Atividade antifúngica de nanofibras de policaprolactona/nistatina: estudo in vitro e in vivo / Antifungal activity of polycaprolactone/nystatin nanofibers: in vitro and in vivo study

Este estudo avaliou a eficácia in vitro e in vivo de mantas de nanofibras (NF) de policaprolactona (PCL) incorporadas com nistatina (NIS) no tratamento da estomatite protética (EP) em modelos animais. NF foram sintetizadas com diferentes concentrações de NIS, totalizando quatro soluções: PCL puro, PCL/NIS 0,045 g, PCL/NIS 0,090 g e PCL/NIS 0,225 g. A liberação da NIS foi analisada por espectroscopia Ultravioleta-Visível. A capacidade das mantas de inibirem o biofilme de Candida albicans, principal fator etiológico da EP, dividindo-se cinco grupos (N=5) compostos por um grupo com controle de células de C. albicans e com PCL puro, além das três concentrações de NIS. A seguir, foi analisada a viabilidade celular em queratinócitos humanos (HaCat) por meio do teste colorimétrico de resazurina. Cinco grupos foram divididos (N=10): controle celular, PCL puro e as três concentrações de NIS. Em modelos animais de ratos Wistar albinos (N=18), dispositivos palatinos (DP) de resina acrílica foram confeccionados simulando próteses totais e utilizados para a indução da EP. Para isso, DP contaminados com C. albicans foram cimentados na região molar da cavidade bucal dos animais e permaneceram em boca por 48 h. Após esse período, os DP foram removidos e os animais foram divididos em três grupos: (C) controle; (B1) com tratamento por mantas de PCL/NIS 0,045 g e (B2) PCL/NIS 0,225 g, com N=6. Então novos DP, livres de contaminação, foram cimentados na cavidade oral dos animais e permaneceu por mais 48 h. Após esse período, os animais foram eutanasiados, a contagem de UFC/ mL foi realizada e os palatos foram coletados para a análise histológica. A curva padrão de NIS obtida apresentou R2 de 0,99. As três concentrações de NF apresentaram liberação de NIS, com pico no tempo de 6 h e valores de 66,26 µg/ mL para PCL/NIS 0,045 g, de 333,87 µg/ mL para PCL/NIS 0,090 g e 436,51 µg/ mL para PCL/NIS 0,225 g, constantes até o fim do experimento. Os grupos com NIS reduziram em 2,5 log10 de crescimento do biofilme fúngico em relação aos grupos sem tratamento, Controle e PCL, sem diferença estatística significativa. Não foi observada citotoxicidade nas células HaCat, com viabilidade celular de 93,7% para PCL/NIS 0,045 g, 72,6% para PCL/NIS 0,090 g e 72,4% para PCL/NIS 0,225 g. A indução da EP nos três grupos foi possível e, porém, sem redução significativa na contagem de UFC/ mL de C. albicans nos grupos B1 e B2. Na análise histológica do grupo C pôde-se observar infiltração de hifas de Candida na camada queratinizada, presença de células inflamatórias formando micro abscessos e um discreto infiltrado inflamatório no tecido conjuntivo subjacente ao epitélio infectado. Nos grupos B1 e B2 não foram encontradas alterações epiteliais, concluindo-se que as NF demonstraram atividade antifúngica in vitro e foram efetivas na prevenção da penetração de hifas no tecido palatino de animais com DP (AU)

This study evaluated the in vitro and in vivo efficacy of nanofiber (NF) mats of polycaprolactone (PCL) incorporated with nystatin (NIS) in the treatment of denture stomatitis (DS) in animal models. NFs were synthesized with different concentrations of NIS, totaling four solutions: pure PCL, PCL/NIS 0.045 g, PCL/NIS 0.090 g, and PCL/NIS 0.225 g. The release of NIS was analyzed by Ultraviolet-Visible spectroscopy. The ability of the mats to inhibit Candida albicans biofilm, the main etiological factor of DS, was assessed by dividing five groups (N=5) composed of a group with C. albicans cell control and with pure PCL, in addition to the three concentrations of NIS. Next, cell viability in human keratinocytes (HaCat) was analyzed using the resazurin colorimetric test. Five groups were divided (N=10): cell control, pure PCL, and the three concentrations of NIS. In albino Wistar rat animal models (N=18), palatal devices (PD) made of acrylic resin were fabricated to simulate total prostheses and used to induce DS. For this, PD contaminated with C. albicans were cemented in the molar region of the animals' oral cavity and remained in the mouth for 48 hours. After this period, the PDs were removed, and the animals were divided into three groups: (C) control; (B1) treated with PCL/NIS 0.045 g mats, and (B2) PCL/NIS 0.225 g, with N=6. Then new, uncontaminated PDs were cemented in the animals' oral cavity and remained for another 48 hours. After this period, the animals were euthanized, UFC/ mL counts were performed, and the palates were collected for histological analysis. The standard NIS curve obtained showed an R2 of 0.99. The three concentrations of NF showed NIS release, with a peak at 6 h and values of 66.26 µg/ mL for PCL/NIS 0.045 g, 333.87 µg/ mL for PCL/NIS 0.090 g, and 436.51 µg/ mL for PCL/NIS 0.225 g, remaining constant until the end of the experiment. The groups with NIS reduced fungal biofilm growth by 2.5 log10 compared to the untreated groups, Control and PCL, with no significant statistical difference. No cytotoxicity was observed in HaCat cells, with cell viability of 93.7% for PCL/NIS 0.045 g, 72.6% for PCL/NIS 0.090 g, and 72.4% for PCL/NIS 0.225 g. Induction of DS in the three groups was possible; however, there was no significant reduction in UFC/ mL counts of C. albicans in groups B1 and B2. Histological analysis of group C revealed infiltration of Candida hyphae in the keratinized layer, presence of inflammatory cells forming micro abscesses, and a discreet inflammatory infiltrate in the connective tissue underlying the infected epithelium. No epithelial alterations were found in groups B1 and B2, concluding that NFs demonstrated in vitro antifungal activity and were effective in preventing hyphal penetration into palatal tissue in animals with PD.(AU)

Avaliação in vitro de formulações do óleo essencial de citronela (Cymbopogon nardus) sobre propriedades biológicas, físicas e mecânicas de resina acrílica para prótese dentária / In vitro evaluation of citronella (Cymbopogon nardus) essential oil formulations on biological, physical and mechanical properties of acrylic resin for dental prosthesis

O controle de formação de biofilme deve ser promovido por meio de técnicas diárias de higienização, sendo uma delas o uso de soluções de desinfecção. Dentre as soluções químicas comercialmente disponíveis, algumas podem ocasionar efeitos adversos quando utilizadas em longo prazo. Dessa forma, a busca por métodos alternativos de desinfecção, com soluções que não alterem as propriedades do material e que sejam inertes para o seu usuário torna-se essencial. Este estudo teve como objetivos: avaliar in vitro, a ação antifúngica de formulações de 5 mg/mL à base do óleo de citronela em biofilmes mistos de espécie de Candida em resina acrílica ativada termicamente (RAAT) para base protética por meio de contagem do número de unidades formadoras de colônias (UFC/mL), em dois tempos de exposição (15 e 30 minutos) e avaliar a citotoxicidade das formulações em células da linhagem epitelial HaCat, e verificar a ação destas formulações de citronela a 5 mg/mL na alteração de propriedades físicas e mecânicas de amostras de RAAT. Inicialmente, foram feitas as formulações à base de citronela em forma de emulsão e nanoemulsão. Em seguida, por meio de ensaios de microdiluição em caldo, foi obtida a concentração inibitória mínima (CIM) e concentração fungicida mínima (CFM) das cepas de Candida testadas. Foram confeccionadas amostras de RAAT para a realização dos ensaios, sendo 96 amostras para o ensaio de biofilme, divididas de acordo com os grupos: GI - controle negativo (Biofilme misto C. albicans ATCC + C. glabrata ATCC + C. albicans oral 6892 + C. albicans oral 7037); GII- Nanoemulsão de Citronela 5mg/mL; GIIIControle da Nanoemulsão (Tween 20); GIV- Emulsão de Citronela 5mg/mL; GV- Controle da Emulsão (Goma Xantana); GVI- Clorexidina 0,12% (Periogard), e 20 para o ensaio de viabilidade celular, divididas nos grupos: GI- Nanoemulsão de Citronela 5mg/mL; GII- Controle da Nanoemulsão (Tween 20); GIII- Emulsão de Citronela 5mg/mL; GIV- Controle da Emulsão (Goma Xantana); GV- Clorexidina 0,12% (Periogard). Biofilmes mistos de Candida foram formados sobre as superfícies das amostras, e foram quantificados por meio de contagem de unidades formadoras de colônias (UFCs). Para o teste de viabilidade celular utilizou-se células epiteliais da linhagem HaCaT, avaliadas através da coloração com resazurina. Para avaliação das propriedades físicas e mecânicas foram confeccionadas 50 amostras retangulares e 50 circulares de RAAT, separadas aleatoriamente em 5 grupos, de acordo com a formulação utilizada: GI ­ controle (água destilada); GII ­ saliva artificial; GIII ­ nanoemulsão de citronela a 5mg/mL; GIV - emulsão de citronela a 5mg/mL e GV - Clorexidina 0,12% (Periogard). As amostras foram imersas nas respectivas formulações, simulando a desinfecção de próteses dentarias pelo período de 30 minutos diários, durante 6 meses. Após este período, foi feita a análise da alteração de rugosidade de superfície (Ra - µm), estabilidade de cor (CIEDE 2000), avaliação da microdureza Knoop e resistência a flexão (MPa) das amostras. Os dados obtidos foram submetidos às análises estatísticas (p< 0,05). As formulações fitoterápicas à base de citronela apresentaram valores de CIM e CFM que variaram entre 0,156-1 mg/mL sobre as espécies de Candida e inibiram o crescimento do biofilme misto, apresentando uma redução estatisticamente significativa na contagem de UFC/mL, de até 2,7 Log destes fungos, principalmente quando submetidas ao tempo de exposição de 30 minutos. As formulações fitoterápicas testadas não apresentaram diferenças estatísticas entre si, apresentando viabilidade da célula HaCaT maior que 70%, diferentemente da clorexidina a 0,12%. Não houve diferença nos valores médios de rugosidade de superfície em nenhum dos grupos após serem submetidos à imersão nas formulações testes, com exceção do grupo controle, que apresentou diferença estatística significativa na rugosidade de superfície após o período de imersão. Nos valores de alteração de cor (ΔE00) foi possível observar que não houve diferença estatística significativa entre os grupos experimentais antes e após serem submetidos a imersão nas formulações testes. Nos valores de microdureza Knoop houve diferença estatística significativa apenas entre o grupo controle e o grupo emulsão de citronela. Para os dados de resistência flexural, módulo de elasticidade, força máxima e alongamento não houve diferença estatística significativa entre os grupos após imersão. Em suma, concluiu-se que as formulações fitoterápicas à base de citronela apresentaram efeito antifúngico sobre as diferentes espécies de Candida em superfície de resina acrílica para próteses dentárias, não apresentaram efeito citotóxico sobre células da linhagem epitelial, e se mostraram seguras como formulações antissépticas no que se refere às propriedades físicas e mecânicas estudadas, sendo potencialmente promissoras para serem indicadas como soluções desinfetantes para próteses dentárias(AU)

