Ensayo de citotoxicidad de extractos de Pleurotusostreatus en diferentes líneas celulares para aplicaciones inmunonutricionales

Introducción: Los bioderivados propuestos como candidatos a ingredientes alimentarios suelen requerir ciertas evaluaciones para las aplicaciones inmunonutricionales Los hongos comestibles-medicinales son un surtidor de compuestos con estas potencialidades. Entre ellos, las setas Pleurotus ostreatus contienen metabolitos bioactivos, con importantes usos en la industria alimenticia y en la práctica terapéutica de la industria médico-farmacéutica. Los ensayos de citotoxicidad in vitro constituyen métodos valiosos para evaluarproductos de origen natural, como los extractos fúngicos. Objetivo: Evaluar la citotoxicidad de dos extractos obtenidos de la seta Pleurotus ostreatus en diferentes líneas celulares. Método: Se obtuvieron extractos hidrosolubles a partir del micelio y de los cuerpos fructíferos de Pleurotus ostreatus en laboratorios del Centro de Estudios de Biotecnología Industrial de la Universidad de Oriente. Se evaluó la citotoxicidad de los bioproductos por el ensayo de reducción del colorante resazurina sobre tres líneas celulares en el Laboratorio de Microbiología, Parasitología e Higiene (LMPH) de la Universidad de Amberes, Bélgica. Se utilizaron células no adherentes THP-1 (pre-monocitos de leucemia humana), células adherentes Caco-2 (epitelio de adenocarcinoma de colon humano) y células adherentes RAW 264.7 (macrófagos murinos). Resultados: Los extractos de Pleurotus ostreatus no resultaron citotóxicos para ninguna de las líneas celulares estudiadas humanas o murina, ya que no ocasionaron daños sobre la viabilidad de las célulasepiteliales del sistema gastrointestinal, nisobrelas células del sistema inmune empleadas. Conclusiones: Este resultado demuestra que ambos bioderivados fúngicos pueden ser aplicados con seguridad en estudios inmunonutricionales.

Introduction: Bioderivatives proposed as candidates for food ingredients usually require certain evaluations for immunonutritional applications. Edible-medicinal mushrooms are a source of compounds with these potentials. Among them, Pleurotus ostreatus mushrooms contain bioactive metabolites, with important uses in the food industry and in the therapeutic practice of the medical-pharmaceutical industry. In vitro cytotoxicity assays are valuable methods to evaluate products of natural origin, such as fungal extracts. Objective: To evaluate the cytotoxicity of two extracts obtained from the Pleurotus ostreatus mushroom in different cell lines. Method: Water-soluble extracts were obtained from the mycelium and fruiting bodies of Pleurotus ostreatus in laboratories of the Center for Industrial Biotechnology Studies of the Universidad de Oriente. The cytotoxicity of the bioproducts was evaluated by the resazurin dye reduction assay on three cell lines at the Laboratory of Microbiology, Parasitology and Hygiene (LMPH) of the University of Antwerp, Belgium. Non-adherent THP-1 cells (human leukemia pre-monocytes), Caco-2 adherent cells (human colon adenocarcinoma epithelium) and RAW 264.7 adherent cells (murine macrophages) were used. Results: Pleurotus ostreatus extracts were not cytotoxic for any of the human or murine cell lines studied, since they did not cause damage to the viability of the epithelial cells of the gastrointestinal system, nor to the immune system cells used. Conclusions: This result demonstrates that both fungal bioderivatives can be safely applied in immunonutritional studies.

Introdução: Bioderivados propostos como candidatos a ingredientes alimentícios geralmente requerem determinadas avaliações para aplicações imunonutricionais. Pleurotus ostreatus contêm metabólitos bioativos, com importantes utilizações na indústria alimentícia e na prática terapêutica da indústria médico-farmacêutica. Ensaios de citotoxicidade in vitro são métodos valiosos para avaliar produtos de origem natural, como extratos de fungos. Objetivo: Avaliar a citotoxicidade de dois extratos obtidos do cogumelo Pleurotus ostreatus em diferentes linhagens celulares. Método: Extratos hidrossolúveis foram obtidos do micélio e dos corpos frutíferos de Pleurotus ostreatus nos laboratórios do Centro de Estudos de Biotecnologia Industrial da Universidade de Oriente. A citotoxicidade dos bioprodutos foi avaliada pelo ensaio de redução do corante resazurina em três linhagens celulares no Laboratório de Microbiologia, Parasitologia e Higiene (LMPH) da Universidade de Antuérpia, Bélgica. Foram utilizadas células THP-1 não aderentes (pré-monócitos de leucemia humana), células aderentes Caco-2 (epitélio de adenocarcinoma do cólon humano) e células aderentes RAW 264.7 (macrófagos murinos). Resultados: Os extratos de Pleurotus ostreatus não foram citotóxicos para nenhuma das linhagens celulares humanas ou murinas estudadas, pois não causaram danos à viabilidade das células epiteliais do sistema gastrointestinal, nem às células do sistema imunológico utilizadas. Conclusões: Este resultado demonstra que ambos os bioderivados fúngicos podem ser aplicados com segurança em estudos imunonutricionais.

