Biofilm formation by Prototheca zopfii isolated from clinical and subclinical bovine mastitis in distinct growth conditions under different dyes / Formação de biofilme por Prototheca zopfii isolados de mastite bovina clínica e subclínica em distintas condições de crescimento sob diferentes corantes

ABSTRACT: Prototheca spp. have been reported as an emergent environmental mastitis pathogen in several countries. Biofilm formation is a significant factor associated with different degrees of virulence developed by many microorganisms, including Prototheca spp. The present study aimed to compare two growth conditions and two staining dyes to determine which combination was more appropriate to evaluate qualitatively and quantitatively the production of biofilm by P. zopfii. Biofilm formation was evaluated in polystyrene microplates under static and dynamic growth conditions and staining with crystal violet or cotton blue dye. All P. zopfii isolates from cows with mastitis were classified as biofilm-producers in all growth conditions and staining. The cotton blue dye proved to be more appropriate method to classify the intensity of P. zopfii biofilm production.

RESUMO: Prototheca spp. tem sido relatado como um patógeno ambiental causador de mastite bovina em vários países. A formação de biofilme é um fator associado a diferentes graus de virulência desenvolvidos por muitos microrganismos, incluindo Prototheca zopfii. O presente estudo teve como objetivo comparar duas condições de crescimento e dois corantes para determinar a combinação mais adequada para avaliar qualitativa e quantitativamente a produção de biofilme por P. zopfii. A formação de biofilme foi avaliada em microplacas de poliestireno sob condições estáticas e dinâmicas de crescimento e coloração com cristal violeta ou azul de algodão. Todos os isolados de P. zopfii de vacas com mastite foram caracterizados como produtores de biofilme, independentemente das condições de crescimento e coloração. O corante azul de algodão demonstrou ser o método mais adequado para classificar a intensidade de produção de biofilme de P. zopfii.

Detecção de Aeromonas spp. e do gene de virulência aerolisina em tilápias do Nilo (Oreochromis niloticus) com a técnica de mPCR / Detection of Aeromonas spp. and virulence gene aerolysin in Nile tilapia (Oreochromis niloticus) using PCR technique

As infecções causadas por bactérias do gênero Aeromonas estão entre as doenças mais comuns em peixes cultivados em todo o mundo, com ocorrência de aeromoniose em todos os países que possuem cultivo de tilápia do Nilo (Oreochromis niloticus). O presente trabalho descreve o desenvolvimento de uma nova multiplex PCR (mPCR) para diagnóstico de Aeromonas spp. e identificação do gene aerolisina (aerA). Para padronização da mPCR foram utilizadas cepas de referência de várias espécies do gênero Aeromonas e de outros gêneros. Também foram usadas cepas de campo de A. hydrophila oriundas de cultivos de peixes pacamãs (Lophiosilurus alexandri) e Aeromonas spp. de tilápias do Nilo. Os primers foram desenhados com base na região 16S rRNA e aerA. Para verificar a melhor temperatura de anelamento foram utilizados gradientes entre 59°C a 61°C com 40ng de DNA molde. Os produtos da amplificação da região 16S rRNA e do gene aerA apresentaram 786 e 550pb, respectivamente. A mPCR apresentou melhor temperatura de anelamento a 57,6°C com limite de detecção das concentrações de DNA em ambos genes (16S rRNA and aerA) de 10-10g/μL. A mPCR padronizada é rápida, sensível e específica no diagnóstico de Aeromonas spp. e identificação do gene aerolisina. Esta metodologia apresenta vantagens quando comparada aos métodos de diagnóstico convencionais, podendo ser utilizada em cultivos comerciais de tilápias do Nilo ou outros peixes. A identificação do gene aerolisina é uma importante ferramenta na determinação do potencial patogênico dos isolados de Aeromonas spp. estudados.(AU)