The control of biofilm formation should be promoted through daily hygiene techniques such as the use of disinfection solutions. Among the commercially available chemical solutions, some can lead to adverse effects in long-term use. Thus, the search for alternative methods of disinfection with solutions that do not interfere with properties of the material and those inert to the user becomes essential. This study aimed to: evaluate, in vitro, the antifungal effect of 5 mg/mL formulations based on citronella oil on mixed biofilms of Candida species in thermally activated acrylic resin (TAAR) for prosthetic base by counting the number of colony forming units (CFU/mL), in two exposure times (15 and 30 minutes) and to evaluate the cytotoxicity of the formulations in cells of the HaCat epithelial lineage, and to verify the action of these formulations of citronella at 5 mg/mL in the alteration of physical and mechanical properties of TAAR samples. Initially, citronella-based formulations were prepared as emulsion and nanoemulsion. Then, by means of broth microdilution assays, the minimum inhibitory concentration (MIC) and minimum fungicidal concentration (MFC) of the tested Candida strains were obtained. For the biofilm test, 96 TAAR samples were prepared and assigned to the groups, as follows: GI - negative control (Mixed biofilm C. albicans ATCC + C. glabrata ATCC + C. albicans oral 6892 + C. albicans oral 7037); GII- Citronella Nanoemulsion 5mg/mL; GIII- Nanoemulsion Control (Tween 20); GIV- Citronella Emulsion 5mg/mL; GVEmulsion Control (Xanthan Gum); GVI- Chlorhexidine 0,12% (Periogard). For the cell viability assay, 20 samples were prepared and assigned to the following groups: GI- Citronella Nanoemulsion 5mg/mL; GII- Nanoemulsion Control (Tween 20); GIII- Citronella Emulsion 5mg/mL; GIV- Emulsion Control (Xanthan Gum); GV- Chlorhexidine 0,12% (Periogard). Mixed Candida biofilms were formed on the surfaces of the samples, and were quantified by counting colony forming units (CFUs). For the cell viability test, epithelial cells of the HaCaT lineage were used, evaluated by staining with resazurin. To evaluate the physical and mechanical properties, 50 rectangular and 50 circular samples of TAAR were prepared and randomly assigned into 5 groups, according to the formulation used: GI ­ control (distilled water); GII ­ artificial saliva; GIII ­ citronella nanoemulsion at 5mg/mL; GIV ­ citronella emulsion at 5mg/mL and GV ­ chlorhexidine 0,12% (Periogard). The samples were immersed in the respective formulations, simulating the disinfection of dental prostheses for a period of 30 minutes daily, for 6 months. After this period, the analysis of surface roughness change (Ra - µm), color stability (CIEDE 2000), evaluation of Knoop microhardness and flexural strength (MPa) of the samples was performed. The data obtained were submitted to statistical analysis (p< 0,05). The phytotherapic formulations based on citronella presented MIC and MFC values that varied between 0,156-1 mg/mL on Candida species and inhibited the growth of mixed biofilm, showing a statistically significant reduction in the CFU/mL counts, up to 2,7 Log of these fungi, mainly when subjected to an exposure time of 30 minutes. The phytotherapic formulations tested did not show statistical differences between them, showing HaCaT cell viability greater than 70%, unlike 0,12% chlorhexidine. There was no difference in the mean values of surface roughness in any of the groups after being subjected to immersion in the test formulations, except for the control group, that presented a statistically significant difference in surface roughness after the immersion period. Regarding color change (ΔE00) it was possible to observe that there was no statistically significant difference between the experimental groups before and after being subjected to immersion in the test formulations. In the Knoop microhardness values, there was a statistically significant difference only between the control group and the citronella emulsion group. For data on flexural strength, modulus of elasticity, maximum force and stretching, there was no statistically significant difference between the groups after immersion. In summary, it can be concluded that phytotherapic formulations based on citronella had an antifungal effect on different Candida species on acrylic resin surfaces for dental prostheses, besides not presenting a cytotoxic effect on cells of the epithelial lineage, and proved to be safe as antiseptic formulations in the which refers to the physical and mechanical properties studied, being potentially promising to be indicated as disinfectant solutions for dental prostheses(AU)

Beneficial effects of three natural products for the treatment of denture stomatitis: a randomized clinical trial / Efeitos benéficos de três produtos naturais para o tratamento da estomatite protética: um ensaio clínico randomizado

Aim: To evaluate the effect of three natural antifungal agents combined with routine denture care on the treatment of DS, using a quantitative mycological culture analysis. Methods: Thirty denture wearers with denture stomatitis DS were treated using five substances: sterile distilled water (G1), nystatin oral suspension (G2), 20% alcoholic extract propolis (G3), Punica granatumLinné gel (G4), and Uncaria tomentosa gel (G5). The substances were used 3 times a day for 14 days. Quantitative mycological culture analysis of samples collected from the palatal mucosa was performed at three stages: before treatment (T0), after 14 days of treatment (T1), and 30 days after treatment completion (T2). Data were evaluated using Kruskal-Wallis and Friedman tests (p < 0.05). Results: Palatal mucosa intragroup analysis showed a significant reduction of Candida CFU/mL values for all groups at T1 compared to T0 (p < 0.05). However, they did not present statistical differences when comparing T1 and T2 (p > 0.05). The intergroup analysis demonstrated that there are no statistical differences, regardless of the evaluation time (p > 0.05). Conclusion:The natural products tested showed a satisfactory result on DS treatment, which proved to be equivalent to conventional topical therapy with nystatin and to treatment using only regular oral hygiene procedures.

Objetivo: Avaliar o efeito de três antifúngicos naturais combinados com o cuidado rotineiro com próteses dentárias no tratamento da EP, por meio de uma análise quantitativa de cultura micológica. Métodos: Trinta usuários de próteses dentárias com EP foram tratados com cinco substâncias: água destilada estéril (G1), suspensão oral de nistatina (G2), extrato alcoólico de própolis 20% (G3), gel Punica granatum L. (G4) e gel Uncaria tomentosa (G5). As substâncias foram utilizadas 3 vezes ao dia durante 14 dias. A análise micológica quantitativa das amostras coletadas da mucosa palatina foi realizada em três etapas: antes do tratamento (T0), após 14 dias do tratamento (T1) e 30 dias após o término do tratamento (T2). Os dados foram avaliados pelos testes de Kruskal-Wallis e Friedman (p < 0,05). Resultados: A análise intragrupo da mucosa palatina mostrou uma redução significativa dos valores de Candida UFC/mL para todos os grupos em T1 em comparação com T0 (p < 0,05). No entanto, não apresentaram diferenças estatísticas na comparação de T1 e T2 (p > 0,05). A análise intergrupos demonstrou que não há diferenças estatísticas, independentemente do tempo de avaliação (p > 0,05). Conclusão: Os produtos naturais testados apresentaram resultado satisfatório no tratamento da EP, sendo equivalente à terapia tópica convencional com nistatina e ao tratamento apenas com procedimentos rotineiros de higiene bucal.

Surgical and nonsurgical treatment of papillary hyperplasia: A case report / Tratamiento quirúrgico y no quirúrgico de la hiperplasia papilar inflamatoria: Reporte de Caso

Dentures with dental plaque predispose recurrent hyperplasia on the palatal mucosa. Surgical procedures for the treatment of inflammatory papillary hyperplasia involve postsurgical discomfort and morbidity. This repot describes clinical and histologic aspects of a patient with severe akantolitic inflammatory papillary hyperplasia. The palatal mucosa was treated with a surgical bur with a low-speed handpiece. A new removable denture was performed and adapted. A follow-up of 4 years showed staility of health at palatal mucosa. Patient referred low discomfort and morbidity when using bur technique. Control of removable denture was critical for long-term healing and soft tissue stability.

Las prótesis dentales con placa bacteriana predisponen a la hiperplasia recurrente en la mucosa palatina. Los procedimientos quirúrgicos para el tratamiento de la hiperplasia papilar inflamatoria implican molestias y morbilidad posquirúrgicas. Este reporte describe los aspectos clínicos e histológicos de un paciente con hiperplasia papilar inflamatoria acantolítica severa. La mucosa palatina fue tratada con una fresa quirúrgica con una pieza de mano de baja velocidad. Se realizó y adaptó una nueva prótesis parcial removible. Después de un seguimiento de 4 años, se encontró estabilidad de la salud de la mucosa palatina. El paciente se refirió a la baja incomodidad y morbilidad al usar la técnica de la fresa. El control de la prótesis parcial removible fue crítico para la cicatrización a largo plazo y la estabilidad de los tejidos blandos, evitando la recidiva de la hiperplasia papilar inflamatoria.

Avaliação da correlação entre o grau de instruções e qualidade de higiene de usuários de próteses totais com a presença de estomatite protética / Correlation between the level of instructions and the quality of hygiene of complete denture wearers with presence of denture stomatitis

Objetivo: Avaliar a correlação entre tempo de uso da prótese, idade do paciente, grau de instrução dos pacientes e qualidade observada da higiene das próteses totais com a presença de estomatite protética. Material e método: Foi aplicado questionário para levantamento dos dados. A presença de biofilme na superfície interna das próteses totais superiores foi inspecionada visualmente. O exame clínico da região palatina nos pacientes foi realizado para avaliar a presença de estomatite protética. Os dados foram analisados por meio dos testes de Correlação de Spearman (tempo de uso da prótese e idade do paciente x estomatite protética), U de Mann-Whitney (gênero e frequência de escovação x inflamação da mucosa; uso contínuo da prótese e instruções do cirurgião-dentista x presença de estomatite protética; instrução do cirurgião-dentista x necessidade de consultas periódicas) e Tau-B de Kendall (higiene da superfície interna da prótese x estomatite protética). Todas as análises foram feitas considerando- se α=5%. Resultados: A maioria dos pacientes não tira a prótese para dormir (91,10%) e relata higienizar esta três vezes ao dia (44,40%). Porém, a higiene das próteses foi considerada precária (53,30%). Nenhum dos fatores investigados relacionados aos relatos dos pacientes influenciou na presença/severidade da estomatite (p>0,05). Entretanto, a higiene observada internamente nas próteses foi inversamente proporcional à presença/severidade da estomatite (p<0,001). Conclusões: Não foi observada correlação entre idade, tempo de uso da prótese, grau de instrução dos pacientes e estomatite protética. Porém, a qualidade observada da higiene das próteses foi considerada precária, estando negativamente relacionada com a prevalência da estomatite protética.

Objective: To evaluate the correlation between patients denture using time, age, degree of instruction and observed quality of complete dentures with the prevalence of denture stomatitis. Material and method: It was applied a questionnaire to data collection. The biofilm in the inner surface of superior dentures were accessed visually. A clinical examination of the palatal area of the patients was performed to classify the presence of denture stomatitis. Data were analyzed by the following tests: Spearman correlation (time of prosthesis usage and patient age x denture stomatitis), Mann-Whitney U (patient gender and prosthesis hygiene x mucosal inflammation; continuous usage of prosthesis and dentist instructions x denture stomatitis; dentist instructions x periodic consult needs) and Kendall Tau-B (hygiene of internal surface of prosthesis x denture stomatitis). All analyses were done considering α=5%. Results: Most patients relate to do not remove the dentures before sleeping (91.10%) and to clean up them three times a day (44.40%), however, the overall hygiene of the dentures was considered poor (53.30%). None of the factors related to patients relates influences stomatitis presence/severity (p>0.05). However, it was found an inverse correlation between the denture surface hygiene and denture stomatitis (p<0.001). Conclusion: It was not found any correlation among patients age, denture using time and degree of instruction with denture stomatitis. However, the overall hygiene of the dentures investigated, which was considered to be poor, were negatively correlated with the denture stomatitis prevalence.