Caracterização, teor de polifenóis totais e atividade antioxidante em diferentes tipos de erva-mate (Ilex paraguariensis St. Hill.) para chimarrão / Characterization and determination of the total polyphenols contents and the antioxidant activity in four types of yerba mate (Ilex paraguariensis St. Hill.) for preparing chimarrão

Considerando-se a ampla utilização das folhas da erva-mate, bem como os benefícios advindos de seu emprego, neste estudo foi avaliada a qualidade de quatro tipos de ervas-mate nativas de espécime chimarrão: tradicional, com adição de 5 % e 10 % de açúcar, e a moída grossa, bem como a homogeneidade em três lotes dos produtos, correspondentes a diferentes semanas de processamento. Foram avaliadas as propriedades físico-químicas, o teor de polifenóis totais e a atividade antioxidante. Os extratos aquosos de erva-mate foram elaborados a 85 ºC, mantidos em de cocção em sistema fechado durante 10 e 30 minutos.As ervas-mate com adição de açúcar apresentaram menores teores de material mineral e de fibra bruta quando comparadas aos tipos tradicional e moída grossa. A erva-mate moída grossa acondicionada em embalagem laminada apresentou os menores valores de atividade de água em relação aos outros tipos de ervas acondicionados em embalagem de papel. A embalagem laminada também contribuiu para a menor absorção de oxigênio, que retarda a oxidação da clorofila e mantém a coloração verde do produto.Os extratos elaborados a partir da erva-mate moída grossa e os que permaneceram por maior tempo em decocção apresentaram maiores teores de polifenóis totais...

Inibição do crescimento micelial de Cercospora calendulae Sacc. por extratos de plantas medicinais / Inhibition of the mycelial growth of Cercospora calendulae Sacc. by medicinal plants extracts

O uso de extratos e óleos essenciais de plantas medicinais tem sido amplamente estudado no controle de doenças de plantas. O objetivo da realização do presente trabalho foi avaliar o efeito de extratos de Ruta graveolens L., Mentha x villosa, Calendula officinalis L., Momordica charantia L., Symphytum officinale L., Ageratum conyzoides L. e Ricinus comunis L., nas concentrações de 0, 250, 500, 1000, 2000, 5000 e 10000 mg L-1, sobre a inibição do crescimento micelial de Cercospora calendulae Sacc. in vitro. Os extratos foram obtidos por infusão. O experimento foi desenvolvido no Laboratório de Fitopatologia da FCA/UFGD, estado de Mato Grosso do Sul, em delineamento inteiramente casualizado, esquema fatorial 7 extratos x 7 concentrações, com seis repetições. Foi detectado efeito dos extratos e suas concentrações sobre o crescimento do fungo, sendo a interação significativa. Os extratos de calêndula, arruda, hortelã e melão de São Caetano, nas maiores concentrações resultaram em maiores porcentagens de inibição, próximas de 100%, 30%, 35% e 40%, respectivamente, a 10000 mg L-1.

This study was carried out to investigate the effects of the extracts of Ruta graveolens L., Mentha x villosa, Calendula officinalis L., Momordica charantia L., Symphytum officinale L., Ageratum conyzoides L. and Ricinus comunis L., in the concentrations of 0, 250, 500, 1000, 2000, 5000 and 10000 mg L-1, on the inhibition of the mycelial growth of in vitro Cercospora calendulae Sacc. The extracts were obtained by infusion. The experiment was performed at the Laboratório de Fitopatologia - FCA/UFGD, in the Brazilian State of Mato Grosso do Sul. The experimental design was totally randomized, with a factorial arrangement of 7 extracts x 7 concentrations, with six repetitions. We detected the effect of the extracts and their concentrations on the growth of the fungus, with a significant interaction between the factor extracts and the concentration. Calendula officinalis L., Ruta graveolens L., Mentha x villosa and Momordica charantia L. extracts in higher concentration resulted in higher inhibition percentages in the order of 100%, 30%, 35% and 40%, respectively.

