Herramientas complementarias utilizadas en el programa de mejoramiento de arveja (Pisum sativum l.) de la Universidad Nacional de Rosario / Complementary tools utilized in the pea (Pisum sativum l.) breeding program at Universidad Nacional de Rosario

RESUMEN El mejoramiento convencional puede ser complementado mediante diferentes estrategias que incrementen la eficiencia de las metodologías y la tasa actual de aumento de los rendimientos a fin de satisfacer la demanda. El uso de marcadores moleculares con el objetivo de desarrollar mapas de ligamiento de la especie, el uso de Blup (Best Linear Unbiased Prediction) para una selección eficiente de progenitores a hibridar, el uso del cultivo in vitro para incrementar artificialmente el número de plantas F1 o el uso de fenotipificación digital para una eficiente caracterización digital que puede realizarse durante la regeneración periódica y rutinaria de accesiones en colecciones de germoplasma.

ABSTRACT Conventional breeding can be complemented by different strategies that increase the efficiency of the methodologies and the current rate of increase in yields in order to meet demand. The use of molecular markers with the aim of developing linkage maps of the species, the use of Blup (Best Linear Unbiased Prediction) for an efficient selection of progenitors to hybridize, the use of in vitro culture to artificially increase the number of F1 plants or the use of digital phenotyping for efficient digital characterization that can be performed during the periodic and routine regeneration of accessions in germplasm collections.

Prevalencia del antígeno D débil y su clasificación fenotípica en donantes voluntarios de sangre / Prevalence of "weak" D antigen and its phenotypic classification in voluntary blood donours / Prevalência do antígeno D "fraco" e sua classificação fenotípica em doadores voluntários de sangue

En el campo de la medicina transfusional la correcta identificación de los fenotipos del sistema Rh y en especial del antígeno D debe ser de manera inequívoca por su relevancia clínica. El antígeno D tiene variantes denominadas D parcial, D débil y DEL, las que se producen por mutaciones de los alelos RHD/RHCE o por una supresión en la expresión fenotípica. Se trató de un estudio descriptivo, retrospectivo de corte transversal en el que se realizó una revisión de registros primarios durante el período 2011-2014 validados de acuerdo con el protocolo de Hernández-Sampieri R. Se utilizó estadística descriptiva mediante la aplicación del software informático SPSS versión 22.0 y se estableció la relación entre variables independientes a través del análisis estadístico de Chi-cuadrado. Se determinó una prevalencia de donantes RhD negativos de 1,8 a 2,5% y RhD débil de 1,79 a 2,28%. La fenotipificación serológica permitió identificar que los tipos 2 y 5 eran los más frecuentes. También se estableció la existencia de aloinmunización por anti-D, anti-C y anti-E. Se estableció de esta manera la existencia de D débil y una importante aloinmunización en la población de donantes de sangre tipificados como D negativo y D débil, por lo que se recomienda implementar un algoritmo de identificación del antígeno D en servicios de medicina transfusional.

In the field of transfusion medicine, the correct identification of the phenotypes of the Rh system and especially of the D antigen must be unequivocal for clinical relevance. The D antigen has variants called partial D, weak D and DEL. These are produced by mutations of the RHD/RHCE alleles or a suppression in phenotypic expression. The objective of this study was to establish the frequency of weak D antigen in the population of blood donours from 17 Ecuadorian states and their phenotypic combinations. It was a descriptive, retrospective cross-sectional study performed during the 2011-2014 period and validated with primary records in accordance with the Hernández-Sampieri R protocol. A descriptive statistics through the application of SPSS computer software version 22.0 was used and the relationship between independent variables through the Chi-square statistic method was established. A prevalence of RhD negative donours from 1.8 to 2.5% and weak D 1.79 to 2.28% was observed The serological phenotyping made it possible to identify that type 2 and 5 were the most frequent. The presence of alloimmunization by anti-D, anti-C and anti-E was also established. Besides, the presence of weak D types and significant alloimmunization in the donour population of blood typed as D negative and weak was established, so it is recommended to implement an algorithm for the identification of D antigen in transfusional medicine services.