Efeito da incorporação de agentes antifúngicos na resistência à tração e porosidade de materiais resilientes temporários para base de próteses / Effect of incorporation of antifungal agents on the ultimate tensile strength and porosity of temporary soft denture liners

Este estudo investigou a resistência à tração (ou limite de resistência à tração- LRT) e a porosidade de reembasadores resilientes temporários modificados por concentrações inibitórias mínimas (CIMs) de agentes antifúngicos para o biofilme Candida albicans (SC5314). Para os testes de LRT, corpos de prova em forma de halteres (n=7) com uma área transversal de 33 mm x 6 mm x 3 mm foram produzidos para os materiais resilientes (Trusoft e Softone) sem (controle) ou com incorporação de cinco fármacos em suas CIMs: nistatina- 0,032 g; diacetato de clorexidina- 0,064; cetoconazol- 0,128 g; miconazol- 0,256 g; itraconazol-0,256 g (grama de fármaco por grama de pó de material resiliente). Após a plastificação, as amostras foram imersas em água destilada a 37°C durante 24 h, 7 e 14 dias e, então, testadas em tensão em uma máquina universal de ensaios (EMIC DL-500 MF) a 40 mm/min. A porosidade foi mensurada por absorção de água, com base na exclusão do efeito plastificante. Inicialmente, determinou-se por isotermas de sorção, que a solução de armazenagem adequada para os corpos de prova (65 mm x 10 mm x 3,3 mm) de ambos os materiais foi o cloreto de cálcio anidro a 50% (S50). Assim, o fator de porosidade (FP) foi calculado para os grupos de estudo (n=10) formados por espécimes sem (controle) ou com incorporação de fármaco em suas CIMs (nistatina, clorexidina ou cetoconazol) após a armazenagem em água destilada ou S50 por 24 h, 7 e 14 dias. Os dados de resistência à tração (MPa) e percentagem de alongamento (%) foram submetidos à ANOVA de 3 fatores seguida pelo teste de Tukey (=0,05). Os dados de porosidade foram analisados estatisticamente por ANOVA de medidas repetidas para 4 fatores e teste de Tukey (=0,05). Ao final de 14 dias, a resistência à tração para ambos os materiais foi significativamente menor nos grupos modificados pelo miconazol e itraconazol em relação aos outros grupos (P<0,0001), que não mostraram diferenças significativas entre si (P>0,05). Após 7 e 14 dias em água, o miconazol e itraconazol adicionados a ambos os materiais resultaram em percentagens significativamente menores de alongamento em comparação com os outros fármacos e ao controle (P<0,0001), que foram semelhantes entre si (P>0,05). O cetoconazol não resultou em alterações significativas no FP para ambos os materiais resilientes em água ao longo de 14 dias (P>0,05). Em comparação aos controles, houve aumento dos FPs do Softone e Trusoft aos 14 dias de imersão em água somente após a adição de nistatina e clorexidina e de clorexidina, respectivamente (P<0,05). Ambos os materiais não apresentaram alterações significativas no FP em até 14 dias de imersão na S50, em comparação aos controles (P>0,05). Em todas as condições experimentais, os FPs do Softone e Trusoft foram significativamente menores quando imersos em S50 em comparação com a água destilada (P<0,05). Concluiu-se que a adição de nistatina, clorexidina e cetoconazol nas CIMs para o biofilme de C. albicans não resultou em efeitos deletérios na resistência à tração e na percentagem de alongamento dos materiais resilientes temporários para base de prótese até o período de 14 dias. A adição de antifúngicos nas CIMs não resultou em efeitos adversos à porosidade de ambos os materiais resilientes temporários em diferentes períodos de imersão em água, com exceção da clorexidina e nistatina no Softone e clorexidina no Trusoft aos 14 dias. Não foram observados efeitos deletérios para a porosidade de ambos os materiais resilientes modificados com as CIMs dos fármacos durante os 14 dias de imersão na S50.(AU)

This study investigated the tensile strength (ultimate tensile strength- UTS) and porosity of temporary soft denture liners modified by minimum inhibitory concentrations (MICs) of antifungal agents for Candida albicans biofilm (SC5314). For UTS tests, dumbbell-shaped specimens (n=7) with a central cross-sectional area of 33 mm x 6 mm x 3 mm were produced by resilient materials (Trusoft and Softone) without (control) or with incorporation of five drugs at MICs: nystatin- 0.032 g; chlorhexidine diacetate-0.064 g; ketoconazole- 0.128 g; miconazole- 0.256 g; itraconazole- 0.256 g (each per gram of soft liner powder). After plasticization, specimens were immersed in distilled water at 37°C for 24 h, 7 and 14 days, and then tested in tension in a universal testing machine (EMIC DL-500 MF) at 40 mm/min. The porosity was measured by water absorption, based on exclusion of the plasticizer effect. Initially, it was determined by sorption isotherms that the adequate storage solution for specimens (65 mm x 10 mm x 3.3 mm) of both materials was 50% anhydrous calcium chloride (S50). Then, the porosity factor (PF) was calculated for the study groups (n=10) formed by specimens without (control) or with drug incorporation at MICs (nystatin, chlorhexidine or ketoconazole) after storage in distilled water or S50 for 24 h, 7 and 14 days. Data of tensile strength (MPa) and elongation percentage (%) were submitted to 3-way ANOVA followed by Tukey's test (=0.05). Data of porosity were statistically analyzed by 4-way repeated measures ANOVA and Tukeys test (=0.05). At the end of 14 days, the tensile strength for both materials was significantly lower in the groups modified by miconazole and itraconazole compared to the other groups (P<0.0001), which showed no significant difference between them (P>0.05). After 7 and 14 days in water, miconazole and itraconazole added into both materials result in significant lower elongation percentages compared to the other drugs and control (P<.0001), which were similar to each other (P>0.05). Ketoconazole resulted in no significant changes in PF for both liners in water over 14 days (P>0.05). Compared to the controls, Softone and Trusoft PFs were increased at 14-day water immersion only after addition of nystatin and chlorhexidine, and chlorhexidine, respectively (P<0.05). Both materials showed no significant changes in PF in up to 14 days of S50 immersion, compared to the controls (P>0.05). In all experimental conditions, Softone and Trusoft PFs were significantly lower when immersed in S50 compared to distilled water (P<0.05). It was concluded that the addition of the nystatin, chlorhexidine and ketoconazole at MICs for C. albicans biofilm resulted in no harmful effects on the ultimate tensile strength and elongation percentage of the temporary soft denture liners up to 14-day period. The addition of antifungals at MICs resulted in no detrimental effects for the porosity of both temporary soft liners in different periods of water immersion, except for chlorhexidine and nystatin in Softone and chlorhexidine in Trusoft at 14 days. No deleterious effect was observed for the porosity of both soft liners modified by the drugs at MICs over 14 days of S50 immersion.(AU)

Biocompatibilidade in vivo de material resiliente temporário para base de prótese modificado por antimicrobianos para tratamento da estomatite protética / Biocompatibility in vivo of temporary soft denture liner for denture base modified by antimicrobials agents for denture stomatitis treatment

Reembasadores resilientes temporários contendo fármacos antifúngicos foram sugeridos como um tratamento adjunto para estomatite protética. No entanto, antes de utilizar clinicamente estes reembasadores modificados em humanos, é importante avaliar a sua biocompatibilidade em modelos animais. Este estudo avaliou a biocompatibilidade in vivo de um reembasador resiliente temporário para base de prótese (Trusoft) modificado por agentes antimicrobianos em suas mínimas concentrações inibitórias (MCIs) para biofilme de Candida albicans. Dispositivos acrílicos intra-orais (DIOs) foram confeccionados individualmente para 60 ratos Wistar. Os ratos foram divididos em 6 grupos (n=5): 3 grupos controle (Negativo: sem DIO; Geral: DIO sem reembasamento; Positivo: DIO reembasado com Trusoft sem fármacos) e 3 grupos experimentais (DIOs reembasados com Trusoft modificados por fármacos em suas respectivas MCIs: 0,032 g de nistatina, 0,064 g de diacetato de clorexidina e 0,128 g de cetoconazol). Os ratos com ou sem os DIOs foram eutanasiados após 7 e 14 dias de avaliação. A análise histopatológica qualitativa foi realizada comparando-se fotomicrografias de secções histológicas, que foram obtidas utilizando um microscópio óptico que abrangeu transversalmente a região intermolares. As alterações morfológicas no epitélio e queratina foram analisadas quantitativamente através da realização de planimetria computadorizada. Os dados quantitativos foram analisados utilizando ANOVA 2-fatores e teste de Tukey (=0,05). A análise quantitativa mostrou que apenas o grupo com DIO contendo cetoconazol diminuiu significativamente a espessura e a área do estrato córneo em comparação com os outros grupos (p<0,05), que não apresentaram diferenças significativas entre si (p>0,05). Estes resultados estiveram de acordo com os obtidos para análise qualitativa. A incorporação de MCIs de nistatina e diacetato de clorexidina no Trusoft não induziram alterações histopatológicas na mucosa palatina de ratos, sugerindo a biocompatibilidade in vivo deste protocolo para o tratamento de estomatite protética.(AU)

Temporary resilient denture liners containing antifungal drugs have been suggested as an adjunct treatment for denture stomatitis. However, before clinically using these modified liners in humans, it is important to assess their biocompatibility in animal models. This study evaluated the in vivo biocompatibility of a temporary soft denture liner (Trusoft) modified by antimicrobial agents at their minimum inhibitory concentrations (MICs) for biofilm formation by Candida albicans. Methods: Acrylic intraoral devices (IODs) were individually made for 60 Wistar rats. The rats were divided into the following 6 groups (n=5): 3 control groups (Negative: without IOD; General: IOD without relining; Positive: IOD relined with Trusoft without drugs) and 3 experimental groups (IOD relined with Trusoft modified by drugs at MICs: 0.032 g for nystatin, 0.064 g for chlorhexidine diacetate, and 0.128 g for ketoconazole). The rats with or without the IODs were sacrificed after 7 or 14 days of evaluation. Histopathological qualitative analysis was performed by comparing photomicrographs of histological sections, which were obtained using an optical microscope that transversely covered the inter-molar region. Morphological changes in the epithelium and keratin were quantitatively analyzed by performing computerized planimetry. Quantitative data were analyzed using 2-way ANOVA and Tukey's test (=0.05). Quantitative analysis showed that only the group with IOD containing ketoconazole significantly decreased the thickness and area of the stratum corneum compared with the other groups (p<0.05), which showed no significant differences between each other (p>0.05). These results were in accordance with those obtained for qualitative analysis. Incorporation of MICs of nystatin and chlorhexidine diacetate in Trusoft did not induce histopathological changes in the palatal mucosa of rats, suggesting the in vivo biocompatibility of this protocol for treating denture stomatitis.(AU)

Efeito de cianoacrilatos e adesivo tissular a base de veneno de cobra na citotoxicidade sobre fibroblastos gengivais e estresse oxidativo sobre células do biofilme de C. albicans / Effect cyanoacrylate and snake venom tissue adhesive on cytotoxicity of gingival fibroblasts and oxidative stress of C. albicans biofilms

