maior na ausência do estímulo. O campo elétrico gerou um sinal que pode aumentar ou diminuir a expressão dos genes que mediam a formação de tecido ósseo. No caso de Runx2, favoreceu a diferenciação de células mesenquimais a Ob com a consequente atividade de remodelação e formação do tecido ósseo.