No campo da medicina transfusional, a correta identificação dos fenótipos do sistema Rh e especialmente do antígeno D deve ser inequívoca devido a sua relevância clínica. O antígeno D tem variantes chamadas de D parcial, D fraca e DEL, as quais são produzidos por mutações dos alelos RHD/RHCE ou por uma supressão na expressão fenotípica. O objetivo deste estudo foi estabelecer a frequência do antígeno D fraco em uma população de doadores de sangue de 17 províncias equatorianas e suas combinações fenotípicas. Foi uma estudo descritivo, retrospectivo de corte transversal em que se realizou uma revisão dos registros primários validados de acordo com o Protocolo Hernández-Sampieri R durante o período 2011-2014. Utilizou-se estatísticas descritivas através da aplicação do software informático SPSS versão 22.0 e a relação entre variáveis independentes através da análise estatística de qui-quadrado. Foi determinada uma prevalência de doadores RhD negativos de 1,8 a 2,5% e RhD fraco de 1,79 a 2,28%. A genotipagem serológica permitiu identificar que os tipos 2 e 5 são os mais frequente. A existência de alo imunização por anti-D, anti-C e anti-E também foi estabelecida. A existência de D fraco e uma alo imunização significativa na população de doadores de sangue tipificados como D negativo e fraco, por isso é recomendado implementar um algoritmo de identificação do antígeno D em serviços de medicina transfusional.

Identification of Brucella abortus biovar 4 of bovine origin in Colombia / Identificación de Brucella abortus biovar 4 de origen bovino en Colombia

The objective of this study was to identify twelve Brucella abortus isolates of bovine origin from the department of Nariño in Colombia up to the biovar level. These isolates are included in the collection of the Germplasm Bank of Microorganisms of Animal Health Interest -Bacteria and Virus (BGSA-BV). The identification was carried out through conventional methods such as macro and microscopic morphological descriptions, enzymatic activity, biochemical profile, substrate use and sensitivity to dyes. Complementary genotypic characterization was carried out using multiplex PCR for B. abortus, Brucella melitensis, Brucella ovis, and Brucella suis-Erytritol (AMOS-ERY-PCR), RFLP-IS711, by southern blot hybridization, as well as by the multiple locus variable number of tandem repeat analysis (MLVA) using the ery gene and the insertion sequence IS711 and variable number of tandem repeats (VNTR) as molecular markers. The results of the phenotypic and molecular characterization allowed to identify twelve isolates as B. abortus biovar 4 as well as to differentiate field from vaccine strains. This is the first study on the phenotypic and molecular identification of B. abortus isolates in Colombia. It was concluded that the phenotypic and molecular identification of twelve isolates as B. abortus biovar 4 could be achieved using conventional and molecular techniques with enough resolution power. The identification of these isolates to the biovar level in taxonomic and epidemiological terms will allow the use of this genetic resource as reference strains in future research. This finding constitutes the basis for identifying biotypes not previously reported in the country that might be useful to support brucellosis survey programs in Colombia.

El objetivo de este estudio fue identificar 12 aislamientos de Brucella abortus de origen bovino procedentes del departamento de Narino, Colombia, hasta la descripción de biovar. Estos aislamientos conforman la colección del Banco de Germoplasma de Microorganismos de Interés en Salud Animal, Bacterias y Virus. La identificación se hizo mediante métodos convencionales, como la descripción morfológica macro y microscópica de actividad enzimática, de perfiles bioquímicos, de utilización de sustratos y de sensibilidad a colorantes. Se hizo una caracterización genotipica complementaria mediante PCR múltiple para Brucella abortus, Brucella melitensis, Brucella ovisy Brucella suis-eritritol (AMOS-ERY-PCR); RFLP-/S7II; hibridación Southern blot y análisis multi-locus de repeticiones en tándem de número variable (MLVA), empleando como marcadores moleculares el gen ery, la secuencia de inserción /S711 y el número variable de repeticiones en tándem (VNTR). Los resultados de la caracterización fenotípica y molecular permitieron identificar 12 aislamientos de campo como B. abortus biovar 4 y diferenciar cepas de campo de cepas vacunales. Este es el primer estudio de identificación fenotípica y molecular de aislamientos de B. abortus en Colombia. Por su importancia taxonómica y epidemiológica, la identificación de estos aislamientos hasta el nivel de biovar permitirá disponer de recursos genéticos que se pueden emplear como cepas de referencia en futuras investigaciones. Estos resultados pueden considerarse como una base para la identificación de biotipos no reportados en el país y podrán ser utilizados en programas de monitoreo y vigilancia de la brucelosis bovina en Colombia.