Atividade antifúngica de óleo e extratos vegetais sobre Sclerotinia sclerotiorum / Antifungal activity of vegetable oils and extracts against Sclerotinia sclerotiorum

Considerando a importância do mofo branco, causado pelo patógeno Sclerotinia sclerotiorum na cultura da soja (Glycine max) e a falta de estudos sobre alternativas de controle deste patógeno, este trabalho teve como objetivo estudar o efeito de óleos e extratos vegetais sobre o crescimento micelial de S. sclerotiorum. No experimento de óleos essenciais, concentrações de 25, 50, 75 e 100 µg de i.a mL-1 de azadiractina, obtida de nim indiano (Azadirachta indica A. Juss), foram estudadas em associação às doses de 0, 1/3, 1/6, 1/8 e 1/10 do óleo de Karanja (Pongamia glabra). Quanto ao experimento de extratos vegetais, estudou-se as espécies Aroeirinha (Schinus molle L.), Mentrasto (Ageratum conyzoides L.), Alfavaca (Ocimum gratissimum L.), Losna (Artemisia absinthium L.), Jambolão (Syzygium cumini (L.) Skeels), Arruda (Ruta graveolens L.), Mandioca (Manihot esculenta Crantz), Santa Bárbara (Melia azedarach L.) e Pimenta longa (Piper aduncum L.) na concentração de 30%. Óleos e extratos vegetais foram incorporados, separadamente, ao meio de cultura BDA e vertido em placa de Petri de 9 cm de diâmetro, na qual depositou-se um disco de BDA, contendo micélio do fungo. As placas foram incubadas à temperatura de 22 ± 3 oC e fotoperíodo de 12 horas. As avaliações consistiram em medições diárias do diâmetro da colônia, durante 48 horas. A maior inibição do crescimento micelial foi diretamente proporcional ao aumento das concentrações dos óleos de nim indiano e de Karanja. A concentração de azadiractina, correspondente a 100 µg de i.a mL-1 com 1/3 de óleo de Karanja foi a mais eficiente na redução do crescimento micelial, com 63% de inibição. Em relação aos extratos vegetais, o fruto de pimenta longa foi o mais promissor sobre a redução do crescimento micelial, com 43% de inibição.

Considering the importance of white mold, caused by the pathogen Sclerotinia sclerotiorum, to soybeans (Glycine max) and the lack of studies about alternative control ways of plant pathogens, this study evaluated the effect of vegetable oils and extracts on the mycelial growth of S. sclerotiorum. Concentrations of 25, 50, 75 and 100 µg a.i. mL-1 of azadiractine, obtained from neem (Azadirachta indica A. Juss), were evaluated associated with the doses of 0, 1/3, 1/6, 1/8 or 1/10 of Karanja (Pongamia glabra) oil in the experiment with essential oils. Vegetable extracts of the species Schinus molle L., Ageratum conyzoides L., Ocimum gratissimum L., Artemisia absinthium L., Syzygium cumini (L.) Skeels, Ruta graveolens L., Manihot esculenta Crantz, Melia azedarach L. and Piper aduncum L. were evaluated in the concentration of 30%. Oils and vegetable extracts were incorporated, separately, into PDA culture medium and poured in 9-cm diameter petri plates, over which a PDA disk containing mycelium of the fungus was placed. The plates were incubated at 22 ± 3 oC and 12 hours lighting. The evaluations consisted of daily measurements of colony diameter for two days. The greatest mycelial growth inhibition was directly proportional to the concentration increase of neem and Karanja oils. Azadiractin concentration corresponding to 100 µg a.i. mL-1 with 1/3 Karanja oil was the most effective on reducing mycelial growth, with 63% inhibition. Among the vegetable extracts, fruits of long pepper were the most promising for reducing mycelial growth, with 43% inhibition.

Efeito alelopático de frutos de umbu (Phytolacca dioica L.) sobre a germinação e crescimento inicial de alface e picão-preto / Allelopathic effects of fruits of Phytolacca dioica L. on the germination and early growth of lettuce and beggartick

As plantas produzem substâncias por meio do metabolismo secundário. Quando liberadas no meio ambiente são capazes de interferir na germinação e no desenvolvimento de outras plantas. Objetivou-se, nesta pesquisa investigar os efeitos alelopáticos de umbu (Phytolacca dioica L.) sobre a germinação e o crescimento inicial de alface e picão-preto, em laboratório, utilizando-se extratos aquosos de frutos de umbu nas concentrações 0, 1, 2, 4 e 8 por cento; foi realizada análise fitoquímica dos frutos e testes de pH e potencial osmótico dos extratos de frutos. Analisaram-se, para a germinação os parâmetros: porcentagem de germinação (PG), velocidade de germinação (VG) e índice de velocidade de germinação (IVG); para o crescimento inicial analisaram-se os parâmetros: comprimento (radicular e da parte aérea) e biomassa (fresca e seca) das plântulas de alface e picão-preto. Os dados foram submetidos ao teste de Tukey, a 1 por cento de probabilidade. Os parâmetros PG, VG e IVG foram alterados significativamente, proporcionais ao aumento da concentração dos extratos de frutos do umbu. O comprimento (radicular e da parte aérea) e a biomassa (fresca e seca) das plântulas de alface e picão-preto foram reduzidos significativamente com o aumento da concentração dos extratos aquosos de frutos de umbu. O pH e potencial osmótico dos extratos mantiveram-se dentro de padrões adequados e a análise fitoquímica revelou a presença de flavonoides. Pelos resultados os frutos de umbu apresentaram-se com efeito alelopático sobre a alface e o picão-preto.