Infections caused by bacteria of the genus Aeromonas are among the most common diseases in fish farming systems worldwide, and this disease occurs in all countries which have Nile tilapia (Oreochromis niloticus) farmed. The present work describes the development of a new multiplex PCR (mPCR) technique that diagnosis the genus Aeromonas and detects aerolysin gene (aerA). Reference strains of several Aeromonas species and other genera were used for standardization of mPCR. Strains of A. hydrophila from "pacaman" fish (Lophiosilurus alexandri) and Aeromonas spp. from Nile tilapia from farming systems were used too. Primers were designed based on the 16S rRNA region and aerA (aerolysin toxin). To verify a better annealing temperature were used gradients between 59°C and 61°C with 40ng of the DNA template. The 16S rRNA gene and the aerA gene amplification products showed 786 and 550 bp, respectively. The mPCR showed better annealing temperature at 57.6°C, and the detection limit for both genes (16S rRNA and aerA) was 10-10g/μL of the DNA. The standardized mPCR is quick, sensitive, and specific for Aeromonas spp. diagnosis and to detect aerolysin gene. This method showed advantages when compared to the conventional diagnostic methods and can be used in Nile tilapia or other fish farming systems. The detection of aerolysin gene is an important tool to determine the potential pathogenicity of Aeromonas spp. isolates.(AU)

Ação de chalconas contra a formação de biofilme de Candida albicans / Action of chalcones against biofilm formation of Candida albicans

Candida albicans é uma levedura oportunista que apresenta um conjunto de fatores de virulência que conferem uma maior patogenicidade a estes micro- organismos. Neste trabalho foram estudadas a expressão de determinados fatores de virulência de C. albicans isoladas de cavidade bucal, com ênfase na formação de biofilme, e a atividade antifúngica e o impacto de concentrações subinibitórias de derivados de chalconas na formação de biofilme por estes micro-organismos. Os compostos foram avaliados quanto à toxicidade pelo ensaio de letalidade de Artemia salina e determinação da dose letal a 50% (DL 50 ) ao micro-crustáceo. Nas chalconas sintetizadas, manteve-se o grupameno hidroxil no anel B e foram feitas modificações no anel A que resultaram em diferenças na toxicidade dos compostos variando de 714,3 a 1798,1?g/mL. As leveduras expressaram de forma variável os fatores de virulência com predomínio de alta produção de fosfolipases, aspartil proteinases e com formação do tubo germinativo em até duas horas. A formação de biofilmes foi categorizada em dois grupos distintos nos quais 16 (48%) leveduras foram consideradas como formadoras fracas e 17 (52%) como formadoras fortes. A susceptibilidade as chalconas foi > 1000?g/mL exceto para (E)-1-fenil-3-(4-hidroxifenil) prop-2-em-1-ona que apresentou uma concentração inibitória mínima de 62,5?g/mL para os isolados e de 250?g/mL para a cepa de C. albicans ATCC 10231. Entretanto, concentrações subinibitórias das chalconas apresentaram uma significativa atividade inibitória da formação de biofilme por C. albicans, com graus de inibição variando de 75 a 90%, o que indica a potencial utilização destes compostos na inibição deste importante fator de virulência.(AU)

Candida albicans is an opportunistic yeast that has a number of virulence factors that increase pathogenicity of these micro-organisms. In this study the expression of certain virulence factors were studied of C. albicans isolated from the oral cavity with emphasis on biofilm formation and antifungal activity and the impact of subinibitory concentrations of derivatives of chalconas in biofilm formation by these micro-organisms. The compounds were evaluated for toxicity testing of brine shrimp lethality and determination of 50% lethal dose (LD50) to the micro-crustacean. In synthesized chalconas, remained grouping the hydroxyl in ring B and ring modifications were made on the resulting differences in toxicity of the compounds ranging from 714.3 to 1798.1 ?g/mL. Yeasts shown variable expressed virulence factors with prevalence of high production of phospholipases, aspartyl proteases and formation of germ tube within two hours. The biofilm formation was categorized into two distinct groups in which 16 (48%) yeasts were considered as poor and 17 trainers (52%) as forming strong. Susceptibility was chalcones ? 1000 ?g/mL except for (E)-1-phenyl-3-(4-hydroxyphenyl) prop-2-en-1-one, which showed a minimum inhibitory concentration of 62.5?g/mL for the clinical isolates and 250?g/mL for the strain of C. albicans ATCC 10231. However, subinibitory concentrations of chalcones showed significant inhibitory activity of biofilm formation by C. albicans with degrees of inhibition ranging from 75 to 90%, indicating the potential use of these compounds in the inhibition of this important virulence factor.(AU)