Eficacia de la fenotipificación Rh / Effectiveness of Rh fenotipification

Basándonos en garantizar la calidad de los procedimientos del laboratorio pretransfusional, se evaluó la eficacia de la fenotipificación Rh en donantes y receptores. Para ello se comparó el número de pacientes sensibilizados transfundidos con glóbulos rojos desplasmatizados (GRD) con fenotipo Rh tomados al azar en relación con pacientes sensibilizados transfundidos con GRD isofenotipo, a fin de determinar si la implementación de las técnicas de fenotipificación Rh en dadores y receptores disminuye la sensibilización por este sistema. De los 113 anticuerpos hallados, 65 (57,52 por ciento) corresponden al sistema Rh y 48 (42,48 por ciento) a otros sistemas de antígenos eritrocitarios. Dentro de los 65 anticuerpos del sistema Rh, 56 (86,15 por ciento) pertenecen al primer grupo y 9 (13,85 por ciento) al segundo. A través de esta casuística demostramos que la implementación de la fenotipificación Rh disminuyó la sensibilización a este sistema.

In order to guarantee the quality of procedures in the pretransfusional laboratory, RH fenotipification efficiency was analised in donors and recipients. To do this, the number of sensitized patients transfusioned with red cells (GRD) with fenotype Rh taken at random was compared with patients transfusioned with fenotype GRD, in order to determine whether the implementation of RH fenotipification techniques in donors and recipients diminishes the sensitization by this system. Out of 113 antibodies found, 65 (57,52 per cent) correspond to Rh system and 48 (42,48 per cent) to other systems of antifungals red cells. Within the 65 antibodies of the Rh system, 56 (86,15 per cent) belong to the first group and 9 (13,85 per cent) to the second. Through these cases, we are showing that the implementation of fenotipification Rh diminished the sensitization to this system.

Pruebas analíticas de resistencia a antirretrovirales en pacientes infectados por el Virus de la Inmunodeficiencia Humana Tipo 1 (VIH-1)

La resistencia a antirretrovirales constituye un factor de fracaso terapéutico importante en el manejo clínico del paciente infectado por VIH. Se han descrito dos tipos de pruebas de laboratorio que permiten determinar sí un paciente bajo terapia antirretroviral ha desarrollado cepas del VIH resistentes: las pruebas fenotípicas y las pruebas genotípicas. Se sospecha de resistencia farmacológica cuando los niveles de carga viral aumentan (0,5 log), o permanecen detectables en mediciones repetidas. Las pruebas fenotípicas se basan en un análisis cuantitativo de la concentración de droga antirretroviral necesaria para la inhibición de la replicación del VIH in vitro, cuantificando así el grado de resistencia. Las pruebas genotípicas detectan la presencia de mutaciones en el genoma del VIH asociadas a resistencia a antirretrovirales. No existe una pauta sobre la interpretación de los resultados obtenidos de estas pruebas analíticas. La realización de análisis de resistencia como herramienta molecular de avanzada, aunado al análisis de la carga viral y el inmunofenotipaje constituye un importante aporte en el manejo y control del paciente infectado por VIH.

Resistance to antiretroviral constitutes an important therapy failure factor in HIV infected patient clinic managing. Two laboratory tests have been described to determine HIV resistant isolates: phenotypic assays and genotypic assays. Pharmacologic resistance is suspected when HIV load viral levels increase (log 0.5) or remain detectable in repeated tests. Phenotypic tests are based in a quantitative assay of antiretroviral drug concentration required to inhibit HIV replication in vitro, quantifying also resistance levels. Genotypic tests detect the presence of HIV genomic mutations associated to antiretroviral resistance. No does exist a role about result interpretation obtained to these analytic tests. Resistance tests like advanced molecular instrument joined to load viral levels and immunophenotype assays in both constitute an important contribution in control and managing of HIV infected patients.

Revisión de tema: Canalopatías epilépticas / Epileptic channelopathies

Se hace una revisión actualizada sobre las epilepsias debidas a alteraciones de los diferentes canales iónicos, con énfasis en su presentación clínica y genotipificación. Se plantean someramente las bases del enfoque farmacológico del tratamiento

Thies an up to date review of the genotypic and phenotypic characteristics of epileptic channelopathies is presented and the bases for a pharmacologic approach to treatment are briefly described.