Identificação dos perfis lipidômicos in situ dos tumores bifásicos da mama por DESI-MS (Desorption Electrospray Ionization/ Mass Spectrometry) / Identification of lipidomic profiles in situ of breast biphasic tumors by DESI-MS (Desorption Electrospray Ionization/ Mass Spectrometry)]

Os tumores bifásicos da mama formam um grupo heterogêneo de tumores que apresentam na histologia dois componentes, o epitelial e o estromal. Esses tumores podem ser benignos ou malignos, alguns podem recidivar ou dar metástase. O seu prognóstico varia conforme a sua classificação histológica, a presença de metástase e a adequabilidade do seu tratamento. Porém, por vezes, há ainda dificuldade em diferenciá-los quando há sobreposição das características histológicas que são utilizadas para realizar o diagnóstico no exame anatomopatológico. Visando um novo método para diferenciar esses tumores entre si, além do exame anatomopatológico habitual, buscou-se analisar esses tumores através de uma técnica da química analítica de ionização ambiente, utilizando espectrometria de massas, o DESI-MSI (Desorption Electrospray Ionization Mass Spectrometry Imaging). Foram utilizados cortes de amostras congeladas em lâminas para analisar no DESI-MSI e, através dessa análise, obteve-se os espectros de massas e as imagens químicas. A análise estatística foi realizada através do teste de Wilcoxon-Mann-Whitney. Nesse estudo encontramos maior intensidade dos ácidos graxos poli-insaturados (PUFAs); de fosfolipídios como as fosfatidilserina e fosfatidiletanolaminas; do ácido ascórbico e de peptídeos no sarcoma do estroma da mama e tumor Phyllodes maligno, comparados ao tumor Phyllodes borderline e, por sua vez, comparado ao tumor Phyllodes benigno, fibroadenomas e tecido normal. Alguns PUFAs, como o ácido araquidônico (m/z 303,2330) e o ácido adrênico (m/z 331,2643), são precursores dos eicosanóides e participam de vias pró-inflamatórias. Os PUFAs podem estar ligados a um fosfolipídio da membrana celular e, quanto mais estiver presente, menor a rigidez da membrana, o que diminui o gasto energético para a realização dos movimentos celulares, como a endocitose. O aumento da intensidade do ácido ascórbico nas células tumorais se deve provavelmente ao aumento da demanda metabólica de glicose pelas células tumorais; ocorrendo, portanto, aumento dos transportadores de glicose (GLUTS) e, como a molécula do ácido ascórbico e sua forma oxidada tem estrutura molecular semelhante à molécula da glicose, o ácido ascórbico seria carreado por esses transportadores para dentro da célula tumoral. A maior intensidade dos peptídeos no tecido maligno pode ser explicada pela maior demanda proteica da célula maligna; porém, além da importância dos peptídeos para construção das proteínas, sabe-se que alguns aminoácidos podem ser convertidos em metabólitos intermediários da glicólise aeróbia. Isso ocorre devido ao aumento da demanda de átomos de carbono para biossíntese de metabólitos. Essas diferenças lipidômicas e metabolômicas ocorrem pelo metabolismo diferenciado da célula maligna, a qual desenvolve mecanismos de adaptação para sobrevivência e proliferação. A análise das imagens químicas dos tumores bifásicos da mama obtidas por DESI-MSI mostrou que é possível diferenciar esses tumores. O uso futuro dessa técnica na rotina diagnóstica pode ser promissor devido a ser de execução rápida e de alta acurácia (AU)