A estomatite protética é uma patologia que acomete muitos usuários de prótese total. Um dos principais fatores da sua etiologia é a fácil adesão de microrganismos, como a Candida albicans, à resina acrílica, principalmente devido às características de superfície facilitadoras deste material. Por esta razão, estuda-se materiais que possam modificar as características de superfície da resina acrílica sem alterar as suas propriedades mecânicas. A investigação das propriedades desses materiais, como a biocompatibilidade e como eles influenciam as células de C. albicans, é de extrema importância para uma futura aplicação clínica. Dessa forma, a proposta desta pesquisa foi avaliar a citotoxicidade sobre fibroblastos gengivais humanos (FGH) e o estresse oxidativo causado em células de C. albicans por 6 produtos (etil-cianoacrilato convencional -ECAc; etil-cianoacrilato em forma de gel formulação a -ECAga; etil-cianoacrilato em forma de gel formulação b -ECAgb; butil-cianoacrilato - BCA; octil-cianoacrilato OCA; selante tissular a base de veneno de cobra-VC;), que quando aplicados na superfície da resina acrílica, modificam suas características de superfície, visando diminuir a formação do biofilme de C. albicans. Espécimes de resina acrílica foram confeccionados e duas camadas de cada produto foram aplicadas nas superfícies. Cada espécime foi deixado em 1, 066 mL de meio de cultura durante 24 horas para extração e utilização do meio condicionado para os dois ensaios. Para a investigação da citotoxicidade, os FGH foram cultivados em placas de 96 poços, meios condicionado de cada grupo foram depositados em cada poço onde permaneceram em contato por 24, 48 e 72 h. Após o processamento para o ensaio de MTT as placas foram analisadas em espectrofotômetro a 500 nm. Foram realizados quatro experimentos independentes em triplicata (n=12). Para a investigação de estresse oxidativo (ERO) causado em C. albicans, biofilme foi desenvolvido em placas de 96 poços durante 24 h. Então, os meios condicionados foram adicionados aos poços e a placa foi mantida em agitadora durante 1 h. Após a retirada dos meios condicionados, foi adicionado a cada poço o reagente CellRox® Deep Red e leituras foram realizadas a cada 30 min durante 3 h em fluorímetro a 640/665nm. Amostras foram coletadas e ensaio de cultura microbiológica foi executado para a realização da normalização dos valores. Foram realizados 3 experimentos independentes em triplicata (n=9). Os resultados obtidos pelo ensaio MTT foram analisados por meio de ANOVA a 2 critérios, seguido pelo teste Tukey para a comparação entre grupos (p<0,05). Para o ensaio ROS, a análise estatística realizada foi ANOVA a 1 critério, seguida, igualmente, por Tukey (p<0,05). Os resultados mostraram que todos os grupos apresentaram certo grau de citotoxicidade quando comparados ao controle, com exceção do VC (ECAc

Denture stomatitis is a disease that affects many denture wearers. One of the main factors of its cause is the easy adhesion of microorganisms, such as Candida albicans, to acrylic resin, mainly due to its permissive surface characteristics. For this reason, materials that can modify surface characteristics of acrylic resin without changing its mechanical properties are being studied. The investigation of these materials features, such as biocompatibility and how they affect Candida albicans, is of utmost importance for future clinical application. Thus, the purpose of this study was to evaluate the cytotoxicity of human gingival fibroblasts (HGF) and oxidative stress in C. albicans cells after contact with 6 experimental products (conventional ethyl-cyanoacrylate -ECAc; ethyl-cyanoacrylate in gel formulation "a" -ECAga; ethyl-cyanoacrylate in gel formulation "b" -ECAgb; butyl- cyanoacrylate - BCA; octyl-cyanoacrylate -OCA; tissue adhesive based on snake venom -VC) applied to the surface of the resin acrylic, modifying its surface characteristics, in order to decrease C. albicans biofilm formation. Acrylic resin specimens were manufactured and two layers of each product were applied to the surfaces. Each specimen was immersed in 1,066 mL of growth media for 24 hours for extraction and the resulting conditioned media were used for both tests. To investigate cytotoxicity, HGF were cultured in 96-well plates and conditioned media from each group were deposited into each well, where they remained in contact for 24, 48 and 72h. After the MTT assay processing, plates were analyzed in a spectrophotometer at 500 nm. Four independent experiments were performed in triplicate (n=12). To investigate oxidative stress (ROS), C. albicans biofilm was developed in 96-well plates for 24 h, conditioned media were added to the wells and the plate was allowed to stir for 1 h. Then, conditioned media were removed and CellRox® Deep Red reagent was added to each well. Readings were performed every 30 min for 3 h in fluorometer at 640/665nm. Samples were collected and microbiological culture test was executed to values normalization. Three independent experiments were performed in triplicate (n=9). Results obtained in MTT assay were analyzed by two-way ANOVA and Tukey's test for comparison between groups (p<0.05). for comparison between groups (p<0.05). For ROS results, one-way ANOVA was performed followed by Tukey test, as well (p<0.05). The results showed that all groups presented different degrees of cytotoxicity when compared to control group, except for VC (ECAc

Efeito antimicrobiano de múltiplas sessões de terapia fotodinâmica sobre biofilmes de Candida spp. formados in vitro / Antimicrobial effect of photodynamic therapy multiple-sessions on biofilms of Candida spp. formed in vitro

Vários estudos in vitro demonstraram que a terapia fotodinâmica (TFD) apresenta efeitos antimicrobianos sobre as leveduras do gênero Candida, podendo representar uma terapia alternativa e coadjuvante no tratamento da estomatite protética. Assim, este trabalho teve como objetivo avaliar o efeito antifúngico de múltiplas sessões de terapia fotodinâmica sobre biofilmes de Candida formados na superfície de resina acrílica. Para realização desse trabalho, biofilmes monotípicos de C. albicans, C. tropicalis e C. glabrata foram formados, durante 5 dias, em corpos de prova confeccionados com resina acrílica termicamente ativada. A seguir, foram realizadas 5 sessões de terapia fotodinâmica, em intervalos de 24 horas, sobre os biofilmes previamente formados. Foram avaliadas 2 modalidades de terapia fotodinâmica, incluindo aplicação de Laser de Arseneto de Gálio e Alumínio associado ao fotossensibilizador azul de metileno ou terapia com Diodo Emissor de Luz (LED) verde e fotossensibilizador eritrosina. Os grupos controles foram tratados apenas com solução fisiológica. Após a realização de cada aplicação da terapia fotodinâmica, os biofilmes aderidos aos corpos de prova foram submetidos à homogeneização ultra-sônica e as células dispersas foram semeadas em Ágar Sabouraud Dextrose (37 °C / 48 h) para contagem de unidades formadoras de colônias (UFC/corpo de prova). Os resultados obtidos foram submetidos à análise de Variância (ANOVA) e teste de Tukey considerando-se nível de significância de 5%. Para todos os micro-organismos os resultados da redução de UFC (log) foram comparados aos controles da primeira, segunda, terceira, quarta e quinta aplicações com o Laser e com o LED. Para C. glabrata as reduções para cada aplicação foram respectivamente de 3,22 e 4,83; 1,49 e 2,21; 1,6 e 2.05; 1,53 e 5,09 e 2,75 e 3,03. Para C. albicans foram 0,12 e 0,36; 0,54 e 0,93; 0,15 e 0,06; 0,96 e 0,75 e 0,89 e 1,82. C. tropicalis apresentou as seguintes reduções: 0,16 e 0,14; 1,52 e 2,84...

Several in vitro studies have demonstrated the antimicrobial effects of photodynamic therapy (PDT) against yeast of the genus Candida, representing an alternative or coadjuvant tool for the treatment of denture stomatitis. Therefore, the objective of this study was to evaluate the antifungal effect of multiple PDT sessions on Candida biofilms formed on the surface of acrylic resin. For this purpose, monotypic biofilms of C. albicans, C. tropicalis and C. glabrata were grown for 5 days on test specimens consisting of thermally activated acrylic resin. Next, the biofilms formed were submitted to five sessions of PDT at intervals of 24 hours. Two modalities of PDT were evaluated: a gallium-aluminum-arsenide laser combined with methylene blue as photosensitizer, and a green light-emitting diode (LED) and erythrosine as photosensitizer. The control groups were only treated with saline. After each application of PDT, the biofilms adhered to the test specimens were submitted to ultrasonic homogenization and the dispersed cells were seeded onto Sabouraud dextrose agar (37 oC, 48 h) for determination of colony-forming units (CFU/test specimen). Analysis of variance (ANOVA) and the Tukey test were used for analysis of the results, adopting a level of significance of 5%. For all microorganisms, the results of CFU(log) reduction were compared to controls of the first, second, third, fourth and fifth application of the laser and LED. For C. glabrata, the reductions in each application were, respectively, 3.22 and 4.83, 1.49 and 2.21, 1.6 and 2.05, 1.53 and 5.09, and 2.75 and 3.03. Reductions of 0.12 and 0.36, 0.54 and 0.93, 0.15 and 0.06, 0.96 and 0.75, and 0.89 and 1.82 were observed for C. albicans. Candida tropicalis showed the following reductions: 0.16 and 0.14, 1.52 and 2.84, 1.86 and 2.1, 1.81 and 2.39, and 0.86 and 1.36. In conclusion, laser- and LED-mediated PDT were effective in reducing Candida biofilms. For all microorganisms tested, the highest microbial...

Efeito antimicrobiano de múltiplas sessões de terapia fotodinâmica sobre biofilmes de Candida spp. formados in vitro / Antimicrobial effect of photodynamic therapy multiple-sessions on biofilms of Candida spp. formed in vitro

Vários estudos in vitro demonstraram que a terapia fotodinâmica (TFD) apresenta efeitos antimicrobianos sobre as leveduras do gênero Candida, podendo representar uma terapia alternativa e coadjuvante no tratamento da estomatite protética. Assim, este trabalho teve como objetivo avaliar o efeito antifúngico de múltiplas sessões de terapia fotodinâmica sobre biofilmes de Candida formados na superfície de resina acrílica. Para realização desse trabalho, biofilmes monotípicos de C. albicans, C. tropicalis e C. glabrata foram formados, durante 5 dias, em corpos de prova confeccionados com resina acrílica termicamente ativada. A seguir, foram realizadas 5 sessões de terapia fotodinâmica, em intervalos de 24 horas, sobre os biofilmes previamente formados. Foram avaliadas 2 modalidades de terapia fotodinâmica, incluindo aplicação de Laser de Arseneto de Gálio e Alumínio associado ao fotossensibilizador azul de metileno ou terapia com Diodo Emissor de Luz (LED) verde e fotossensibilizador eritrosina. Os grupos controles foram tratados apenas com solução fisiológica. Após a realização de cada aplicação da terapia fotodinâmica, os biofilmes aderidos aos corpos de prova foram submetidos à homogeneização ultra-sônica e as células dispersas foram semeadas em Ágar Sabouraud Dextrose (37 °C / 48 h) para contagem de unidades formadoras de colônias (UFC/corpo de prova). Os resultados obtidos foram submetidos à análise de Variância (ANOVA) e teste de Tukey considerando-se nível de significância de 5%. Para todos os micro-organismos os resultados da redução de UFC (log) foram comparados aos controles da primeira, segunda, terceira, quarta e quinta aplicações com o Laser e com o LED. Para C. glabrata as reduções para cada aplicação foram respectivamente de 3,22 e 4,83; 1,49 e 2,21; 1,6 e 2.05; 1,53 e 5,09 e 2,75 e 3,03. Para C. albicans foram 0,12 e 0,36; 0,54 e 0,93; 0,15 e 0,06; 0,96 e 0,75 e 0,89 e 1,82. C. tropicalis apresentou as seguintes reduções: 0,16 e 0,14; 1,52 e 2,84;...