Plants produce substances through secondary metabolism. When these chemicals are released into the environment they can interfere in the germination and development of other plants. The objective of this research was to investigate the effects of allelopathic Phytolacca dioica L. on the germination and early growth of lettuce and beggartick, under laboratory conditions, using aqueous extracts of fruits of Phytolacca dioica at concentrations of 0, 1, 2, 4 and 8 percent. Phytochemical analysis of the fruit was performed; and pH and osmotic potential of extracts of fruit were tested. We analyzed the following germination parameters: percentage of germination (PG), speed of germination (VG) and speed of germination index (IVG), for the initial growth parameters examined are: length (root and shoot) and biomass (fresh and dry) of seedlings of lettuce and beggartick. The data were submitted to Tukey's test at 1 percent of probability. Parameters PG, VG and IVG were significantly affected, with increase in concentration of the extracts of fruits of Phytolacca dioica. The length (root and shoot) and biomass (fresh and dry) of seedlings of lettuce and beggartick were reduced significantly with increasing concentration of the aqueous extracts of fruits of Phytolacca dioica. The pH and osmotic potential of the extracts were maintained within appropriate standards and phytochemical analysis revealed the presence of flavonoids. The results showed that the fruits of Phytolacca dioica presented allelopathic effect on the lettuce and beggartick.

Water extracts of Brazilian leguminous seeds as rich sources of larvicidal compounds against Aedes aegypti L.

This study assessed the toxicity of seed water extracts of 15 leguminous species upon Aedes aegypti larvae. A partial chemical and biochemical characterization of water extracts, as well as the assessment of their acute toxicity in mice, were performed. The extracts of Amburana cearensis, Anadenanthera macrocarpa, Dioclea megacarpa, Enterolobium contortisiliquum and Piptadenia moniliformis caused 100 percent of mortalit y after 1 to 3 h of exposure. They showed LC50 and LC90 values ranging from 0.43 ± 0.01 to 9.06 ± 0.12 mg/mL and from 0.71 ± 0.02 to 13.03 ± 0.15 mg/mL, respectively. Among the secondary metabolite constituents, the seed water extracts showed tannins, phenols, flavones, favonols, xanthones, saponins and alkaloids. The extracts also showed high soluble proteins content (0.98 to 7.71 mg/mL), lectin (32 to 256 HU/mL) and trypsin inhibitory activity (3.64 = 0.43 to 26.19 = 0.05 gIT/kg of flour) The electrophoretic profiles showed a great diversity of protein bands, many of which already described as insecticide proteins. The extracts showed low toxicity to mice (LD50 > 0.15 = 0.01 g/kg body weight), but despite these promising results, further studies are necessary to understand the toxicity of these extracts and their constituentsfrom primary and secondary metabolism upon Ae. aegypti.

Este trabalho objetivou avaliar a toxicidade dos extratos aquosos de sementes de 15 espécies de leguminosas contra larvas de Aedes aegypti. Foi realizada uma caracterização química e bioquímica parcial dos extratos aquosos e a avaliação da toxicidade aguda em camundongos. Os extratos de Amburana cearensis, Anadenanthera macrocarpa, Dioclea megacarpa, Enterolobium contortisiliquum e Piptadenia moniliformis causaram 100 por cento de mortalidade depois de 1 a 3 h de exposição e mostraram valores de CL50 e CL90 entre 0,43 = 0,01 e 9,06 ± 0,12 e entre 0,71 = 0,02 e 13,03 = 0,15 mg/mL, respectivamente. Dentre os constituintes do metabolismo secundário, os extratos das sementes apresentaram taninos, fenóis, flavonas, flavonóis, xantonas, saponinas e alcalóides. Os extratos apresentaram alto teor de proteínas solúveis (0,98 to 7,71 mg/mL), lectina (32 to 256 UH/mL) e inibidor de tripsina (3,64 ± 0,43 to 26,19 = 0,05 gIT/kg de farinha). O perfil eletroforéticomostrou uma grande diversidade de proteínas, muitas dasquais já descritas como inseticidas. Os extratos mostraram baixa toxicidade ao camundongo (DL50 > 0,15 = 0,01 g/kg peso corporal), porém apesar desses resultados promissores, estudos posteriores são necessários para compreender a toxicidade desses extratos e de seus constituintes do metabolismo primário e secundário sobre Ae. aegypti.