Biphasic breast tumors form a heterogeneous group of tumors that present in histology two components, epithelial and stromal. These tumors may be benign or malignant, some may recur or metastasize. Its prognosis varies according to its histological classification, the presence of metastasis and the adequacy of its treatment. However, sometimes there is still difficulty in differentiating them when there is overlap of the histological features that are used to make the diagnosis in the pathological examination. Aiming at a new method to differentiate these tumors from each other, in addition to the usual pathological examination, we sought to analyze these tumors using an analytical chemistry technique of ambient ionization using mass spectrometry, the Desorption Electrospray Ionization Mass Spectrometry Imaging (DESI-MSI). Frozen specimen sections were used to analyze the DESI-MSI and, through this analysis, mass spectra and chemical images were obtained. Statistical analysis was performed using the Wilcoxon-Mann-Whitney test. In this study we found higher intensity of polyunsaturated fatty acids (PUFAs); phospholipids such as phosphatidylserine and phosphatidylethanolamines; ascorbic acid and peptides in breast sarcoma and malignant phyllodes tumor, compared to borderline phyllodes tumor and, in turn, compared to benign phyllodes tumor, fibroadenomas and breast normal tissue. Some PUFAs, such as arachidonic acid (m/z 303,2330) and adrenic acid (m/z 331,2643), are precursors of eicosanoids and participate in proinflammatory pathways. PUFAs may be linked to a cell membrane phospholipid and, the more it is present, the lower the membrane stiffness, which decreases the energy expenditure to perform cell movements, such as endocytosis. The increase in ascorbic acid intensity in tumor cells is probably due to the increased metabolic demand for glucose by tumor cells; there is therefore an increase in glucose transporters (GLUTS) and, since the ascorbic acid molecule and its oxidized form have a similar molecular structure to the glucose molecule, the ascorbic acid would be carried by these transporters into the tumor cell. The higher intensity of peptides in malignant tissue may be explained by the higher protein demand of the malignant cell; However, in addition to the importance of peptides for protein construction, it is known that some amino acids can be converted into intermediate metabolites of aerobic glycolysis. This is due to the increased demand for carbon atoms for metabolite biosynthesis. These lipidomic and metabolomic differences occur due to the differentiated metabolism of the malignant cell, which develops adaptation mechanisms for survival and proliferation. Analysis of chemical images of biphasic breast tumors obtained by DESI-MSI showed that it is possible to differentiate these tumors. The future use of this technique in the diagnostic routine may be promising due to its fast execution and high accuracy (AU)

Dabigatran en plasma: tiempos de trombina diluido, Ecarin y veneno de víbora de Russell diluido / Plasma dabigatran: diluted thrombin time, Ecarin and diluted Russell Viper Venom Time / Dabigatrana em plasma: tempos de trombina diluído, Ecarin e veneno de víbora de Russell diluído

Los objetivos del trabajo fueron verificar la calidad analítica del ensayo tiempo de trombina diluido (DTI) para medición de la concentración plasmática (cc) de dabigatran comparando dos coagulómetros de detección foto-óptica, comparar los resultados con el tiempo de Ecarin (ECT) y correlacionar las cc con las pruebas básicas de coagulación Tiempo de protrombina (TP), APTT y Tiempo de trombina (TT), y tiempo de veneno de víbora de Russell con fosfolípidos concentrados (DRVVTC). Se tomaron 43 muestras de plasma en el valle (10-14 h de la última toma) de 40 pacientes que recibían dabigatran. DTI y ECT presentaron (%) repetitividad <5,4% y <7,5%, CV interensayo <6% y <9%, respectivamente, en el protocolo EP15A2, aceptables para un Error Total permitido (TEa) <15%. Las cc medidas en pacientes fueron: mediana 83 (4-945) ng/mL. La comparación de equipos ACL TOP 300 y 500 dio resultados equivalentes por procedimiento alternativo de comparación de métodos. La comparación ECT vs. DTI fue satisfactoria por regresión de Deming (pendiente 1,143, ordenada al origen -19,33). Las correlaciones de cc vs. APTT, TP y DRVVTC fueron moderadas y no lineales tendiendo a plateau a cc>350 ng/mL, r2 0,59, 0,66 y 0,59, respectivamente. El TT fue extremadamente sensible: >120 s a cc 50 ng/mL. DTI presentó un buen desempeño analítico y permitió cuantificar dabigatran plasmático a cc bajas y altas en ambos equipos utilizados. ECT presentó resultados comparables a DTI. Se verifica una correlación moderada entre cc de dabigatran y las pruebas clásicas y DRVVTC, pudiendo ser estimadores de cc a partir de los 50 ng/mL.

The aims of the study were to verify the analytical performance of Dilute Thrombin Time (DTI) test to measure plasma dabigatran concentration (cc) in two photo-optical coagulometers, compare Ecarin clotting Time (ECT) and DTI results, and correlate cc with classical coagulation tests: prothrombin time (PT), APTT, thrombin time (TT) and diluted Russell Viper Venom Time tests with high phospholipid concentration (DRVVTC). Forty three plasma samples from 40 patients taking dabigatran were drown at through (10-14 hs.since last dose). DTI and ECT showed repetitivity (%) <5.4% and <7.5%, interassay CV <6% and <9%, respectively, following EP15A2 protocol, acceptable considering a Allowed Total Error (TEa)<15%. Patients` cc: median 83 (4-945) ng/mL. The comparison between ACL TOP 300 and 500 coagulometers showed equivalent results by using the alternative method comparison test. ECT vs. DTI: acceptable by Deming`s regression (slope 1.143, Y insert -19.33). cc vs. APTT, TP and DRVVTC: nonlinear and moderate correlations with plateau reached at cc >350 ng/mL, r2 0.59, 0.66 y 0.59, respectively. TT is extremely prolonged at cc >50 ng/mL. In conclusion: DTI showed a good analytical performance in both coagulometers. ECT showed comparable results to DTI. We verified that dabigatran cc presented moderate correlations with PT, APTT and DRVVTC, and that these tests could only qualitative estimate cc >50 ng/mL.