Several in vitro studies have demonstrated the antimicrobial effects of photodynamic therapy (PDT) against yeast of the genus Candida, representing an alternative or coadjuvant tool for the treatment of denture stomatitis. Therefore, the objective of this study was to evaluate the antifungal effect of multiple PDT sessions on Candida biofilms formed on the surface of acrylic resin. For this purpose, monotypic biofilms of C. albicans, C. tropicalis and C. glabrata were grown for 5 days on test specimens consisting of thermally activated acrylic resin. Next, the biofilms formed were submitted to five sessions of PDT at intervals of 24 hours. Two modalities of PDT were evaluated: a gallium-aluminum-arsenide laser combined with methylene blue as photosensitizer, and a green light-emitting diode (LED) and erythrosine as photosensitizer. The control groups were only treated with saline. After each application of PDT, the biofilms adhered to the test specimens were submitted to ultrasonic homogenization and the dispersed cells were seeded onto Sabouraud dextrose agar (37 oC, 48 h) for determination of colony-forming units (CFU/test specimen). Analysis of variance (ANOVA) and the Tukey test were used for analysis of the results, adopting a level of significance of 5%. For all microorganisms, the results of CFU(log) reduction were compared to controls of the first, second, third, fourth and fifth application of the laser and LED. For C. glabrata, the reductions in each application were, respectively, 3.22 and 4.83, 1.49 and 2.21, 1.6 and 2.05, 1.53 and 5.09, and 2.75 and 3.03. Reductions of 0.12 and 0.36, 0.54 and 0.93, 0.15 and 0.06, 0.96 and 0.75, and 0.89 and 1.82 were observed for C. albicans. Candida tropicalis showed the following reductions: 0.16 and 0.14, 1.52 and 2.84, 1.86 and 2.1, 1.81 and 2.39, and 0.86 and 1.36. In conclusion, laser- and LED-mediated PDT were effective in reducing Candida biofilms. For all microorganisms tested, the highest microbial ...

Avaliação clínica e laboratorial do tratamento da estomatite protética através de produtos naturais / Clinical and laboratory evaluation of denture stomatitis treatment using natural products

O aumento da resistência aos antifúngicos convencionais e os possíveis efeitos colaterais destes fármacos têm estimulado pesquisas sobre produtos naturais com potencial antimicrobiano e baixa toxicidade. Assim, o objetivo desta pesquisa foi realizar uma avaliação clínica e laboratorial do tratamento da estomatite protética (EP) através de produtos naturais, por meio de cultura micológica quantitativa, de microscopia confocal e de análise das propriedades superficiais de uma resina acrílica. Em todas as avaliações, os grupos experimentais foram divididos de acordo com as seguintes substâncias: G1 - água destilada estéril; G2 - nistatina; G3 - extrato alcoólico de própolis a 20%; G4 - gel de Punica granatum Linné; G5 - gel de Uncaria tomentosa (Imuno-Max Gel). Para a cultura micológica quantitativa, 30 pacientes diagnosticados com EP utilizaram os seus respectivos medicamentos três vezes por dia, durante 14 dias, associados à escovação das próteses com dentifrício. Nas avaliações, foram coletados materiais das áreas eritematosas da mucosa palatina e das áreas correspondentes na prótese total superior. Este procedimento foi realizado antes do tratamento (T0), após 14 dias do início do tratamento (T1) e 30 dias após a suspensão do uso dos medicamentos (T2). Os dados obtidos foram submetidos ao teste não-paramétrico de Friedman para comparações intragrupos e ao teste de Kruskal-Wallis para comparações intergrupos. Para análise através de microscopia confocal, 30 espécimes de uma resina acrílica termopolimerizável foram inoculados com C. albicans para a formação do biofilme e, em seguida, imersos em sua respectiva droga. Os biofilmes remanescentes sobre os espécimes foram corados através de fluorocromos indicadores de viabilidade celular. Os dados obtidos foram analisados através do teste não paramétrico de Kruskal-Wallis e do pós-teste de comparação múltipla de Dunn. Para análise das propriedades superficiais, 50 espécimes de uma resina acrílica termopolimerizável...

The increased resistance to conventional antifungal drugs and their possible side effects have stimulated research on natural products with antimicrobial activity and low toxicity. This study comprised a clinical and laboratory evaluation of the treatment of denture stomatitis (DS) using natural products by quantitative mycological culture, confocal microscopy and analysis of surface properties of an acrylic resin. In all evaluations, the experimental groups were divided according to the following substances: G1 - sterile distilled water; G2 - nystatin (Micostatin); G3 - 20% propolis alcoholic extract; G4 - P. granatum Linné gel; G5 - Uncaria tomentosa gel (Imuno-Max Gel). For quantitative mycological culture, 30 patients diagnosed with DS used their respective medicines three times a day for 14 days, associated with denture brushing with dentifrice. For the analysis, material was collected from erythematous areas of the palatal mucosa and from corresponding areas on the maxillary denture. This procedure was performed before treatment (T0), at 14 days after treatment onset (T1) and 30 days after interrupting the use of drugs (T2). Data were analyzed by the non-parametric Friedman test for intragroup comparisons and Kruskal-Wallis test for intergroup comparisons. For analysis by confocal microscopy, 30 specimens of a polymerized acrylic resin were inoculated with C. albicans for biofilm development and then immersed in the respective drugs. The remaining biofilms on the specimens were stained using fluorochrome indicators of cell viability. Data were analyzed by non-parametric Kruskal-Wallis test and Dunn's multiple comparison post-hoc test. For the analysis of surface properties, 50 specimens of polymerized acrylic resin were fabricated, polished and tested for initial verification of roughness and microhardness (T0). Then, the specimens were individually immersed in the respective drugs for 24 hours. After 14 days of immersion (T1), the surfasse...

Avaliação clínica e laboratorial do tratamento da estomatite protética através de produtos naturais / Clinical and laboratory evaluation of denture stomatitis treatment using natural products

O aumento da resistência aos antifúngicos convencionais e os possíveis efeitos colaterais destes fármacos têm estimulado pesquisas sobre produtos naturais com potencial antimicrobiano e baixa toxicidade. Assim, o objetivo desta pesquisa foi realizar uma avaliação clínica e laboratorial do tratamento da estomatite protética (EP) através de produtos naturais, por meio de cultura micológica quantitativa, de microscopia confocal e de análise das propriedades superficiais de uma resina acrílica. Em todas as avaliações, os grupos experimentais foram divididos de acordo com as seguintes substâncias: G1 - água destilada estéril; G2 - nistatina; G3 - extrato alcoólico de própolis a 20%; G4 - gel de Punica granatum Linné; G5 - gel de Uncaria tomentosa (Imuno-Max Gel). Para a cultura micológica quantitativa, 30 pacientes diagnosticados com EP utilizaram os seus respectivos medicamentos três vezes por dia, durante 14 dias, associados à escovação das próteses com dentifrício. Nas avaliações, foram coletados materiais das áreas eritematosas da mucosa palatina e das áreas correspondentes na prótese total superior. Este procedimento foi realizado antes do tratamento (T0), após 14 dias do início do tratamento (T1) e 30 dias após a suspensão do uso dos medicamentos (T2). Os dados obtidos foram submetidos ao teste não-paramétrico de Friedman para comparações intragrupos e ao teste de Kruskal-Wallis para comparações intergrupos. Para análise através de microscopia confocal, 30 espécimes de uma resina acrílica termopolimerizável foram inoculados com C. albicans para a formação do biofilme e, em seguida, imersos em sua respectiva droga. Os biofilmes remanescentes sobre os espécimes foram corados através de fluorocromos indicadores de viabilidade celular. Os dados obtidos foram analisados através do teste não paramétrico de Kruskal-Wallis e do pós-teste de comparação múltipla de Dunn. Para análise das propriedades superficiais, 50 espécimes de uma resina acrílica termopolimerizável...

The increased resistance to conventional antifungal drugs and their possible side effects have stimulated research on natural products with antimicrobial activity and low toxicity. This study comprised a clinical and laboratory evaluation of the treatment of denture stomatitis (DS) using natural products by quantitative mycological culture, confocal microscopy and analysis of surface properties of an acrylic resin. In all evaluations, the experimental groups were divided according to the following substances: G1 - sterile distilled water; G2 - nystatin (Micostatin); G3 - 20% propolis alcoholic extract; G4 - P. granatum Linné gel; G5 - Uncaria tomentosa gel (Imuno-Max Gel). For quantitative mycological culture, 30 patients diagnosed with DS used their respective medicines three times a day for 14 days, associated with denture brushing with dentifrice. For the analysis, material was collected from erythematous areas of the palatal mucosa and from corresponding areas on the maxillary denture. This procedure was performed before treatment (T0), at 14 days after treatment onset (T1) and 30 days after interrupting the use of drugs (T2). Data were analyzed by the non-parametric Friedman test for intragroup comparisons and Kruskal-Wallis test for intergroup comparisons. For analysis by confocal microscopy, 30 specimens of a polymerized acrylic resin were inoculated with C. albicans for biofilm development and then immersed in the respective drugs. The remaining biofilms on the specimens were stained using fluorochrome indicators of cell viability. Data were analyzed by non-parametric Kruskal-Wallis test and Dunn's multiple comparison post-hoc test. For the analysis of surface properties, 50 specimens of polymerized acrylic resin were fabricated, polished and tested for initial verification of roughness and microhardness (T0). Then, the specimens were individually immersed in the respective drugs for 24 hours. After 14 days of immersion (T1), the surfasse...

Resposta imune inata na estomatite protética: interação in vitro entre células epiteliais de palato humano e Candida albicans / Innate imune response in denture stomatitis: in vitro interaction between human palatal epithelial cells and Candida albicans

A presença de Candida albicans nos biofilmes microbianos da superfície interna das próteses totais superiores está relacionada com uma doença inflamatória no palato, a estomatite protética. Constituinte da defesa inata do hospedeiro, o epitélio bucal, por sua vez, tem a capacidade de reconhecer e reagir aos fatores fúngicos a fim de evitar a invasão pelo microrganismo. O objetivo deste trabalho foi avaliar in vitro o efeito direto e indireto de C. albicans viável sobre as células epiteliais de palato humano (CEPH) ao longo do tempo. Objetivamos correlacionar os eventos de agressão, apoptose e invasão das CEPH provocados pelo fungo, com as respostas de defesa epitelial mediante produção de óxido nítrico (NO) e expressão gênica do peptídeo antimicrobiano β-defensina 2 (hBD-2). Material e Métodos: As CEPH foram obtidas, parte pelo método explante e parte pelo método enzimático, e mantidas em co-cultivo sobre uma camada de sustentação feederlayer (fibroblastos gengivais humanos mitoticamente inativados). Após desafios das CEPH com C. albicans ATCC 90028 por contato direto fungo-epitélio (D.D.) e indireto pelo sobrenadante da cultura do fungo hifal (D.I.), proporções de desafio de 0,01/1; 0,025/1 e 0,1/1 levedura/queratinócito (FUN/EPI) e tempos experimentais de 3, 6 e 10 h foram determinados; via ensaios de viabilidade celular por imunofluorescência (LIVE/DEAD), e análise qualitativa da invasão celular pelo fungo por meio do método colorimétrico com laranja de acridina. A apoptose epitelial foi determinada pela marcação nuclear fluorescente com Hoechtst 33258. A produção de óxido nítrico (NO) e a expressão de RNAm de hBD-2 foram avaliados por reação colorimétrica de Griess e RT-qPCR, respectivamente. Os resultados foram expressos como média ± desvio padrão e submetidos aos testes estatísticos ANOVA Fatorial, Teste de Contraste; ou Teste de Mann-Whitney (p<0,05). Resultados: Em 3 h, foi detectado aumento da apoptose das células epiteliais em relação ao...