Os objetivos do trabalho foram verificar a qualidade analítica do ensaio tempo de trombina diluído (DTI) para medição da concentração plasmática (cc) de dabigatrana, comparando dois coagulômetros de detecção foto-óptica, comparar os resultados com o tempo de Ecarina (ECT) e correlacionar as cc com os testes básicos de coagulação Tempo de protrombina (TP), APTT e Tempo de trombina (TT), e tempo de veneno de víbora de Russell com fosfolipídios concentrados (DRVVTC). Foram tomadas 43 amostras de plasma no vale (10-14 h. da última toma) de 40 pacientes que recebiam dabigatrana. DTI e ECT apresentaram (%) repetitividade <5,4% e <7,5%, CV interensaio <6% e <9%, respectivamente, no protocolo EP15A2, aceitáveis para um Erro Total permitido (TEa) <15%. Cc medidas em pacientes: mediana 83 (4-945) ng/mL. Comparação de equipamentos ACL TOP 300 e 500: resultados equivalentes por procedimento alternativo de comparação de métodos. Comparação ECT vs. DTI: satisfatória por regressão de Deming (pendente 1,143, ordenada à origem -19,33). Correlações cc vs. APTT, TP e DRVVTC: moderadas e não lineares tendendo a plateau a cc>350 ng/mL, r2 0,59; 0,66 e 0,59, respectivamente. O TT é extremamente sensível: >120 s a cc 50 ng/mL. DTI apresentou um bom desempenho analítico e permitiu quantificar dabigatrana plasmática a cc baixas e altas em ambos os equipamentos utilizados. ECT apresentou resultados comparáveis com DTI. Verifica-se uma correlação moderada entre cc de dabigatrana e os testes clássicos e DRVVTC, podendo ser estimadores de cc a partir dos 50 ng/mL.

Avaliação de biomarcadores para diagnóstico e monitoramento do tratamento da tuberculose pulmonar / Biomarker assessment for diagnosis and monitoring of treatment of pulmonary tuberculosis

INTRODUÇÃO: A tuberculose (TB), doença crônica infecciosa causada por Mycobacterium tuberculosis, é considerada um grave problema de saúde pública no país. A caracterização de antígenos protéicos e/ou lipídios que induzem uma resposta imunológica no hospedeiro, torna-se um importante passo para o desenvolvimento de novas ferramentas de diagnóstico e resposta terapêutica. Dentre os diferentes antígenos, em especial a mammalian cell entry protein 1A (proteína Mce1A), e os fosfolipídios da parede celular do bacilo como a cardiolipina (CL), os fosfatidilinositol (FI), fosfatidilcolina (FC), fosfatidiletanolamina (FE) e o sulfatide (SL), são, em sua maioria altamente imunogênicos, podendo então ser úteis no sorodiagnóstico. Portanto, o objetivo do estudo é avaliar a produção de anticorpos anti- Mce1A...

INTRODUCTION: Tuberculosis (TB), chronic infectious disease caused by Mycobacterium tuberculosis, is still a serious public health problem in the country. The characterization of protein and/or lipids antigens that induce an immune response in the host, it is an important step in the development of new diagnostic tools and monitoring TB treatment response. Among the different antigens, particularly mammalian cell entry protein 1A (Mce1A protein), and phospholipids from the cell wall of bacillus such as cardiolipin (CL), phosphatidylinositol (PI), phosphatidylcholine (PTC), phosphatidylethanolamine (PE) and sulfatide (SL), are highly immunogenic and can be used for improvement of the serodiagnosis. Therefore, the aim of the study is to evaluate the production of anti-Mce1A...