The presence of the fungus Candida albicans in the microbial biofilm underlying maxillary prosthesis is related to an inflammatory reaction of the palatal mucosa, the denture stomatitis. As a component of the host innate defense, the oral epithelium has the ability to recognize and react to fungal factors in order to prevent the microrganism invasion. The aim of this study was to in vitro evaluate the direct and indirect effect of viable C. albicans on the human palatal epithelial cells (HPEC) over time. The aggressive events, such as apoptosis and HPEC invasion by the fungus, were correlated with epithelial defense responses through the nitric oxide (NO) production and antimicrobial peptides β-defensin (hBD-2) mRNA expression. Methods: The HPEC were obtained by explant and enzymatic methods, and were maintained in co-culture on a feeder-layer support (mitotically inactivated human gingival fibroblasts). After the HPEC challenges with C. albicans ATCC 90028 by direct contact fungus-epithelium (D.D.) and indirect contact by supernatant from hyphal fungus (D.I.), defiance ratios of 0.01/1, 0.025/1 and 0.1/1 yeast/keratinocyte (FUN/EPI) and experimental times of 3, 6 and 10 h were determined. These conditions were standardized by cell viability immunofluorescence assay (LIVE/DEAD), and cell invasion qualitative analysis (colorimetric method with acridine orange). The apoptotic cells were determined by fluorescent nuclear staining with Hoechtst 33258. The nitric oxide (NO) production and hBD-2 gene expression were evaluated by Griess colorimetric reaction and RT-qPCR, respectively. The results were expressed as mean ± standard deviation and were analyzed using the factorial ANOVA, Contrast Test; or Mann-Whitney Test (p<0,05). Results: At 3 h, the apoptotic epithelial cells under 0.1/1 FUN/EPI increased compared to epithelium unchallenged (p<0,05) that remained over time with increasing concentration and independent of D.D. and D.I. The onset...

Prevalência de lesões bucais cancerizáveis diagnosticadas em Pernambuco nas Campanhas do Projeto Asa Branca segundo gênero e idade / Prevalence of carcinogenic oral injuries diagnosed in Pernambuco in Campaings of Project Asa Branca according gender and age

A presente pesquisa de campo tem o objetivo de verificar a prevalência das lesões bucais cancerizáveis diagnosticadas nas campanhas do Projeto Asa Branca que foram realizadas pela FOC/ASCES no estado de Pernambuco, segundo gênero e idade nos anos de 2004 a 2008. Iniciou-se uma análise de todas as fichas cadastrais arquivadas das campanhas realizadas nesses anos. Os dados encontrados foram separados de acordo com as variáveis sexo e faixa etária, e, logo após, utilizou-se o teste estatístico qui-quadrado. Os resultados mostraram que nos anos de 2004 a 2008, 19.397 pessoas apresentaram algum tipo de lesão bucal, sendo que as lesões predominaram no sexo feminino (13.826 lesionadas - 71,28%) e nas pessoas de 30 a 59 anos de idade (10.266 lesionados - 52,93%). Foi concluído que as lesões prevalecem no sexo feminino e nas faixas etárias entre 30 a 59 anos. Como o índice de portadores de próteses dentárias é superior no sexo feminino com essa faixa etária, sugere-se, portanto, que a maioria dos casos das lesões na população pernambucana é devido a próteses dentárias mal adaptadas ou a má higienização da prótese, causando a lesão mais diagnosticada nessas campanhas: a estomatite protética.

This research field has the purpose to verify the prevalence of carcinogenic oral injuries diagnosed in campaings of Project Asa Branca wich were realized by FOC/ASCES in state of Pernambuco, according to gender and age, in the years 2004-2008. An analysis of all the registration records filed of Project Asa Branca campaings in these years has began. The informations found were separate according to variables gender and age, and after, was used the chi-square statistical test. The results showed in years 2004 to 2008, 19.397 people showed some type of oral lesion, being the lesions predominated in female gender (13.826 injureds - 71,28%) and in people with 30 to 59 years old (10.266 injureds - 52,93%). It was verified that, the lesions predominated in female gender and in age group 30 to 59 years old. As the index of patients with prosthesis is more in female gender with these age, we suggest, so, the majority of lesions cases in the Pernambuco state population is because dental prosthesis with bad adaptation or the bad hygiene of the prosthesis, causing the lesion more diagnosed in these campaings: the stomatitis denture.

Produção de citocinas pelos monócitos de idosos com estomatite protética associada a Candida / Cytokine production by monocytes from elderly patients with Candida-associated denture stomatitis

Estomatite protética associada a Cândida (EPC), a lesão mais frequente em usuários de próteses removíveis, principalmente os idosos, caracteriza-se por uma inflamação da mucosa bucal que suporta a prótese. Está fortemente associada com Candida Albicans, bem como com fatores locais e sistêmicos, como a deficiência da resposta imune. Os monócitos são importantes na resposta protetora contra o fungo, produzindo citocinas que recrutam e ativam leucócitos. Existem alterações funcionais dessas células com o avanço da idade. Não foi possível encontrar na literatura dados referentes à função imunomodulatória dos monócitos de idosos com EPC. O presente trabalho pretendeu avaliar a produção de citocinas por essas células, estimuladas in vitro com C. albicans, obtidas do sangue periférico de idosos usuários de prótese total superior (PTS) com EPC, comparando-se com idosos usuários de PTS sem EPC, e com idosos e jovens não usuários de PTS. Os monócitos isolados foram cultivados em placas de cultura de 24 poços, na ausência ou presença de lipopolissacarídeo (LPS) ou C. albicans ATCC 90028 morta pelo calor. Após 18 horas, o sobrenadante foi coletado e submetido ao ensaio de imunoabsorção por ligação enzimática (ELISA) para dosagem das citocinas pró- inflamatórias fator de necrose tumoral- (TNF-), interleucina-6 (IL-6), IL-1, CXCL8 e proteína quimiotática de monócito (MCP-1), e anti-inflamatórias IL-10 e fator transformador de crescimento- (TGF-). Os resultados estão expressos como média ± desvio padrão dos valores obtidos para cada grupo, e foram analisados por meio de testes estatísticos não-paramétricos. Valores de p<0,05 foram considerados estatisticamente significativos. Os resultados demonstraram, de uma forma geral, alterações nos monócitos oriundos dos idosos com EPC, em comparação aos outros grupos: menor produção espontânea de CXCL8 e de MCP-1; menores níveis de TNF-, de IL-6, de IL-1, de CXCL8, de MCP-1 e de IL-10, após estímulo com LPS; e menor...

Candida-associated denture stomatitis (DS), the most frequent lesion among denture wearers, especially the elderly, is characterized by inflammation of the denture-bearing mucosa. It is strongly associated with Candida albicans, as well as with local and systemic factors, such as impaired immune response. Monocytes are important in the protective immune response against the fungus, by the production of cytokines that recruit and activate leukocytes. There are functional changes of these cells with advancing age. No data were found in the literature concerning the immunomodulatory function of these phagocytes in elderly patients with DS. This study aimed to evaluate the cytokine production by monocytes, challenged in vitro with C. albicans, obtained from peripheral blood of elderly denture wearers with DS, compared with elderly denture wearers without DS and elderly and young non-denture wearers. The isolated monocytes were cultivated in 24-well flat-bottomed culture plates, in the absence or presence of lipopolysaccharide (LPS) or heat-killed C.albicans ATCC 90028. After 18 hours, the supernatant was collected and submitted to the enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for determination of the pro-inflammatory cytokines tumor necrosis factor-alpha (TNF-), interleukin-6 (IL-6), CXCL8, IL-1, monocyte chemotactic protein-1 (MCP-1) and anti-inflammatory cytokines IL-10 and transforming growth factor- (TGF-). The results are expressed as mean ± standard deviation of the values obtained for each group, and were analyzed using nonparametric statistical tests; p values <0.05 were considered statistically significant. The results demonstrated, in general, changes in monocytes from the elderly with DS, as compared to other groups: lower spontaneous production of CXCL8 and MCP-1; lower levels of TNF-, IL-6, IL-1, CXCL8, MCP-1 and IL-10 after stimulation with LPS; and reduced production of TNF- and IL-6 after stimulation with C. albicans. Comparing...

Efeito do etil-cianoacrilato (Super Bonder®) e do polidor líquido de baixa viscosidade (Biscover®) sobre biofilme de Candida albicans em resina acrílica para reembasamento / Effect of ethyl-cyanoacrylate (Super Bonder®) and a liquid polish of low viscosity (Biscover®) on Candida albicans biofilms on denture reline resin

A proposta desse trabalho foi verificar através de microscopia confocal de varredura a laser, se a utilização de uma resina fotopolimerizável de baixa viscosidade (Biscover®) e do etil-cianoacrilato (Super Bonder®) seriam eficientes em prevenir ou reduzir a formação de biofilme de Candida albicans. Cinqüenta e seis corpos de prova em resina acrílica para reembasamento (New Truliner) foram divididos aleatoriamente em 7 grupos: G1 (C)- Controle; G2 (SBAE)- Recebeu uma camada de Super Bonder® em sua superfície antes de esterilizar; G3 (SBDE)- Recebeu uma camada de Super Bonder® em sua superfície depois de esterilizar; G4 (SB3G)- 3 gotas de Super Bonder® incorporadas na resina; G5 (SB4G)- 4 gotas de Super Bonder® incorporadas na resina; G6 (BCDE)- Recebeu uma camada de Biscover® em sua superfície depois de esterilizar e G7 (BCAE) Recebeu uma camada de Biscover® em sua superfície antes de esterilizar. Todos os corpos de prova foram inoculados com Candida albicans para formação de biofilme. Os biofilmes remanescentes sobre os corpos de prova foram corados através dos fluorocromos SYTO-9 e iodeto de propídeo para análise no microscópio confocal. Os dados foram analisados através dos testes estatísticos de Kruskal-Wallis e Dunn, a um nível de significância de 5%. Os resultados obtidos pelo microscópio confocal mostraram que, de todos os corpos de prova modificados, os que receberam a Super Bonder® em sua superfície, G2(SBAE) e G3(SBDE) foram os únicos que significativamente reduziram a formação de biofilme de Candida albicans. Através da análise das imagens geradas pelo microscópio confocal, pôde-se observar que nos grupos G2(SBAE) e G3(SBDE) os campos apresentaram um reduzido número de células fúngicas e a maioria se encontrava na forma de levedura (inócua), enquanto que, para os demais grupos, além de observado um elevado número de células, a maioria destas se apresentava em forma de hifa (patogênica). Desse modo, a partir das...

The purpose of this study was to verify, using the confocal laser scanning microscopy (CLSM), if the use of a photoactivated resin of low viscosity (Biscover®) and a ethyl-cyanoacrylate (Super Bonder®) could be efficient in the prevention or reduction of Candida albicans biofilms. Fifty six reline resin specimens (New Truliner) were fabricated and randomly divided into 7 groups: G1 (C)- Control; G2 (SBAE)- a Super Bonder® layer was applied on the surface before sterilization; G3 (SBDE)- the surface received a Super Bonder® layer after sterilization; G4 (SB3G)- 3 drops of Super Bonder® were incorporated in the structure of the resin; G5 (SB4G)- 4 drops of Super Bonder® were incorporated in the structure of the resin; G6 (BCDE)- a Biscover® layer was applied on the surface after sterilization; G7 (BCAE) the surface received a Biscover® layer before sterilization. All the specimens were inoculated with Candida albicans for biofilm dvelopment. The remaining biofilms on the specimens were stained with fluorochromes SYTO-9 and propidium iodide to be analyzed by CLSM. The data were statistically analyzed using the Kruskal-Wallis and Dunn test, considering a significance level of 5%. The data obtained by CLSM revealed that of all specimens modified, those that received a Super Bonder® layer on their surface, G2(SBAE) e G3(SBDE), presented the better results, reducing Candida albicans biofilm formation. Analyzing the images produced by CLSM it was possible to see that groups G2(SBAE) e G3(SBDE) showed a reduced number of cells, and they were in a less phatogenetic form (Yeast), while the other groups showed a high number of cells in a more pathogenetic form (Hyphae). Considering the experimental conditions of this study we can conclude that the material modifications done with Super Bonder® on the surface could be an interesting way to prevent or control biofilm formation on acrylic resin.

Efeito do etil-cianoacrilato (Super Bonder®) e do polidor líquido de baixa viscosidade (Biscover®) sobre biofilme de Candida albicans em resina acrílica para reembasamento / Effect of ethyl-cyanoacrylate (Super Bonder®) and a liquid polish of low viscosity (Biscover®) on Candida albicans biofilms on denture reline resin

A proposta desse trabalho foi verificar através de microscopia confocal de varredura a laser, se a utilização de uma resina fotopolimerizável de baixa viscosidade (Biscover®) e do etil-cianoacrilato (Super Bonder®) seriam eficientes em prevenir ou reduzir a formação de biofilme de Candida albicans. Cinqüenta e seis corpos de prova em resina acrílica para reembasamento (New Truliner) foram divididos aleatoriamente em 7 grupos: G1 (C)- Controle; G2 (SBAE)- Recebeu uma camada de Super Bonder® em sua superfície antes de esterilizar; G3 (SBDE)- Recebeu uma camada de Super Bonder® em sua superfície depois de esterilizar; G4 (SB3G)- 3 gotas de Super Bonder® incorporadas na resina; G5 (SB4G)- 4 gotas de Super Bonder® incorporadas na resina; G6 (BCDE)- Recebeu uma camada de Biscover® em sua superfície depois de esterilizar e G7 (BCAE) Recebeu uma camada de Biscover® em sua superfície antes de esterilizar. Todos os corpos de prova foram inoculados com Candida albicans para formação de biofilme. Os biofilmes remanescentes sobre os corpos de prova foram corados através dos fluorocromos SYTO-9 e iodeto de propídeo para análise no microscópio confocal. Os dados foram analisados através dos testes estatísticos de Kruskal-Wallis e Dunn, a um nível de significância de 5%. Os resultados obtidos pelo microscópio confocal mostraram que, de todos os corpos de prova modificados, os que receberam a Super Bonder® em sua superfície, G2(SBAE) e G3(SBDE) foram os únicos que significativamente reduziram a formação de biofilme de Candida albicans. Através da análise das imagens geradas pelo microscópio confocal, pôde-se observar que nos grupos G2(SBAE) e G3(SBDE) os campos apresentaram um reduzido número de células fúngicas e a maioria se encontrava na forma de levedura (inócua), enquanto que, para os demais grupos, além de observado um elevado número de células, a maioria destas se apresentava em forma de hifa (patogênica). Desse modo, a partir das...

The purpose of this study was to verify, using the confocal laser scanning microscopy (CLSM), if the use of a photoactivated resin of low viscosity (Biscover®) and a ethyl-cyanoacrylate (Super Bonder®) could be efficient in the prevention or reduction of Candida albicans biofilms. Fifty six reline resin specimens (New Truliner) were fabricated and randomly divided into 7 groups: G1 (C)- Control; G2 (SBAE)- a Super Bonder® layer was applied on the surface before sterilization; G3 (SBDE)- the surface received a Super Bonder® layer after sterilization; G4 (SB3G)- 3 drops of Super Bonder® were incorporated in the structure of the resin; G5 (SB4G)- 4 drops of Super Bonder® were incorporated in the structure of the resin; G6 (BCDE)- a Biscover® layer was applied on the surface after sterilization; G7 (BCAE) the surface received a Biscover® layer before sterilization. All the specimens were inoculated with Candida albicans for biofilm dvelopment. The remaining biofilms on the specimens were stained with fluorochromes SYTO-9 and propidium iodide to be analyzed by CLSM. The data were statistically analyzed using the Kruskal-Wallis and Dunn test, considering a significance level of 5%. The data obtained by CLSM revealed that of all specimens modified, those that received a Super Bonder® layer on their surface, G2(SBAE) e G3(SBDE), presented the better results, reducing Candida albicans biofilm formation. Analyzing the images produced by CLSM it was possible to see that groups G2(SBAE) e G3(SBDE) showed a reduced number of cells, and they were in a less phatogenetic form (Yeast), while the other groups showed a high number of cells in a more pathogenetic form (Hyphae). Considering the experimental conditions of this study we can conclude that the material modifications done with Super Bonder® on the surface could be an interesting way to prevent or control biofilm formation on acrylic resin.

Efetividade da escovação com diferentes agentes de limpeza de próteses na redução da viabilidade de biofilme in vitro da Candida albicans / Effectiveness of mechanical brushing with different denture cleansing agents in reducing in vitro Candida albicans biofilm viability

A Candida albicans tem sido considerada o principal agente etiológico da estomatite protética, uma das infecções mais comumente observadas em pacientes usuários de próteses removíveis. A adesão de C. albicans à superfície das próteses é o primeiro passo para o desenvolvimento da estomatite protética. Assim, uma adequada higienização das próteses é essencial para prevenir a formação de biofilme microbiano sobre a superfície protética e, conseqüentemente, o início e propagação desta infecção. O objetivo deste estudo foi avaliar a efetividade da escovação com diferentes soluções (água destilada, dentifrício, digluconato de clorexidina a 2%, hipoclorito de sódio a 1% e Polident fresh cleanse®) na redução da viabilidade de um biofilme maduro de C. albicans, desenvolvido sobre uma resina termopolimerizável para base de prótese. Para isso, 90 corpos-de-prova circulares foram confeccionados, esterilizados e inoculados com uma suspensão de 107 células/mL de C. albicans. Para a formação do biofilme, todos os corpos-de-prova foram incubados por 48 h a 37 °C sob agitação. A seguir, os corpos-de-prova foram aleatoriamente divididos (n=9) e individualmente submetidos à escovação ou exposição por 90 s nas diferentes soluções avaliadas. Os espécimes imersos em água destilada pelo mesmo período de tempo foram utilizados como controle positivo. Para verificar a efetividade da escovação e dos agentes de limpeza, os corpos-de-prova foram submetidos à avaliação da atividade metabólica das células não removidas de C. albicans por meio do teste do XTT. Os resultados obtidos foram analisados estatisticamente pelos testes de Mann-Whitney e Kruskal-Wallis (α=0.05). A escovação com todos os agentes de limpeza apresentou redução significativamente superior (p<0,0001) na viabilidade do biofilme quando comparada à exposição dos corpos-de-prova às soluções. Escovação e exposição em digluconato de clorexidina a 2% e escovação com hipoclorito de sódio a 1% resultaram em 100% de inativação do biofilme de C. albicans. Escovação e exposição nas demais soluções demonstraram, ao menos, 88% de redução na viabilidade celular (p<0,0001). O método de escovação associado ao uso dos agentes de limpeza digluconato de clorexidina a 2% e hipoclorito de sódio a 1% provou ser efetivo para inativar biofilme maduro de C. albicans aderido em resinas acrílicas para base de prótese

The adhesion of C. albicans to surfaces is the prerequisite for occurrence of denture stomatitis, a common disease diagnosed among denture wearers. Therefore, a strict routine of denture cleansing is essential to prevent biofilm formation on the acrylic denture surface and the onset of this infection. Thus, the aim of the current study was to investigate the effectiveness of combining toothbrushing and cleansing agents (dentifrice, 2% chlorhexidine gluconate, 1% sodium hypochlorite, and Polident fresh cleanse®) in inactivating C. albicans biofilm. Circular specimens (10 x 2 mm) of acrylic resin denture base material were made, sterilized, and individually inoculated with C. albicans (1x107 colony-forming units/mL). After incubation (37 °C/48 h), the specimens were divided into 10 experimental groups (n=9): 5 subjected to toothbrushing with different cleansing agents and 4 exposed to the cleansing agents without toothbrushing. Non–cleansed specimens were used as positive controls. The viability of cells was evaluated by XTT reduction method. Mann-Whitney and Kruskal-Wallis tests were used for comparative analysis between the two methods of cleansing and the cleansing agents, respectively (α=0.05). Toothbrushing with all agents was significantly more effective (p<0.0001) in reducing biofilm viability than exposure to the cleansing agents only. Exposure to all cleansing agents reduced significantly (p<0.0001) the biofilm viability, with 2% chlorhexidine gluconate being most effective (p<0.0001). Toothbrushing with 2% chlorhexidine gluconate and 1% sodium hypochlorite resulted in 100% inactivation of the biofilm. The use of cleansing agents as an adjunct to toothbrushing is an effective method to reduce C. albicans biofilm viability on denture base resins.

Estomatite protética em pacientes com Diabetes mellitus: prevalência de Candida spp. e eficiência dos tratamentos com nistatina e desinfecção de próteses por micro-ondas / Denture stomatitis in diabetic patients: Candida spp. prevalence and efficacy of treatments with nystatin and denture microwave disinfection

Este estudo in vivo teve como objetivos avaliar: 1. a prevalência das diferentes espécies de Candida em pacientes diabéticos portadores de estomatite protética e compará-la àquela de pacientes não diabéticos com/sem estomatite protética; 2. a eficiência de dois tratamentos para estomatite protética em pacientes diabéticos: terapia antifúngica com nistatina e desinfecção de próteses totais por micro-ondas. Para isso, 210 pacientes usuários de prótese totais foram selecionados e distribuídos em três grupos de estudo. O grupo controle - GC foi formado por 90 pacientes não diabéticos e com mucosa oral saudável; os grupos experimentais foram formados por portadores de estomatite protética, sendo 80 pacientes não diabéticos - EPND e 40 diabéticos do tipo 2 controlados - EPD. Uma avaliação intra-oral dos pacientes dos grupos experimentais foi realizada e a aparência clínica da mucosa inflamada foi classificada de acordo com os critérios de Newton em graus I, II ou III. Coletas microbiológicas das próteses totais foram realizadas com swab estéril e plaqueadas em meio CHROMagar Candida. Em seguida, os procedimentos de identificação foram realizados: análise de microcultivo, teste de triagem fenotípica em caldo hipertônico e testes bioquímicos (ID-32C). Os resultados obtidos foram analisados por Intervalo de Confiança de Bonferroni e testes Exato de Fisher e Qui Quadrado (α=0,05). Os 40 pacientes diabéticos foram, então, submetidos ao tratamento da estomatite protética. Para isso, foram aleatoriamente distribuídos em 2 grupos (n=20): grupo NIS ­ tratamento com antifúngico tópico nistatina (suspensão oral - 100.000UI/mL), 4 vezes ao dia, por 14 dias; grupo MIC ­ tratamento por meio da irradiação das totais por micro-ondas (650W / 3 minutos), 3 vezes por semana, por 14 dias. Dois parâmetros foram utilizados para avaliar a efetividade dos tratamentos: microbiológico (coletas de material das próteses e das mucosas palatinas com swab estéril para quantificação de colônias viáveis ­ ufc/mL e identificação de Candida spp.) e clínico (tomadas fotográficas intra-orais das mucosas palatinas infectadas). Todos os pacientes foram submetidos a estes procedimentos previamente ao início dos tratamentos, ao seu final, e 30, 60 e 90 dias decorridos do seu início. Os valores de log10ufc/mL foram analisados estatisticamente por ANOVA subjacente a um modelo linear com efeitos aleatórios. A prevalência das espécies de Candida foi avaliada pelo teste Qui Quadrado. As avaliações qualitativas das fotografias intra-bucais e a análise da inflamação ao longo do tempo foram avaliadas, respectivamente, pelos testes Exato de Fisher e Mann-Whitney (α>05). Os resultados observados demonstraram que a C. albicans foi a espécie predominante em todos os grupos de estudo (p<0,016), seguida por C. tropicalis e C. glabrata (p>0,05). Não foram verificadas diferenças significantes (p>0,05) na prevalência de Candida spp. entre os grupos EPND e EPD. As prevalências de C. albicans e C. tropicalis foram significativamente superiores (p<0,01) nos grupos de pacientes com estomatite protética e a de C. tropicalis foi superior (p<0,05) nos pacientes diagnosticados com infecção grau III de Newton. Com relação aos tratamentos instituídos nos pacientes diabéticos, ambos reduziram significativamente (p<0,001) os valores de log10ufc/mL após 15 e 30 dias, não tendo sido encontradas diferenças estatisticamente significantes (p>0,05) entre os grupos de estudo. Não foram verificadas diferenças significantes (p>0,05) entre o número de pacientes curados e com recidivas, após a condução dos dois tratamentos. Com base nestes resultados, foi concluído que a prevalência de Candida spp. foi similar entre os pacientes diabéticos e não-diabéticos com estomatite protética. Apesar de a C.albicans ter sido a espécie mais frequentemente identificada em todos os pacientes avaliados, a prevalência de C. tropicalis foi superior nos pacientes com estomatite protética e naqueles com maior grau de inflamação, sugerindo que esta espécie pode estar envolvida com o início e a progressão da infecção. Além disso, a irradiação de próteses totais por micro-ondas pode ser utilizada com sucesso para tratar e prevenir o aparecimento de estomatite protética em pacientes diabéticos, apresentando a mesma efetividade de um método clássico de tratamento com antifúngico tópico