Distribution of conjugated linoleic acid (CLA) isomers and other fatty acids in polar and neutral fractions of milk from cows fed different lipid supplements / Distribución de isómeros de ácido linoléico conjugado (CLA) y ácidos grasos en las fracciones neutra y polar de la leche de vacas alimentadas con diferentes suplementos lipídicos / Distribuição de isômeros do acido linoleico conjugado (CLA) e outros ácidos graxos nas frações polares e neutras no leite de vacas alimentadas com diferentes suplementos lipídicos

Background: milk fatty acid composition has become very important for consumers due to the positive relationship that has been found between some fatty acids and human health. In recent years, content and fatty acid composition in the different fractions of milk lipids has also become important due to reported potential technological and sensory implications. Objective: the aim of this study was to evaluate the effect of dietary supplementation with several lipid supplements on the proportion of neutral (triglycerides) and polar lipids (phospholipids) of milk fat, alterations of the fatty acid composition and Conjugated Linolenic Acid isomers (CLA) of total milk lipids. Methods: 18 first lactation German Holstein cows were assigned to three dietary treatments for 10 weeks as follows: Rumen-stable fractionated palm fat, linseed oil plus algae, and sunflower oil plus algae. Results: dietary polyunsaturated fat supplements increased the proportion of phospholipids and decreased triglycerides in milk fat compared to Rumen-stable fractionated palm fat. Long chain polyunsaturated fatty acids were preferentially deposited into phospholipids. Diet effect was more pronounced in triglycerides than in phospholipids. Plant oil/algae supplemented diets induced lower proportions of total saturated fatty acids and higher proportions of total unsaturated fatty acids in triglycerides. Conclusions: linseed oil plus algae feeding generated the best results in reference to fatty acids related to human health. Sunflower oil plus algae caused accumulation of CLAtrans-10,cis-12, CLAtrans-7,cis-9, CLAtrans-7,trans-9 and CLAtrans-10,trans-12 and decrease of CLAtrans-9,trans-11 in total milk fat, whereas linseed oil plus algae increased CLAtrans-12,trans-14, CLAtrans-11,trans-13, and CLAtrans-11,cis-13 deposition compared to rumen-stable fractionated palm fat.

Antecedentes: la composición de ácidos grasos de la leche ha tomado gran importancia para los consumidores a causa de la relación positiva que se ha encontrado entre algunos ácidos grasos y la salud humana. En los últimos años, el contenido y composición de ácidos grasos en las diferentes fracciones de los lípidos de la leche también ha tomado importancia debido a las posibles implicaciones tecnológicas y sensoriales que se han reportado. Objetivo: el objetivo del presente estudio fue evaluar los cambios en la proporción de lípidos neutros (triglicéridos) y lípidos polares (fosfolípidos) y alteraciones de la composición de ácidos grasos e isómeros del Ácido Linoléico Conjugado (CLA) del total de lípidos de la leche como resultado de la suplementación dietaria con diferentes suplementos lipídicos. Métodos: 18 vacas Holstein Alemán de primera lactancia fueron asignadas a tres tratamientos dietarios durante 10 semanas, así: grasa de palma fraccionada y estable al rumen, aceite de lino más alga, y aceite de girasol más alga. Resultados: la suplementación con ácidos grasos poliinsaturados incrementó la proporción de fosfolípidos y disminuyó la de triglicéridos en la grasa de la leche comparado con grasa de palma fraccionada y estable al rumen. Los ácidos grasos poliinsaturados de cadena larga fueron preferencialmente depositados en los fosfolípidos. El efecto de la dieta fue más pronunciado en los triglicéridos que en los fosfolípidos. Las dietas suplementadas con aceite vegetal y alga indujeron a menores proporciones de ácidos grasos saturados y mayores proporciones de ácidos grasos insaturados en los triglicéridos. Conclusiones: la suplementación con aceite de lino más alga generó los mejores resultados respecto a la composición de ácidos grasos relacionados con la salud humana. El aceite de girasol más alga causó una acumulación de isomeros CLAtrans-10,cis-12, CLAtrans-7,cis-9, CLAtrans- 7,trans-9 y CLAtrans-10,trans-12 y disminuyó CLAtrans-9,trans-11 en la grasa total de la leche mientras que el aceite de lino más alga incrementó CLAtrans-12,trans-14, CLAtrans-11,trans-13, y CLAtrans-11,cis-13 comparado con la grasa de palma fraccionada y estable al rumen.