The aim of this in vivo study was to evaluate: 1. the prevalence of Candida spp. in well-controlled type 2 diabetic patients and compare it to that found in non-diabetics with/without denture stomatitis; 2. the efficacy of two treatments of denture stomatitis in diabetic patients: topical nystatin and denture microwave disinfection. Two hundred and ten denture wearer patients were divided into three groups of study. The control group - CG was formed by 90 individuals without diabetes or denture stomatitis and the experimental groups were formed by patients with denture stomatitis, being 80 non-diabetics - DSND and 40 well-controlled type 2 diabetics - DSD. Mucosal characteristics of denture stomatitis patients were classified in types I, II, and III, according to Newton's criteria. Mycological samples were taken from the dentures and cultured in CHROMagar's plates. Candida spp. were identified by micro-cultivation, hypertonic Sabouraud broth, and bioMérieux ID32C assays. Results were analyzed by means of Bonferroni corrected confidence interval, Fisher's exact test, and Chi-square analysis of several proportions (α=0.05). The 40 diabetic patients were divided into two groups (n=20) and submitted to two treatments for denture stomatitis: NYS group ­ patients were treated with topical nystatin, 4 times a day, for 14 days; MW group ­ patients had their dentures microwaved (650W / 3 minutes), 3 times per week, for 14 days. Mycological samples were taken from the palates and the tissue surface of the dentures for quantification and identification of Candida spp. and standardized photographs of the palates were taken for the clinical analysis. Microbiological and clinical evaluations were repeated at baseline, the end of treatments (day-14), and follow up (day-30, day60, day-90). Microbiological data were evaluated by ANOVA using a random effects statistical model,Tukey's post hoc test, and Chi-square test, while clinical results were analyzed by Mann-Whitney and Fisher's exact tests (α=0.05). According to the results, C. albicans was the most predominant species isolated in CG, DSND, and DSD groups (p<0.016), followed by C. tropicalis and C. glabrata (p>0.05). No significant differences were found in Candida spp. prevalence between DSND and DSD (p>0.05). The percentage frequencies of C. albicans and C. tropicalis in denture stomatitis groups (DSND and DSD) were significantly higher (p<0.01) than those in CG and the prevalence of C. tropicalis was significantly higher (p<0.05) in Newton's type III patients. Both NYS and MW treatments were considered successful in reducing the clinical signs of denture stomatitis and significantly reduced the values of cfu/mL from the palates and dentures at day-14 and day-30. Forty percent of patients had no signs of denture stomatitis at the end of both treatments. No significant differences (p>0.05) in the microbiological and clinical outcomes were revealed between the two treatments. It was concluded that the prevalence of Candida spp. was similar between diabetic and non-diabetic patients with denture stomatitis. Despite C. albicans was the most commonly isolated organism, the prevalence of C. tropicalis increased in patients with denture stomatitis and in those with the highest degree of inflammation, suggesting that this species may play an important role in the progression of this infection. In addition, denture microwave disinfection was as effective as nystatin on the treatment of well-controlled type 2 diabetic patients with denture stomatitis

Atividade antimicrobiana de uma resina acrílica para base protética combinada a um polímero antimicrobiano sobre a formação de biofilme / Antimicrobial activity of a denture base acrylic resin combined with a biocide polymer on biofilm formation

Por ser considerada um ambiente propício para proliferação de microrganismos bucais e formação de biofilme, possibilitando o aparecimento de estomatite protética, a adição de um polímero com ação antimicrobiana à resina acrílica poderia favorecer a saúde bucal do paciente edentado e torná-la menos suscetível à formação de biofilmes. Dessa forma, o objetivo deste estudo foi avaliar a atividade antimicrobiana de uma resina acrílica termopolimerizável para base protética combinada ao polímero antimicrobiano poli(2 tert-butilaminoetil) metacrilato (PTBAEMA) sobre formação de biofilme de Staphyloccocus aureus, Streptococcus mutans e Candida albicans. Trinta espécimes de formato circular foram confeccionados a partir da resina acrílica termopolimerizável (Lucitone 550) e divididos em três grupos de acordo com as diferentes concentrações de PTBAEMA 0, 10 e 25%. Os espécimes foram inoculados e incubados a 37ºC por 48h. Após esse período, cada espécimes foi transferido para tubos contendo solução salina. Em seguida, foram realizadas diluições seriadas da suspensão resultante e alíquotas dessas diluições foram semeados em placas de Petri e incubadas a 37ºC por 48h. Os dados obtidos foram transformados em log(UFC+1)/ml e analisados pelos testes de Mann-Whitney e Kruskal-Wallis (α=0,05). Os resultados demonstraram que o grupo contendo 25% de PTBAEMA inibiu completamente a formação de biofilme de S. aureus e S. mutans. Uma redução significativa na contagem de log(UFC+1)ml de S. aureus (P=0,001) e S. mutans (P=0,001) para o grupo contendo 10% de PTBAEMA foi observada quando comparada aos valores encontrados nos respectivos grupos controle. Para C. albicans não foi encontrada diferença significante entre grupos contendo PTBAEMA e o grupo controle (P=0,079). Conclui-se que a resina acrílica Lucitone 550 contendo 10% e 25% de PTBAEMA apresentaram, respectivamente, um efeito bacteriostático e bactericida na formação de biofilme de S. aureus e S. mutans. Entretanto não teve efeito significante na formação de biofilme de C. albicans

Denture base acrylic resins have been shown to be reservoirs for microorganisms and are a potential to support the formation of biofilm, which may result in the development of denture stomatitis. Thus, the addition of a polymer with antimicrobial activity to the acrylic resin could inhibit biofilm growth on denture base. The aim of this study was to evaluate the antimicrobial activity of an acrylic resin combined with antimicrobial polymer poly (2-tertbutylaminoethyl) methacrylate (PTBAEMA) to inhibit biofilm formation of three species of microorganisms (Staphylococcus aureus, Streptococcus mutans and Candida albicans). Thirty discs of a heat-polymerized acrylic resin (Lucitone 550) were produced and divided into three groups, according to the concentration of PTBAEMA: 0% (control), 10% and 25%. The specimens were individually inoculated with appropriate media containing one of the tested microorganisms and incubated for 37ºC for 48h under aerobic or anaerobic conditions. After incubation, each specimen was transferred to sterile tube containing sterile distilled water. Replicate aliquots of resultant suspensions were plated at dilutions for 48h at 37ºC. After incubation, the mean microbial counts were expressed as log (CFU + 1)/mL and analyzed statistically with Denture base acrylic resins have been shown to be reservoirs for microorganisms and are a potential to support the formation of biofilm, which may result in the development of denture stomatitis. Thus, the addition of a polymer with antimicrobial activity to the acrylic resin could inhibit biofilm growth on denture base. The aim of this study was to evaluate the antimicrobial activity of an acrylic resin combined with antimicrobial polymer poly (2-tertbutylaminoethyl) methacrylate (PTBAEMA) to inhibit biofilm formation of three species of microorganisms (Staphylococcus aureus, Streptococcus mutans and Candida albicans). Thirty discs of a heat-polymerized acrylic resin (Lucitone 550) were produced and divided into three groups, according to the concentration of PTBAEMA: 0% (control), 10% and 25%. The specimens were individually inoculated with appropriate media containing one of the tested microorganisms and incubated for 37ºC for 48h under aerobic or anaerobic conditions. After incubation, each specimen was transferred to sterile tube containing sterile distilled water. Replicate aliquots of resultant suspensions were plated at dilutions for 48h at 37ºC. After incubation, the mean microbial counts were expressed as log (CFU + 1)/mL and analyzed statistically with =.05. The results showed that the group containing 25% of PTBAEMA completely inhibited biofilm formation of S. aureus and S. mutans. A significant reduction in count of log (CFU +1) ml of S. aureus (P=0.001) and S. mutans (P=0.001) was observed for the group containing 10% PTBAEMA when compared to respective control groups. For C. albicans, differences were not significant between groups containing PTBAEMA and control group (P=0.079). It was concluded that 10% and 25% of PTBAEMA showed, respectively, a bacteriostatic and bactericidal effect in biofilm formation of S. aureus and S. mutans. However, had no significant effect on biofilm formation of C. albicans Denture base acrylic resins have been shown to be reservoirs for microorganisms and are a potential to support the formation of biofilm, which may result in the development of denture stomatitis. Thus, the addition of a polymer with antimicrobial activity to the acrylic resin could inhibit biofilm growth on denture base. The aim of this study was to evaluate the antimicrobial activity of an acrylic resin combined with antimicrobial polymer poly (2-tertbutylaminoethyl) methacrylate (PTBAEMA) to inhibit biofilm formation of three species of microorganisms (Staphylococcus aureus, Streptococcus mutans and Candida albicans). Thirty discs of a heat-polymerized acrylic resin (Lucitone 550) were produced and divided into three groups, according to the concentration of PTBAEMA: 0% (control), 10% and 25%. The specimens were individually inoculated with appropriate media containing one of the tested microorganisms and incubated for 37ºC for 48h under aerobic or anaerobic conditions. After incubation, each specimen was transferred to sterile tube containing sterile distilled water. Replicate aliquots of resultant suspensions were plated at dilutions for 48h at 37ºC. After incubation, the mean microbial counts were expressed as log (CFU + 1)/mL and analyzed statistically with =.05. The results showed that the group containing 25% of PTBAEMA completely inhibited biofilm formation of S. aureus and S. mutans. A significant reduction in count of log (CFU +1) ml of S. aureus (P=0.001) and S. mutans (P=0.001) was observed for the group containing 10% PTBAEMA when compared to respective control groups. For C. albicans, differences were not significant between groups containing PTBAEMA and control group (P=0.079). It was concluded that 10% and 25% of PTBAEMA showed, respectively, a bacteriostatic and bactericidal effect in biofilm formation of S. aureus and S. mutans. However, had no significant effect on biofilm formation of C. albicans α=.05. The results showed that the group containing 25% of PTBAEMA completely inhibited biofilm formation of S. aureus and S. mutans. A significant reduction in count of log (CFU +1) ml of S. aureus (P=0.001) and S. mutans (P=0.001) was observed for the group containing 10% PTBAEMA when compared to respective control groups. For C. albicans, differences were not significant between groups containing PTBAEMA and control group (P=0.079). It was concluded that 10% and 25% of PTBAEMA showed, respectively, a bacteriostatic and bactericidal effect in biofilm formation of S. aureus and S. mutans. However, had no significant effect on biofilm formation of C. albicans