Antecedentes: a composição de ácidos graxos do leite tem-se tornado muito importante para os consumidores devido à relação positiva encontrada entre alguns ácidos graxos e a saúde humana. Nos últimos anos, o conteúdo e composição dos ácidos graxos nas diferentes frações lipídicas no leite também se tornaram importantes devido às consequências tecnológicas e sensoriais que tem sido reportada recentemente. Objetivo: realizou-se um estudo para avaliar as mudanças na proporção de lipídios neutros (triglicerídeos) e polares (fosfolipídios) na gordura do leite e as alterações da composição dos ácidos graxos e os isômeros do Ácido Linoleico Conjugado (CLA) no total dos lipídeos do leite como resultado da suplementação na dieta com diferentes suplementos lipídeos. Métodos: 18 vacas Holandesas na Alemanha, todas de primeira lactação foram avaliadas em três tratamentos com regimes alimentares diferentes durante 10 semanas, assim: óleo de palma fracionada e estável no rúmen, óleo de linhaça mais algas e óleo de girassol mais algas. Resultados: a suplementação com ácidos graxos poli-insaturados incrementou a proporção de fosfolipídios e diminuiu a proporção de triglicerídeos na gordura do leite, comparado com o óleo de palma fracionada e estável no rúmen. Os ácidos graxos poliinsaturados de cadeia longa foram preferencialmente depositados nos fosfolipídios. O efeito da dieta foi mais pronunciado nos triglicerídeos que nos fosfolipídios. As dietas que foram suplementadas com óleo vegetal mais algas reduziram a proporção de ácidos graxos saturados, e aumentaram a proporção de ácidos graxos insaturados nos triglicerídeos. Conclusões: a suplementação com óleo de linhaça mais alga gerou os melhores resultados respeito à composição dos ácidos graxos relacionados com a saúde humana. O óleo de girassol mais alga causaram uma acumulação de CLAtrans-10, cis-12, CLAtrans-7, cis-9, CLAtrans-7, trans-9 e CLAtrans-10, trans-12 e diminuiu CLAtrans-9, trans-11 na gordura total do leite, enquanto que óleo de linhaça mais alga aumentou a deposição de CLAtrans-12, trans-14, CLAtrans-11, trans-13, e CLAtrans-11, cis-13, em comparação com o óleo de palma fracionada e estável no rúmen.

Lipossomas e suas aplicações terapêuticas: estado da arte / Liposomes and their therapeutic: state of art applications

Lipossomas são vesículas constituídas de uma ou mais bicamadas fosfolipídicas orientadas concentricamente em torno de um compartimento aquoso e servem como carreadores de fármacos, biomoléculas ou agentes de diagnóstico. A estabilidade dos lipossomas pode ser afetada por fatores químicos, físicos e biológicos. Após administração intravenosa, lipossomas convencionais são rapidamente capturados pelo sistema fagocitário mononuclear. Para evitar essa captura, lipossomas furtivos foram desenvolvidos, os quais apresentam a superfície modificada com componentes hidrofílicos. Para permitir a liberação seletiva do fármaco nos sítios alvos, ligantes de reconhecimento específico são conjugados na superfície de lipossomas. Em geral, os métodos de preparação de lipossomas incluem hidratação de um filme lipídico seguida de sonicação ou extrusão para redução do tamanho das vesículas. Os lipossomas são caracterizados quanto ao tamanho e composição química das vesículas e conteúdo do material encapsulado. Nesta revisão, constata-se que os lipossomas oferecem maior eficácia e segurança com relação aos tratamentos convencionais. Apesar de algumas formulações lipossomais serem comercializadas desde os anos 1980 para tratamento de infecções fúngicas sistêmicas e do câncer, problemas de ordem tecnológica e biológica fazem com que os lipossomas sejam ainda extensivamente estudados para desenvolvimento de formulações estáveis no organismo visando à terapia de várias doenças, principalmente do câncer.

Liposomes are vesicles that consist of one or more concentric phospholipidic bilayers organized around an aqueous inner compartment. They are carriers of drugs, biomolecules and diagnostic agents. The stability of liposomes can be influenced by chemical or physical factors. Once injected in the circulatory system, conventional liposomes suffer uptake by the mononuclear phagocytic system. To avoid such a capture, non-conventional or Stealth® liposomes were developed, which are coated by hydrophilic components. Specific ligand had been incorporated in their surface so as to control the drug release and selectivity, thereby originating the targeted liposomes. In general, all preparation methods of liposomes include the hydration of lipidic film followed by sonication or extrusion to reduce the mean size of vesicles. After preparation, the vesicles are characterized by size, chemical constitution, and amount of encapsulated material. In this review it is shown that the liposomes offer effectiveness and safety in comparison with many conventional treatments. In spite of the existence of a few liposomal formulations available since early 80's, which are used for the treatment of systemic fungal infections and cancer, many technological and biological issues remain as a challenge. In this scenario, liposomes have extensively been studied in order to improve their in vivo stability in the treatment of several diseases, including cancer.